多拷贝增味肽表达基因的构建及表达

摘要

本发明公开了一种多拷贝增味肽表达基因及载体和重组毕赤酵母的构建方法，属于分子生物技术领域，克服了现有技术提取或化学合成EFP的技术难度大、成本高、产量低等不足。根据毕赤酵母表达翻译的密码子偏爱性，设计出含有6拷贝的EFP表达基因的序列，并设计出必要的限制性酶切位点、6×His和终止密码子。通过体外操作，不断的扩大EFP的拷贝数至24拷贝，并将其插入到表达载体pPIC9上，将pPIC9线性化后通过电转化的方法将目的片段-含24拷贝的EFP表达基因，重组于毕赤酵母的基因组上。通过发酵，甲醇诱导毕赤酵母得到高产量的EFP，并通过6×His亲和柱Ni柱进行分离纯化。