蟑螂多肽的制备及其抗革兰氏阳性及阴性菌医药用途

摘要

本发明涉及蟑螂多肽的制备及其抗革兰氏阳性及阴性菌医药用途。具体而言，本发明涉及一种具有防治细菌感染性疾病功能的蟑螂提取物有效部位及其制备方法和医药用途。本发明的美洲大蠊提取物有效部位是分子量小于5000道尔顿的多肽类物质，由蜚蠊科美洲大蠊（Periplaneta americana）虫体鲜品或干品经溶剂提取和膜分离法精制而成，该有效部位多肽类活性物质具有明显的抗革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌活性，可制备成水凝胶、巴布剂、冻干粉、水剂、气雾剂、栓剂、膜剂、外用搽剂、软膏剂形式，用于制备防治革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌感染相关疾病的药物、日化用品以及医疗器械。

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体而言，本发明涉及一种具有防治细菌感染性疾病功能 的蟑螂提取物有效部位及其制备方法和医药用途。该有效部位多肽类活性物质可制备成水 凝胶、巴布剂、冻干粉、水剂、气雾剂、栓剂、膜剂、外用搽剂、软膏剂等形式，用于制 备治疗防治革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌感染相关疾病的药物、日化用品或医疗器械。

背景技术

自然界存在大量细菌。金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，简称“金葡菌”）是 格兰氏阳性球菌，是一种最常见且是对人体健康影响极大的致病菌种，引起人的主要感染 有疖子、脓疱、毒性表皮腐解、肺炎、骨髓炎、急性心肌炎、乳腺炎、膀胱炎、前列腺炎、 菌血症、中毒性休克综合症、淋巴结炎、咽炎、子宫颈炎、盆腔炎，以及肌肉、皮肤、尿 殖道、中枢神经系统的脓肿。抗甲基西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）是20世纪80年代 开始出现的耐药菌株，它是医院内和临床上微生物流行病的主要病源。链球菌 （Streptococcus species）是成链状排列、兼性厌氧的格兰氏阳性杆菌。医学上常见的致病 性链球菌大部分属于β溶血型，它们存在于人的皮肤、呼吸道、消化道以及尿殖道的黏膜 上，能够引起皮肤、呼吸道以及软组织感染如肺炎、菌血症、心内膜炎、脑膜炎、泌尿道 炎症以及关节炎等疾病。

大肠杆菌（或称大肠埃希氏杆菌）是中等大小杆菌，革兰氏染色阴性，其大小为（1-3） 微米×（0.5-0.7）微米，有鞭毛、无芽胞，有的菌株可形成荚膜，需氧或兼性厌氧，生化 反应活泼、易于在普通培养上增殖，适应性强。该菌对一般消毒剂敏感，但对抗生素及磺 胺类药等极易产生耐药性。大肠杆菌病是由大肠杆菌埃氏菌的某些致病性血清型菌株引起 的疾病总称，其是由一定血清型的致病性大肠杆菌及其毒素引起的一种肠道传染病。一年 四季均可发生，临床症状及解剖特点以下痢为主要特征，排出黄棕色水样稀粪。急性致死 性感染病例一般1-2天死亡，亚急性1周左右死亡。治疗上常采用螺旋霉素、多粘菌素E、 庆大霉素、硫酸卡那霉素、恩诺沙星等肌肉注射，每天2-3次连续3-5天（以上三者交替 应用或合用效果更好）。

大多数革兰氏阳性菌的致病物质为外毒素，而大多数革兰氏阴性菌的致病物质为其内 毒素。在抗感染药物中，抗生素占90%。其它抗真菌药物、抗病毒药物和抗寄生虫病药物 仅占10%。然而，在抗生素的应用中，大多数格兰仕阳性菌对青霉素敏感，而革兰氏阴性 菌则大多对链霉素和氯霉素等敏感。因此，发现既能抑制革兰氏阳性菌同时又能抑制革兰 氏阴性菌生长的抗菌物质，将是光谱抗菌药物开发的重要目标之一。

本世纪以来，随着随着现代社会的日益发达，细菌感染的机会越来越大，手感人群活 动反而越来越频繁，造成大规模感染的几率越来越大。因此也造成了抗生素的大量使用， 甚至滥用。因此，抗生素的合理应用十分重要。随着多种抗生素耐药性的出现、以及超级 细菌的初现端倪，使得现有一线使用的抗生素面临不能满足临床需要而全面崩溃的局面。 这使得欧美发达国家投入巨资研发新的抗生素药物。除了医师自觉抵制滥用抗生素之外， 确实还需要储存一大批针对变异的耐药株的抗菌药物，以便在真正发生大规模耐药菌株流 行传播时人们不至于素手无策、坐以待毙。然而，随着医院临床耐药菌的增多，以及研发 出的抗生素毒性和副作用越来越大，使得人们不得不将眼光转向广谱、低毒、使用安全的 “绿色抗生素”。不断研发出新的植物和动物天然绿色抗生素，是十几亿人口的人口大国 必须执行的一个既定政策。

本研究团队以前从植物中发现许多对革兰氏阳性菌和/或阴性菌有效的植物提取部位 和有效成分，更加增添了我们研发新的“绿色抗生素”、发现新的抗菌天然药物的信心。（赵 昱等，具抗病毒、抗炎、和/或抗菌作用的六棱菊属提取物及其用途，ZL200510077457.3）、 （赵昱等，生姜中单萜苷类化合物及其抗菌用途和药物组合物，CN 101012255；蒲公英中 的两个黄酮苷及其抗格兰氏阳性菌的医药用途，ZL200710067180.5；蒲公英中的木质素及 其抗菌活性和医药用途，ZL 200710067458.9；黑紫橐吾中的含氯原子艾里莫芬烷及其抗菌 和细胞毒活性，ZL200710067460.6；蒲公英中的倍半萜内酯及其抗格兰氏阳性菌的用途， ZL200710067776.5；黑紫橐吾素A及其抑制格兰氏阳性菌的医药用途，ZL200710068539.0； 蒲公英木质素抑制格兰氏阳性菌的制药用途，ZL 200810165728.4）

本研究团队另外一个开发的重点领域是昆虫类抗菌肽资源。抗菌肽是自上世纪80年 代以来兴起的新的抗菌药物开发领域。其是指从生物体内发现的宿主产生的一类能够抵御 外界病原体感染的小分子多肽，由动物体内的分泌物、血液、淋巴组织等分离得到的大量 抗菌肽，其与传统抗生素的作用机制不同，且对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有不同的选 择性。该研究方向引起了我们的兴趣，本研究团队着力于从抗感染能力强的种群中发现绿 色抗生素，诸如抗菌肽类物质和其他有成药可能的小分子物质基础。

蟑螂，为昆虫纲有翅亚纲蜚蠊目蜚蠊科大蠊属昆虫，最常见为美洲大蠊（Periplaneta  americana Linn.）。蟑螂入药始载于《神农本草经》，其中把它列为中品，谓“味：咸、寒； 治：血瘀症坚寒热、破积聚、喉咽闭、内寒无子”（孙星衍等，《神农本草经》，商务印书 馆，1955:90）。“蟑螂”为其俗名首见于《本草纲目拾遗》，也称其为石姜、滑虫；各地方 有其不同的称法，如：偷油婆、茶婆子、灶蚂子等。蜚蠊科（Blattidae）是一个庞大的昆 虫家族，在地球上已生存了3.2亿年，与恐龙属同一时代出现的生物。无疑它是世界上生 命力最强、最古老、至今繁衍最成功的昆虫类群之一。1960年Princis曾报道蜚蠊在世界 范围内约有3500种，我国已有记录的共253种（冯平章，郭予元，吴福祯，中国蟑螂种 类及防治，北京:中国科学技术出版社，1997年4月）。蜚蠊主要分布于热带、亚热带地 区的室内或野外，而美洲大蠊是其中少数几种家居蜚蠊品种之一。美洲大蠊作为室内害虫 主要栖息于厨房、食堂、仓库等处损害食物、衣服、书籍等，取食并污染人的食物，传播 痢疾、伤寒、蛔虫、蛲虫等多种疾病。从厨房和仓库等收集到的226只蟑螂体表及肠道内 检出致病菌25种，感染率高达99.9%（Pai H.H.等，Isolation of bacteria with antibiotic  resistance from household cockroaches(Periplaneta americana and Blattella germanica)，Acta  Tropica，2005，93(3):259）。蟑螂作为害虫是城市卫生防疫部门和海关检疫部门重点防治 对象之一。然而，在科技日新月异的今天，面对上千种针对它的各种杀灭剂，这一昆虫群 体依然十分活跃，这表明其体内必应具有某些特殊的物质和其特有的作用机制，这一现象 引起了国内外一些学者的关注。

近几年来随着我国对传统中医药资源研究开发的重视，有些学者对这一几千年来无法 根绝的害虫进行了应用开发方面的研究，并取得了可喜的成就，发掘出了这一传统意义上 的害虫的正面价值。我们研究团队以美洲大蠊醇提物制成的产品“康复新”，在烧伤、烫 伤等外伤创面的良好疗效。以美洲大蠊醇提物精制而成的“心脉龙注射液”，具强心升压， 改善微循环，兴奋呼吸，利尿，增加心、脑、肺、肾的血流量。“心脉龙注射液”主治： 右心衰，也可治急慢性心衰、失血性休克、低血压、室性早博、病窦性综合症、心脑缺血 性疾病，为2004年通过中国国家食品与药品监督管理局SFDA审批的国家二类新药（中 药）。

蓝江林等利用大肠杆菌、溴氢菊酯、昆虫生理盐水、紫外线、超声波作为诱导源进行 诱导，获得具有抗菌活性的血淋巴，在经诱导的美洲大蠊血淋巴中提取分离得到抗菌肽成 分。对经大肠杆菌诱导的美洲大蠊的血淋巴进行抑菌作用测试，结果发现大肠杆菌的数量 在一定的测试时间内逐渐减少。该研究还通过电镜观察表明：经诱导的美洲大蠊学血淋巴 中的抗菌肽首先使细菌的外层及细胞质膜损伤，形成开口，导致内容物外泄而死亡，最后 菌体崩解成碎片。因此认为美洲大蠊抗菌肽对大肠杆菌不是一般的抑菌作用，而是直接杀 灭作用。（蓝江林，周先治，卓侃等，美洲大蠊(Periplaneta americana L.)抗菌肽杀菌作用 初步观察，福建农林大学学报(自然科学版)，2004，33(2):166）。对蜚蠊科昆虫澳洲大蠊 （Periplaneta australasie Fabricus）全虫（去翅及足）的油状醇提取物进行的体内筛选证明： 澳洲大蠊提取物对S-180及人食管癌小鼠异种移植均有显著的抗癌作用（黄厚聘，程才芬， 李淑芳，蟑螂油的抗癌作用，中草药，1981，12(1):35）。陈利铭发现蟑螂提取物AT2能增 强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能，并能使脾脏重量增加，在体外可增加T淋巴细胞对Con A 的转化反应。AT2治疗原发性肝癌49例，临床观察表明，本品具有缓解症状，使甲胎蛋白 下降，延长患者生存期的功效（陈利铭，蟑螂提取物AT2抗癌作用的临床及实验研究，中 西医结合杂志，1986，(11):648）。在临床应用方面，蟑螂活虫提取物治疗原发性肺癌有良 好效果。廖剑英以“康复新”治疗恶性纤维组织细胞瘤，取得良好效果（廖剑英，康复新 治疗恶性纤维组织细胞瘤1例，大理学院学报，2003，2(3):92）。有相关报道表明蟑螂提 取物在抗肿瘤的同时具有一定的增强免疫功能的作用（罗志宏，占汉章，李艳红等，中药 康复新在头颈部恶性肿瘤治疗中的作用观察，中国中西医结合耳鼻咽喉科杂，1998，6(3): 132；严奉祥等，中药康复新的在体免疫药理学特征，大理医学院学报，1991，3(1):21）。

对美洲大蠊在制药方面的研究多集中于美洲大蠊中的粗提物，李树楠等从美洲大蠊的 醇提物中除去油脂，用二氧化碳吸附后除去色素和过敏成分，用于治疗心血管疾病（国家 发明专利CN 1067243C）；刘耀北等用乙酸提取蟑螂提取物，对肝癌细胞BEL7404和 BEL7721进行癌细胞增殖抑制试验，发现粗提物可以有明显抑制癌细胞生长的作用（国家 发明专利CN 1199991C）；廖吉等报道了用6号提取液从蜚蠊虫体中制备降脂、调节胆固 醇、调节血糖、防治肿瘤和预防心血管疾病、抗风湿作用的保健食品（国家发明专利CN 1230183C）；严少宏等阐述了一种美洲大蠊粗浸膏的优化提取方式（国家发明专利CN 1255117C）；徐燕和公开了一种类似的粗浸膏制备方法（国家发明专利CN 1548058A）；严 少宏等公开了一种美洲大蠊粗浸膏综合利用的的提取方式（国家发明专利CN 1593467A）。 以上专利都未公开美洲大蠊抗菌药用有效部位的方面的应用。

发明人所在研究团队对蟑螂进行了十余年的研究；所研发的“康复新”、“心脉隆注射 液”、“肝龙注射液”取得了3只国家新药证书，产品已经上市销售。在我们对美洲大蠊的 后续研究中；我们还发现：用醇水混合溶剂溶剂提取美洲大蠊虫体具有体外抗单纯疱疹病 毒（HSV-1和HSV-2）的功效（王晓雨，刘光明，宋丽艳等，“美洲大蠊有效部位的用途”， ZL 200810060885.9）。但是，该专利中使用的是大孔树脂作为分离材料；对于多肽类分子 量并无选择性；而对于化学实体应用于制备药物时的质量控制，希望得到分子量在一定范 围内的多肽，以便利于质量控制。而蓝江林等研究的美洲大蠊抗菌肽是以大肠杆菌诱导美 洲大蠊，使其血淋巴中产生抗菌物质，然后再从血淋巴中提取分离抗菌肽。该过程复杂， 且无法提供足量的抗菌肽作为进一步研究开发的物质基础。因此，寻找美洲大蠊体内固有 的抗菌物质以便进一步开发利用仍十分必要。

我们为了寻找抗菌活性更强和质量更易于控制的总多肽类有效部位，尝试应用先进的 膜分离法对美洲大蠊提取物进行了活性筛选下的抗菌有效活性部位研究；并同时用革兰氏 阳性菌和革兰氏阴性菌予以测试，最终发现了用<5KDa的生物膜进行分离，能得到新的广 谱抗菌活性有效部位；产率比用大孔树脂法得到提高，且质量控制更为精准。同时，我们 还针对该活性部位进行抗菌实验，最终发现用<5KDa的生物膜分离法得到的既能抗革兰氏 阳性菌（金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌）、又能抗革兰氏阴性菌（大肠杆菌）双重 抗菌活性的蟑螂多肽类有效部位。经查新发现，以往均无由美洲大蠊醇提物经膜分离法得 到的提取物作为主药进行配制的药物制剂的相关报道，更无运用上述制剂用于广谱抗菌的 文献报道。从而构成本发明。

发明内容

本发明的目的是提供了一种蟑螂中提取的分子量小于5000道尔顿的活性物质有效部 位；

本发明的另一目的是提供了一种制备蟑螂中提取的分子量小于5000道尔顿的活性物 质有效部位的方法；

本发明的另一目的是提供了将美洲大蠊提取物有效部位用于制备既能抗革兰氏阳性 菌又能抗革兰氏阴性菌感染的广谱抗菌药物、日化用品、医疗器械的用途；

本发明的又一目的是提供了一种含有美洲大蠊提取物有效部位用于制备防治细菌感 染的多种制剂形式，包括水凝胶、巴布剂、冻干粉、水剂、气雾剂、栓剂、膜剂、外用搽 剂、软膏剂。

根据本发明人深入的研究，发现美洲大蠊的抗菌活性成分可以通过工艺优化得到富 集，本发明人采用水或水醇溶剂提取得到的美洲大蠊醇提物辅以孔径大小一定的超滤膜进 行超滤，得到分子量小于5000道尔顿的有效部位（即<5KDa部位），具体而言，本发明中 美洲大蠊具抗菌活性的有效部位的制备方法如下：用水或有机溶剂及缓冲溶剂提取经粉碎 或未粉碎的美洲大蠊虫体，浓缩提取回收溶剂，特定浓缩比/特定转速和pH值下进行超滤 膜分离纯化；得到的分子量小于5KDa的多肽类活性有效部位经减压浓缩至无醇味，减压 浓缩或冷冻干燥，粉碎得产品。

本发明中的动物药材可以是蟑螂任一部位，即可以是美洲大蠊（Periplaneta americana） 头、身、翅，也可以是它们的混合物，优选全虫。可以是干燥全虫，也可以是未经干燥的 全虫或活体全虫。

本发明得到的美洲大蠊醇提物经超滤膜分离得到的分子量小于5KDa的多肽类有效部 位具有重要的生物活性，体外具有明显的抑制革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌和乙型溶血 性链球菌）以及抑制革兰氏阴性菌（大肠杆菌）的活性；其抑制革兰氏阳性菌和/或革兰氏 阴性菌的活性高于粗提物。急性毒性试验进一步证实，ICR小鼠口服该有效部位具有相当 的安全性。以上均说明美洲大蠊醇提物经经超滤膜分离得到的分子量小于5KDa的多肽类 有效部位有可能发展成为新的广谱抗菌类药物、日化用品或医疗器械。说明本发明所提供 的以超滤膜分离制备方法得到分子量小于5000道尔顿的多肽类有效部位具有创造性和新 颖性，据此完成本发明。

本发明中所述及的美洲大蠊醇提物经超滤膜分离得到的分子量小于5KDa的多肽类有 效部位可以与药学上常用的辅料或载体结合，制备得到具有广谱抗菌功效的水凝胶、巴布 剂、冻干粉、水剂、气雾剂、栓剂、膜剂、外用搽剂、软膏剂、泡沫凝胶，还可以采用现 代制药界所公知的控释或缓释剂型或纳米制剂。

本发明的美洲大蠊醇提物经超滤膜分离得到的分子量小于5KDa的多肽类有效部位或 其可药用盐还可以与现已上市的金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌抑制剂和/或其他治疗 类似革兰氏阳性菌感染相关病症的治疗药物及其原料药如头孢类、大环内酯类、以及磺胺 类如沙星等药物品种联合使用或交叉使用，制备得到具有抗病菌感染的组合物或复方制 剂，可预期成为治疗革兰氏阳性菌感染疾病药品、保健品、日化用品和医疗器械。上述各 类药物组合物或者药品、保健品、日化用品和医疗器械可以采用片剂、胶囊剂、注射剂、 气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、水凝胶、泡沫凝胶、巴布剂、冻干粉、水剂、外用搽剂、 软膏剂等剂型药物，包括采用现已公认的药剂学常识常规制备而得的各种缓释、控释剂型 或纳米制剂。

本发明的美洲大蠊醇提物经超滤膜分离得到的分子量小于5KDa的多肽类有效部位或 其可药用盐还可以与现已上市的大肠杆菌抑制剂和/或其他治疗类似革兰氏阴性菌感染相 关病症的治疗药物及其原料药如螺旋霉素、多粘菌素E、庆大霉素、硫酸卡那霉素、恩诺 沙星等药物品种联合使用或交叉使用，制备得到具有抗病菌感染的组合物或复方制剂，可 预期成为治疗革兰氏阴性菌感染疾病药品、保健品、日化用品和医疗器械。上述各类药物 组合物或者药品、保健品、日化用品和医疗器械可以采用片剂、胶囊剂、注射剂、气雾剂、 栓剂、膜剂、滴丸剂、水凝胶、泡沫凝胶、巴布剂、冻干粉、水剂、外用搽剂、软膏剂等 剂型药物，包括采用现已公认的药剂学常识常规制备而得的各种缓释、控释剂型或纳米制 剂。

本发明的有益之处在于：本发明使用超滤膜分离法制备出美洲大蠊醇提物中分子量小 于5KDa的多肽类有效部位，其原料来源方便易得、制备步骤简便、利于产业化。超滤膜 分离法产率高，且生理活性更为广泛，该多肽有效部位具有显著的抑制的革兰氏阳性菌和 革兰氏阴性菌的药效活性，对于开发市场广大的广谱抗菌药物、日化用品和医疗器械提供 了新的物质基础，通过规范化养殖蟑螂又能给连片特困地区的农民增加收入、脱贫，具有 潜在的社会效益和经济效益。

具体实施方案

为了更好地理解本发明的实质，下面分别用实施例说明采用超滤膜分离法制备出美洲 大蠊醇提物中分子量小于5KDa的多肽类有效部位，及其对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性 链球菌、大肠杆菌抑制作用的药理实验结果，说明其在抗革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌研 究领域中的新用途。本发明还用该活性提取物进行了ICR小鼠的口服灌胃急性毒性试验， 说明该有效部位对动物的毒性，由此来反映在人体使用时的安全性。若无特别说明，本发 明的百分比指的是重量百分比。必须说明，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本 发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。

实施例1：美洲大蠊水提物经超滤膜分离法富集分子量小于5KDa的多肽类有效部位（样 品A）的制备

1.1美洲大蠊水提物的制备

美洲大蠊药材3公斤，加双蒸水10000毫升，45°C浸泡提取1次，24小时；50°C浸 泡提取1次，24小时；55℃浸泡提取1次，24小时。合并提取液，减压浓缩至干，真空 干燥，即得美洲大蠊水提物。

1.2采用5KDa超滤膜过滤正交试验制备样品A

经对影响膜分离效果的因素进行单因素试验，确定影响因素是转速、时间、pH值、浓 缩比，并最终确定影响因素范围。根据单因素实验结果，设计正交实验方案，确定最佳工 艺。

1.2.1不同pH值对超滤效果的影响

将1.2项下制备得到的美洲大蠊水提物溶解，采用一定浓度的氢氧化钠或盐酸溶液调 节其pH值分别为8、9、10和11四个梯度，浓度为0.3毫克/毫升（mg/mL），转速为2500 转/分钟（r/min），时间分别为10、20、30、40、50和60分钟（min）、考察对超滤效果的 影响。

1.2.2不同浓缩比对超滤效果的影响

将1.2项下制备得到的美洲大蠊水提物溶解，采用不同量溶解，使其浓缩比分别为0.2、 0.3、0.4和0.5mg/mL四个梯度，转速为2500r/min，pH值为9，时间分别为10、20、30、 40、50和60min、考察对超滤效果的影响。

1.2.3不同转速对超滤效果的影响

将1.2项下制备得到的美洲大蠊水提物溶解，使其转速分别为1500、2500、3500和 4500r/min四个梯度，浓度为0.3mg/mL，pH值为9，时间分别为10、20、30、40、50和 60min、考察对超滤效果的影响。

1.2.4不同时间对超滤效果的影响

将1.2项下制备得到的美洲大蠊水提物溶解，使其时间分别为10、20、30、40、50和 60min六个梯度，浓度为0.3mg/mL，pH值为9，转速为2500r/min，考察对超滤效果的 影响。

通过以上单因素试验，确定其主要影响因素及其范围分别是：浓缩比（0.2、0.3和0.4 mg/mL）、转速（2500、3500和4500r/min）和pH值（9、10和11）。

1.2.5用三因素三水平正交实验验证出最佳提取参数

通过三因素三水平正交实验，推断出超滤提取最佳组合是：转速4500r/min、pH=11 和浓度为0.3mg/mL。

1.2.6分子量<5KDa多肽样品制备

美洲大蠊水提物300毫克，用水1000毫升溶解；调制其pH值为11后，倾入置有孔 径为5KDa的超滤膜的超滤装置中，以4500r/min转速超滤30分钟。滤液真空干燥，即得 分子量<5KDa多肽样品（65毫克），收率：21.7%。

1.2.7SDS-PAGE电泳检测样品A的分子量

部分仪器与试剂：三羟甲基氨基甲烷(Tris)：Solarbio公司；十二烷基硫酸钠(SDS)：Sigma 公司；甘氨酸：Solarbio公司；丙烯酰胺：Amresco公司；N,N′-亚甲基双丙烯酰胺：Amresco 公司；TEMED：Bio Basic Inc.公司；N-三羟甲基甲基甘氨酸(Tricine)：Solarbio公司；β- 巯基乙醇：Bio Basic Inc.公司；溴酚蓝：生工生物工程（上海）有限公司；超低分子量标 准蛋白标记(Marker，3.3-20.1KDa)：Solarbio公司；考马斯亮蓝G-250：Solarbio公司；考 马斯亮蓝R-250：Solarbio公司；3-(环己胺)-1-丙磺酸钠(CAPS）：Solarbio公司；聚偏二氟 乙烯膜(PVDF）：Solarbio公司；HD-3型紫外检测仪：上海沪西分析仪器厂有限公司；HD-A 型电脑采集器：上海沪西分析仪器厂有限公司；QL-866型旋涡混合器：海门其林贝尔仪器 制造有限公司；Mini-PROTEAN Tetra Cell电泳系统：Bio-Rad公司；TS-1型脱色摇床：海 门其林贝尔仪器制造有限公司；In Genius LHR型凝胶成像分析系统：Gene公司。

采用SDS-PAGE法，双垂直电泳槽，分离胶的质量分数为15%，浓缩胶的质量分数为 3.5%，供试品上样量为10微升，浓缩胶电压为10mA，分离胶电压为20mA。采用考马 斯亮蓝染色法。与标准低分子量蛋白质marker比较，确认由上述方法制备而得的美洲大蠊 水提物超滤膜分离后得到的样品95%以上为分子量<5KDa的物质。

1.2.8SDS-PAGE电泳检测样品A的性质

采用Folin-酚试剂法（Lowry法）测定样品A中蛋白质的含量为65%。将样品A按照 标准方法水解后与标准氨基酸以HPLC法比对后确定，该分子量<5KDa多肽样品由17种 常见氨基酸组成。

1.3与用D-101大孔树脂法得到的活性部位之收率比较

1.3.1按照专利ZL 200810060885.9公开的内容制备样品B

（1）美洲大蠊药材3公斤，加55％乙醇10000毫升，室温浸泡提取，提取3次，每 次24小时。合并提取液，减压浓缩至干，真空干燥，即得美洲大蠊醇提物。（2）取得到 的美洲大蠊醇提物20克，用30克D-101大孔吸附树脂吸附拌样，上200克D-101大孔吸 附树脂柱，先用水洗脱至无色，续用30％乙醇-水溶液洗脱至无色，取洗脱液10毫升减压 浓缩至干，冷冻真空干燥，即得提取物（II-30）[美洲大蠊醇提物D-101大孔吸附树脂柱层 析30％醇洗液]；续用60％乙醇-水溶液洗脱至无色，取洗脱液10毫升减压浓缩至干，冷 冻真空干燥，得提取物（II-60）[美洲大蠊醇提物D-101大孔吸附树脂柱层析60％醇洗液]， 即样品B。

1.3.2样品B收率

将上述方法制备得到的提取物II-30与II-60称重，分别为2.96克和724.9毫克。针对 美洲大蠊醇提物20克而言，提取物II-60（即样品B）的收率为3.6%。而按照本实施例之 超滤膜法，300毫克美洲大蠊粗提物经超滤膜操作后得到65毫克有效部位，收率为21.7%； 显而易见，以超滤膜法进行对多肽部位的富集，损失小，收率大大提高（为大孔树脂方法 制备得到的样品之6倍）。

1.4与用D-101大孔树脂法得到的活性部位的分子量之比较

1.4.1将上述1.3项制备得到的样品B（II-60[美洲大蠊醇提物D-101大孔吸附树脂柱层析 60％醇洗液]）按照本实施例1.2.7项所描述之SDS-PAGE电泳法检测分子量，以超低分子 量标准蛋白Marker（3.3-20.1KDa）为对照，可知样品B中分子量<5KDa的物质占52%； 而5-15KDa者为38%；>15KDa者占10%。与美洲大蠊水提物超滤膜分离后得到的有效部 位样品95%以上为分子量<5KDa的物质相比，用D-101大孔树脂法得到的活性部位分子量 分布较为分散，质量控制上不如用超滤膜方法得到的分子量集中的多肽部位容易受到控 制。

实施例2：美洲大蠊醇提物经超滤膜分离法富集分子量小于5KDa的多肽类有效部位（样 品C）的制备

2.1美洲大蠊醇提物的制备

美洲大蠊药材3公斤，加55％乙醇10000毫升，室温浸泡提取，提取3次，每次24 小时。合并提取液，减压浓缩至干，真空干燥，即得美洲大蠊醇提物。

2.2分子量<5KDa多肽活性物质（样品C）的制备

依照实施例1中正交试验优选出的提取参数，取2.1制备得到的美洲大蠊醇提物300 毫克，用温水1000毫升溶解；调制其pH值为11后，倾入置有孔径为5KDa的超滤膜的 超滤装置中，以4500rpm转速超滤30分钟。滤液真空干燥，即得分子量<5KDa多肽样品 （69毫克），收率：23%。

2.3SDS-PAGE电泳检测样品C的分子量

仪器与试剂：同实施例1。采用SDS-PAGE法，双垂直电泳槽，分离胶的质量分数为 15%，浓缩胶的质量分数为3.5%，供试品上样量为10微升，浓缩胶电压为10mA，分离 胶电压为20mA。采用考马斯亮蓝染色法。与标准低分子量蛋白质marker比较，确认由 2.2方法制备而得的样品C其93%以上为分子量<5KDa的物质。

2.4SDS-PAGE电泳检测样品C的性质

采用Folin-酚试剂法（Lowry法）测定2.2方法所制备出之样品C中蛋白质的含量为 66%。将样品C按照标准方法水解后与标准氨基酸以HPLC法比对后确定，该分子量<5KDa 多肽样品由17种常见氨基酸组成。

实施例3：美洲大蠊丙酮-水提物经超滤膜分离法富集分子量小于5KDa的多肽类有效部位 （样品D）的制备

3.1美洲大蠊丙酮-水提物的制备

美洲大蠊药材3公斤，加70％丙酮水溶液10000毫升，室温浸泡提取，提取3次，每 次24小时。合并提取液，减压浓缩至干，真空干燥，即得美洲大蠊丙酮-水提物。

3.2分子量<5KDa多肽样品（样品D）的制备

依照实施例1中正交试验优选出的提取参数，取2.1制备得到的美洲大蠊丙酮-水提物 300毫克，用温水1000毫升溶解；调制其pH值为11后，倾入置有孔径为5KDa的超滤膜 的超滤装置中，以4500rpm转速超滤30分钟。滤液真空干燥，即得分子量<5KDa多肽样 品（67毫克），收率为22.3%。

3.3SDS-PAGE电泳检测样品D的分子量

仪器与试剂：同实施例1。采用SDS-PAGE法，双垂直电泳槽，分离胶的质量分数为 15%，浓缩胶的质量分数为3.5%，供试品上样量为10微升，浓缩胶电压为10mA，分离 胶电压为20mA。采用考马斯亮蓝染色法。与标准低分子量蛋白质marker比较，确认由 3.2方法制备而得的样品D其90%以上为分子量<5KDa的物质。

3.4SDS-PAGE电泳检测样品D的性质

采用Folin-酚试剂法（Lowry法）测定3.2方法所制备的样品D中蛋白质的含量为61%。 将样品D按照标准方法水解后与标准氨基酸以HPLC法比对后确定，该分子量<5KDa多 肽样品由17种常见氨基酸组成。

实施例4：美洲大蠊不同提取物中制备出的分子量<5KDa多肽样品抑制格兰氏阳性菌能力 检测

4.1原理：

采用“管碟法”研究试验药物的体外抗菌活性，利用加在牛津杯中的试验药物扩散到 接种有试验菌的培养基中，从而抑制细菌的生长。通过检测在牛津杯周围形成的抑菌圈的 直径大小来确定试验药物的抗菌活性。

4.2检测菌：

金黄色葡萄球菌26003-23，购自中国药品生物制品检定所。

乙型溶血性链球菌32210，购自中国药品生物制品检定所。

4.3试验药物及仪器：

4.3.1试验药物

DMSO：DMSO溶剂对照；

阳性对照药物诺氟沙星：2.5mg/mL；

测试样品来自实施例1-3中制得的四种样品（样品A：1.2.6所述之美洲大蠊水提物经超滤 膜制备的分子量<5KDa多肽样品；样品B：1.3.1所述之美洲大蠊醇提物D-101大孔吸附树 脂柱层析60％醇洗液；样品C：实施例2中依2.2法制得的美洲大蠊醇提物中分子量<5KDa 多肽样品；样品D：实施例3中依3.2法制得的美洲大蠊丙酮-水提物中分子量<5KDa多肽 样品）。样品用DMSO溶解并配置成2.5mg/mL。

4.3.2仪器

CO₂培养箱：美国Shellab公司产品；

XD-2倒置显微镜：重庆光电仪器有限公司产品；

生物安全柜：美国LABCONCO公司产品；

LDZX-40BI型立式自动电热压力蒸汽灭菌器：上海申安医疗器械厂产品。

4.4方法与步骤：

4.4.1制备M-H琼脂、M-H肉汤及试验菌液。

4.4.2双碟的制备：

（1）M-H琼脂底层：取灭菌M-H琼脂液体自然冷却凝固。

（2）M-H琼脂菌层：取菌液150微升（μl）与30毫升（mL）的M-H琼脂混匀。取约 5mL含菌液琼脂，均匀摊布在具有M-H琼脂底层的平皿内。

4.4.3待培养基凝固后，在每个平皿中均匀放立加满试验药液牛津杯。

4.4.4置37℃培养24小时。

4.4.5用游标卡尺测量抑菌圈直径。

4.5结果：

样品A-D及阳性对照药物诺氟沙星抑菌试验结果见表1。

表1.样品A-D及诺氟沙星（2.5mg/mL）对标准致病菌的抑菌圈直径（毫米mm）

注：表中数字均为三次试验平均值。

4.6实验结论：

通过采用“管碟法”研究美洲大蠊水提物经超滤膜制备的分子量<5KDa多肽样品（样 品A）、美洲大蠊醇提物中分子量<5KDa多肽样品（样品C）、美洲大蠊丙酮-水提物中分 子量<5KDa多肽样品（样品D）对金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌的体外抗菌活性， 结果表明：美洲大蠊水提物经超滤膜制备的分子量<5KDa多肽样品（样品A）、美洲大蠊 醇提物中分子量<5KDa多肽样品（样品C）、美洲大蠊丙酮-水提物中分子量<5KDa多肽 样品（样品D）对金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌有较好的抗菌活性，与阳性药物诺 氟沙星的抑菌活性相接近。且三者对金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌的抑制强度都优 于美洲大蠊醇提物D-101大孔吸附树脂柱层析60％醇洗液（样品B），说明美洲大蠊中抑 制金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌的有效成分极可能集中在分子量<5KDa多肽样品 范围中。从而可以预期其进一步开发成为治疗金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌感染类 疾病的天然药物，或与已上市之治疗革兰氏阳性菌感染药物联合使用。

根据实施例1-3中对多肽样品收率和质量控制的难易程度等可知：用超滤法对溶剂提 取的美洲大蠊提取物中分子量<5KDa多肽样品比D-101大孔树脂提取的活性部位对金黄色 葡萄球菌和溶血性链球菌的抑制活性强、收率更高、有效克服了D101树脂提取物质量控 制不易的难题，从而具有显著的优越性。本实施例说明用超滤法制备的美洲大蠊提取物中 分子量<5KDa多肽样品更有希望发展成为质量可控、安全有效的防治革兰氏阳性菌感染的 药品、日化用品、和医疗器械，还可以作为抗菌饲料添加剂应用于动物饲料的制备中去。

实施例5：测定美洲大蠊不同提取物中制备出的分子量<5KDa多肽样品对革兰氏阴性菌大

肠杆菌的抑制作用试验

5.1原理：

采用“管碟法”研究试验药物的体外抗菌活性，是利用加在牛津杯中的试验药物扩散 到接种有试验菌的培养基中，从而抑制细菌的生长。通过检测在牛津杯周围形成的抑菌圈 的直径大小来确定试验药物的抗菌活性。

5.2检测菌：

大肠杆菌C84008，大理学院药学院药理教研室提供。

5.3试验药物及仪器：

5.3.1试验药物

DMSO：DMSO溶剂对照；

阳性对照硫酸庆大霉素：2.5mg/mL；

样品来自实施例1-3中制得的四种样品（样品A：1.2.6所述之美洲大蠊水提物经超滤膜制 备的分子量<5KDa多肽样品；样品B：1.3.1所述之美洲大蠊醇提物D-101大孔吸附树脂柱 层析60％醇洗液；样品C：实施例2中依2.2法制得的美洲大蠊醇提物中分子量<5KDa多 肽样品；样品D：实施例3中依3.2法制得的美洲大蠊丙酮-水提物中分子量<5KDa多肽样 品）。配置成2.5mg/mL；样品用DMSO溶解。

5.3.2仪器

CO₂培养箱：美国Shellab公司产品；

XD-2倒置显微镜：重庆光电仪器有限公司产品；

生物安全柜：美国LABCONCO公司产品；

LDZX-40BI型立式自动电热压力蒸汽灭菌器：上海申安医疗器械厂产品。

5.4方法与步骤：

5.4.1制备M-H琼脂、M-H肉汤及试验菌液。

5.4.2双碟的制备：

（1）M-H琼脂底层：取灭菌M-H琼脂液体自然冷却凝固。

（2）M-H琼脂菌层：取菌液150μl与30mL的M-H琼脂混匀。取约5mL含菌液琼脂， 均匀摊布在具有M-H琼脂底层的平皿内。

5.4.3待培养基凝固后，在每个平皿中均匀放立加满试验药液牛津杯。

5.4.4置37℃培养24小时。

5.4.5用游标卡尺测量抑菌圈直径。

5.5结果：

样品A-D及阳性对照药物硫酸庆大霉素抑菌试验结果见表2。

表2.样品A-D及阳性对照药物（2.5mg/mL）对标准致病菌的抑菌圈直径（mm）

注：表中数字均为三次试验平均值。

5.6结论：

上述试验结果说明，美洲大蠊水提物经超滤膜制备的分子量<5KDa多肽样品（样品A）、 美洲大蠊醇提物中分子量<5KDa多肽样品（样品C）、美洲大蠊丙酮-水提物中分子量<5KDa 多肽样品（样品D）对革兰氏阴性菌之代表株大肠杆菌C84008有确切的抑制作用，且三 者对大肠杆菌C84008的抑制强度和治疗指数都优于美洲大蠊醇提物D-101大孔吸附树脂 柱层析60％醇洗液（样品B）；且样品A和C在同浓度下抑制强度还超过了阳性对照药 物硫酸庆大霉素；说明美洲大蠊中抑制大肠杆菌的有效成分极可能集中在分子量<5KDa多 肽样品范围中。从而可以预期其进一步开发成为防治革兰氏阴性菌感染类疾病的天然药 物，或与已上市之防治革兰氏阴性菌感染药物联合使用。

根据实施例1-3中对多肽样品收率和质量控制难易程度等因素可知：用超滤法对溶剂 提取的美洲大蠊提取物中分子量<5KDa多肽样品比D-101大孔树脂提取的有效部位对于大 肠杆菌的抑制活性强、收率更高、有效克服了D101树脂提取物质量控制不易的难题，从 而具有显著的优越性。本实施例说明用超滤法制备的美洲大蠊提取物中分子量<5KDa多肽 样品更有希望发展成为质量可控、安全有效的和防治革兰氏阴性菌感染的药品、日化用品、 和医疗器械。此外，其还可以作为抗菌饲料添加剂应用于制备动物饲料的生物工程。

实施例6：超滤膜分离法制备出美洲大蠊中分子量小于5KDa的多肽类有效部位的急性毒 性（LD₅₀）试验

6.1实验材料：

6.1.1待试样品：实施例1中得到的超滤膜分离法制备出美洲大蠊中分子量小于5KDa的多 肽类有效部位（样品A）；

6.1.2溶媒：0.5%CMC-Na；

6.1.3动物：ICR小鼠，雌雄兼用，体重19.0～20.9克，购自上海斯莱克实验动物有限责任 公司。

6.2实验方法：

6.2.1制备样品混悬液：称取样品A制成浓度为50毫克/毫升的混悬液。

6.2.2给药：将12只小鼠（雌雄各半），灌胃给予美洲大蠊分子量小于5KDa的多肽类样品 混悬液；给药容积为40毫升/公斤，给药剂量为2000毫克/公斤。

6.2.3观察记录：观察并记录给药后小鼠的反应情况。

6.3实验结果：连续观察给药后10天的动物进食与活动情况，未见小鼠呈任何异常反应， 未有死亡现象发生。

6.4实验结论：一般来说，治疗肿瘤药物急性毒性测试中，半数致死剂量>2.0克/公斤者 一半视为毒性较小，或者基本无毒。美洲大蠊分子量小于5KDa的多肽类样品满足这一要 求，所以属于低毒或基本无毒的有效部位，可以预期临床使用具有较高的安全系数。

实施例7：制备含有分子量小于5000道尔顿的蟑螂多肽抗菌男用肛门给药凝胶推射剂

取10.0克的Carbopol-940（卡波姆940），加水约900毫升，充分浸泡使其溶胀完全。 在机械搅拌下滴加10%氢氧化钠溶液适量，将其调整为pH值为7.0，再加入30克的甘露 醇，0.3克的EDTA-Na，0.8克的尼泊金乙酯，搅拌至全部溶解后，放置入烧杯中，高压流 通蒸汽灭菌30分钟（120℃，115Pa），室温下充分冷却，制成空白基质。另于无菌条件下 取5.0克赖氨酸，加入注射用水直至溶解完全，完全溶解后，将其在搅拌条件下加入到上 述空白基质中，制成混合液。然后称取按照实施例2方法制备的美洲大蠊提取物<5KDa的 多肽类物质（样品C）200毫克，加入注射用水搅拌至完全溶解，在不断搅拌条件下，将 多肽水溶液加入上述混合液中，调整溶液总体积为1000毫升。将其按照制剂规格要求装 入注射器中，灭菌后备用。由此制成男用肛门给药推射剂。

本品以美洲大蠊提取物<5KDa的多肽类分子为主药，还可以与多种辅料配方制备出不 同剂型的男用肛门推射剂水凝胶产品，并不限于本实施例所述之辅料配方。

实施例8：制备含有分子量小于5000道尔顿的蟑螂多肽抗菌温敏性女用阴道给药凝胶推 射剂

取聚卡波非500毫克、卡波莫1.0克、加入去离子水300毫升，充分浸泡使其溶胀完 全。搅拌下用氢氧化钠调pH值为5.0，在机械搅拌下加入15.0克的泊洛沙姆F127、5.0克 泊洛沙姆F68、3.0毫克十二烷基硫酸钠，5.0克甘油，搅拌至全部溶解后，放置入烧杯中， 高压流通蒸汽灭菌30分钟（120℃，115Pa），室温下充分冷却，制成空白基质。然后称取 按照实施例2方法制备的200毫克的美洲大蠊提取物<5KDa的多肽类物质（样品C），加 入注射用水搅拌至完全溶解，在不断搅拌条件下，将多肽水溶液加入上述混合液中，调整 溶液总体积为600毫升。将其按照制剂规格要求装入注射器中，灭菌后备用。由此制成温 敏性女用阴道给药凝胶推射剂。

本品以美洲大蠊提取物<5KDa的多肽类分子为主药，还可以与多种辅料配方制备出不 同剂型的温敏性女用阴道给药凝胶推射剂产品，并不限于本实施例所述之辅料配方。

实施例9：制备含有分子量小于5000道尔顿的蟑螂多肽抗菌泡沫凝胶

取椰子油脂肪酸单乙醇酰胺12.0克、聚乙二醇1.5克，十二烷基硫酸钠3.0毫克，加 去离子水500毫升，在机械搅拌下滴加氢氧化钠溶液适量，将其调整为pH值为4.3，搅拌 下滴加甘油5.0克，至全部溶解后，放置入烧杯中，灭菌30分钟，室温下充分冷却。另称 取按照实施例3方法制备的200毫克的美洲大蠊提取物<5KDa的多肽类物质（样品D）， 加入注射用水搅拌至完全溶解。在不断搅拌条件下，将该多肽水溶液加入上述已制备好的 基质混合液中，调整溶液总体积为600毫升。将其按照制剂规格要求装入喷雾器中，灭菌 后备用。由此制成泡沫凝胶剂。

本品以美洲大蠊提取物<5KDa的多肽类分子为主药，还可以与多种辅料配方制备出不 同剂型的泡沫凝胶剂型产品，并不限于本实施例所述之辅料配方。

实施例10：制备含有分子量小于5000道尔顿的蟑螂多肽抗菌人体可吸收外伤敷料

取5.0克的甘油、50毫克转化生长因子、3.0克止血环酸，常温下搅拌，使其溶解完 全。然后称取按照实施例1方法制备的2.0克的美洲大蠊提取物<5KDa的多肽类物质（样 品A），在机械搅拌下加入该溶液，超声分散10分钟。另取100毫升水中加入按照实施例 1方法提取的2.0克的美洲大蠊提取物<5KDa的多肽类物质（样品A），以及7.0克聚乙烯 醇、3.0克胶原，于60℃下充分搅拌使其完全溶解。将上述两种溶液在40℃下充分混合， 搅拌均匀后，置入烧杯中，灭菌后迅速冷却至-20℃。完全冷却后，将得到的粘稠状物置 于-80℃冷冻干燥机内，干燥48小时。取出后将其按照制剂规格要求分割包装，灭菌后备 用。由此制成皮肤外用敷料。

本品以美洲大蠊提取物<5KDa的多肽类分子为主药，还可以与多种辅料配方制备出不 同剂型的人体可吸收外伤敷料抗菌产品，并不限于本实施例所述之辅料配方。

实施例11：制备含有分子量小于5000道尔顿的蟑螂多肽抗菌巴布剂

取0.2克的酒石酸、0.2克的EDTA加入45克水中；搅拌下使其溶解，制成水相。将 15.0克丙二醇、100毫克甘羟铝、5.0克聚丙烯酸钠、2.0克聚维酮K-90、1.0克交联聚维 酮依次、少量多次加入甘油中，水浴加热下搅拌使其溶解完全，制成油相。然后称取按照 实施例2方法制备的3.0克的美洲大蠊提取物<5KDa的多肽类物质（样品C），并在机械搅 拌下加入油相中，再在油相中加入3.0克氮酮，超声分散10分钟。将上述两种溶液（水相 和油相）在40℃下充分混合，搅拌均匀后，将得到的膏体均匀涂布于无纺布上，灭菌后盖 上聚乙烯薄膜。剪切制成皮肤外用抗菌巴布剂。

巴布膏剂的特征为制备使用方便、揭帖自如，本品以美洲大蠊提取物<5KDa的多肽类 分子为主药。其亦可以与多种辅料配方制备出不同剂型的外用巴布膏剂抗菌产品，并不限 于本实施例所述之辅料配方。

实施例12：制备含有分子量小于5000道尔顿的蟑螂多肽抗菌湿纸巾

取根据实施例3的方法制备得到的美洲大蠊提取物<5KDa的多肽类物质5.0克，加入 6克丙二醇、8克2,3-二甲氧基-5-甲基-6-葵二烯基-1,4-苯二醇，在室温下充分溶解于200 毫升水中，制成混合液A。再取2克聚氧乙烯失水山梨醇单硬脂酸酯、6克硬脂酸、2克聚 氧乙烯硬化蓖麻油溶于10克甘油和17毫升乙醇的混合溶剂中，制成混合液B。强烈搅拌 下将A液和B液混合，加入5毫升柏叶油香精，成为均匀的混合液。将该混合液微孔过滤， 除去灰尘和不溶物，药液均匀浸润纸巾，整形、切割成4.0cm×10.0cm大小的形状，装 入塑料袋内，密封后切割呈小包装型。用于日常生活中除菌、美肤之用。

实施例13：制备含有分子量小于5000道尔顿的蟑螂多肽抗菌喷雾剂

取根据实施例2的方法所制得的美洲大蠊提取物<5KDa的多肽类物质5.0克，加入70 克70%乙醇，搅拌后加入2.2克吐温20，搅拌均匀后，定量装入气雾剂耐压瓶中，压盖。 然后在800kpa压力下，向瓶内压入经为经滤膜过滤的抛射剂HFA-134a，所用抛射剂的量 为80克左右；得到含有分子量小于5000道尔顿的蟑螂多肽抗菌喷雾剂。该喷雾剂可以作 为日常消毒、厨房灭菌、手术器具消毒、性生活后消毒、口腔消毒等使用。

实施例14：制备含有分子量小于5000道尔顿的蟑螂多肽抗菌饲料添加剂

取根据实施例1的方法所制得的美洲大蠊提取物<5KDa的多肽类物质15.0克，与粉碎 为20-50目的玉米200克、稻谷200克、大麦200克、小麦200克、高粱200克、麦麸100 克、米糠100克、豆饼200克、豆粕100克、鱼粉50克、蚕蛹粉60克、草粉80克、贝 壳粉60克、骨粉70克、食盐6克，充分混合后，制成猪用饲料。用于生猪喂养中的抗菌 消毒，以预防牲畜饲养中常发生的下痢、肠炎等疾病。

在上述说明书阐述本发明时，同时提供了实施例的目的是举例说明本发明的实际操作 过程和本发明的意义。在进入本发明权利要求和其等同物范围内时，本发明的实际应用包 括所有一般变化、配合，或改进。