一种前列宁药物组合物及其制剂的制备方法

摘要

本发明涉及一种前列宁药物组合物及其制剂的制备方法。该方法包括挥发油提取及包合、水提取、制剂成型等步骤。与传统方法制备的制剂相比，本发明的方法制备的药物组合物去除了无效杂质，在相同疗效的情况下，患者服药量少。采用β-环糊精包合工艺进行保护，有效的保证了挥发油类药效成分的稳定。本发明的方法制备的药物制剂在保留原制剂药效的前提下，可实现吸收快，有效成分集中到达病灶部位，起效快，生物利用度高。本发明方法制备的药物制剂提高了疗效。

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其制剂的制备方法，特别涉及一种用于热毒瘀阻所引起 的尿频，尿急，尿痛属中医淋证的前列宁药物组合物及其制剂的制备方法。

背景技术

热淋证属中医学淋证的范畴，包括现代医学的急慢性前列腺炎、前列腺增生肥大、急 慢性肾盂肾炎、膀胱炎、尿道炎等疾患，病机为湿热毒邪客于膀胱，气化失司，水道不利； 盖火性急故溲频而急；湿热壅盛，气机失宣，故尿难涩；湿热蕴蒸，灼热刺痛，故尿黄赤。 目前西医多以广谱抗生素抗菌消炎为主；而中医辩证属下焦湿热蕴结、膀胱气化不利而引 发的各种前列腺疾病和泌尿系统感染，即热淋，则以清热解毒，化瘀通淋为主要治则，弥 补了西药对肝肾损害大的缺点。然现有治疗热淋的中药虽多，但大都难以达到理想疗效。

前列宁胶囊为金诃藏药股份有限公司独家产品，原标准收载于国家中成药标准汇编内 科肾系分册，2012年该标准转正，标准号是：WS-10627(ZD-0762)-2002-2011Z，是由以下 重量配比的药材制成的：菥蓂子58.7g、石韦41.2g、蒲公英41.2g、刺柏29.3g、诃子29.3g、 刀豆22.8g、芒果核17.5g、蒲桃17.5g、大托叶云实17.5g、紫草茸11.4g、藏茜草17.5g、 红花11.4g、豆蔻5.9g。制法为：上述十三味药材，粉碎成细粉，过筛，混匀，装入胶囊， 即得。前列宁胶囊功能清热解毒，化瘀通淋。用于热毒瘀阻所引起的尿频，尿急，尿痛属 中医淋证者。方中菥蓂子入肾经，清肾热，可利尿通淋，为方中君药；石韦和蒲公英共为 臣药，石韦凉血止血，蒲公英清热散结，共同辅助君药，增强其利尿通淋之功；刺柏、诃 子、刀豆、芒果核、蒲桃、大托叶云实、紫草茸、藏茜草、红花、豆蔻为佐药，刺柏清热 解毒，藏茜草清热凉血，佐助君臣，增强清肾中热邪的功效，芒果核滋阴补肾，蒲桃，大 托叶云实温肾祛寒，诃子涩肠止泻，刀豆，豆蔻温中补肾，辅助君臣，同时还有温肾补肾 作用，紫草茸和红花活血化瘀，促进君臣药的清热之功。

前列宁胶囊组方科学，经临床验证，疗效显著。但是，现有技术关于前列宁药物的制 备方法均采用原料药材粉碎、混合的简单物理处理，不便于制剂形式的多样化，原料药的 有效成分释放缓慢，制成制剂后服药量大，因此提供一种能快速溶出、方便患者使用的前 列宁组合物具有重要的意义。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种前列宁的药物组合物及其制剂的制备方法。

本发明的技术方案如下：

一种前列宁药物组合物及其制剂的制备方法，所述药物组合物的原料药重量份组成为： 菥蓂子20-120重量份、石韦15-85重量份、蒲公英15-85重量份、刺柏12-70重量份、诃子 12-70重量份、刀豆10-50重量份、芒果核8-40重量份、蒲桃8-40重量份、大托叶云实8-40 重量份、紫草茸5-25重量份、藏茜草8-40重量份、红花5-25重量份、豆蔻2-15重量份； 包括以下步骤：

（1）按原料药配比组成取菥蓂子、刺柏、蒲桃、大托叶云实、豆蔻共5味药材，加水 4-14重量倍，采用水蒸汽蒸馏法，提取挥发油3-7h，收集挥发油，药液滤过，得提取液A′ 和药渣A；

将收集得到的挥发油加入重量体积百分比3-7%的β-环糊精水溶液中，挥发油与β-环糊 精的体积重量比为1ml:3-7g，保持温度40-60℃，搅拌2-6h，0-4℃冷藏12-24h，抽滤，沉 淀物40-60℃真空干燥，得挥发油包合物；

（2）取药渣A，加入体积浓度为40-95%的乙醇溶液提取1-4次，每次加的量是所述药 渣A总重量的4-12倍，每次提取1-4小时，滤过，回收乙醇，与步骤（1）提取挥发油后的 提取液A′合并，浓缩至50-60℃条件下相对密度为1.20-1.40的稠膏；将稠膏干燥，得提取 物B；

（3）按原料药组成配比取石韦、蒲公英、诃子、刀豆、芒果核、藏茜草共6味药材， 加水提取1-4次，每次加水的量是所述6味药材总重量的5-16倍，提取1-4h，滤过，浓缩 至50-60℃条件下相对密度为1.20-1.40的稠膏；将稠膏干燥，得提取物C；

（4）按原料药组成配比取红花，加水浸提1-3次，浸提温度20-80℃，每次加水的量是 所述红花药材重量的10-30倍，浸提4-12小时，滤过，滤液喷雾干燥，进风口温度170-190 ℃，出风口温度70-90℃，得提取物D；

（5）按原料药组成配比取紫草茸，粉碎成1-200μm，得药材细粉E；

（6）将上述步骤（1）制得的挥发油包合物、步骤（2）制得的提取物B、步骤（3）制 得的提取物C、步骤（4）制得的提取物D、步骤（5）制得的药材细粉E，混匀，得前列宁 药物组合物，加入常规辅料，按照常规工艺制备成药学上可接受的任何一种剂型，包括片 剂、胶囊、口服液、滴丸、颗粒剂、浓缩丸等。

所述辅料包括溶剂、稀释剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、 基质中的一种或几种的组合。

优选的，一种前列宁药物组合物及其制剂的制备方法，所述药物组合物的原料药组成 为：

菥蓂子30-80重量份、石韦30-50重量份、蒲公英30-50重量份、刺柏20-40重量份、 诃子20-40重量份、刀豆15-35重量份、芒果核15-30重量份、蒲桃15-30重量份、大托叶 云实15-30重量份、紫草茸8-15重量份、藏茜草15-30重量份、红花8-15重量份、豆蔻4-8 重量份。

进一步优选的，一种前列宁药物组合物及其制剂的制备方法，所述药物组合物的原料 药组成为：

菥蓂子58.7重量份、石韦41.2重量份、蒲公英41.2重量份、刺柏29.3重量份、诃子 29.3重量份、刀豆22.8重量份、芒果核17.5重量份、蒲桃17.5重量份、大托叶云实17.5 重量份、紫草茸11.4重量份、藏茜草17.5重量份、红花11.4重量份、豆蔻5.9重量份。

根据本发明优选的，一种前列宁药物组合物的制备方法，所述药物组合物的原料药组 成为：菥蓂子58.7g、石韦41.2g、蒲公英41.2g、刺柏29.3g、诃子29.3g、刀豆22.8g、芒 果核17.5g、蒲桃17.5g、大托叶云实17.5g、紫草茸11.4g、藏茜草17.5g、红花11.4g、豆蔻 5.9g；包括以下步骤：

（1）按原料药组成配比取菥蓂子、刺柏、蒲桃、大托叶云实、豆蔻共5味药材，加水 8倍量，采用水蒸汽蒸馏法，提取挥发油4h，收集挥发油，药液滤过，得提取液A′和药渣 A；

将收集得到的挥发油加入重量体积百分比4%的β-环糊精水溶液中，挥发油与β-环糊精 的体积重量比为1ml:4g，搅拌条件下，保持温度50℃，搅拌4h，4℃冷藏12h，抽滤，沉淀， 50℃真空干燥，得挥发油包合物；

（2）取药渣A，加入体积浓度为60%的乙醇溶液回流提取2次，每次加的量是所述药 渣A总重量的8倍，第一次提取2小时，第二次提取1小时，滤过，回收乙醇，与步骤（1） 提取挥发油后的提取液A′合并，浓缩至55℃条件下相对密度为1.25的稠膏；将稠膏干燥， 得提取物B；

（3）按原料药组成配比取石韦、蒲公英、诃子、刀豆、芒果核、藏茜草共6味药材， 加水提取2次，每次提取2小时，每次加水8重量倍，滤过，浓缩至55℃条件下相对密度 为1.24的稠膏；将稠膏干燥，得提取物C；

（4）按原料药组成配比取红花，加水浸提2次，浸提温度40℃，每次加水的量是所述 红花药材重量的20倍，第一次浸提10小时，第二次浸提6小时，滤过，滤液喷雾干燥， 进风口温度180℃，出风口温度75℃，得提取物D；

（5）按原料药组成配比取紫草茸，粉碎成120μm，得药材细粉E；

（6）将上述步骤（1）制得的挥发油包合物、步骤（2）制得的提取物B、步骤（3）制 得的提取物C、步骤（4）制得的提取物D、步骤（5）制得的药材细粉E，混匀，得前列宁 药物组合物，加入常规辅料，按照常规工艺制备成胶囊剂。

本发明的前列宁药物组合物中总黄酮类是其主要药效成分，因此采用“亚硝酸钠-硝酸 铝-氢氧化钠显色法”对前列宁药物组合物的总黄酮含量进行多批次测定，制定含量检测指 标。结果以芦丁计，前列宁药物组合物总黄酮含量不得少于1.6mg/g

本发明的前列宁药物组合物中有机酸为另一类药效成分，采用电位滴定法进行多批次 测定，制定总有机酸的含量测定指标。结果以没食子酸计，前列宁药物组合物总有机酸含 量不得少于5.0mg/g。

因此，所述前列宁药物组合物中总黄酮含量不得少于1.6mg/g，总有机酸含量不得少于 5.0mg/g。

本发明重量份和体积份的关系为g/ml或kg/L。

本发明的有益效果如下：

1、本发明以植化成分为物质基础，充分考虑药物有效成分的性质，分别采用不同的提 取方法制备而成，与传统方法制备的制剂相比，本发明的方法制备的药物组合物去除了无 效杂质，在保证疗效的前提下，减少了患者服药量。

2、本发明对配方药材的挥发油成分，进行了提取，并采用β-环糊精包合工艺进行保护， 有效的保证了挥发油类药效成分的稳定。具体见试验例数据说明。

3、本发明对药材进行提取，以提取物形式入药，可根据临床需要，制备成多种剂型， 克服了原有技术均为原药材粉碎入药，不适合现代剂型的缺点，采用本发明技术所得的药 物组合物可用于片剂、胶囊、口服液、滴丸、颗粒剂、浓缩丸等多种剂型。

具体实施方式

下述实施例和实验例用于进一步说明但不限于本发明。实验例中所使用的是本发明实 施例1的方法制备的前列宁药物组合物。

实施例1药物组合物的原料药重量份配比如下：

菥蓂子58.7g、石韦41.2g、蒲公英41.2g、刺柏29.3g、诃子29.3g、刀豆22.8g、芒果 核17.5g、蒲桃17.5g、大托叶云实17.5g、紫草茸11.4g、藏茜草17.5g、红花11.4g、豆蔻 5.9g。

作为对比用的原前列宁胶囊为青海金诃藏药药业股份有限公司产品。 实施例1、一种前列宁药物组合物胶囊的制备

（1）按原料药组成配比取菥蓂子58.7g、刺柏29.3g、蒲桃17.5g、大托叶云实17.5g、 豆蔻5.9g共5味药材128.9g，加水1031.2g，采用水蒸汽蒸馏法，提取挥发油4h，收集挥 发油，得1.05ml，药液滤过，得提取液A′和药渣A；

将收集得到的挥发油加入重量体积百分比4%的β-环糊精水溶液中，挥发油与β-环糊精 的体积重量比为1ml:4g，搅拌条件下，保持温度50℃，搅拌4h，4℃冷藏12h，抽滤，沉淀， 50℃真空干燥，得挥发油包合物3.9g；

（2）取药渣A，加入体积浓度为60%的乙醇溶液回流提取2次，每次加的量是1031.2g， 第一次提取2小时，第二次提取1小时，滤过，回收乙醇，与步骤（1）提取挥发油后的提 取液A′合并，浓缩至55℃条件下相对密度为1.25的稠膏；将稠膏干燥，得乙醇提取物B13.4g；

（3）按原料药组成配比取石韦41.2g、蒲公英41.2g、诃子29.3g、刀豆22.8g、芒果核 17.5g、藏茜草17.5g共6味药材169.5g，加水提取2次，每次提取2小时，每次加水1356g， 滤过，浓缩至55℃条件下相对密度为1.24的稠膏；将稠膏干燥，得水提取物C41.7g；

（4）按原料药组成配比取红花11.4g，加水浸提2次，浸提温度40℃，每次加水的量 是228g，第一次浸提10小时，第二次浸提6小时，滤过，滤液喷雾干燥，进风口温度180 ℃，出风口温度75℃，得提取物D3.9g

（5）按原料药组成配比取紫草茸11.4g，粉碎成120μm，得药材细粉E11.4g；

（6）将上述步骤（1）制得的挥发油包合物、步骤（2）制得的提取物B、步骤（3）制 得的提取物C、步骤（4）制得的提取物D、步骤（5）制得的药材细粉E，混匀，得前列宁 药物组合物。加入玉米淀粉11.5g，混合均匀，用体积百分比80%乙醇制粒，干燥，整理， 装胶囊，每粒装0.25g，即得前列宁药物组合物胶囊。

前列宁药物组合物胶囊每次服用1粒，所服原药材的量相当于原前列宁胶囊3粒，大 大减少了患者用药量。 实施例2、一种前列宁药物组合物颗粒剂的制备

（1）按原料药组成配比取菥蓂子58.7g、刺柏29.3g、蒲桃17.5g、大托叶云实17.5g、 豆蔻5.9g共5味药材128.9g，加水1289g，采用水蒸汽蒸馏法，提取挥发油6h，收集挥发 油，得1.02ml，药液滤过，得提取液A′和药渣A；

将收集得到的挥发油加入重量体积百分比6%的β-环糊精水溶液中，挥发油与β-环糊精 的体积重量比为1ml:6g，搅拌条件下，保持温度40℃，搅拌6h，2℃冷藏20h，抽滤，沉淀， 40℃真空干燥，得挥发油包合物5.5g；

（2）取药渣A，加入体积浓度为80%的乙醇溶液回流提取3次，第一次加的量是1031.2g， 提取2小时，第二次加的量是773.4g，提取2小时，第三次加的量是773.4g，提取1小时， 滤过，回收乙醇，与步骤（1）提取挥发油后的提取液A′合并，浓缩至50℃条件下相对密度 为1.27的稠膏；将稠膏干燥，得乙醇提取物B13.8g；

（3）按原料药组成配比取石韦41.2g、蒲公英41.2g、诃子29.3g、刀豆22.8g、芒果核 17.5g、藏茜草17.5g共6味药材169.5g，加水提取2次，第一次加1695g，提取2小时，第 二次加1356g，提取1小时，滤过，浓缩至50℃条件下相对密度为1.27的稠膏；将稠膏干 燥，得水提取物C41.3g；

（4）按原料药组成配比取红花11.4g，加水浸提2次，浸提温度20℃，每次加水的量 是285g，第一次浸提12小时，第二次浸提4小时，滤过，滤液喷雾干燥，进风口温度180 ℃，出风口温度80℃，得提取物D3.5g

（5）按原料药组成配比取紫草茸11.4g，粉碎成150μm，得药材细粉E11.4g

（6）将上述步骤（1）制得的挥发油包合物、步骤（2）制得的提取物B、步骤（3）制 得的提取物C、步骤（4）制得的提取物D、步骤（5）制得的药材细粉E，混匀，得前列宁 药物组合物。加入蔗糖粉60g，糊精30g，混匀，用75%乙醇制粒，干燥，整粒，得前列宁 药物组合物颗粒，每袋装0.5g。

前列宁药物组合物颗粒每次服用1袋，相当于前列宁胶囊3粒。

实施例3、一种前列宁药物组合物片剂的制备

（1）按原料药组成配比取菥蓂子58.7g、刺柏29.3g、蒲桃17.5g、大托叶云实17.5g、 豆蔻5.9g共5味药材128.9g，加水1546.8g，采用水蒸汽蒸馏法，提取挥发油3h，收集挥 发油，得0.98ml，药液滤过，得提取液A′和药渣A；

将收集得到的挥发油加入重量体积百分比5%的β-环糊精水溶液中，挥发油与β-环糊精 的体积重量比为1ml:5g，搅拌条件下，保持温度60℃，搅拌3h，3℃冷藏12h，抽滤，沉淀， 60℃真空干燥，得挥发油包合物4.8g；

（2）取药渣A，加入体积浓度为50%的乙醇溶液回流提取2次，每次加的量是773.4g， 每次提取2小时，滤过，回收乙醇，与步骤（1）提取挥发油后的提取液A′合并，浓缩至60℃ 条件下相对密度为1.22的稠膏；将稠膏干燥，得乙醇提取物B13.3g；

（3）按原料药组成配比取石韦41.2g、蒲公英41.2g、诃子29.3g、刀豆22.8g、芒果核 17.5g、藏茜草17.5g共6味药材169.5g，加水提取3次，第一次加1695g提取2小时，第 二次加1356g，提取1小时，第三次加1017g，提取1小时，滤过，浓缩至60℃条件下相对 密度为1.23的稠膏；将稠膏干燥，得水提取物C42.2g；

（4）按原料药组成配比取红花11.4g，加水浸提3次，浸提温度30℃，每次加水的量 是228g，第一次浸提10小时，第二次浸提6小时，第三次浸提4小时，滤过，滤液喷雾干 燥，进风口温度175℃，出风口温度75℃，得提取物D4.1g

（5）按原料药组成配比取紫草茸11.4g，粉碎成75μm，得药材细粉E11.4g

（6）将上述步骤（1）制得的挥发油包合物、步骤（2）制得的提取物B、步骤（3）制 得的提取物C、步骤（4）制得的提取物D、步骤（5）制得的药材细粉E，混匀，得前列宁 药物组合物。加入淀粉20g，糊精10g，混合均匀，加75%乙醇制粒，干燥，整粒，加入颗 粒重量3%的硬脂酸镁，混匀，压片，包薄膜衣或糖衣，即得。薄膜衣片每片重0.32g，糖 衣片每素片重0.31g

前列宁药物组合物片剂每次服用1片，相当于前列宁胶囊3粒。

实验例1、稳定性试验

以挥发油为指标，考察挥发油β-环糊精包合技术优点。

试验组按实施例1的方法提取挥发油，并包合，同时制备前列宁组合物胶囊；对照组 取前列宁提取物（即实施例1中乙醇提取物B，水提取物C，喷雾干燥药粉D，药材细粉E 的混合物），将挥发油喷入后，制备前列宁胶囊；同一条件（温度40℃±2℃，相对湿度 75%±5%）下放置0、1、2、3、6个月，检测挥发油含量，结果见表1。

表1β-环糊精包合对挥发油稳定性的考察结果

结果表明，本发明挥发油用β-环糊精包合后，可提高挥发油在制剂中的稳定性。

实验例2、挥发油提取试验

1、加水量的考察

按原料药配比取菥蓂子58.7g，刺柏29.3g，蒲桃17.5g，大托叶云实17.5g，豆蔻5.9g， 共5味总计128.9g，取4份，分别加3、5、8、10重量倍水提取挥发油4小时，结果见表2。

表2挥发油提取加水量的考察试验

结论：结果表明，随加水量的增加，收油量增加，加8倍、10倍量时，其收油量基本 相同，收油量基本不再增加，为节约成本，选择加8倍的水提取挥发油。

2、提取时间考察

按原料药配比取菥蓂子58.7g，刺柏29.3g，蒲桃17.5g，大托叶云实17.5g，豆蔻5.9g， 共5味总计128.9g，取3份，分别加8倍量水，提取挥发油，记录不同时间的收油量，试 验结果见表3。

表3不同提取次数的考察试验

结论：结果表明，加8倍量水，提油4小时，其累计收油量占10小时收油量的95%以 上，从经济角度出发，故选择提油时间为4小时。

从上述的表2和表3两个实验结果显示，挥发油最佳提取工艺为加8倍量水连续回流 提取4小时，收集挥发油。 实验例3、乙醇提取试验

按原料药配比取菥蓂子58.7g，刺柏29.3g，蒲桃17.5g，大托叶云实17.5g，豆蔻5.9g， 共5味总计128.9g，照优选工艺提取挥发油后，药渣加不同浓度的乙醇提取。以提取液中 总黄酮得率为指标，采用正交试验法，对提取时间，提取次数，加醇量，乙醇浓度四个因 素进行考察，各取三个水平，因素水平表见表4.正交设计及结果见表5.

表4因素水平表

表5正交试验设计表及结果

由极差分析可知，三个水平的提取时间，极差最小，因此，以提取时间作为误差项，进 行方差分析，结果见表6.

表6正交试验方差分析表

以总黄酮的得率进行评价分析，由表2的极差R值大小显示，各因素的作用主次为：B ＞A＞C＞D，以A₁B₂C₂D₂为佳；方差分析结果表明，提取次数具有显著性差异，而乙醇浓 度，提取时间和加醇量对总黄酮得率没有显著影响。为使总黄酮及其他成分能充分提出， 并从节约成本角度考虑，选择提取时间为第一次2小时，第二次1小时。提取2次为提取3 次的93.68%，从经济角度考虑，选择提取2次。加醇量没有显著性差异，加6倍量为加10 倍亮的95.31%，而实际操作中，加6倍量有些少，所以，选择加8倍量。因此，工艺优选 为加体积浓度为60%的乙醇提取2次，第一次加8倍量提取2小时，第二次加8倍量提取1 小时。

2、正交验证试验

以上述直观分析最佳工艺A₁B₃C₂D₃和优选工艺分别进行三份验证试验，测定总黄酮得 率，结果见表7。

表7正交试验验证结果

由验证试验结果可知，优选工艺和最佳工艺的总黄酮得率差别不大，因此确定提取工 艺为加60%乙醇提取二次，第一次加8倍量提取2小时，第二次加8倍量提取1小时。 实验例4、水提取试验

按原料药配比取石韦41.2g、蒲公英41.2g、诃子29.3g、刀豆22.8g、芒果核17.5g、 藏茜草17.5g、红花11.4g，共7味总计180.9g。以提取液中总黄酮和总有机酸的得率为指 标，采用正交试验法，对提取时间，提取次数，加液量三个因素进行考察，各取三个水平， 因素水平表见表8.正交设计及结果见表9.方差分析结果见表10.

指标评价：总黄酮和总有机酸均为有效成分，故总黄酮权重系数定位0.5，总有机酸权 重系数定位0.5。综合评分按下式计算：

综合评分=（总有机酸得率/最大得率）×0.5×100+（总黄酮得率/最大得率） ×0.5×100。

表8因素水平表

表9正交试验设计表及结果

表10正交试验方差分析表

由表9的极差R值大小显示，各因素的作用主次为：B＞A＞C，以A₂B₂C₂为佳；方差分 析结果表明，B因素提取时间具有显著性差异，提取次数和加液量对试验结果没有显著影响。 因此，工艺优选为加8倍量水提取2次，每次提取2小时。

2、正交验证试验

根据优选工艺进行三份验证试验，测定总黄酮得率和总有机酸得率，结果见表11。

表11正交试验验证结果

由验证试验结果可知，通过正交试验优选的工艺可重复性高，因此确定提取工艺为加8 倍量水提取2次，每次提取2小时。

实验例5、抗急性炎症作用试验研究

一、试验材料

1、试验动物

昆明种小鼠，雄性，18～22g，山东省天然药物工程技术研究中心试验动物中心，合 格证号：SYXK(鲁)20030020。

2、试验药品与试剂

受试药：实施例1胶囊。

阳性对照药：前列宁胶囊，规格0.3g/粒，批号：20100918，由青海金诃藏药药业股 份有限公司提供。吲哚美辛，规格25mg/片，批号：A100802，市售。

试剂：冰醋酸，天津广成化学试剂有限公司，批号20100515；伊文氏兰，国药集团化 学试剂有限公司，批号：WC20090626；生理盐水，山东齐都药业有限公司，批号：3B10102305； CMC-Na，上海万邦化工，批号：20100918。

3、仪器

离心机，上海医用分析仪器厂，型号：TGL-16G；Synergy HT多功能酶标仪，美国Bio-Tek 公司型号：Synergy HTⅡ；电子天平（OHAUS，AR124CN）；电子计量秤，上海寺冈电子有 限公司制造，DS-671型。

二、试验内容

1、动物分组、给药

小鼠按体重随机分为5组：对照组、模型组、吲哚美辛（10mg/kg，运用体表面积法按 照人的临床用药剂量折算小鼠用药剂量，以下同，此剂量为临床人用药剂量的1倍）组、前 列宁胶囊（0.25g/kg，此剂量分别为临床人用药剂量的1倍）组，实施例1胶囊（0.083g/kg， 此剂量分别为临床人用药剂量的1倍）组，每组10只。每只小鼠灌胃给药，给药体积为0.2 mL/10g，对照组和模型组给予同体积的1%CMC-Na溶液。

2、指标测定

各组小鼠给予相应药物，2h后尾静脉注射1.0%伊文氏兰（0.1mL/10g），同时腹 腔注射0.6%醋酸（0.1mL/10g），20min后颈部脱臼处死小鼠，腹腔注射生理盐水3.0mL， 按揉10次，取腹腔液1.5mL，4000r/min离心10min，取200μL于590nm波长检测吸 光度。根据标准曲线求得各组小鼠腹腔液伊文氏兰含量。

3、数据处理

试验结果以表示，多组比较采用方差分析及LSD多组均数两两比较。P＜0.05 为有统计学差异。

4、试验结果

与模型组比较，前列宁胶囊组、实施例1组合物前列宁胶囊组小鼠腹腔液伊文氏兰含 量明显减少(P＜0.05或P＜0.01，表1)。

表1如意珍宝丸对小鼠小鼠腹腔液伊文氏兰含量影响

注：与对照组比较：^##P＜0.01；与模型组比较：^*P＜0.05；^**P＜0.01。

三、试验结论

前列宁胶囊及实施例1组合物前列宁胶囊均具有抗急性炎症作用，且实施例1组合物 前列宁胶囊抗炎效果更佳。

实验例6、总黄酮检测试验

本发明的前列宁药物组合物中总黄酮类是其主要药效成分，因此采用“亚硝酸钠-硝酸 铝-氢氧化钠显色法”对实施例1的前列宁药物组合物的总黄酮含量进行测定。测定方法如 下：

（1）对照品储备液的制备：取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度约为 0.15mg/ml的芦丁对照品储备液。

（2）标准曲线制备：分别取（1）中的芦丁对照品储备液0、1、2、3、5ml于25ml量 瓶中，分别用水补足至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，混匀，静置6min，加10%硝酸铝溶 液1ml，摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液10ml，摇匀，加水至刻度，摇匀，放置15min， 500nm下测定吸光度，绘制标准曲线。

（3）药材溶液制备：取前列宁胶囊原料药配方药材，分别粉碎成细粉，按前列宁胶囊 原料药组成配比混匀，取粉末5g，置100ml茄形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加 热回流2小时，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml至10ml量瓶中， 用甲醇稀释至刻度，取该溶液3ml至25ml量瓶中，按标准曲线溶液的配制方法，自“分别 用水补足至6ml……”起，同法操作。

（4）样品溶液制备：取前列宁药物组合物粉末1g，置100ml茄形瓶中，精密加入甲醇 50ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤 液1ml至10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，取该溶液3ml至25ml量瓶中，按标准曲线溶 液的配制方法，自“分别用水补足至6ml……”起，同法操作。

（5）结果：结果以芦丁计，前列宁药物组合物总黄酮含量为3.26mg/g，所述药材中总 黄酮含量为0.76mg/g，转移率为（3.26×74.3）÷（1.16×321.2）×100%=65.01%

实验例7、总有机酸检测试验

本发明的前列宁药物组合物中有机酸为另一类药效成分，参照《中国药典》2010年版 一部附录ⅧA电位滴定法对实施例1的前列宁药物组合物的总有机酸含量进行测定。测定 方法如下：

（1）对照品溶液的制备：取没食子酸对照品10mg，用无水乙醇溶解，并稀释至100ml 量瓶中，即得。

（2）对照品溶液滴定曲线的制备：精密吸取（1）中的没食子酸对照品溶液20ml于烧 杯中，将烧杯放在滴定台上，插入pH复合电极，开动磁力搅拌器，用0.0100mol/L氢氧化 钠溶液滴定，滴定时记录滴定过程中用去的氢氧化钠溶液的体积及其相对应的电位变化值， 同时进行空白校正。结果消耗的氢氧化钠溶液体积为3.80ml，与理论值相吻合，由公式V_碱=2C_酸·V_酸/C_碱计算消耗碱量为3.79ml，滴定终点明显。

（3）药材溶液制备：取前列宁胶囊原料药配方药材，分别粉碎成细粉，按前列宁胶囊 原料药组成配比混匀，精密称取10g干燥至恒重的前列宁配方药材粉末，于80℃进行回流 提取。提取液滤过后稀释至100ml的量瓶中，分别精密吸取上述样品溶液各20ml，按（2） 项下操作，利用电位滴定法测定并计算前列宁药物组合物总有机酸的含量。

（4）待测样品总有机酸的提取和测定：精密称取4g干燥至恒重的前列宁药物组合物 粉末，于80℃进行回流提取。提取液滤过后稀释至100ml的量瓶中，分别精密吸取上述样 品溶液各20ml，按（2）项下操作，利用电位滴定法测定并计算前列宁药物组合物总有机酸 的含量。

上述（3）和（4）均根据下面公式计算前列宁药物组合物总有机酸的含量：

总有机酸含量=CK(V－V₀)/(m×20/100)×100%

式中：V为滴定样品消耗氢氧化钠溶液的体积；V₀为空白消耗氢氧化钠溶液的体积；C 为氢氧化钠溶液浓度；K为换算成主要酸的系数，即1m mol氢氧化钠相当于主要酸的系数， K=0.059；m为样品质量。

（4）结果：结果以没食子酸计，前列宁药物组合物总有机酸含量为7.9mg/g，所述药 材中总有机酸含量为2.51mg/g，转移率为（7.9×74.3）÷（2.58×321.2）×100%=70.83%。

经检测，实施例1所述前列宁药物组合物中总黄酮含量和总有机酸含量均高于规定的 量。