一种单一糖簇及杂合糖簇化合物及其制备方法和用途

摘要

本发明公开了一种式(I)所示单一糖簇及杂合糖簇化合物，其中式(I)化合物中取代基定义详见说明书。此外，还公开了这类化合物的制备方法、药物组合物。该类化合物具有抗粘附、内毒素休克保护作用。

说明书

技术领域

本发明涉及药物化学技术领域，更具体地说，涉及一类新的单一糖簇 和杂合糖簇，及其制备方法和在抗粘附、抗休克药物生物学研究中的用途。

背景技术

内毒素休克(Endotoxic Shock，ES)是由革兰阴性菌产生的内毒素引起 的一种以组织低灌流、低血压及器官功能障碍为主要特征的全身危重综合 征。全身血管低反应性、广泛的内皮细胞激活或损伤、弥散性血管内凝血 甚至多器官功能障碍是ES的典型病理生理改变。由于ES的高发病率和高 死亡率，引起了人们的广泛关注。

内毒素由脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)与蛋白质复合而成。脂多 糖为革兰阴性细菌细胞膜表面的主要组成成分，在细菌和外界环境的相互 作用中扮演着重要角色。临床上，ES主要由革兰阴性菌感染或肠道细菌移 位引起，细菌在大量繁殖代谢的过程中持续裂解，形成大量的细胞外膜碎 片，即LPS；LPS向周围组织器官或经血液及淋巴移位，进入脉管系统中 的大部分LPS与血浆中脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide binding  protein，LBP)结合，形成LPS-LBP复合物。LPS-LBP又与CD14分子结合， 形成LPS-LBP-CD14复合物，并通过糖基磷脂酰肌醇(glucosyl  phosphatidylinositol，GPI)锚定于细胞膜上。CD14没有胞浆区内段，所以 CD14不能直接向细胞内传递细胞信号。研究发现，LPS细胞膜受体主要 是Toll样受体4(Toll-like receptor 4，TLR4)，LPS通过与TLR4结合将LPS 的刺激信号向细胞内传导，即激活细胞内各种蛋白质的基因表达系统 (MAPK、NF-κB等)(Palsson-McDermott EM，O Neill LA.Signal  transduction by the lipopolysaccharide receptor，Toll-like receptor-4. Immunology，2004，113(2)：153～162)。继而激活了细胞粘附分子、TNF- α、IL-6等炎症因子的转录表达(Andreakos E，Sacre SM，Smith C，et  al.Distinct pathways of LPS-induced NF-kappaB activation and cytokine  production in human myeloid and nonmyeloid cells defined by selective  utilization of MyD88 andMal/TIRAP.Blood，2004，103(6)：2229～2237)。 同时，LPS和TNF-α等细胞因子引起了白细胞，淋巴细胞和内皮细胞的全 面活化，导致黏附分子的上调，促使中性粒细胞和单核细胞的黏附和侵润， 加重炎症反应(Karima，R.，Matsumoto，S.，Higashi，H.，Matsushima， K.：The molecular pathoenesis of endotoxic shock and organ failure.Mol.Med. Today，1999，(5)：123-132)。这种由血管内外吞噬细胞引起的损伤，与其 他途径引起的损伤一起，最终将导致多器官功能衰竭。

前人的研究已经证实白细胞与内皮细胞间的相互作用在休克的发病 机制中占有重要的地位(Spronk，P.E.，Zandstra，D.F，Ince，C.： Bench-to-bedside review：sepsis is a disease of the microcirculation.Crit. Care，2004，(8)：462-468)。在休克的发病过程中，有效循环血量减少而 致的微循环障碍是多数休克发生的共同基础。休克持续一段时间，血液流 速明显降低，特别是在血流缓慢的微静脉；加上组胺的作用使血管通透性 增加，血浆外渗，血液黏度增高；灌流压下降，可导致白细胞滚动、贴壁、 粘附于内皮细胞，嵌塞毛细血管或在微静脉附壁黏着，使血流受阻，毛细 血管后阻力增加。这种粘附是透过粘附分子介导的。粘附并激活的白细胞 通过释放氧自由基和溶酶体导致血管内皮细胞和其他组织细胞损伤，进一 步引起微循环障碍及组织损伤(王万铁，病理生理学，2006)。因此，抑制 白细胞与内皮细胞粘附可作为治疗内毒素休克的重要手段。

在白细胞和内皮细胞的粘附过程中，由于黏附分子的糖链结构及其配 体直接参与黏附分子与其受体的相互作用。因此基于粘附过程的小分子寡 糖抑制剂应运而生。其典型代表为唾液酸化路易斯X(sLeX)，sLeX是一种 可结合到所有选择素的四糖。这就引起了在sLeX的基础上对选择素抑制 剂的研究。目前已报道了很多针对选择素的糖类抑制剂，如包含sLeX的 寡糖和其他类似物(Kaila，N.，Thomas，B.E：Design and synthesis of sialyl  Lewis(x)mimics as E-and P-selectin inhibitors.Med.Res.Rev.2002，(22)： 566-601.)。此类化合物一般合成难度较大，成本较高。另一方面，基于白 细胞和内皮细胞表面的另一类重要粘附分子——整合素的糖类抑制剂则 未见报道。

本发明人研究小组的前期研究表明，乳糖簇具有抗粘附活性，其作用 靶点为白细胞上的β2整合素CD11b/CD18。然而，现有技术中未报道以葡 萄糖、半乳糖、甘露糖、纤维二糖为母体的单一糖簇以及乳糖和甘露糖组 合而成的杂合糖簇化合物及其活性。此外，从药物的耐药性、半衰期、口 服生物利用度、合成成本及工艺等方面考虑，本领域存在进一步研发全新 结构的抗粘附活性化合物的需要。

发明内容

本发明人经大量的实验制备了以不同糖母体缀合的单一糖簇及杂合 糖簇化合物，而且这些化合物具有抗粘附、抗内毒素休克活性，成功地克 服了现有技术中存在的不足。

本发明的目的是提供一种单一糖簇及杂合糖簇化合物。

本发明的另一个目的是提供上述化合物的制备方法。

本发明的第三个目的是提供上述化合物的用途。

本发明的第四个目的是提供包含上述化合物的药物组合物。

具体地说，本发明提供了一种式(I)所示的单一糖簇或杂合糖簇化合 物，或其药学上可接受的酸加成盐：

其中，R₁和R₂可以相同或不同，各自独立地选自葡萄糖、半乳糖、 甘露糖、乳糖、纤维二糖中的一种；并规定，R₁和R₂不同时为乳糖、或 甘露糖；

Y为多元羧酸(即m元羧酸，例如二元羧酸、三元羧酸)的残基(不 包含羧酸的部分)，可选自C1-C20烷基部分(例如1，3-亚丙基)、取代的 C1-C20烷基部分(例如1位取代的1，3-亚丙基)、或苯基，所述取代的 C1-C20烷基部分任选地被一个或多个的氨基、或羟基、或硝基在其任意位 置上所取代的C1-C20烷基部分，而且，所述的多个氨基或多个羟基之间 可通过一个连接臂连接(例如1，8-辛二酰基)；

而且，m为2至10的整数，优选地，为2、4、6、或8。

优选地，本发明提供的式(I)所示的单一糖簇或杂合糖簇化合物，其 中Y为下列基团：

特别优选地，本发明提供的单一糖簇或杂合糖簇化合物选自下列化合 物：

(N-{2-[1，3-二-O-二-(O-β-D-吡喃葡萄糖基)丙基]}-2-氨基-戊二酰胺(这 里简称为化合物13，或TPu-4)；

(N-{2-[1，3-二-O-二-(O-β-D-吡喃半乳糖基)丙基]}-2-氨基-戊二酰胺(这 里简称为化合物14，或TBa-4)；

(N-{2-[1，3-二-O-二-[O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基] 丙基]}-2-氨基-戊二酰胺(这里简称为化合物15，或TXIA-4)；

(N-{2-[1-(O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(O-α-D- 吡喃甘露糖基)]丙基}-戊二酰胺(这里简称为化合物22，或TLM-Wu)；

(N-{2-[1-(O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(O-α-D- 吡喃甘露糖基)]丙基}-均苯三酰胺(这里简称为化合物23，或TLM-Ju)；

(N-{2-N-[1-(O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖 基)-3-(O-α-D-吡喃甘露糖基)丙基]戊二酰基}-辛二酰胺(这里简称为化合物 26，或TLM-GX-4)。

在本发明所提供的单一糖簇或杂合糖簇化合物中，所述的药学上可接 受的酸加成盐选自无机酸盐或有机酸盐；所述的无机酸盐选自氢卤酸盐 (如盐酸盐、氢溴酸盐、或氢碘酸盐等)、硫酸盐、硫酸氢盐、或磷酸盐 等，优选地为盐酸盐；所述的有机酸盐选自甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯 磺酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、枸橼酸盐、或苹果酸盐等。

另一方面，本发明提供了式(I)所示单一糖簇或杂合糖簇化合物的制 备方法，包括

由不同的糖基供体(五乙酰葡萄糖、五乙酰半乳糖、八乙酰纤维二糖) 与2-苄氧羰酰氨基1，3-丙二醇在无水CH₂Cl₂中，BF₃·OEt₂为催化剂，室温 下反应制得二价糖2-苄氧羰酰氨基-1，3-二-O-二-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D- 吡喃葡萄糖基)丙烷(化合物1)、2-苄氧羰酰氨基-1，3-二-O-二-(2，3，4，6-四-O- 乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)丙烷(化合物2)及2-苄氧羰酰氨基-1，3-二-O- 二-[2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-乙酰基-β-D- 吡喃葡萄糖基]丙烷(化合物3)，收率35-45％。然后在甲醇中用Pd/C催 化氢化得到化合物2-氨基-1，3-二-O-二-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄 糖基)丙烷(化合物4)、2-氨基-1，3-二-O-二-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃 半乳糖基)丙烷(化合物5)及2-氨基-1，3-二-O-二-[2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D- 吡喃葡萄糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基]丙烷(化合物 6)，化合物4-6作为糖单元用于糖簇的合成；

化合物4-6与谷氨酸反应，在无水四氢呋喃中，在HOBt和DCC存在 下偶联得到四价糖N-{2-[1，3-二-O-二-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄 糖基)]丙基}-2-苄氧羰酰氨基戊二酰胺(化合物7)、N-{2-[1，3-二-O-二 -(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)]丙基}-2-苄氧羰酰氨基戊二酰胺 (化合物8)及N-{2-[1，3-二-O-二-[2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基 -(1→4)-2，3，6-三--O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基]丙基}-2-苄氧羰酰氨基戊二 酰胺(化合物9)。

四价糖——化合物7-9在CH₃OH中用Pd/C催化氢化得到N-{2-[1，3- 二-O-二-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)]丙基}-2-氨基戊二酰胺 (化合物10)、N-{2-[1，3-二-O-二-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖 基)]丙基}-2-氨基戊二酰胺(化合物11)及N-{2-[1，3-二-O-二-[2，3，4，6-四-O- 乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-2，3，6-三--O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基] 丙基}-2-氨基戊二酰胺(化合物12)。将糖簇化合物10-12用 CH₃ONa/CH₃OH处理得到目标化合物N-{2-[1，3-二-O-二-(O-β-D-吡喃葡萄 糖基)丙基]}-2-氨基-戊二酰胺(化合物13)、N-{2-[1，3-二-O-二-(O-β-D-吡 喃半乳糖基)丙基]}-2-氨基-戊二酰胺(化合物14)及N-{2-[1，3-二-O-二 -[O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基]丙基]}-2-氨基-戊二酰胺 (化合物15)。

由八乙酰乳糖与2-苄氧羰酰氨基1，3-丙二醇在无水CH₂Cl₂中， BF₃·OEt₂为催化剂，室温下选择性糖基化反应制得糖苷2-苄氧羰酰氨基 -3-[2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-乙酰基-β-D- 吡喃葡萄糖基]-1-丙醇(化合物16)。化合物16与2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D- 吡喃甘露糖-三氯乙酰亚胺酯反应制得杂合糖单元2-苄氧羰酰氨基 -1-[2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三--O-乙酰基-β-D- 吡喃葡萄糖基]-3-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖基)丙烷(化合物 17)。化合物17在CH₃OH中用Pd/C催化氢化以95％的收率得到2-氨基 -1-[2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-乙酰基-β-D- 吡喃葡萄糖基]-3-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖基)丙烷(化合物 18)。

化合物18作为糖单元与多元羧酸，例如谷氨酸、戊二酸，均苯三酸 在HOBt和DCC存在下偶联得到(2+2)、(3+3)杂合糖簇N-{2-[1-(2，3，4，6- 四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖 基)-3-(2，3，4，6-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖基)-丙基]}-戊二酰胺(化合物19)、 N-{2-[1-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-乙酰基 -β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(2，3，4，6-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖基)-丙基}-2-苄氧 羰酰氨基戊二酰胺(化合物20)、N-{2-[1-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半 乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(2，3，4，6-O-乙酰基 -α-D-吡喃甘露糖基)-丙基}-均苯三酰胺(化合物21)。化合物19和21分 别用CH₃ONa/CH₃OH处理从而得到化合物22和23。

化合物20在CH₃OH中用Pd/C催化氢化得到N-{2-[1-(2，3，4，6-四-O- 乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖 基)-3-(2，3，4，6-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖基)丙基]}-2-氨基戊二酰胺(化合 物24)。24与辛二酸，在HOBt和DCC存在下偶联得到(4+4)杂合糖簇 N-{2-N-[1-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-乙酰 基-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(2，3，4，6-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖基)丙基]戊二 酰基}-辛二酰胺(化合物25)。将25用CH₃ONa/CH₃OH处理得到目标化 合物N-{2-N-[1-(O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖 基)-3-(O-α-D-吡喃甘露糖基)丙基]戊二酰基}-辛二酰胺(化合物26)。

第三方面，本发明提供了上述式(I)所示单一糖簇或杂合糖簇化合物 在制备抗粘附、或抗内毒素休克的药物中的用途。本发明提供的上述单一 糖簇或杂合糖簇化合物可以通过非胃肠道、口服或局部给药，给药的剂量 为从0.1毫克到10000毫克/每次，每日1次或多次。

第四方面，本发明提供了包含上述式(I)所示单一糖簇或杂合糖簇化 合物的药物组合物。在本发明的实施方案中，所述上述式(I)所示单一糖 簇或杂合糖簇化合物的药物组合物可制成适宜的药物制剂，例如，以固体 剂型的形式，如胶囊，片剂，颗粒剂，冻干粉针；或者以液体剂型形式， 如糖浆，混悬液，也可以采用注射灭菌的液体剂型；或者以半固体形式， 如软膏剂，乳膏剂，或凝胶剂等。在本发明的实施方案中，所述的药物制 剂，其中，上述式(I)所示单一糖簇或杂合糖簇化合物的含量范围从0.1 毫克到1000毫克/每单位；而且，在这些药物制剂中，通常上述式(I)所 示单一糖簇或杂合糖簇化合物的总质量占所有成分总质量的0.5-99％。

经实验证明，本发明提供的上述式(I)所示单一糖簇或杂合糖簇化合 物具有抗粘附的作用，对内毒性休克具有保护的作用。

附图说明

图1和图2表示的是化合物13，14，15，22，23，26、TMa-4对内 毒素休克大鼠白细胞与内皮细胞粘附的作用。

图3和图4表示的是化合物26以及TMaD-4的内毒素休克保护活性。

具体实施方式

实施例1.

单一糖簇糖单元制备通法：糖基供体(五乙酰葡萄糖、五乙酰半乳糖、 八乙酰纤维二糖)及2-苄氧羰酰氨基1，3-丙二醇(3∶1)溶于无水 CH₂Cl₂(1mmol供体/mL)中，加入BF₃·OEt₂(相对于供体5当量)，室温搅拌 24小时。混合物用CH₂Cl₂稀释后，依次用饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤， 无水Na₂SO₄干燥，蒸除溶剂。粗产品用柱层析纯化，石油醚(60-90℃)∶ 丙酮3∶2，得无色糖浆。然后在甲醇(0.05mmol/mL)中用Pd/C(20％)室温 下催化氢化(0.4MPa)6小时，得到糖单元用于糖簇的合成。

2-苄氧羰酰氨基-1，3-二-O-二-[2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基 -(1→4)-2，3，6-三--O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基]丙烷(化合物3)-制备见 通法；[α]_D＝-15.0(c＝0.80 in CHCl₃)；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ＝7.35-7.31 (m，5H，Ph)，5.28(d，2H，PhCH₂O)，5.13(t，2H，H-3′)，5.06(t，2H；H-2′)， 4.90(t，2H，H-3)，4.85(t，2H；H-2)，4.50(d，J_1，2＝7.9Hz，4H；H-1，H-1′)， 4.46-4.01(m，8H；H-6a，b，H-6a′，b′)，3.80-3.49(m，13H；H-4，5，H-4′，5′，CH₂O， CHNH)，2.10-1.97(7s，42H；CH₃CO)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ＝170.4， 170.3，170.2，169.7，169.6，169.3，169.0，155.7(CO)，136.3，128.5，128.2，128.1 (Ph)，101.0(C-1′)，100.8(C-1)，76.3，76.2(C-4，C-4′)，72.9，72.7(C-3，C-3′)， 72.3，72.1(C-5，C-5′)，71.5，70.9(C-2，C-2′)，67.866.8(CH₂O，PhCH₂O)，61.7， 61.5(C-6，C-6′)，50.1(CHNH)，20.7，20.6，20.5，20.4(CH₃).

2-氨基-1，3-二-O-二-[2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基 -(1→4)-2，3，6-三--O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基]丙烷(化合物6)-制备见 通法；[α]_D＝-15.7(c＝1.78in CHCl₃)；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ＝5.13(dd， 2H，H-3′)，5.05(t，2H；H-2′)，4.90(t，2H，H-3)，4.86(dd，2H；H-2)，4.48(d， J_1，2＝7.8Hz，4H；H-1，H-1′)，4.53，4.39-4.01(m，8H；H-6a，b，H-6a′，b′)， 3.80-3.65(m，13H；H-4，5，H-4′，5′，CH₂O，CHNH₂)，2.14-1.97(7s，42H； CH₃CO)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ＝170.5，170.4，170.2，169.8， 169.7，169.2，169.0(CO)，100.9，100.6(C-1，C-1′)，76.0(C-4，C-4′)，73.0，72.9 (C-3，C-3′)，72.2，71.9(C-5，C-5′)，71.6，71.4(C-2，C-2′)，67.8(CH₂O)，61.5 (C-6，C-6′)，50.9(CHNH₂)，20.9，20.6，20.4(CH₃).

2-苄氧羰酰氨基-1，3-二-O-二-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基) 丙烷(化合物1)-制备见通法。

2-氨基-1，3-二-O-二-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)丙烷(化 合物4)-制备见通法。

2-苄氧羰酰氨基-1，3-二-O-二-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基) 丙烷(化合物2)-制备见通法。

2-氨基-1，3-二-O-二-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)丙烷(化 合物5)-制备见通法。

实施例2.

单一糖簇制备通法：多元酸溶于无水THF(0.1mmol/mL)，冷却至0℃， 然后加入HOBt(每个羧基1.5当量)和DCC(每个羧基1.5当量)。0℃下搅 拌0.5小时，糖单元(每个羧基1当量)的THF溶液(0.1mmol/mL)用N-甲 基吗啡啉将溶液调至pH＝8～9后加入反应瓶中，混合物在0℃下搅拌2小 时后于室温下搅拌36小时，蒸除溶剂，加入CH₂Cl₂，滤去不溶物，溶液 依次用10％的柠檬酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液和水洗涤，无水Na₂SO₄干 燥，蒸除溶剂。粗产品用柱层析纯化，石油醚(60-90℃)∶丙酮2∶3。得 无色糖浆。然后在甲醇(0.05mmol/mL)中用Pd/C(20％)室温下催化氢化(0.4 MPa)6小时，滤除催化剂，蒸除溶剂，所得产物溶于甲醇，加入催化量的 钠，室温搅拌12小时，然后用阳离子交换树脂中和至中性。滤去树脂， 蒸除溶剂，残渣溶于去离子水，冷冻干燥，得目标化合物。

N-{2-[1，3-二-O-二-[2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基 -(1→4)-2，3，6-三--O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基]丙基}-2-苄氧羰酰氨基戊二 酰胺(化合物9)-制备见通法；[α]_D＝-6.6(c＝0.61 in CHCl₃)；¹H NMR(400 MHz，CDCl₃)：δ＝7.35-7.34(m，5H；Ph)，6，30(d，1H；NH)，6.00(d，1H；NH)， 5.19-5.13(m，6H；PhCH₂O，H-3′)，5.07(t，4H；H-2′)，4.92(t，4H；H-3)，4.85 (t，4H；H-2)，4.42(d，J_1，2＝8.0Hz，8H；H-1，H-1′)，4.53，4.38-4.35(m，16H； H-6a，b，H-6a′，b′)，4.13-3.51(m，27H；H-4，5，H-4′，5′，CH₂O，COCHNH₂， CHNHCO)，2.18-1.98(m，88H；CH₃CO，COCH₂，CH₂CHNH)；¹³C NMR(100 MHz，CDCl₃)：δ＝170.4，170.2，169.7，169.3，169.0(CO)，128.5，128.1，127.9 (Ph)，100.7(C-1，C-1′)，76.4(C-4，C-4′)，72.9，72.8(C-3，C-3′)，72.3(C-5， C-5′)，71.9，71.6(C-2，C-2′)，67.7，66.8(CH₂O，PhCH₂O)，61.5(C-6，C-6′)， 53.8(CHNHCO)，31.7，29.2(CH₂CO，CH₂CHNH)，20.8，20.6，20.5(CH₃).

N-{2-[1，3-二-O-二-[2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基 -(1→4)-2，3，6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基]丙基}-2-氨基戊二酰胺(化 合物12)-制备见通法；[α]_D＝-17.9(c＝0.67 in CHCl₃)；¹H NMR(400MHz， CDCl₃)：δ＝5.16(t，4H；H-3′)，5.08(t，4H；H-2′)，4.92(t，4H；H-3)，4.83(t，4 H；H-2)，4.54(d，J_1，2＝J_1′，2′＝7.7Hz，8H；H-1，H-1′)，4.52-4.01(m，16H； H-6a，b，H-6a′，b′)，3.79-3.51(m，27H；H-4，5，H-4′，5′，CH₂O，COCHNH， CHNH₂)，2.16-1.96(m，88H；CH₃CO，COCH₂，CH₂CHNH₂)；¹³C NMR(100 MHz，CDCl₃)：δ＝170.4，170.1，169.7，169.2，169.0(CO)，100.6.(C-1，C-1′)， 76.2(C-4，C-4′)，72.9(C-3，C-5)，71.9(C-2，C-2′)，71.6，71.5(C-3′，C-5′)，67.8 (CH₂O)，61.8，61.5(C-6，C-6′)，53.8(CHNHCO)，31.7，29.2(CH₂CO， CH₂CHNH₂)，20.9，20.6，20.5(CH₃).

N-{2-[1，3-二-O-二-[O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基]丙 基}-2-氨基-戊二酰胺(化合物15)-制备见通法；[α]_D＝-90.6(c＝0.53 in H₂O)； ¹H NMR(400MHz，D₂O)：δ＝4.42(d，J_1，2＝J_1′，2′＝7.8Hz，8H；H-1，H-1′)， 3.91-3.21(m，58H；H-2，3，4，5，6a，b，H-2′，3′，4′，5′，6a′，b′，CH₂O，CHNH)， 2.94-1.96(m，4H；CH₂CO，CH₂CHNH₂)；¹³C NMR(100MHz，D₂O)：δ＝174.2 (CO)，102.6，102.5，102.4(C-1，C-1′)，79.0，78.8(C-4，C-4′)，76.1，75.6，74.8， 74.3，73.2，72.9，69.5，68.8，68.6(C-2，3，5，C-2′，3′，5′，CH₂O)，60.7，60.2，60.1 (C-6，C-6′)，53.0，49.3(CHNH)，31.1，23.3(CH₂CO，CH₂CHNH₂).

N-{2-[1，3-二-O-二-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)丙基}-2- 苄氧羰酰氨基戊二酰胺(化合物7)-制备见通法。

N-{2-[1，3-二-O-二-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)丙基}-2- 氨基戊二酰胺(化合物10)-制备见通法。

N-{2-[1，3-二-O-二-(O-β-D-吡喃葡萄糖基)丙基}-2-氨基-戊二酰胺(化 合物13)-制备见通法。[α]_D＝-25.9(c＝1.7 in H₂O)；¹H NMR(400MHz，D₂O)： δ＝4.35(d，J_1，2＝7.8Hz，4H；H-1)，4.32-3.11(m，34H；H-2，3，4，5，6a，b，CH₂O， CHNH)，2.90-2.03(m，5H；CH₂CO，CH₂CHNH₂)；¹³C NMR(100MHz，D₂O)： δ＝173.6，167.6(CO)，102.8，102.6(C-1)，75.2，72.7，70.8，68.7(C-2，3，4，5， CH₂O)，61.1(C-6)，48.9(CHNH₂)，30.8(CH₂CHNH₂)，23.3(CH₂CO)

N-{2-[1，3-二-O-二-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)丙基}-2- 苄氧羰酰氨基戊二酰胺(化合物8)-制备见通法。

N-{2-[1，3-二-O-二-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)丙基}-2- 氨基戊二酰胺(化合物11)-制备见通法。

N-{2-[1，3-二-O-二-(O-β-D-吡喃半乳糖基)丙基}-2-氨基-戊二酰胺14- 制备见通法。[α]_D＝-53.7(c＝0.67 in H₂O)；¹H NMR(400MHz，D₂O)：δ＝4.28 (d，J_1，2＝7.8Hz，4H；H-1)，4.20-3.39(m，34H；H-2，3，4，5，6a，b，CH₂O，CHNH)， 2.35-1.80(m，5H；CH₂CO，CH₂CHNH₂)；¹³C NMR(100MHz，D₂O)：δ＝174.8， 174.5(CO)，103.2(C-1)，76.0(C-4)，75.7，73.1，69.7，68.6(C-2，3，5，CH₂O)， 60.8(C-6)，48.9(CHNH₂)，30.8(CH₂CHNH₂)，23.8(CH₂CO)

实施例3.

2-苄氧羰酰氨基-3-[2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基 -(1→4)-2，3，6-三--O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基]-1-丙醇(化合物16)-八乙 酰乳糖及2-苄氧羰酰氨基1，3-丙二醇(1∶1)溶于无水CH₂Cl₂(0.5mmol供 体/mL)中，加入BF₃·OEt₂(相对于供体3当量)，室温搅拌6小时。混合物用 CH₂Cl₂稀释后，依次用饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤，无水Na₂SO₄干燥， 蒸除溶剂。粗产品用柱层析纯化，石油醚(60-90℃)∶乙酸乙酯2∶3，得 无色糖浆。收率30％。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ＝7.34(m，5H；Ph)，5.35 (d，1H；H-4′)，5.26(d，2H，PhCH₂O)，5.17(dd，1H；H-3)，5.11(dd，1H；H-2′)， 4.95(dd，1H；H-3′)，4.87(t，1H；H-2)，4.48(d，J_1，2＝J_1′，2′＝8.0Hz，2H；H-1， H-1′)，4.55，4.17-4.03(m，4H；H-6a，b，H-6a′，b′)，3.89-3.59(m，8H；H-4，5， H-5′，CH₂O，CHNH)，2.17-1.97(7s，21H；CH₃CO)；¹³C NMR(100MHz， CDCl₃)：δ＝170.3，170.1，170.0，169.9，169.7，169.6，169.0(CO)，101.1(C-1′)， 100.6(C-1)，76.1(C-4)，72.8(C-3)，72.5(C-5)，72.4(C-2)，71.4(C-5′)， 70.9(C-3′)，70.7，69.1，68.9(CH₂O，PhCH₂O)，66.9(C-2′)，66.6(C-4′)，61.7 (C-6′)，60.8(C-6)，51.8(CHNH)，20.7，20.6，20.5(CH₃).

实施例4.

2-苄氧羰酰氨基-1-[2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基 -(1→4)-2，3，6-三--O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基]-3-(2，3，4，6-四-O-乙酰基 -α-D-吡喃甘露糖基)丙烷(化合物17-16)与2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-吡 喃甘露糖-三氯乙酰亚胺酯(1∶1.5)溶于无水CH₂Cl₂(1mmol供体/mL)中， 反应液冷却至-30℃，加入BF₃·OEt₂或TMSOTf(相对于供体0.1当量)，反 应混合物于-30℃-室温下搅拌12小时，混合物用CH₂Cl₂稀释后，依次用 饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤，无水Na₂SO₄干燥，蒸除溶剂。粗产品用 柱层析纯化，石油醚(60-90℃)∶乙酸乙酯1∶1，得无色糖浆化合物17， 收率70％。化合物17在甲醇(0.05mmol/mL)中用Pd/C(20％)室温下催化氢 化(0.4MPa)6小时，滤除催化剂，蒸除溶剂，以95％的收率得到杂合糖 单元2-氨基-1-[2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-2，3，6-三--O- 乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基]-3-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖基)丙 烷(化合物18)；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ＝5.36(d，2H；H-4′)，5.30-5.00 (m，5H；H-3，H-2′，H-3″，PhCH₂O)，4.93-4.61(m，3H；H-3′，H-2，H-1″)，4.56 (d，J_1，2＝J_1′，2′＝7.3Hz，2H；H-1，H-1′)，4.58，4.26-4.00(m，7H；H-2″，H-6a，b， H-6a′，b′，H-6a″，b″)，3.97-3.39(m，10H；H-4，5，H-5′，H-4″，5″，CH₂O，CHNH)， 2.23-1.98(11s，33H；CH₃)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ＝170.5，170.2， 170.1，170.0，169.5，169.4，169.0(CO)，100.9(C-1′)，100.8(C-1)，97.5(C-1″)， 75.8(C-4，C-4″)，73.0(C-3)，72.6(C-5)，71.3(C-2)，70.9(C-3″)，70.6(C-5′)， 70.2(C-3′)，69.1(C-2″，CH₂O)，66.6(C-2′，C-5″)，65.5(C-4′)，62.2(C-6′， C-6″)，60.7(C-6)，45.8(CHNH₂)，20.7，20.6，20.4(CH₃).

实施例5.

杂合糖簇制备通法：多元酸(谷氨酸、戊二酸，均苯三酸、辛二酸)溶 于无水THF(0.1mmol/mL)，冷却至0℃，然后加入HOBt(每个羧基1.5当 量)和DCC(每个羧基1.5当量)。0℃下搅拌0.5小时，糖单元化合物18 或24(每个羧基1当量)的THF溶液(0.1mmol/mL)用N-甲基吗啡啉将溶液 调至pH＝8～9后加入反应瓶中，混合物在0℃下搅拌2小时后于室温下搅 拌36小时，蒸除溶剂，加入CH₂Cl₂，滤去不溶物，溶液依次用10％的柠 檬酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液和水洗涤，无水Na₂SO₄干燥，蒸除溶剂。 粗产品用柱层析纯化，石油醚(60-90℃)∶丙酮1∶1。得无色糖浆。所得 产物溶于甲醇，加入催化量的钠，室温搅拌12小时，然后用阳离子交换 树脂中和至中性。滤去树脂，蒸除溶剂，残渣溶于去离子水，冷冻干燥， 得目标化合物。

N-{2-[1-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-乙 酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(2，3，4，6-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖基)-丙基}- 戊二酰胺(化合物19)-制备见通法；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ＝6.13 (d，1H；NHCO)，6.04(d，1H；NHCO)，5.35(d，2H；H-4′)，5.29-5.07(m，6H； H-3，H-2′，H-3″)，4.98(dd，2H；H-3′)，4.87-4.81(m，4H；H-2，H-1″)，4.50(d， J_1，2＝J_1′，2′＝7.7Hz，4H；H-1，H-1′)，4.55，4.34-4.01(m，14H；H-2″，H-6a，b， H-6a′，b′，H-6a″，b″)，3.91-3.40(m，20H；H-4，5，H-5′，H-4″，5″，CH₂O，CHNH)， 2.18-1.97(m，70H；CH₃，CH₂CO)，1.72(m，2H；CH₂)；¹³C NMR(100MHz， CDCl₃)：δ＝170.7，170.6，170.4，170.3，170.1170.0，169.7，169.6，169.5，169.0 (CO)，101.1(C-1′)，100.9(C-1)，98.0(C-1″)，76.1(C-4)，76.0(C-4″)，72.9 (C-3)，72.5(C-5)，71.6(C-2)，71.5(C-3″)，70.9(C-5′)，70.6(C-3′)，69.2(C-2″)， 69.0，68.7(CH₂O)，66.6，65.9(C-2′，C-5″)，65.8(C-4′)，62.2(C-6′)，61.6 (C-6″)，60.7(C-6)，53.8(CHNHCO)，31.7(CH₂CO)，29.2(CH₂)，20.8，20.7， 20.6，20.5(CH₃).

N-{2-[1-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-乙 酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(2，3，4，6-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖基)-丙基}-2- 苄氧羰酰氨基戊二酰胺(化合物20)-制备见通法。

N-{2-[1-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-乙 酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(2，3，4，6-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖基)-丙基}- 均苯三酰胺(化合物21)-制备见通法。

N-{2-[1-(O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(O-α-D- 吡喃甘露糖基)]丙基}-戊二酰胺22-制备见通法；¹H NMR(400MHz，D₂O)： δ＝5.09，4.96(d，2H；NHCO)，4.78(s，2H；H-1″)，4.37(d，J_1，2＝7.9Hz，2H； H-1)，4.34(d，J_1′，2′＝7.8Hz，2H；H-1′)，3.92-3.41(m，46H；H-2，3，4，5，6a，b， H-2′，3′，4′，5′，6a′，b′，H-2″，3″，4″，5″，6a″，b″，CH₂O，CHNH)，2.22(t，4H； CH₂CO)，2.07(m，2H；CH₂)；¹³C NMR(100MHz，D₂O)：δ＝173.8，173.4(CO)， 102.9，102.6，102.4(C-1，C-1′)，100.1，99.7(C-1″)，78.5(C-4)，77.0(C-4″)， 75.3(C-3)，74.8(C-5)，74.3，74.2(C-2)，73.1，73.0(C-3″)，72.9，72.8(C-5′)， 72.5，72.4(C-3′)，70.9，70.5(C-2″)，69.9，68.7，68.5(CH₂O)，67.0，66.8(C-2′)， 66.6(C-5″)，66.3(C-4′)，61.0，60.9(C-6′)，60.7，60.5(C-6″)，60.1(C-6)，48.9 (CHNHCO)，35.0(CH₂CO)，22.0，21.9，20.3(CH₂).

N-{2-[1-(O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(O-α-D- 吡喃甘露糖基)]丙基}-均苯三酰胺(化合物23)-制备见通法。[α]_D＝+21.8 (c＝1.10 in H₂O)；¹H NMR(400MHz，D₂O)：δ＝8.19(s，3H；Ph)4.78(s，3H； H-1″)，4.41(d，J_1，2＝8.0Hz，3H；H-1)，4.30(d，J_1′，2′＝7.7Hz，3H；H-1′)， 4.03-3.21(m，84H；H-2，3，4，5，6a，b，H-2′，3′，4′，5′，6a′，b′，H-2″，3″，4″，5″，6a″，b″， CH₂O，CHNH)；¹³C NMR(100MHz，D₂O)：δ＝169.1(CO)，134.9，129.3(Ph)， 102.9，102.7，102.4(C-1，C-1′)，100.2，99.7(C-1″)，78.4(C-4，C-4″)，75.3 (C-3)，74.8(C-5)，74.3(C-2)，72.9(C-3″)，72.8(C-5′)，72.5(C-3′)，70.9，70.5 (C-2″)，70.0，68.9，68.5(CH₂O)，66.6(C-2′，C-5″)，66.3(C-4′)，61.0(C-6′)1， 60.8(C-6″)，60.1(C-6)，50.3(CHNHCO)，49.7(CH₂CO)

实施例6.

N-{2-[1-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-乙 酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(2，3，4，6-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖基)丙基}-2- 氨基戊二酰胺(化合物24-20)在甲醇(0.05mmol/mL)中用Pd/C(20％)室 温下催化氢化(0.4MPa)6小时，滤除催化剂，蒸除溶剂，得到化合物24， 收率95％。

N-{2-N-{1-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O- 乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-3-(2，3，4，6-O-乙酰基-α-D-吡喃甘露糖基)丙基} 戊二酰基}-辛二酰胺(化合物25)-制备见通法。

N-{2-N-{1-(O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖 基)-3-(O-α-D-吡喃甘露糖基)丙基}戊二酰基}-辛二酰胺(化合物26)-制 备见通法；[α]_D＝+22.6(c＝1.06 in H₂O)；¹H NMR(400MHz，D₂O)：δ＝4.78(s， 4H；H-1″)，4.41(d，J_1，2＝7.8Hz，4H；H-1)，4.37(d，J_1′，2′＝7.8Hz，4H；H-1′)， 4.26-2.80(m，112H；H-2，3，4，5，6a，b，H-2′，3′，4′，5′，6a′，b′，H-2″，3″，4″，5″，6a″，b″， CH₂O，CHNH)，2.23-1.26(m，32H；CH₂CO，CH₂)；¹³C NMR(100MHz，D₂O)： δ＝177.1，174.8，173.6，173.5(CO)，102.9，102.4(C-1，C-1′)，100.2，100.1，99.6 (C-1″)，78.4(C-4，C-4″)，75.3(C-3)，74.8(C-5)，74.2(C-2)，72.8(C-3″)，72.5 (C-5′，C-3′)，70.9(C-2″)，70.5，70.0，68.5(CH₂O)，66.7，66.6(C-2′)，66.2 (C-5″)，65.9(C-4′)，61.0(C-6′)，60.9(C-6″)，60.1(C-6)，49.4，49.2，48.8 (CHNHCO)，35.4，31.9(CH₂CO)，27.9，25.1，20.3(CH₂).

活性试验

将上述合成的化合物进行了抗粘附和抗休克活性的测定，均显出良好 的抗粘附和休克保护作用。具体活性试验操作及典型化合物的结果如下：

一、抗粘附活性试验：

细胞分离、培养

分离人外周血中的中性粒细胞：

1.取1ml血(内加肝素)，至离心管中。加等体积无血清培养基(1640) 即血∶培养基＝1∶1至离心管中。

2.将稀释好的血加到淋巴细胞分离液中(按分离液∶血＝1∶2的比例)， 加血的时候要沿壁缓缓加，不要冲开淋巴分离液。

3.水平离心机离心2000rpm，20min。

4.离心后离心管内分为三层，上层为血浆和培养基，下层主要为红 细胞和粒细胞，中层为淋巴分离液，在上、中层界面处有以单个核细胞 为主的白色云雾层狭窄带。单个核细胞主要包括淋巴细胞和单核细胞(只 留下下层的红细胞和粒细胞)

5.加入红细胞裂解液，冰上裂解10-15分钟，至液体澄清，离心 1500rpm，5min，4℃(直至无红色，底部为白色)。

6.去上清，用无血清培养基重悬，计数。

人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养

人脐静脉内皮细胞(HUVEC)(购自ScienCell)在37℃，5％CO₂条件 下，用含5％胎牛血清(Fetal Bovine Serum，FBS，GIBCO)，1％ECGS (ScienCell，1001)，抗生素(100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素)的ECM 完全培养液(ScienCell)培养。HUVEC经0.25％的胰酶-EDTA消化一分 钟后，用含有5％胎牛血清(GIBCO)的ECM培养液终止消化，制成悬浮细 胞，接种在培养瓶内，置入5％CO2培养箱中37℃培养，每两天换一次液， 生长融合的细胞经0.25％的胰酶-EDTA消化传代。

实验步骤：

1.将内皮细胞种于96孔板中，使每孔数量达到3×10⁴，2-3天后待其 生长融合，并铺满单层。

2.分离人粒细胞

3.去上清，用无血清培养基重悬，计数至2.5x10⁶/ml。

4.用Calcein-AM(8Mm，每毫升细胞悬液加入2μl染色剂)将白细胞染 色40min(用无血清培液1640)，而后用HEPES CaMg buffer洗两遍， 800rpm，4min，最后用含有0.5％BSA和二价离子的无血清培液重悬，并 计数至10⁶/ml。

5.将细胞分至小离心管中，使得每管3.5x10⁵/350μl，按照分组不同加 入1μg/ml LPS刺激15min，与此同时用不同的糖室温共同孵育白细胞15 分钟。

6.先将种有内皮的孔中的培液吸去，然后加入孵育过的细胞，每孔的 细胞量达到10⁵/100μl。然后置于培养箱孵育20分钟。

7.孵育过后，用HEPES CaMg buffer清洗。

先将96孔板固定在一饭盒内，然后用枪将含有细胞的孔用HEPES CaMg buffer填满，动作要轻。最后用HEPES CaMg buffer将整个饭盒填满， 再用以保鲜膜覆盖液面，并适当绷紧，防止饭盒内产生气泡，最后盖上盖 子。

8.翻转孔板，室温下静置6分钟，使未黏附的细胞从孔中掉下来。然 后，倾斜15度，让液体流出。

9.用酶标仪485nm/528nm测荧光。

结果如下(见图1和2，其中，MFI为平均荧光强度)：

二、内毒素休克保护活性试验：

实验动物：

种属：ICR小鼠

饲养级别：清洁级

体重：18～22g，雄性

来源：扬州大学比较医学中心

实验试剂：

脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)(Sigma，Escherichia coli O111:B4)

TLM-GX-4(N-{2-N-[1-(O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖 基)-3-(O-α-D-吡喃甘露糖基)丙基]戊二酰基}-辛二酰胺，化合物26)

TLM-Ju(N-{2-[1-(O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖 基)-3-(O-α-D-吡喃甘露糖基)]丙基}-均苯三酰胺，化合物23)

TLM-Wu(N-{2-[1-(O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖 基)-3-(O-α-D-吡喃甘露糖基)]丙基}-戊二酰胺，化合物22)

TPu-4(N-{2-[1，3-二-O-二-(O-β-D-吡喃葡萄糖基)丙基]}-2-氨基-戊二 酰胺，化合物13)

TBa-4(N-{2-[1，3-二-O-二-(O-β-D-吡喃半乳糖基)丙基]}-2-氨基-戊二 酰胺，化合物14)

TXIA-4(N-{2-[1，3-二-O-二-[O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡 萄糖基]丙基]}-2-氨基-戊二酰胺，化合物15)

TMa-4(N-{2-[1，3-二-O-二-(O-α-D-吡喃甘露糖基)丙基]}-2-氨基-戊二 酰胺)(Zhao-Jun Yin，Qing Li，Xiang-Bao Meng and Zhong-Jun Li，Design  and synthesis of novel multivalent mannosides targeting the mannose receptor， Carbohydrate Research 342(2007)2729-2734)

TMaD-4(N-{2-[1，3-二-O-二-(O-α-D-吡喃甘露糖基)丙基]}-丁二酰胺) (来源同上)

TMaX-4(N-{2-[1，3-二-O-二-(O-α-D-吡喃甘露糖基)丙基]}-辛二酰胺) (来源同上)

TMa-6(N-{2-[1，3-二-O-二-(O-α-D-吡喃甘露糖基)丙基]}-均苯三酰胺) (来源同上)

TMa-8(N-{2-N-[1，3-二-O-二-(O-α-D-吡喃甘露糖基)丙基]戊二酰基}- 辛二酰胺)(来源同上)

实验材料：

无菌EP管、封口膜、标签、注射器(1ml)、0.9％生理盐水(氯化钠来自 国药集团有限公司10019318)、PBS缓冲溶液(已灭菌)

药物配制和给药剂量、方法

LPS配制：

给药剂量：37.5mg/kg

给药体积：0.005ml/g

给药浓度：7.5mg/ml

给药方法：腹腔注射

药物母液配制：将100mg LPS溶于6.67ml 0.9％的生理盐水中，终浓 度15mg/ml，配两瓶。4℃保存。

药物工作液配制：取6.67ml 15mg/ml母液于15ml离心管中，加入 6.67ml 0.9％生理盐水稀释，终浓度即工作浓度为7.5mg/ml，配两管，总 体积为26.68ml。4℃保存。

本发明糖类化合物：

给药剂量：800nmol/kg

给药体积：0.005ml/g

给药浓度：40nmol/ml给药方法：腹腔注射

药物工作液配制：称取计算量的药品置于无菌的4ml无菌Ep管中， 加入计算量的生理盐水溶解，得到工作浓度为160nmol/ml的工作液。-20℃ 保存。

实验方法与步骤：

对240只小鼠随机分成24组，每组10只。然后进行如下操作：

1.取出小鼠，称重，记录并用苦味酸标记小鼠；

2.配制实验相关药品(LPS和新化合物)；

3.根据小鼠体重及药品的工作浓度计算出需要注射的药品量；

4.对所有小鼠腹腔注射LPS并记录注射时间；

5.注射LPS 30分钟后，按照实验分组分别腹腔注射给药；

连续观察72小时(注射LPS后8小时观察一次，以后每半小时观察一 次)，并记录小鼠的死亡时间，最后统计小鼠的生存时间和生存率的变化。 试验结果如图3和4。

上述试验结果表明，本发明的化合物具有抗粘附的作用，并且相对于 对照品而言具有显著的内毒素休克保护作用。

综上所述，以上仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明 的保护范围，因此，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同 替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。