一种鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂及制备方法

摘要

本发明涉及一种鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂及制备方法。本发明的鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂,具体成分包括羧甲基纤维素钠１～２％、低聚木糖２～８％、山梨醇１～３％、谷氨酸钠０.５～０.８％、亚硒酸钠0.1～0.5％，余量为注射用水。本发明的耐热冻干保护剂解决了鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗仅不能在2℃～8℃下长期保存和运输的问题。

说明书

 

技术领域

本发明涉及一种鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂，及其制备方法，属于动物用疫苗生产领域。

 

背景技术

冷冻干燥技术是生物学的一个重要应用技术，常用于生物制品的科研和生产中，以保持菌、毒种的生物学特性，稳定生物原料和半成品的生物活性，延长成品的有效期。冻干保护剂是活疫苗生产中的关键技术，对于疫苗的保存、运输和使用具有很大的影响。

国外活疫苗冻干制品在2～8℃的保存期为15个月以上，但保护剂配方是严格保密的，在我国动物用疫苗中，活的冻干疫苗占相当大的比例，国内常用的保护剂主要为牛奶、蔗糖、明胶等，组方简单，对疫苗的保护功能差。如果在2℃～8℃条件下，保存期只有4～6月，多需要在-15℃以下保存。加上国内传统的生物制品保护剂的研制相对滞后，使成品的长期保存和运输受限。所以，耐热冻干保护剂的研究是非常急需的，在20世纪80年代，发达国家就已开始进行耐热冻干保护剂的研究。我国在耐热冻干保护剂方面的研究起步较晚，加上中国市场巨大，国外生物制品涌入，市场竞争加剧。为了本国生物制品业的生存和发展，新型有效的耐热冻干保护剂的研究和应用显得尤为迫切。

羧甲基纤维素钠钠（CMC）通常用作胶体和粘结剂，可作为安全的食品添加剂。上世纪七十年代我国开始采用，九十年代开始普遍使用。是当今世界上使用范围最广、用量最大的纤维素种类。CMC在食品应用中不仅是良好的乳化稳定剂、增稠剂，而且具有优异的冻结、熔化稳定性，特别是对动、植物油、蛋白质与水溶液的乳化性能极为优异，能使其形成性能稳定的匀质乳状液。在医药工业中可作针剂的乳化稳定剂，片剂的粘结剂和成膜剂。有人经基础及动物实验证明CMC是安全可靠的抗癌药载体。

低聚木糖又称木寡糖 由2-7个木糖分子以β-1,4糖苷键结合而成的功能性聚合糖。酸、热稳定性好，难发酵，与其他低聚糖相比，低聚木糖的突出特点是稳定性非常好。即使在酸性条件下（PH=2.5-7）加热至100℃也基本不分解，根据文献，低聚木糖中的木三糖、木二糖和木糖都有还原性，木四糖以上没有。

亚硒酸钠 研究表明，硒显著地影响免疫系统所包含的全部三种调节机制，即细胞免疫、体液免疫和非特异免疫。硒还能促进淋巴细胞产生抗体，使血液免疫球蛋白水平增高或维持正常，因此临床中给肿瘤患者适量补硒，可有效提高患者机体免疫功能，增强机体防癌和抗癌能力。硒作为谷胱甘肽过氧化酶的成分，具有抗氧化作用；调节免疫、抗肿瘤作用。硒具有抗氧化作用，参与辅酶Q10的合成，保持细胞膜完整性，维持动物肌体的正常生长发育，缺硒可引发多种疾病和癌症。硒是人体免疫调节营养素，既能激活细胞免疫中淋巴细胞，又能刺激免疫球蛋白及抗体产生。免疫调节作用是通过抗氧化剂辅酶Q、半胱氨酸、维生素E来完成，而这些都要在硒的参与下才能激活，缺硒必然导致免疫力下降，各类疾病相继出现。硒不但能维持动物体正常的生长发育，与机体抗氧化机制密切相关，还能提高动物的体液免疫和细胞免疫功能，增强机体对传染性疾病的抵抗能力，是加强机体免疫系统和抗感染能力必不可少的微量元素之一。补硒能增强体液免疫。给动物补硒能够提高羊红细胞抗原，还能提高免疫球蛋白(IgM、IgA)的含量。

鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂的研究，常现用5％蔗糖脱脂奶为保护剂的冻干疫苗，在2℃～8℃保存仅12个月,加耐热冻干保护剂疫苗，在2℃～8℃可保存2年后。说明耐热冻干保护剂比常规的保护剂更能有效地保护疫苗，保存时间更长久。耐热冻干保护剂的种类和配比是影响疫苗的质量和保存效果的重要因素。冻干保护剂可影响生物制品的质量、效价和稳定性，改变生物制品的生产工艺，提高产品预测能力并增大产品批次间的稳定性。

发明内容

本发明提供了一种鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂，目的是将疫苗耐热冻干保护剂与活疫苗混合，解决鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗仅不能在2℃～8℃下长期保存和运输的技术问题。

本发明采用的具体技术方案如下：

一种鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂，具体成分包括羧甲基纤维素钠１～２％、低聚木糖２～８％、山梨醇１～３％、谷氨酸钠０.５～０.８％、亚硒酸钠0.１～0.５％，余量为注射用水。

上述鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂的配制方法包括如下步骤：

1）将羧甲基纤维素钠充分溶于注射用水作为A液；

2）将低聚木糖、山梨醇充分溶于注射用水，作为B液；

3）谷氨酸钠、亚硒酸钠充分溶于注射用水,作为C液；

4）将上述A液、B液和C液，按1：1：1的体积比配制成耐热冻干保护剂。

上述鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂的应用，将疫苗冻干保护剂按２～６：１的体积比与鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗病毒液混合，然后经分装后进行冷冻干燥。

本发明的保护剂保护的疫苗在２～８℃保存２４～３６个月，仍保持冻干后的外形，病毒含量均超过国家兽医生物制品规程的标准。冻干前后病毒损失率低，冻干产品耐老化程度高，产品在２～８℃保存２４～３６个月，病毒含量不发生改变，从而解决了鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗仅不能在2℃～8℃下长期保存和运输的技术问题。

 

具体实施方式

实施例1  

鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干疫苗的制备

1）将羧甲基纤维素钠与注射用水混合，在98～100℃温度下加热１０～２０分钟,冷却至室温，配制成浓度３％（本发明所涉及的浓度除有特殊说明外，皆为质量百分比浓度）的A液。

2）将低聚木糖、山梨醇与注射用水混合，配制成B液，低聚木糖浓度8％，山梨醇浓度３％。

3）将谷氨酸钠,亚硒酸钠, 与去注射用水混合，搅拌混匀，配制成C液，谷氨酸钠浓度１.５％,亚硒酸钠浓度1.5％。

4）将A液、B液和C液，按1:1：1的体积比配制成疫苗冻干保护剂。

5）将疫苗冻干保护剂按3:1（V/V）与鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗病毒液混合。

6）分装后进行冷冻干燥。

7）密封、包装，2℃～8℃可以保存３６个月。

实施例２

鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干疫苗的制备

1）将羧甲基纤维素钠与注射用水混合，在98～100℃温度下加热１０～２０分钟,冷却至室温，配制成浓度３％的A液。

2）将低聚木糖、山梨醇与注射用水混合，配制成B液，低聚木糖浓度６％，山梨醇浓度３％。

3）将谷氨酸钠,亚硒酸钠, 与去注射用水混合，搅拌混匀，配制成C液，谷氨酸钠浓度１.５％,亚硒酸钠浓度０.３％。

4）将A液、B液和C液，按1:1：1的体积比配制成疫苗冻干保护剂。

5）将疫苗冻干保护剂按２:1（V/V）与鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗病毒液混合。

6）分装后进行冷冻干燥。

7）密封、包装，2℃～8℃可以保存２８个月。

实施例３

鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干疫苗的制备

1）将羧甲基纤维素钠与注射用水混合，在98～100℃温度下加热１０～２０分钟,冷却至室温，配制成浓度６％的A液。

2）将低聚木糖、山梨醇与注射用水混合，配制成B液，低聚木糖浓度10％，山梨醇浓度6％。

3）将谷氨酸钠,亚硒酸钠, 与去注射用水混合，搅拌混匀，配制成C液，谷氨酸钠浓度１.５％,亚硒酸钠浓度０.３％。

4）将A液、B液和C液，按1:1：1的体积比配制成疫苗冻干保护剂。

5）将疫苗冻干保护剂按５:1（V/V）与鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗病毒液混合。

6）分装后进行冷冻干燥。

7）密封、包装，2℃～8℃可以保存３２个月。