一种尖鳞环锈伞新菌株及其子实体栽培方法

摘要

本发明公开了一种尖鳞环锈伞新菌株及其子实体栽培方法。本发明所提供的尖鳞环锈伞具体为尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4，它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.6062。本发明所提供的尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062菌丝生长速度快，菌丝满袋时间短（比对照黄伞（Pholiota adipose）1号提前10-12d），可以考虑作为杂交亲本，选育性状菌丝速度快、周期短、产量高的新菌株。另外，尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062产量高，头两潮菇的生物学效率达51.29%，大于对照菌株黄伞（Pholiota adipose）1号的42.67%。

说明书

技术领域

本发明涉及一种尖鳞环锈伞新菌株及其子实体栽培方法。

背景技术

尖鳞环锈伞学名Pholiota squarrosoides(Peck)Sacc.别名尖鳞黄伞、锐鳞环柄菇、 刺儿蘑。在分类学上属真菌界，担子菌门，层菌纲，伞菌目，球盖菇科，环锈伞属。 尖鳞环锈伞子实体色泽鲜艳呈金黄色，菌盖菌柄上布满角锥状鳞片。该菌属于中低温 型食用菌，夏秋季大量在林中树桩及倒木上发生，产量较高；其子实体富含蛋白质、 碳水化合物、维生素及多种矿物质元素，味道鲜美，风味独特，多年来为人们所采食。 尖鳞环锈伞与黄伞同属于球盖菇科、环锈伞属，形态特征较为相近；二者的单孢菌株 可以发生交配反应，因此，可作为杂交亲本选育优良新菌株。目前，关于尖鳞环锈伞 的文献较少，尚未有驯化栽培的报道。

尖鳞环锈伞子实体较小至中等大。菌盖直径3-12cm，半球形至扁半球形，最后扁 平，有时中部稍凸，表面干燥，黄褐色或土褐色带粉红色，鳞片角锥状色较深，中部 多，易脱落，盖缘幼时内卷，往往附着菌环（菌幕）残片。菌肉白色后带乳黄色，褶 缘细锯齿状，不等长。菌柄近圆柱形，长3-12cm，粗0.8-1.5cm。向基部膨大，菌环 以上白色，而以下具有类似盖色的颗粒状鳞片，易脱落，内部松软至变空心。菌环膜 质，上面白色，下面带褐色，易碎破消失。孢子印白色。孢子无色，假淀粉反应，光 滑，椭圆形，（7.3-8.1）μm×（2.3-3）μm。囊体棒状，无色或浅褐色，（20-50）μm×（8-12） μm。尖鳞环锈伞夏秋季多在云杉、冷杉、高山松、红松及混交林地上散生或群生。

发明内容

本发明提供了一种尖鳞环锈伞新菌株及其子实体栽培方法。

本发明提供的尖鳞环锈伞新菌株采自北京市昌平柿子树上，经中国科学院微生物 所卯晓岚先生鉴定为尖鳞环锈伞，并组织分离获得原始菌株，将该菌株命名为尖鳞环 锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4，该菌株已于2012年4月26日保藏于中国微生物 菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西 路1号院3号），保藏编号为CGMCC No.6062。

所述尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062在作为亲本进行 杂交育种中的应用也属于本发明的保护范围。

栽培所述尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062得到的子实 体也属于本发明的保护范围。

培养所述尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062得到的菌丝 体也属于本发明的保护范围。

本发明所提供的所述尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062 子实体的栽培方法，可包括如下步骤：

（1）接种及发菌：将所述尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4 CGMCC  No.6062的栽培种接入栽培培养基，在环境温度为23℃-25℃，空气相对湿度为 50%-60%，通风良好，避光培养24-26d，菌丝长满培养基；

（2）低温刺激：转移至-5℃-5℃条件下处理3-5d；

（3）出菇：转移至环境温度为15℃-20℃，空气相对湿度80%-90%，光照300-600 Lux，通风良好，二氧化碳浓度在2000-2300ppm之间的条件下培养20-22d至子实体 原基形成，继续培养；

（4）采收：6-8d后，子实体菌柄长至7-9cm，菌盖尚未完全展开，即可采收。

在上述栽培方法中，所述栽培培养基具体由棉籽壳、木屑、麦麸、玉米粉、石膏、 石灰和水混合而成；其中，所述棉籽壳、所述木屑、所述麦麸、所述玉米粉、所述石 膏和所述石灰的质量百分配比为60%：18%：15%：5%：1%：1%；所述水在所述栽 培培养基中的质量百分含量为60%-65%。

在上述栽培方法中，所述栽培种可通过如下方法获得：

（1）母种制备：将所述尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062 接种到母种培养基上，24℃-28℃避光培养7-10d，得到的菌丝体作为母种；所得母种 若不及时使用，可贮藏于4℃。

（2）原种制备：将步骤（1）所得的母种转接到原种培养基上，培养温度为23 ℃-25℃，空气相对湿度为50%-60%，通风良好，避光培养至菌丝长满容器，得到所 述原种。原种一般室温存放期不超过15d，低温存放不超过20d，过期菌种不能使用。

（3）栽培种制备：将步骤（2）所得的原种转接到栽培培养基上，在环境温度为 23℃-25℃、空气相对湿度为50%-60%、通风良好、避光的条件下培养24-26d菌丝长 满菌袋，获得所述栽培种。

所述尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062的子实体在食品 加工中的应用也属于本发明的保护范围。

所述尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062的子实体干后香 味浓，食用时质地脆。

本发明所提供的尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062的菌 丝生长速度快，菌丝满袋时间短，可以考虑作为杂交亲本，选育性状菌丝速度快、周 期短、产量高的新菌株。另外，尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4 CGMCC  No.6062产量高，头两潮菇的生物学效率达51.29%，大于现有黄伞（Pholiota adipose）

1号栽培品种的42.67%。

保藏说明

建议分类命名：尖鳞环锈伞

拉丁名：（Pholiota squarrosoides）

参椐的生物材料：HS4

保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心

保藏机构简称：CGMCC

地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号

保藏日期：2012年4月26日

保藏中心登记入册编号：CGMCC No.6062

附图说明

图1为尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062的子实体形态。

图2为尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062的孢子形态。

图3为尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062的菌丝形态， 箭头所指为菌丝的锁状联合。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

黄伞（Pholiota adipose）1号孟俊龙，梁志英，刘靖宇等.黄伞高产优质栽培模式 研究.中国食用菌.2006（25）：27-30.

下述实施例所用各种培养基的配方如下：

（1）母种培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g、蛋白胨2g、MgSO₄0.2g、KH₂PO₄0.25g、K₂HPO₄0.25g、VB10.5mg、琼脂粉15g、水1000mL、pH7.0。

（2）原种培养基：由木屑、麸皮、石膏、石灰和水混合而成；其中，所述木屑、 所述麸皮、所述石膏和所述石灰的质量百分配比为78%：20%：1%：1%；所述水在 所述栽培培养基中的质量百分含量为60%-65%。

（3）栽培培养基：由棉籽壳、木屑、麦麸、玉米粉、石膏、石灰和水混合而成； 其中，所述棉籽壳、所述木屑、所述麦麸、所述玉米粉、所述石膏和所述石灰的质量 百分配比为60%：18%：15%：5%：1%：1%；所述水在所述栽培培养基中的质量百 分含量为60%-65%。

实施例1、尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4的分离与鉴定

本发明菌株（记作HS4）的野生子实体采自北京市昌平柿子树上，经中国科学院 微生物所卯晓岚先生鉴定为尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）。进一步，通过对其 子实体及菌丝体形态特征的观察，以及基因间隔序列（ITS）测序，判断该菌株的生物 学分类命名。

一、形态特征

1、子实体形态特征

本发明菌株HS4子实体一般中等大（图1）。菌盖直径3-12cm，半球形至扁半 球形，最后扁平，有时中部稍凸，表面干燥，黄褐色或土褐色带粉红色，鳞片角锥状、 刺状，色较深，中部多，易脱落，盖缘幼时内卷，往往附着菌环（菌幕）残片。菌肉 白色后带乳黄色。菌褶稍密，直生，近白色，后呈浅茶褐色。菌柄近圆柱形，长4.5-8 cm，粗0.7-1.0cm，纤维质，内实色与菌盖相似，下部2/3部分覆有浅朽叶色的鳞片， 菌环以上近白色，无鳞片。菌环易脱落。孢子印呈锈褐色。孢子椭圆形或近球形，直 径（7.2-8.4）μm×（4.1-5.0）μm（图2）。在光学显微镜下，菌丝具有锁状联合（图3）。 该菌株子实体干后香味浓，食用时质地脆。

2、菌丝体形态特征本发明菌株HS4整个生长阶段菌丝均为白色，致密。

通过上述形态学鉴定，将本发明菌株HS4初步判断为尖鳞环锈伞（Pholiota  squarrosoides）。

二、rDNA-ITS测序

采用分子生物学方法对从采集的子实体中分离得到的菌丝体进行rDNA-ITS测 序，其测序结果如序列表中序列1所示。将序列1与Genbank No.：FJ810180（黄伞 （Pholiota adipose）进行DNAMAN剪切比对处理，发现其同源性达98.83%；Renske 等在对土层中分布的外生菌根菌群落进行分子鉴定的研究中提出，供试的rDNA ITS 序列通过与NCBI的GenBank数据库进行BLAST检索比对，序列相似性≥99％，可 以鉴别为相同种；序列相似性为95％～99％，可以鉴别为相同属；序列相似性≤95％， 可以鉴别为相同科（Renske L，Paula L，Thom W K,et al.Molecular identification of  ectomycorrhizal mycelium in soil horizons.Applied and environmental microbiology，2003, 69(1):327-333.）。因此，可断定本发明菌株和黄伞（Pholiota adipose）同属于环锈伞属。

鉴于上述形态特征及rDNA-ITS测序鉴定结果，将本发明菌株HS4鉴定为真菌界， 担子菌门，层菌纲，伞菌目，球盖菇科，环锈伞属的尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）。 该菌株已于2012年4月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 （简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号），保藏编号为CGMCC No.6062。

实施例2、尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062子实体的 人工栽培

一、菌种的制备

（1）母种制备：将实施例1获得的所述尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4 CGMCC No.6062接种到母种培养基上，24℃-28℃避光培养7-10d，得到的菌丝体作 为母种；所得母种若不及时使用，可贮藏于4℃。

（2）原种制备：将步骤（1）所得的母种转接到原种培养基上，培养温度为23 ℃-25℃，空气相对湿度为50%-60%，通风良好，避光培养至菌丝长满容器，得到原 种。原种一般室温存放期不超过15d，低温存放不超过20d，过期菌种不能使用。

（3）栽培种制备：将步骤（2）所得的原种转接到栽培培养基上，在环境温度为 23℃-25℃、空气相对湿度为50%-60%、通风良好、避光的条件下培养24-26d菌丝长 满菌袋，获得栽培种。

二、栽培方法

尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062的栽培流程具体如下： 培养基制作→冷却接种→发菌→低温刺激→出菇→采收

（1）培养基制作及装袋

按照上文栽培培养基的配方配制得到栽培培养基，将其按照常规方法制备菌袋， 使用的菌袋规格为17cm×33cm×0.04cm的耐高压塑料袋，每袋装干料（栽培培养 基中除水外的其他组分）0.40kg。经高压灭菌，冷却后得到待接种菌袋。

（2）接种及发菌：将经过上述步骤一获得的所述尖鳞环锈伞（Pholiota  squarrosoides）HS4CGMCC No.6062的栽培种均匀接入步骤（1）制备的菌袋，每袋 接种量为3.14×10^-5m³。接种后在环境温度为23℃-25℃，空气相对湿度为50%-60%， 通风良好，避光条件下培养，24-26d后菌丝可长满培养基；

（2）低温刺激：转移至-5℃-5℃条件下处理3-5d；

（3）出菇：转移至环境温度为15℃-20℃，空气相对湿度80%-90%，光照300-600 Lux，通风良好，二氧化碳浓度在2000-2300ppm之间的条件下培养20-22d至子实体 原基形成，继续培养；

（4）采收：6-8d后，子实体菌柄长至7-9cm，菌盖尚未完全展开，即可采收第 一潮菇。采摘后进行搔菌，进入菌丝恢复期，待菌丝回复后重新恢复上述操作进行出 菇，采收第二潮菇，一般可采3-4潮菇。

实施例3、尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062菌丝生长 速度、产量及营养成分的检测

本实施例以黄伞（Pholiota adipose）1号为对照（目前没有关于尖鳞环锈伞栽培 的报道，只能选用其近缘种黄伞作为对照），检测尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides） HS4CGMCC No.6062的菌丝生长速度、产量及营养成分。

一、菌丝生长速度的测定

1、实验材料

尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062和黄伞（Pholiota  adipose）1号菌株的母种、原种和栽培种，其制备方法同实施例2步骤一。

2、实验方法

母种菌丝平均生长速度测定：将两种菌株的母种分别接种于母种培养基表面的中 央，培养2-3d后，记录菌丝位置（A），3-5d后记录菌丝位置（B），用直尺测量A与 B之间的距离，除以两位置之间的天数即为菌丝的日平均生长速度，实验设置五个重 复，结果取平均值。

栽培种菌丝平均生长速度测定：将两菌株的原种接种于装有栽培培养基的栽培袋 中央，使均匀分布，待菌丝萌发3-5d后，记录菌丝位置（A），5-7d后记录菌丝位置 （B），用直尺测量A与B之间的距离，除以两位置之间的天数即为菌丝的日平均生长 速度，实验设置五个重复，结果取平均值。

3、实验结果

对母种菌丝生长速度的测定结果如表2所示，尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides） HS4CGMCC No.6062母种的菌丝生长速度可达6.85±0.15mm/d，远高于对照黄伞 （Pholiota adipose）1号母种的菌丝生长速度4.33±0.05mm/d。

表2母种菌丝生长速度的测定结果（单位：mm/d）

  菌株   重复1   重复2   重复3   重复4   重复5   平均值±标准差   HS4   7.00   6.65   6.75   6.85   7.00   6.85±0.15   1号   4.30   4.40   4.30   4.30   4.35   4.33±0.05

对栽培种菌丝生长速度的测定结果如表3所示，尖鳞环锈伞（Pholiota  squarrosoides）HS4CGMCC No.6062栽培种的菌丝生长速度可达3.02±0.01mm/d，高 于对照黄伞（Pholiota adipose）1号栽培种的菌丝生长速度2.51±0.02mm/d。

表3栽培种菌丝生长速度的测定结果（单位：mm/d）

  菌株   重复1   重复2   重复3   重复4   重复5   平均值±标准差mm/d   HS4   3.01   3.03   3.03   3.04   2.99   3.02±0.02   1号   2.50   2.53   2.51   2.52   2.49   2.51±0.02

二、产量的测定

将本发明的尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062与作为对 照的黄伞（Pholiota adipose）1号分别按照实施例2的栽培方法进行栽培，均收获头两 潮菇，对其栽培周期及产量进行比对。实验设置三个重复，每个重复栽培150个菌袋， 结果取平均值。

1、栽培周期

在实施例2所述栽培条件下，尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062的发菌期（从接种到菌丝长满菌袋的时间）为24-26d（比对照黄伞（Pholiota  adipose）1号提前10-12d），低温刺激3-5d，出菇条件下子实体原基形成期20-22d， 子实体分化至采收6-8d，计算从接种至采收第一潮菇共需要53-61d。菇潮间隔14-16 d，第二潮菇子实体分化至采收8-10d。出两潮菇的整个生产周期为75-87d。

在实施例2所述栽培条件下，黄伞（Pholiota adipose）1号发菌期为34-38d，低 温刺激3-5d，出菇条件下子实体原基形成期10-12d，子实体分化至采收4-6d，计算 从接种至采收第一潮菇共需要51-61d。菇潮间隔12-15d，第二潮菇子实体分化至采 收5-8d。出两潮菇的整个生产周期为68-84d。

2、产量

以“生物学效率”表示产量。所述生物学效率是指食用菌鲜重与所用的培养料干 重（栽培培养基中除水外的其他组分）之比，常用百分数表示。如100kg干培养料生 产了80kg新鲜食用菌，则这种食用菌的生物学效率为80%。

在实施例2所述栽培条件下，尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062头两潮菇的生物学效率可达51.29±1.68%，高于作为对照的黄伞（Pholiota  adipose）1号头两潮菇的生物学效率42.67±1.35%，详见表4。

表4头两潮菇的产量（生物学效率）统计（单位：%）

  菌株   重复1   重复2   重复3   平均值±标准差   HS4   52.87   51.49   49.52   51.29±1.68   1号   41.52   42.33   44.15   42.67±1.35

三、营养成分的分析

从步骤二收获的尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062和作 为对照的黄伞（Pholiota adipose）1号的头两潮菇中各自随机选取500g进行营养成分 （氨基酸含量及维生素含量）的分析，由谱尼测试中心测定。氨基酸（表5中的18 种氨基酸）中除色氨酸外，参照食品中氨基酸的测定参照GB/T 5009.124-2003；硫胺 素（维生素B1）的测定参照GB/T 5009.84-2003；核黄素（维生素B2）的测定参照 GB/T 5009.85-2003；维生素B6的测定参照GB/T 5009.154-2003；烟酸和烟酰胺（维 生素B3、PP）的测定参照GB 5413.15-2010。实验设置3个重复，结果取平均值。

其氨基酸及维生素含量如表5和表6所示，尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides） HS4CGMCC No.6062的子实体中氨基酸含量低于作为对照的黄伞（Pholiota adipose） 1号，这可能是由于这两个菌株属于不同的生物种；而在维生素水平上，其维生素B2 含量是黄伞（P.adipose）1号的7倍，维生素B3略低于黄伞（P.adipose）1号，维生 素B1和B6含量相差不大。综合以上分析，尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4 CGMCC No.6062菌株的营养成分稍逊于对照菌株黄伞（P.adipose）1号，但鉴于其菌 丝生长速度较快及产量较高，因此可作为黄伞生产菌株的杂交亲本，选育兼有二者优 良性状的新菌株。

表5尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062与黄伞（Pholiota  adipose）1号子实体中的18氨基酸含量比较（单位：g/100g）

  氨基酸   1号   HS4   氨基酸   1号   HS4   天门冬氨酸   1.47±0.01   0.85±0.00   蛋氨酸   1.04±0.02   1.08±0.03   苏氨酸   0.76±0.01   0.47±0.00   异亮氨酸   0.74±0.01   0.50±0.01   丝氨酸   0.78±0.01   0.48±0.00   亮氨酸   1.20±0.01   0.80±0.02   谷氨酸   3.23±0.05   1.54±0.00   酪氨酸   0.40±0.00   0.24±0.00   脯氨酸   0.71±0.03   0.39±0.02   苯丙氨酸   0.81±0.01   0.58±0.02   甘氨酸   0.67±0.01   0.40±0.00   赖氨酸   0.83±0.01   0.50±0.01   丙氨酸   0.89±0.01   0.54±0.00   组氨酸   0.33±0.00   0.20±0.01   胱氨酸   0.14±0.01   0.09±0.01   色氨酸   0.20±0.00   0.10±0.01   缬氨酸   0.71±0.00   0.42±0.01   精氨酸   1.11±0.02   0.44±0.00

注：单位g/100g，指的是每100g干子实体中含有相应氨基酸的克数。

表6尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC No.6062与黄伞（Pholiota  adipose）1号子实体中的维生素含量比较（单位：mg/100g）

  维生素   1号   HS4   维生素B2   0.30±0.01   2.10±0.00   维生素B1   0.21±0.00   0.30±0.00   维生素B6   0.37±0.01   0.28±0.00   维生素B3   75.00±2.00   50.75±0.75

注：单位mg/100g，指的是每100g干子实体中含有相应维生素的毫克数。

综合上述结果，本发明所提供的尖鳞环锈伞（Pholiota squarrosoides）HS4CGMCC  No.6062菌丝生长速度较快，产量高，营养成分丰富，可作为黄伞菌株选育的优良亲 本。