一种尼莫地平冻干固体脂质纳米粒及其制备方法

摘要

本发明公开了一种尼莫地平冻干固体脂质纳米粒，由固体脂质纳米粒溶液与冻干保护剂混合后冻干制成，每100mL固体脂质纳米粒溶液中加入20g～40g冻干保护剂；100mL所述固体脂质纳米粒溶液由以下原料制成：尼莫地平2mg～20mg，磷脂0.5g～4g，胆固醇硫酸钠盐0g～0.2g，丙二醇嵌段聚醚0.02g～0.4g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干保护剂为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的一种或几种。本发明的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒，其载药量可达0.2mg/mL，复溶后状态良好，其理化性质符合静脉注射用要求，具有高效、低毒、稳定等特点，可提高患者顺应性，适于临床应用。

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种尼莫地平冻干固体脂质纳米 粒及其制备方法。

背景技术

尼莫地平(Nimodipine，NMD)是第二代二氢吡啶类钙离子拮抗剂， 二十世纪八十年代由德国拜耳公司合成，其结构式如下：

尼莫地平可以选择性作用于钙通道，特异性地与有关受体可逆结合， 调节血管平滑肌内钙离子浓度，引起平滑肌松弛，逆转血管痉挛，改善血 液供应。由于尼莫地平为脂溶性药物，可以通过血脑屏障，因此能保护脑 细胞，提高其对缺氧的耐受性。临床常用于缺血性脑血管病，蛛网膜下腔 出血引起的脑血管痉挛、脑中风和偏头疼等症，还可改善记忆力等。

尼莫地平耐受性好，副作用小，但存在严重的肝脏首过效应，口服生 物利用度低，因此临床上广泛使用的是其注射液。尼莫地平水溶性差，注 射液中含有高浓度的乙醇，使用时用葡萄糖或生理盐水稀释，有时会析出 沉淀，且乙醇对血管有刺激性，因此开发高效、低毒和稳定的尼莫地平新 剂型，具有重要的意义。

固体脂质纳米粒在结构上与脂质体相类似，脂质体系指将药物包封于 类脂质双分子层内而形成的微型泡囊体。其在结构上说，具有中间的内水 相，可以包载水溶性药物，属于空心结构。而固体脂质纳米粒是以固态天 然或合成的类脂为载体，将药物包裹或夹嵌于类脂核中制成的固体胶粒给 药系统，在结构上说，其属于实心结构，更易包载脂溶性药物。

CN1418626A公开的尼莫地平纳米脂质体制备技术所制备的脂质体， 尽管有着较好的安全性和生物相容性及跨膜性，但其稳定性不是很好，用 该方法制备的脂质体的粒径也偏大。CN1554340A提供了一种具有良好脑 部靶向的尼莫地平纳米脂质体及其前体冻干组合物，其平均粒径在100nm 以下，但却没有给出冻干组合物复溶后的粒径变化情况及稳定性的数据。 而冻干后的质量评价是冻干制剂的重要衡量指标。CN1903173A公开了一 种尼莫地平纳米粒的其制备方法，其载药量和稳定性尚可，但粒径较大， 复溶后的平均粒径在0.3μm以下，较大的粒径将不利于脑靶向也不利于静 脉给药。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种 稳定的可供临床应用的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒。该冻干固体脂质纳 米粒复溶后状态良好，其理化性质符合静脉注射用要求，同时提高了患者 顺应性，适于临床应用。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种尼莫地平冻干 固体脂质纳米粒，其特征在于，由固体脂质纳米粒溶液与冻干保护剂混合 后冻干制成，每100mL固体脂质纳米粒溶液中加入20g～40g冻干保护剂； 100mL所述固体脂质纳米粒溶液由以下原料制成：尼莫地平2mg～20mg， 磷脂0.5g～4g，胆固醇硫酸钠盐0g～0.2g，丙二醇嵌段聚醚0.02g～0.4g， 余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干保护剂为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽 糖和甘露醇中的一种或几种。

上述的一种尼莫地平冻干固体脂质纳米粒，100mL所述固体脂质纳米 粒溶液由以下原料制成：尼莫地平20mg，磷脂2g，胆固醇硫酸钠盐0.1g， 丙二醇嵌段聚醚0.2g，余量为磷酸盐缓冲溶液。

上述的一种尼莫地平冻干固体脂质纳米粒，所述磷脂为注射级蛋黄卵 磷脂PL-100M；所述丙二醇嵌段聚醚为丙二醇嵌段聚醚F-68。

上述的一种尼莫地平冻干固体脂质纳米粒，所述冻干保护剂为甘露醇 和海藻糖，甘露醇和海藻糖的质量比为1∶2。

上述的一种尼莫地平冻干固体脂质纳米粒，每100mL固体脂质纳米 粒溶液中加入30g的甘露醇和海藻糖。

另外，本发明还提供了上述尼莫地平冻干固体脂质纳米粒的制备方 法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤一、分别称取尼莫地平、磷脂和胆固醇硫酸钠盐，将称取的尼莫 地平、磷脂和胆固醇硫酸钠盐混合后在磁力搅拌下加热溶解，得到均一油 相；

步骤二、称取丙二醇嵌段聚醚并将称取的丙二醇嵌段聚醚溶解于pH 值为6.5～7.5的磷酸盐缓冲溶液中，得到水相；

步骤三、将步骤二中所述水相加热至与步骤一中所述油相温度相同， 然后在搅拌条件下将加热后的水相滴入步骤一中所述油相中，分散得到初 乳；

步骤四、将步骤三中所述初乳用pH值为6.5～7.5的磷酸盐缓冲溶液 定容，然后超声分散，冷却后超滤灭菌，得到固体脂质纳米粒溶液；

步骤五、称取冻干保护剂并将称取的冻干保护剂溶解于步骤四中所述 固体脂质纳米粒溶液中，分装，冻干，得到尼莫地平冻干固体脂质纳米粒。

上述的方法，步骤一中所述加热的温度为60℃。

上述的方法，步骤三中所述搅拌速率为500rpm。

上述的方法，步骤四中所述超声的功率为750W，超声时间为10min。

上述的方法，所述超声采用间隔超声方式，具体为：超声波每处理3s， 间歇1s。

本发明以尼莫地平为模型药物，运用乳化-超声方法成功制备了尼莫地 平固体脂质纳米粒。通过对冷冻干燥工艺的优化和对冻干保护剂处方的筛 选，成功的开发出高效、低毒和稳定的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

1、本发明的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒，其载药量可达0.2mg/mL， 复溶后状态良好，其理化性质符合静脉注射用要求，具有高效、低毒、稳 定等特点，可提高患者顺应性，适于临床应用。

2、本发明经过深入的研究，选用胆固醇硫酸钠盐(SCS)作为稳定剂， SCS是由胆固醇经硫酸酯化后衍生而来的，它作为一种新型膜稳定性材料 参与固体脂质纳米粒的组成，在起到调节膜流动性功能的同时又具有乳化 作用。随着SCS比例的增加，固体脂质纳米粒的澄明度增加，粒径减小且 分布趋宽，同时zeta电位的绝对值变大；与胆固醇比较，SCS的加入可以 使得固体脂质纳米粒粒径减小，在加入量相同的情况下，用SCS制得的固 体脂质纳米粒粒径要比用胆固醇制得的脂质纳米粒粒径小的多，且zeta电 位的绝对值要大，而zeta电位的大小某种程度上影响着制剂的稳定性。

3、本发明中经过深入的研究，选用非离子型乳化剂丙二醇嵌段聚醚 作为乳化剂，在增加脂溶性成分的溶解度的同时可以提高药物的包封率和 固体脂质纳米粒的稳定性；同时，选用既有亲油基又有亲水基的注射级蛋 黄卵磷脂PL-100M，在制备过程中易形成囊泡。

4、采用本发明的方法制备的尼莫地平固体脂质纳米粒在冻干过程中 具有良好成型性，可以被完好保护，冻干前和复水后固体脂质纳米粒的形 态和粒径只有微小变化，平均粒径在100nm左右，各项理化性质在冻干前 后保持稳定，符合静脉用药要求。

5、本发明的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒长期稳定性考察的结果显 示：在25±2℃的条件下放置3个月，其外观、残留水分、pH值、粒径和 包封率均无显著变化，仍符合静脉用药的要求。

下面结合附图和实施例，对本发明的技术方案作进一步的详细描述。

附图说明

图1为本发明实施例1制备的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒冻干前的 透射电镜照片。

图2为本发明实施例1制备的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒复溶后的 透射电镜照片。

图3为本发明实施例1制备的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒冻干前后 在含30％乙醇的pH 7.4磷酸盐缓冲液中的药物释放曲线。

图4为单剂量股静脉注射本发明尼莫地平冻干固体脂质纳米粒和溶液 型尼莫地平注射液的平均血药浓度与时间的曲线。

具体实施方式

实施例1

本实施例的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒，由固体脂质纳米粒溶液与 冻干保护剂混合后冻干制成；100mL所述固体脂质纳米粒溶液由以下原料 制成：尼莫地平20mg，磷脂2g，胆固醇硫酸钠盐0.1g，丙二醇嵌段聚醚 0.2g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干保护剂为甘露醇和海藻糖，其中 甘露醇的用量为每100mL固体脂质纳米粒溶液用10g甘露醇，海藻糖的 用量为每100mL固体脂质纳米粒溶液用20g海藻糖；所述磷脂为注射级 蛋黄卵磷脂PL-100M；所述丙二醇嵌段聚醚为丙二醇嵌段聚醚F-68。

本实施例的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒的制备方法包括以下步骤：

步骤一、分别称取20mg尼莫地平、2g注射级蛋黄卵磷脂PL-100M和 0.1g胆固醇硫酸钠盐，将称取的尼莫地平、注射级蛋黄卵磷脂PL-100M和 胆固醇硫酸钠盐混合后在搅拌条件下加热至60℃溶解，得到均一油相；

步骤二、称取0.2g丙二醇嵌段聚醚F-68并将称取的丙二醇嵌段聚醚 F-68溶解于适量pH值为6.5的磷酸盐缓冲溶液中，得到水相；

步骤三、将步骤二中所述水相加热60℃，然后在搅拌速率为500rpm 的搅拌条件下将加热后的水相滴入步骤一中所述油相中，分散得到初乳；

步骤四、将步骤三中所述初乳用pH值为6.5的磷酸盐缓冲溶液定容 至100mL，然后在功率为750W的条件下间隔超声(超声波每处理3s，间 歇1s)分散10min，冷却后过0.22μm超滤膜灭菌，得到固体脂质纳米粒 溶液；

步骤五、称取10g甘露醇和20g海藻糖，并将称取的甘露醇和海藻糖 溶解于步骤四中所述固体脂质纳米粒溶液中，分装，冻干(预冻温度为-45 ℃，预冻时间为5h)，得到尼莫地平冻干固体脂质纳米粒。

实施例2

本实施例与实施例1相同，其中不同之处在于：所述冻干保护剂为蔗 糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的一种或三种以上，或者为蔗糖、 葡萄糖、麦芽糖和甘露醇中的两种，或者为蔗糖、葡萄糖和麦芽糖中的一 种与海藻糖的混合物。

实施例3

本实施例的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒，由固体脂质纳米粒溶液与 冻干保护剂混合后冻干制成；100mL所述固体脂质纳米粒溶液由以下原料 制成：尼莫地平10mg，磷脂1g，胆固醇硫酸钠盐0.05g，丙二醇嵌段聚醚 0.1g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干保护剂为甘露醇和海藻糖，其中 甘露醇的用量为每100mL固体脂质纳米粒溶液用10g甘露醇，海藻糖的 用量为每100mL固体脂质纳米粒溶液用20g海藻糖；所述磷脂为注射级 蛋黄卵磷脂PL-100M；所述丙二醇嵌段聚醚为丙二醇嵌段聚醚F-68。

本实施例的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒的制备方法包括以下步骤：

步骤一、分别称取10mg尼莫地平、1g注射级蛋黄卵磷脂PL-100M和 0.05g胆固醇硫酸钠盐，将称取的尼莫地平、注射级蛋黄卵磷脂PL-100M 和胆固醇硫酸钠盐混合后在搅拌条件下加热至60℃溶解，得到均一油相；

步骤二、称取0.1g丙二醇嵌段聚醚F-68并将称取的丙二醇嵌段聚醚 F-68溶解于适量pH值为7.5的磷酸盐缓冲溶液中，得到水相；

步骤三、将步骤二中所述水相加热60℃，然后在搅拌速率为500rpm 的搅拌条件下将加热后的水相滴入步骤一中所述油相中，分散得到初乳；

步骤四、将步骤三中所述初乳用pH值为7.5的磷酸盐缓冲溶液定容 至100mL，然后在功率为750W的条件下间隔超声(超声波每处理3s，间 歇1s)分散10min，冷却后过0.22μm超滤膜灭菌，得到固体脂质纳米粒 溶液；

步骤五、称取10g甘露醇和20g海藻糖，并将称取的甘露醇和海藻糖 溶解于步骤四中所述固体脂质纳米粒溶液中，分装，冻干(预冻温度为-45 ℃，预冻时间为5h)，得到尼莫地平冻干固体脂质纳米粒。

实施例4

本实施例与实施例3相同，其中不同之处在于：所述冻干保护剂为蔗 糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的一种或三种以上，或者为蔗糖、 葡萄糖、麦芽糖和甘露醇中的两种，或者为蔗糖、葡萄糖和麦芽糖中的一 种与海藻糖的混合物。

实施例5

本实施例的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒，由固体脂质纳米粒溶液与 冻干保护剂混合后冻干制成；100mL所述固体脂质纳米粒溶液由以下原料 制成：尼莫地平2mg，磷脂0.5g，丙二醇嵌段聚醚0.02g，余量为磷酸盐 缓冲溶液；所述冻干保护剂为蔗糖，蔗糖的用量为每100mL固体脂质纳 米粒溶液用20g蔗糖；所述磷脂为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M；所述丙二 醇嵌段聚醚为丙二醇嵌段聚醚F-68。

本实施例的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒的制备方法包括以下步骤：

步骤一、分别称取2mg尼莫地平和0.5g注射级蛋黄卵磷脂PL-100M， 将称取的尼莫地平和注射级蛋黄卵磷脂PL-100M混合后在搅拌条件下加 热至60℃溶解，得到均一油相；

步骤二、称取0.02g丙二醇嵌段聚醚F-68并将称取的丙二醇嵌段聚醚 F-68溶解于适量pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中，得到水相；

步骤三、将步骤二中所述水相加热60℃，然后在搅拌速率为500rpm 的搅拌条件下将加热后的水相滴入步骤一中所述油相中，分散得到初乳；

步骤四、将步骤三中所述初乳用pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液定容 至100mL，然后在功率为750W的条件下间隔超声(超声波每处理3s，间 歇1s)分散10min，冷却后过0.22μm超滤膜灭菌，得到固体脂质纳米粒 溶液；

步骤五、称取20g蔗糖，并将称取的蔗糖溶解于步骤四中所述固体脂 质纳米粒溶液中，分装，冻干(预冻温度为-45℃，预冻时间为5h)，得 到尼莫地平冻干固体脂质纳米粒。

实施例6

本实施例与实施例5相同，其中不同之处在于：所述冻干保护剂为葡 萄糖、海藻糖、麦芽糖或甘露醇，或者为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖 和甘露醇中的至少两种。

实施例7

本实施例的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒，由固体脂质纳米粒溶液与 冻干保护剂混合后冻干制成；100mL所述固体脂质纳米粒溶液由以下原料 制成：尼莫地平20mg，磷脂4g，胆固醇硫酸钠盐0.2g，丙二醇嵌段聚醚 0.4g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干保护剂为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、 麦芽糖和甘露醇按等质量比混合，冻干保护剂总量为每100mL固体脂质 纳米粒溶液40g冻干保护剂；所述磷脂为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M；所 述丙二醇嵌段聚醚为丙二醇嵌段聚醚F-68。

本实施例的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒的制备方法包括以下步骤：

步骤一、分别称取20mg尼莫地平、4g注射级蛋黄卵磷脂PL-100M和 0.2g胆固醇硫酸钠盐，将称取的尼莫地平、注射级蛋黄卵磷脂PL-100M和 胆固醇硫酸钠盐混合后在搅拌条件下加热至60℃溶解，得到均一油相；

步骤二、称取0.4g丙二醇嵌段聚醚F-68并将称取的丙二醇嵌段聚醚 F-68溶解于适量pH值为6.5的磷酸盐缓冲溶液中，得到水相；

步骤三、将步骤二中所述水相加热60℃，然后在搅拌速率为500rpm 的搅拌条件下将加热后的水相滴入步骤一中所述油相中，分散得到初乳；

步骤四、将步骤三中所述初乳用pH值为6.5的磷酸盐缓冲溶液定容 至100mL，然后在功率为750W的条件下间隔超声(超声波每处理3s，间 歇1s)分散10min，冷却后过0.22μm超滤膜灭菌，得到固体脂质纳米粒 溶液；

步骤五、称取蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇各8g，并将称 取的蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇溶解于步骤四中所述固体脂 质纳米粒溶液中，分装，冻干(预冻温度为-45℃，预冻时间为5h)，得 到尼莫地平冻干固体脂质纳米粒。

实施例8

本实施例与实施例7相同，其中不同之处在于：所述冻干保护剂为蔗 糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的至多四种。

对本发明的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒进行以下检测试验：

一、尼莫地平冻干固体脂质纳米粒的外观检测

对本发明的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒进行肉眼观察，为海绵状团 块，可见明显蓝色乳光，肉眼和显微镜下观察均无不溶性成分或块状团聚 物。尼莫地平冻干固体脂质纳米粒外观不塌陷、不皱缩、颜色均匀、孔隙 致密、表面光洁，体积保持冻干前的体积。尼莫地平冻干固体脂质纳米粒 复溶后外观为半透明乳白色。

图1为本发明实施例1制备的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒冻干前的 透射电镜照片，图2为本发明实施例1制备的尼莫地平冻干固体脂质纳米 粒复溶后的透射电镜照片。由图1和图2可知，尼莫地平冻干固体脂质纳 米粒冻干前和复溶后外形均圆整，结构均一。

二、尼莫地平冻干固体脂质纳米粒的粒径分布考察

用经0.22μm微孔滤膜超滤的注射用水将本发明实施例1和实施例7 制备的尼莫地平固体脂质纳米粒冻干前样品和尼莫地平冻干固体脂质纳 米粒复溶后样品分别稀释至适宜浓度，然后后立即放入Nicomp^TM380粒度 测定仪中，测定粒径分布，与冻干前的固体脂质纳米粒溶液的粒径分布进 行比较，结果见表1。

表1粒径分布测定结果

  实施例   冻干前的PSD(nm)   复溶后的PSD(nm)   1   106±45   153±47   7   110±39   150±54

从表1可以看出，实施例1和实施例7制备的尼莫地平冻干固体脂质 纳米粒在冻干前后的粒径分布变化很小，均在200nm以下，满足静脉注射 用要求。

三、尼莫地平冻干固体脂质纳米粒的zeta电位测定

采用Nicomp^TM380进行zeta电位的测定。用经0.22μm微孔滤膜超滤 的注射用水将本发明实施例1和实施例7制备的尼莫地平固体脂质纳米粒 冻干前样品分别稀释至适宜浓度后立即放入Nicomp^TM380样品池内，测定 zeta电位，结果见表2。

表2zeta电位测定结果

  实施例   1   7   Zeta电位(mv)   -14.15   -13.96

从表2可以看出，本发明制备的尼莫地平固体脂质纳米粒冻干前样品 的zeta电位在-14mv左右，稳定性较好。

四、尼莫地平冻干固体脂质纳米粒的尼莫地平含量测定及包封率的考 察

采用甲醇破乳，用HPLC测定本发明实施例1和实施例7制备的尼莫 地平冻干固体脂质纳米粒中尼莫地平的含量，用体外微渗析的方法测定包 封率，结果如表3所示。

表3尼莫地平固体脂质纳米粒含量和包封率测定结果

  实施例   1   7   含量(％)   98.45   98.32   包封率(％)   92.56   93.14

从表3可以看出，本发明制备的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒的含量 均在98％以上，包封率均在93％左右，质量稳定。

五、尼莫地平冻干固体脂质纳米粒的长期稳定性的考察

将本发明实施例1制备的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒放置于室温 (25℃±2℃)干燥条件下储存3个月，分别于放置前和放置后第1、2、3 月取样进行各项理化性质的检查与测定，结果见表4。

表4尼莫地平冻干固体脂质纳米粒长期稳定性试验结果(25℃±2℃)

从表4可以看出，在25℃±2℃干燥条件下放置3个月，尼莫地平冻干 固体脂质纳米粒的外观、残留水分、pH值、粒径和包封率均无显著变化， 仍符合静脉用药要求。

六、尼莫地平冻干固体脂质纳米粒冻干前后的体外释放

分别精密量取冻干前和复溶后的尼莫地平固体脂质纳米粒2mL置透 析袋中，两端扎紧，置于50mL锥形瓶中，加入40mL释放介质(含30％ 乙醇的pH 7.4磷酸盐缓冲溶液)，同法制得样品3份。将锥形瓶放37℃ 的水浴振荡器中，100次/分振荡，于0.5、1、2、3、4、6、8、12、24、 36、48h取样100μL，并补充同体积的新鲜介质，取出的介质用HPLC法 进行分析。结果见表5。

表5尼莫地平冻干固体脂质纳米粒在冻干前后的释放行为

由表5可知，两制剂均存在明显的突释效应，前期释放较快，后期趋 于缓慢。依此数据绘制曲线，结果见图3。两曲线十分相似，表明尼莫地 平冻干固体脂质纳米粒在冻干前后其状态并未发生较大改变。

七、尼莫地平冻干固体脂质纳米粒的动物实验-大鼠体内药代动力学 研究

选用12只体重为200±20g的Wister种雄性大白鼠，实验前禁食给水， 将大鼠随机分为两组：对照组和待检组，每组6只，以大鼠右后股静脉注 射的方式给药，对照组注射尼莫地平注射液，待检组注射用注射用水复溶 的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒，注射剂量均为0.75mg·kg^-1，分别于给药 后5min，10min，20min，30min，45min，1h，2h，4h，6h眼眶取血0.5mL， 置于预先肝素化的1.5mL尖底离心管中，4000rpm离心10min，分离血浆， -70℃保存，待测。

将保存的血浆样品100μL置于7mL离心管，加入20μL内标溶液 (4μg·mL^-1尼群地平溶液)、20μL甲醇和20μL NaOH(0.1M)，涡旋30 秒，混匀；加入3mL乙醚-正己烷(体积比1∶1)，涡旋10min；然后于 4000rpm离心10min，取上清液2mL置于5mL离心管中，用美国 LABCONCO公司离心浓缩干燥仪在40℃条件下真空蒸发除去溶剂，残留 物加入1mL甲醇复溶，涡旋5min混合，冷冻离心机12000rpm离心10min， 取上清液5μL进样UPLC-ESI-MS/MS进行分析，大鼠各时血药浓度结果 见表6和表7。

表6单剂量股静脉注射本发明

尼莫地平冻干固体脂质纳米粒后大鼠各时血药浓度

表7单剂量股静脉注射尼莫地平注射液后大鼠各时血药浓度

绘制对照组和待检组大鼠平均血药浓度与时间的关系曲线，结果见图 4。从图中可以看出，静脉注射尼莫地平纳米固体脂质纳米粒和尼莫地平 溶液型注射液后，两种制剂在大鼠体内的药物动力学行为基本相似，但是 由于初期固体脂质纳米粒组的血药浓度高于溶液剂组，导致整个监测过程 中纳米粒的血药浓度始终大于溶液剂组。这可能是由于尼莫地平溶液剂给 药后药物迅速分布到组织中使其初始血浆药物浓度迅速降低。而对于纳米 粒组，90％以上的尼莫地平药物存在于磷脂双分子层及其表面。因此给药 后，药物需要一定的时间，扩散到血浆中，然后再分布到组织中，因此导 致尼莫地平纳米粒组的初始血药浓度高于其溶液剂。同时由隔室模型参数 可知，两制剂均符合三隔室模型，其药物的药代动力学行为基本一致。从 而导致在整个代谢过程中，纳米粒组的血药浓度较溶液剂组偏高。

应用DAS2.0统计计算软件(中国药理学会数学药理专业委员会)药 物动力学程序对尼莫地平冻干固体脂质纳米粒和尼莫地平注射液的血药 浓度数据进行处理。根据AIC值和拟合度判断两者的隔室模型归属，计算 结果表明，尼莫地平冻干固体脂质纳米粒和尼莫地平注射液的血药浓度数 据均符合三隔室模型。

非隔室模型药物动力学参数及生物等效性的评价：采用统计矩对血药 浓度数据进行计算，用统计矩分析药物的体内过程属于一种非隔室的分析 方法，因此它不需对药物设定专门的隔室。本实验使用DAS2.0统计计算 软件的药物动力学程序，根据血药浓度-时间实测数据所描述的体内过程， 计算尼莫地平冻干固体脂质纳米粒和尼莫地平注射液的统计矩药物动力 学参数，结果见表8。

表8非隔室模型拟合本发明尼莫地平

冻干固体脂质纳米粒与参比溶液剂的各项药动学参数

  参数  单位   尼莫地平冻干固体脂质纳米粒   尼莫地平注射液   AUC(0-t)  μg/L*h   469.953±67.75   343.677±82.791   AUC(0-∞)  μg/L*h   484.489±78.058   345.956±84.314   最大血药浓度  μg/L   804.433±117.519   600.6±133.676   药峰时间  h   0.083±0   0.083±0   半衰期  h   0.797±0.187   0.545±0.108

应用DAS2.0统计计算软件的生物等效性程序，对表8的药动学参数 进行了评价。采用对数转换，对AUC，最大血药浓度进行了双向单侧t 检验，结果显示两制剂等效。

综上所述，本发明的尼莫地平冻干固体脂质纳米粒，其载药量可达 0.2mg/mL，复溶后状态良好，其理化性质符合静脉注射用要求，具有高效、 低毒、稳定等特点，可提高患者顺应性，适于临床应用。本发明的尼莫地 平冻干固体脂质纳米粒与尼莫地平注射液等效，避免了注射液中乙醇对血 管的刺激性，是高效、低毒、稳定的尼莫地平新剂型。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡 是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效 结构变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。