制备头花蓼提取物的方法和头花蓼提取物

摘要

本发明涉及制备头花蓼提取物的方法和头花蓼提取物。本发明制备头花蓼提取物的方法，其基本上包括以下步骤：(1)将头花蓼地上部分鲜品或干品加水煎煮，过滤，使滤液浓缩、干燥；(2)将步骤(1)所得干燥物用76～84％乙醇提取，过滤，使滤液浓缩、干燥，即得。本发明头花蓼提取物可用于制备清热利湿用药，利尿通淋用药，泌尿系统感染或结石用药，肾盂肾炎用药，解毒、散瘀用药，抗菌、抗炎、镇痛用药，前列腺炎用药。

说明书

技术领域

本发明属于药用植物提取物领域，具体涉及一种制备头花蓼提取物的 方法和头花蓼提取物，特别地，所述提取物由以下步骤获得：取头花蓼地 上部分鲜品或干品，加水煎煮2～4小时，过滤，将滤液浓缩至20℃时相对 密度为1.1～1.3，浓缩液喷雾干燥或减压干燥成为干燥物；干燥物粉碎成100 目细粉，细粉再用8倍质量的80～83％乙醇提取1小时，过滤，滤液干燥 即得。

背景技术

已知头花蓼(Polygonum capitatum Buch-Ham ex D.Don)为蓼科蓼属多 年生草本植物。具有清热利湿、利尿通淋之功效，在临床上治疗泌尿系统 感染有着显著的效果。以其为原料制成的中成药制剂“热淋清颗粒”2002年 进入国家基本药物目录，2004年进入国家基本医疗保险目录。

头花蓼是少数民族地区的常用药，主要用于肾盂肾炎、尿道感染、利 尿通淋等症。相关的药理学研究少见，目前仅有任光友等几篇报道。任光 友采用大鼠细菌性肾盂肾炎模型进行实验，结果头花蓼水提取物组大鼠尿 液中的WBC和BLD与对照组比较明显减少，显示头花蓼水提物对肾盂肾 炎具有一定的抗炎作用。任光友等以小鼠腹腔注射大肠杆菌菌液观察5天 内小鼠死亡情况，结果对照组死亡率为100％，头花蓼组死亡率分别为20％ 和50％，显示头花蓼水提物能够对抗大肠杆菌引起的感染。任光友等以头 花蓼水提物灌胃给药予家兔，结果，头花蓼水提物组与对照组比较，体温 无显著性差异，但能降低静脉注射伤寒副伤寒菌苗引起的家兔的发热体 温。任光友等，以头花蓼水提物分别灌胃给药家兔、大鼠，与空白组和速 尿对照组比较尿量。结果显示头花蓼水提物对家兔和大鼠无明显利尿作用。 徐英春等人采用琼脂稀释法检测了头花蓼对10株淋病奈瑟球菌(淋球菌)的 体外抑菌活性，结果头花蓼对淋球菌有抑菌活性。其对10株淋球菌的最小 抑菌浓度范围为8～32g/L，平均值为11.2g/L。

中国专利申请公开说明书CN1054899A(中国专利申请号90107810.7， 公开日1991年10月2日)中公开了一种泌感灵冲剂、糖浆生产工艺。该生 产工艺是以四季草为原料用水煎煮30-60分钟，提取液过滤浓缩，将其上 清液减压浓缩成膏，再用60-70％乙醇提取，将乙醇提取液真空干燥，得四 季红浸膏，进一步配制成冲剂或糖浆剂，据信该具有解毒、散瘀、利尿、 通淋的功效。

中华人民共和国卫生部药典委员会1998年编的中华人民共和国卫生 部《药品标准一中药成方制剂》(第十七册)中收载了名为“热淋清颗粒”的 中成药制剂，其是通过将头花蓼加水煎煮两次后过滤浓缩制成的。

CN 1481832A(中国专利申请号02129686.3，公开日2004年3月17日) 和CN 1483466A(中国专利申请号03146381.9，公开日2004年3月24日) 公开了头花蓼提取物，其基本上是由以下步骤制备的：a.由头花蓼全草的 鲜品或干品用水分两次煎煮或者用醇水混合物分二至三次回流提取，每次 1-2小时，合并煎煮液，过滤浓缩至20℃时的相对密度为1.2，喷雾干燥 或减压干燥得到；或者，b.由头花蓼全草及其水提药渣经二氧化碳超临界 萃取得到。据信此提取物可用于抗菌、抗炎、镇痛、利尿、治疗泌尿系统 结石、治疗肾盂肾炎以及前列腺炎。

尽管目前有诸多关于制备头花蓼提取物的报道，然而本领域技术人员 仍然期待从头花蓼获得更为有效的产品。

发明内容

本发明目的是期待从头花蓼获得更为有效的产品。本发明人发现，使 用先将头花蓼经水提得到浓缩干燥品，然后再用一定浓度的乙醇提取该浓 缩干燥品，得到的提取物在生物活性方面具有令人期待的效果。本发明基 于此发现而得以完成。

本发明第一方面提供了一种制备头花蓼提取物的方法，其基本上包括 以下步骤：

(1)将头花蓼地上部分鲜品或干品加水煎煮，过滤，使滤液浓缩、干燥；

(2)将步骤(1)所得干燥物用76～84％乙醇提取，过滤，使滤液浓缩、干 燥，即得。

根据本发明第一方面的方法，其中所述步骤(1)中，用头花蓼干品或鲜 品的5-15倍量(优选5-13倍量，更优选5-10倍量)的水提取1-2次，每次 1-4小时(优选1-3小时或者优选1-2小时)。

根据本发明第一方面的方法，其中所述步骤(1)中，滤液浓缩至20℃时 相对密度为1.1～1.3。

根据本发明第一方面的方法，其中所述步骤(1)中，滤液浓缩后经喷雾 干燥或减压干燥的方式干燥。

根据本发明第一方面的方法，其中所述步骤(2)中，所用乙醇为78～84％ 乙醇，更优选80～84％乙醇，例如约82％乙醇。

根据本发明第一方面的方法，其中所述步骤(2)中，步骤(1)所得干燥物 被粉碎成60-120目(优选80-120目，例如约100目)的细粉，然后再进行乙 醇提取。

根据本发明第一方面的方法，其中所述步骤(2)中，使用乙醇溶液在回 流处理的条件或者超声波处理的条件下进行提取。在一个实施方案中，提 取时间可以是0.5～5小时(例如1-4小时，例如1-3小时)。

本发明第二方面提供了一种头花蓼提取物，其基本上由包括以下步骤 的方法制备得到：

(1)将头花蓼地上部分鲜品或干品加水煎煮，过滤，使滤液浓缩、干燥；

(2)将步骤(1)所得干燥物用76～84％乙醇提取，过滤，使滤液浓缩、干 燥，即得。

根据本发明第一方面的头花蓼提取物，其中所述步骤(1)中，用头花蓼 干品或鲜品的5-15倍量(优选5-13倍量，更优选5-10倍量)的水提取1-2次， 每次1-4小时(优选1-3小时或者优选1-2小时)。

根据本发明第一方面的头花蓼提取物，其中所述步骤(1)中，滤液浓缩 至20℃时相对密度为1.1～1.3。

根据本发明第一方面的头花蓼提取物，其中所述步骤(1)中，滤液浓缩 后经喷雾干燥或减压干燥的方式干燥。

根据本发明第一方面的头花蓼提取物，其中所述步骤(2)中，所用乙醇 为78～84％乙醇，更优选80～84％乙醇，例如约82％乙醇。

根据本发明第一方面的头花蓼提取物，其中所述步骤(2)中，步骤(1) 所得干燥物被粉碎成60-120目（优选80-120目，例如约100目)的细粉，然 后再进行乙醇提取。

根据本发明第一方面的头花蓼提取物，其中所述步骤(2)中，使用乙醇 溶液在回流处理的条件或者超声波处理的条件下进行提取。在一个实施方 案中，提取时间可以是0.5～5小时(例如1-4小时，例如1-3小时)。

本发明第三方面提供本发明第二方面所述头花蓼提取物在制备清热利 湿用药，利尿通淋用药，泌尿系统感染或结石用药，肾盂肾炎用药，解毒、 散瘀用药，抗菌、抗炎、镇痛用药，前列腺炎用药的药物中的用途。

本发明第四方面提供了一种药物组合物，其中包含本发明第二方面任 一实施方案所述的头花蓼提取物以及任选的药学可接受的载体。

根据本发明第四方面的药物组合物，其呈口服或注射给药的制剂形式。 在一个实施方案中，所述药物组合物呈片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、口 服液剂、注射剂(水针和/或粉针)等的形式。

本发明任一方面或该任一方面的任一实施方案所具有的任一技术特征 同样适用其它任一实施方案或其它任一方面的任一实施方案，只要它们不 会相互矛盾，当然在相互之间适用时，必要的话可对相应特征作适当修饰。 下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且 如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此 外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义， 即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释， 提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

在本发明中，本发明方法得到“头花蓼提取物”，该术语亦可称为本发 明的“头花蓼有效组分”或者本发明的“头花蓼有效部位”。

在本发明方法中，经步骤(1)获得水提取物，该步骤的操作条件无需要 作特别的限制，原因在于本发明人发现在步骤(2)中采用独特浓度的提取溶 剂即乙醇水溶液，出现令人期待的药效学提高的效果。

本发明目的在于克服现有技术的不足，提供一种有效的头花蓼抗炎有 效成分(有效部位)与应用。

发明对头花蓼药效作用进行聚焦，弄清其作用特点同时对头花蓼不同 提取部位的药效作用进行筛选，采用头花蓼不同提取部位的样品通过抗炎、 镇痛、抗菌药理实验进行了头花蓼有效组分(有效部位)与药效作用特点的 筛选。

在一个实施方案中，发明通过以下技术方案实现上述目的：

发明提供了一种头花蓼有效组分(有效部位)，是由以下步骤获得：

(1)取头花蓼地上部分鲜品或干品，加水煎煮2～4小时，过滤，将滤液 浓缩至20℃时相对密度为1.1～1.3，浓缩液喷雾干燥或减压干燥成为干燥 物；

(2)干燥物粉碎成100目细粉，细粉再用8倍质量的76～84％乙醇提取 1小时，过滤，滤液干燥即得。滤液中的乙醇可以进行回收再用。

在一个实施方案中，步骤(1)所述的水的加入量为头花蓼干品或鲜品的 10-13倍；加水煎煮分两次进行，每次1～2小时。

在一个实施方案中，步骤(2)所述的乙醇提取分两次进行，每次0.5小 时，所述的提取为搅拌提取或超声波提取。

在一个实施方案中，步骤(2)乙醇的提取过程中，乙醇的质量分数是一 个重要的因素，关系到所提取的有效部位的药用效果。乙醇浓度低，头花 蓼药粉容易粘附，造成提取不完全，工业生产困难。乙醇浓度高极性成分 提取减少，影响药效。本发明最为优选的乙醇浓度为80～84％，更优选的 为82％。

以下提供本发明的一种优选方案，头花蓼有效组分是由以下方法获得： 由头花蓼干品用13倍水(W/W)煎煮，可分成二次煎煮，每次1～2小时，过 滤，合并滤液，将滤液浓缩至20℃时相对密度为1.1～1.3，浓缩液喷雾干燥 或减压干燥，减压干燥物粉碎成100目细粉。干燥细粉再用8倍(W/W)82％ 乙醇提取，分二次提取(超声波提取)，每次0.5小时，过滤，合并滤液，回 收乙醇，残留物干燥即得。

本发明所提供的头花蓼有效组分(有效部位)，对二甲苯致小鼠耳肿胀 的影响实验，按5g头花蓼干品所得提取物/kg体重灌胃给药，连续5天， 末次给药60min后实验，有显著的抗炎作用，最高炎症抑制率可达46.08％； 对于小鼠热板致痛实验，能延长小鼠热板添足反应潜伏时间(与对照组比较 P＜0.05)，最高延时率可达16.57％。

该头花蓼有效组分可以与药物制造上可以接受的辅料组合制备成各种 常用制剂和缓释制剂、控释制剂、靶向制剂等。

尽管头花蓼药物采用水提、醇提、水煮醇提的工艺是较为公知的做法， 但未见水(煮)提干燥，粉碎，再特定浓度乙醇提取的工艺，与现有技术相 比，本发明具有以下有益效果和性质的不同。

本发明先用水煮提取，获得药效成分然后再用极性溶剂(特定浓度的乙 醇)进行浓集的方法，可以使抗炎作用比水提物明显增强。本发明提取物与 水提工艺的提取物比较，能非常显著地提高其抗炎效果，其实验结果如下 表所示：

  组别   剂量(g/kg)   n   肿胀度(mg)   抑制率(％)   对照组    －   10   6.8±3.01   头花蓼水提物   2.5   10   5.3±1.35   22.06   头花蓼水提物   5   10   4.8±1.55   29.41   本发明提取物   2.5   10   4.4±1.26^＊  35.29   本发明提取物   5   9   3.67±1.00^＊＊  46.08

注：与对照组比较：^＊P＜0.05^＊＊P＜0.01

上表中，“本发明提取物”采用的提取方法是：将头花蓼干品用13倍水 (W/W)分成二次煎煮，每次1.5小时，过滤，合并滤液，将滤液浓缩至20℃ 时相对密度为1.1，浓缩液喷雾干燥得100目以上细粉(此细粉是上表“头花 蓼水提物”的试药)。干燥细粉再用8倍(W/W)82％乙醇提取，分二次提取(超 声波提取)，每次0.5小时，过滤，合并滤液，回收乙醇，残留物干燥即得(作 为上表中“本发明提取物”的试药)。

在本发明中，以g/kg表示试验的给药剂量时，如无另外说明，是指每 kg动物体重给予相应试药(例如本发明提取物)折合成头花蓼干品的重量。

具体实施方式

为了能够更清楚地理解本发明的技术内容，特举以下实施例详细说明， 但本发明的实施方式不限于此。

A、提取物制备例部分

制备例1：头花蓼水提物

取头花蓼地上部分干品10Kg，用水洗净，加入10倍量水(W/W)，浸 泡1小时，加热煮沸1小时，过滤，滤渣再加6倍量水煮沸1小时，过滤， 合并滤液，将滤液浓缩至20℃时相对密度达1.3，浓缩液喷雾干燥，得干 燥细粉1.03Kg。

制备例2：本发明提取物的制备

取制备例1方法所得干燥细粉(约100目)0.5Kg，用8倍(W/W)82％乙 醇分二次超声提取，每次0.5小时，过滤，合并滤液，回收乙醇，残留物 减压干燥，得干燥物0.047Kg，此提取物用于下文试验例部分试验中的试 药。

制备例2a：本发明提取物的制备

另外，参考以上制备例2的方法，分别用6倍(W/W)82％乙醇、10倍 (W/W)82％乙醇进行提取并且超声处理2次每次5小时，提取物收率与制 备例2的基本相同；再将所得提取物同样进行下文试验例部分试验，结果 显示与制备例2的用8倍(W/W)82％乙醇提取所得提取物的生物学活性基 本相同(相差小于10％)，表明在相同浓度提取液的条件下，提取液用量和 醇处理时间等提取条件对提取物的活性无影响。

制备例3：本发明提取物的制备

取制备例1方法所得干燥细粉(约80目)0.5Kg，用8倍(W/W)76％乙 醇回流提取1次，每次1小时，过滤，合并滤液，回收乙醇，残留物减压 干燥，得干燥物0.067Kg。

制备例4：本发明提取物的制备

取制备例1方法所得干燥细粉(约120目)0.5Kg，用8倍(W/W)84％乙 醇分二次超声提取，每次3小时，过滤，合并滤液，回收乙醇，残留物减 压干燥，得干燥物0.053Kg。

制备例5：本发明提取物的制备

取头花蓼地上部分鲜品20Kg，用水洗净，加入7倍量水(W/W)，浸泡 1小时，加热煮沸1小时，过滤，滤渣再加5倍量水煮沸1小时，过滤， 合并滤液，将滤液浓缩至20℃时相对密度达1.1，浓缩液喷雾干燥，得干 燥细粉0.63Kg。

取以上制备的干燥细粉(约100目)0.5Kg，然后参考制备例4的方法进 行醇提，不同之处是所用乙醇为80％乙醇，得干燥物0.055Kg。

对照例1：对照提取物的制备

参考制备例2的方法，不同之处是所用乙醇为70％，得干燥物0.075Kg。

对照例2：对照提取物的制备

参考制备例2的方法，不同之处是所用乙醇为60％，得干燥物0.083Kg。

对照例3：对照提取物的制备

参考制备例2的方法，不同之处是所用乙醇为90％，得干燥物0.033Kg。

对照例4：对照提取物的制备

参考制备例5的方法，不同之处是醇提步骤所用乙醇为72％，得干燥 物0.081Kg。

对照例5：对照提取物的制备

参考制备例5的方法，不同之处是醇提步骤所用乙醇为88％，得干燥 物0.036Kg。

B、药效学试验例部分

试验例1：二甲苯致小鼠耳肿胀实验，考察头花蓼提取物的抗炎效果

动物：SPF级昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄兼用。

试药、剂量和给药方法：以上文“A、提取物制备例部分”所得的各种 制备例样品和对照例样品作为试药，剂量为每kg动物体重给予相应试药折 合成头花蓼干品的重量为5g。各试药临用前用生理盐水混悬至相当于每只 动物每次灌胃给药0.4ml的浓度，同时设置灌胃同体积生理盐水的对照组。

试验方法：小鼠雌雄兼用，随机分组，每一试药组10只动物；连续给 药5天，末次给药60min后，用二甲苯0.1ml/只涂右耳致炎，30min后处 死小鼠，用直径6mm的打孔器取左右两耳片。立即用电子天平称重，以 两耳片重量差作为肿胀度(mg)，以下式计算各试药组的抑制率(％)：

其中肿胀度(mg)＝右耳片重-左耳片重

结果进行统计分析。实验结果见表1。

对抑制率进行分级，抑制率低于10％为A级，抑制率10～20％为AA 级，抑制率20～30％为AAA级，抑制率30～40％为AAAA级，抑制率40～50％ 为AAAAA级，抑制率大于50％为AAAAAA级。

表1：不同的头花蓼对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响

  试药   抑制率分级  制备例1   AAA^＊ 制备例2   AAAA^＊＊ 制备例3   AAAAA^＊＊ 制备例4   AAAAA^＊＊ 制备例5   AAAAAA^＊＊ 对照例1   AA  对照例2   AAA^＊ 对照例3   A

注：肿胀度(mg)，与溶媒对照组动物比较：^＊P＜0.05，^＊＊P＜0.01。另 外，对照例4和对照例5试药的结果分别为AA和A。

试验例2：小鼠耐热热板反应实验，考察头花蓼提取物的镇痛效果

动物、试药、剂量和给药方法与试验例1相同。

试验方法：小鼠雌雄兼用，随机分组，每一试药组10只动物；连续给 药5天，末次给药60min后，将各组小鼠放入智能热板仪，观察记录小鼠 添足反应潜伏时间，各组小鼠测量2次(每次间隔约15min)取其平均值。实 验结果见表2。

对添足反应潜伏时间进行分级，潜伏时间低于6秒为A级，潜伏时间 6～7秒为AA级，潜伏时间7～8秒为AAA级，潜伏时间8～9秒为AAAA 级，潜伏时间大于9秒为AAAAA级。

表2：不同的头花蓼对小鼠耐热热板反应的影响

  试药   添足反应潜伏时间分级   制备例1   AA   制备例2   AAAA^＊＊  制备例3   AAA^＊  制备例4   AAAA^＊＊  制备例5   AAAA^＊＊  对照例1   AA   对照例2   A   对照例3   A   溶媒对照组   A

注：添足反应潜伏时间(秒)，与溶媒对照组动物比较：^＊P＜0.05^＊＊P＜0.01。另外，对照例4和对照例5试药潜伏时间分级结果均为A级。

实施例3：不同头花蓼提取物的抗菌实验

采用常规抗菌试验方法，使用MH肉汤培养基对绿脓杆菌、大肠杆菌 M421C1ST、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌进行试验，以上 文“A、提取物制备例部分”所得的各种制备例样品和对照例样品作为试药， 测试它们对这些细胞的敏感性。

结果显示，制备例1样品对绿脓杆菌、大肠杆菌敏感，MIC＞20mg/ml； 对照例1-3各样品对绿脓杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌不 敏感，对链球菌的MIC＞10mg/ml；制备例2-5各样品对五种细菌的MIC 在1-4mg/ml之间，对个别细胞的MIC＝2.5mg/ml。