一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物及其制备方法

摘要

本发明涉及一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，该提取物含有从蓼科大黄属植物丽江大黄中提取的总质量不低于40％的如下结构式的二苯乙烯化合物：

说明书

技术领域

本发明涉及天然植物药用成分和保护肝损伤药效活性成分领域，尤其涉 及一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物及其制备方法。

背景技术

大黄作为我国著名的传统中药材，其药用记载始见于《神农本草经》，列 为下品，具有“泻下通便，破积滞”之功效。在传统的中医药应用中，大黄 植物的药用范围非常单一，主要偏重其泻下功效。近现代研究证明了大黄泻 下功效的主要物质基础成分是蒽醌类化合物。因此，蒽醌类成分被认定为是 大黄的传统成药化合物。目前，《中国药典》规定的大黄药材的活性指标成分 以及世界各国用于评价大黄药材品质优劣的依据都是以蒽醌类化合物为主。 (许义杵，大黄的应用及其机理研究进展，中国医院药学杂志。1992，12(9)： 421-422。)

然而，中国的大黄属(Rheum L.)植物约有45种(李秀才，大黄的研究进 展，中国药学杂志。1998，33(10)：581-584)，除了《中国药典》收载的掌 叶大黄(Rheum palmutum L.)、唐古特大黄(R..tonguticum Maxim.ex Balf.)和药 用大黄(R..officinale Baill.)这3利“正品”大黄以外，同属的其它40余种“非 正品”大黄由于不含或仅含痕量的蒽醌类成分，并且几乎不含大黄酸和番泻 苷，因此其泻下药效作用很弱或全无。但是长期以来，这些“非正品”大黄 在民间医疗中通常与“正品”大黄混淆使用，并且在药材市场中掺杂或冒充 “正品”大黄混乱销售的现象十分严重。

我国肝病发病人群广、发病率高、肝病类型主要包括酒精性肝病、化学 性肝病及病毒性肝病，每年大约有200万急性肝炎病例，这个数字还在逐年 增加。这些庞大的患者群体造就了诱人的肝病治疗药物市场。据2006年的统 计表明，我国肝药市场容量在100亿元左右。因此，从我国丰富的植物资源 中寻找具有较高成药潜力的化合物或提取物用于开发为治疗肝病的新药，具 有重要现实意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄 提取物。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供该丽江大黄提取物的制备方 法。

本发明所要解决的第三个技术问题是提供该丽江大黄提取物所含的主成 分在用于制备保护肝损伤药物中的用途。

为解决上述问题，本发明所述的一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提 取物，其特征在于：该提取物含有从蓼科大黄屈植物丽江大黄(Rheum likiangense.)中提取的总量不低于40％的如下结构式的二苯乙烯化合物：

其中母核的亚乙烯基为反式结构，R₁、R₂、R₃、R₄分别独立选自-H、-OH、 -CH₃、-OCH₃、-葡萄糖基、-O-葡萄糖基。

该提取物含有化合物3，3’，5-三羟基-4’-甲氧基二苯乙烯-3-O-β-D-葡萄糖 苷。

该提取物含有化合物3，5-二羟基-4’-甲氧基二苯乙烯-3-O-β-D-葡萄糖苷。

该提取物含有化合物3，5-二羟基-4’-甲氧基二苯乙烯。

该提取物含有化合物3，5，3’-三羟基-4’-甲氧基二苯乙烯。

如上所述的一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物的制备方法，包 括以下步骤：

(1)选取野生或人工栽培或经引种栽培选育出的优质变种的丽江大黄植物 的地下根或根茎或其地上茎叶及整个植株作为原料；

(2)原料前处理：将所述原料经自然晾干或风干或晒干或在25～60℃温度 下干燥至恒重后，经切段或切片或粉碎，得到提取原料；

(3)提取溶剂的制备：在乙醇质量浓度为30％～98％的醇水溶液中加入 10mol/L的氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液，调节至该醇水溶液的pH值为 6～14，即得提取溶剂；

(4)将所述提取原料和所述提取溶剂按1∶1～1∶50的料液质量体积比混合 均匀后，在提取温度为10～95℃、提取时间为0.5～12小时、提取次数为1～5 次的条件下进行提取，收集合并提取液，该提取液经减压浓缩，得到粗提液；

(5)在所述粗提液中加入其体积0.1～10倍的无水乙醇，并按照提取原料质 量的0.5倍量加入钙盐并搅拌，然后再加入10mol/L的氢氧化钠溶液或氢氧化 钾溶液，使混合液的pH值至7～14，搅拌均匀后，室温下静置，待沉淀完全， 弃去沉淀，收集滤液；所述滤液经减压浓缩，得到浓缩液；

(6)在所述浓缩液中加入质量浓度为10％的盐酸溶液，调节浓缩液的pH 值至3～7后，在0～25℃温度下静置，直到沉淀完全析出，收集沉淀物；所述 沉淀物经洗涤、在25～60℃温度下干燥至恒重后即得丽江大黄提取物。

所述步骤(4)中所述提取原料和所述提取溶剂的料液质量体积比为1∶5～1∶ 20，其提取温度为25～65℃、提取时间为1～5小时、提取次数为1～2次。

所述步骤(4)和(5)中减压浓缩的条件是指抽真空到负压为0.01～0.1MPa，温 度为20～50℃。

所述步骤(5)中无水乙醇的体积量为所述粗提液体积量的0.5～5倍。

所述步骤(5)中的钙盐是指氯化钙、碳酸钙、硫酸钙、氧化钙中的任意一 种。

所述步骤(6)静置温度为0～15℃。

如上所述的一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物在制备保护肝损 伤药物制剂中的应用。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

1、本发明丽江大黄提取物经HPLC-DAD检测分析(Agilent1200高效液 相色谱仪；C₁₈反相色谱柱；甲醇-乙腈-水三元梯度洗脱；Agilent DAD波长 320nm)，其主含成分是二苯乙烯化合物(参见图1)。由此可知，本发明丽 江大黄提取物中活性成分的结构清楚、组成明确、分析检测方法成熟，有利 于各级产品的质量监测和控制，符合天然药物复合制剂的发展方向及要求。

2、本发明采用了无机盐离子络合、酸碱沉淀等技术，因此，本发明提供 的制备方法简单易行、成本低、效率高、较完全地保留其生物活性，适合于 工业化生产及应用。

3、本发明所得的丽江大黄提取物经保护肝损伤活性试验证明具有显著的 保护肝损伤的药效活性作用，因此在制备预防和治疗肝损伤疾病的药物方面 具有广泛的用途，可用于开发为治疗肝病的药物及制剂。这一发现，将使资 源丰富的“非正品”大黄中的丽江大黄作为一种新的药源植物，开辟其药用新 价值。

其中，本发明所说的肝损伤保护作用，是指对急性肝损伤的保护作用。

在活性试验中，首先用四氯化碳对肝细胞L02进行氧化损伤造模，然后 加入不同浓度的本发明丽江大黄提取物，通过检测细胞内外超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷草转氨酶(AST)、细胞MDA含量等指标， 反应加药前后细胞清除自由基的能力，以及细胞受损严重程度，进而评价丽 江大黄提取物的保护肝损伤活性大小。

(1)材料与仪器：

肝细胞L02(由中科院上海细胞库提供)；RPMI1640培养基(购于上海 英俊生物技术公司)；SOD试剂盒、CAT试剂盒、AST试剂盒(购于南京建 成生物研究所)。其它试剂均为分析纯。

生物净化工作台(BCM-1000，苏州净化设备有限公司)，酶标仪(Bio-Rad 680)，光学显微镜(BX-202B，强肝光学仪器厂)。

(2)方法与结果：

①细胞形态学变化：

肝细胞LO2经消化铺孔板并加药后，培养20h后，于倒置显微镜下观察 其细胞形态及变化。由本发明图2细胞形态观察显示，A正常组：细胞饱满 而且均匀，细胞间粘连紧密；B损伤组：呈现不同程度的细胞皱缩，细胞粘 连变疏、不饱满，细胞数量没有明显减少；C损伤+丽江大黄提取物组：与丽 江大黄提取物共孵育后，细胞状态有不同程度的改善，细胞形态接近正常组， 说明丽江大黄提取物对于肝损伤有修复作用。

②细胞MDA含量变化：

本发明图3反映出了丽江大黄提取物对肝细胞LO2四氯化碳损伤后 MDA含量的影响，即随着丽江大黄提取物浓度的增大，MDA含量逐渐降低， 在10～20μg/mL范围内，MDA含量维持在较低的水平下，当丽江大黄提取 物浓度增大至50μg/mL时，MDA含量有升高的趋势。试验结果说明，在10～30 μg/mL浓度范围内，细胞受到四氯化碳损伤后在丽江大黄提取物的作用下， 脂质过氧化程度减小，细胞膜受损程度降低，因此，丽江大黄提取物对四氯 化碳引起的损伤具有显著的抑制作用。

③细胞SOD活力变化：

本发明图4反映出四氯化碳对肝细胞LO2有明显的损伤作用，细胞损伤 后胞内SOD酶活性升高；然而加药后，丽江大黄提取物能显著提高细胞内 SOD活性(p＜0.05)，当丽江大黄提取物的浓度为1.85μg/mL时SOD活力显 著增高并接近正常组，说明对于四氯化碳引起的肝损伤，丽江大黄提取物具 有显著的治疗效果。

④细胞CAT活力变化：

本发明图5反映出细胞损伤后胞内CAT酶活性略有降低，损伤加入丽江 大黄提取物后能够显著提高细胞内CAT活性(p＜0.01)，在5.0～20μg/mL的 浓度范围内，可明显增强清除氧自由基的能力，具有很好的保护肝损伤疗效。

⑤细胞AST活力变化：

本发明图6反映出当肝细胞受损伤后其AST活性会升高，加药后当丽江 大黄提取物在2.0～20μg/mL的浓度范围内其AST活力明显低于正常组 (P＜0.05)，且维持在较低的稳定水平，说明丽江大黄提取物具有保护肝损伤 的作用。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。

图1为本发明丽江大黄提取物的HPLC色谱图和紫外图(320nm处的最 大吸收峰特征性的表明提取物的主成分是具有二苯乙烯骨架结构的化合物)。

图2为本发明丽江大黄提取物的保护肝损伤试验结果一：损伤及加药后 细胞形态变化，其中A正常组细胞，B四氯化碳损伤组，C损伤+丽江大黄提 取物组。

图3为本发明丽江大黄提取物的保护肝损伤试验结果二：丽江大黄提取 物对肝细胞四氯化碳损伤后细胞MDA含量的影响。

图4为本发明丽江大黄提取物的保护肝损伤试验结果三：丽江大黄提取 物对损伤后肝细胞中SOD活力的影响。

图5为本发明丽江大黄提取物的保护肝损伤试验结果四：丽江大黄提取 物对损伤后肝细胞中CAT活力的影响。

图6为本发明丽江大黄提取物的保护肝损伤试验结果五：丽江大黄提取 物对肝细胞损伤后AST活力的影响。

具体实施方式

实施例1一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，该提取物含 有从蓼科大黄属植物丽江大黄(Rheum likiangense.)中提取的总量不低于40％ 的如下结构式的化合物：

其中母核的亚乙烯基为反式结构，R₁、R₂、R₃、R₄分别独立选自-H、-OH、 -CH₃、-OCH₃、-葡萄糖基、-O-葡萄糖基。

该丽江大黄提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)选取野生或人工栽培或经引种栽培选育出的优质变种的丽江大黄植物 的地下根或根茎或其地上茎叶及整个植株作为原料。

(2)原料前处理：将原料在25℃温度下干燥至恒重后，经切段或切片或粉 碎，得到提取原料。

(3)提取义溶剂的制备：在乙醇质量浓度为90％的醇水溶液中加入10mol/L 的氢氧化钠溶液调节其pH值至6，即得提取溶剂。

(4)将10g提取原料和30mL提取溶剂混合均匀并使物料充分浸润后，在 提取温度为65℃、提取时间为2小时、提取次数为1次的条件下进行提取， 收集合并提取液，该提取液在温度为45℃、压力为0.1MPa的条件下经减压 浓缩，得到粗提液。

将该粗提液定容至250mL，取其中10μL以0.45μm微孔滤膜过滤后进行 HPLC含量测定，结果发现，丽江大黄粗提液中含有本发明结构式化合物的 总量为60.79mg/g。

(5)在粗提液中加入其体积10倍的无水乙醇，并加入5g氯化钙并搅拌， 然后再加入10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至10，搅拌均匀后，室温下 静置，待沉淀完全，弃去沉淀，收集滤液；滤液在温度为45℃、压力为0.1MPa 的条件下经减压浓缩，得到浓缩液。

(6)在浓缩液中加入质量浓度为10％的盐酸溶液调节至浓缩液的pH值为5 后，在25℃下静置直到沉淀完全析出，收集沉淀物；沉淀物经洗涤、在60℃ 温度下干燥至恒重后即得丽江大黄提取物。

实施例2一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，该提取物含有 从蓼科大黄属植物丽江大黄(Rheum likiangense.)中提取的总量不低于40％的 如下结构式的化合物：

其中母核的亚乙烯基为反式结构，R₁、R₂、R₃、R₄分别独立选自-H、-OH、 -CH₃、-OCH₃、-葡萄糖基、-O-葡萄糖基。

该丽江大黄提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)选取野生或人工栽培或经引种栽培选育出的优质变种的丽江大黄植物 的地下根或根茎或其地上茎叶及整个植株作为原料。

(2)原料前处理：将原料在30℃温度下干燥至恒重后，经切段或切片或粉 碎，得到提取原料。

(3)提取溶剂的制备：在乙醇质量浓度为30％的醇水溶液中加入10mol/L 的氢氧化钠溶液调节其pH值至7，即得提取溶剂。

(4)将10g提取原料和120mL提取溶剂混合均匀并使物料充分浸润后，在 提取温度为85℃、提取时间为4小时、提取次数为1次的条件下进行提取， 收集合并提取液，该提取液在温度为50℃、压力为0.05MPa的条件下经减压 浓缩，得到粗提液。

将该粗提液定容至250mL，取其中10μL以0.45μm微孔滤膜过滤后进行 HPLC含量测定，结果发现，丽江大黄粗提液中含有本发明结构式化合物的 总量为57.17mg/g。

(5)在粗提液中加入其体积5倍的无水乙醇，并加入5g碳酸钙并搅拌，然 后再加入10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至14，搅拌均匀后，室温下静 置，待沉淀完全，弃去沉淀，收集滤液；滤液在温度为50℃、压力为0.05MPa 的条件下经减压浓缩，得到浓缩液。

(6)在浓缩液中加入质量浓度为10％的盐酸溶液调节至浓缩液的pH值为7 后，在25℃下静置直到沉淀完全析出，收集沉淀物；沉淀物经洗涤、45℃温 度下干燥至恒重后即得丽江大黄提取物。

实施例3一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，该提取物含有 从蓼科大黄属植物丽江大黄(Rheum likiangense.)中提取的总量不低于40％的 如下结构式的化合物：

其中母核的亚乙烯基为反式结构，R₁、R₂、R₃、R₄分别独立选自-H、-OH、 -CH₃、-OCH₃、-葡萄糖基、-O-葡萄糖基。

该丽江大黄提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)选取野生或人工栽培或经引种栽培选育出的优质变种的丽江大黄植物 的地下根或根茎或其地上茎叶及整个植株作为原料。

(2)原料前处理：将原料在60℃温度下干燥至恒重后，经切段或切片或粉 碎，得到提取原料。

(3)提取溶剂的制备：在乙醇质量浓度为65％的醇水溶液中加入10mol/L 的氢氧化钾溶液调节其pH值至14，即得提取溶剂。

(4)将50g提取原料和50mL提取溶剂混合均匀并使物料充分浸润后，在 提取温度为55℃、提取时间为0.5小时、提取次数为4次的条件下进行提取， 收集合并提取液，该提取液在温度为35℃、压力为0.06MPa的条件下经减压 浓缩，得到粗提液。

将该粗提液定容至250mL，取其中10μL以0.45μm微孔滤膜过滤后进行 HPLC含量测定，结果发现，丽江大黄粗提液中含有本发明结构式化合物的 总量为66.32mg/g。

(5)在粗提液中加入其体积4倍的无水乙醇，并加入25g氯化钙并搅拌， 然后再加入10mol/L的氢氧化钾溶液调节pH值至11，搅拌均匀后，25℃下 静置，待沉淀完全，弃去沉淀，收集滤液；滤液在温度为35℃、压力为0.06MPa 的条件下经减压浓缩，得到浓缩液。

(6)在浓缩液中加入质量浓度为10％的盐酸溶液调节至浓缩液的pH值为5 后，在0℃下静置直到沉淀完全析出，收集沉淀物；沉淀物经洗涤、45℃温 度下干燥至恒重后即得丽江大黄提取物。

实施例4一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，该提取物含有 从蓼科大黄属植物丽江大黄(Rheum likiangense.)中提取的总量不低于60％的 如下结构式的化合物：

其中母核的亚乙烯基为反式结构，R₁、R₂、R₃、R₄分别独立选自-H、-OH、 -CH₃、-OCH₃、-葡萄糖基、-O-葡萄糖基。

该丽江大黄提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)选取野生或人工栽培或经引种栽培选育出的优质变种的丽江大黄植物 的地下根或根茎或其地上茎叶及整个植株作为原料。

(2)原料前处理：将原料在60℃温度下干燥至恒重后，经切段或切片或粉 碎，得到提取原料。

(3)提取溶剂的制备：在乙醇质量浓度为85％的醇水溶液中加入10mol/L 的氢氧化钠溶液，调节其pH值至8，即得提取溶剂。

(4)将10g提取原料和200mL提取溶剂混合均匀并使物料充分浸润后，在 提取温度为10℃、提取时间为2小时、提取次数为3次的条件下进行提取， 收集合并提取液，该提取液在温度为20℃、压力为0.01MPa的条件下经减压 浓缩，得到粗提液。

将该粗提液定容至250mL，取其中10μL以0.45μm微孔滤膜过滤后进行 HPLC含量测定，结果发现，丽江大黄粗提液中含有本发明结构式化合物的 总量为61.41mg/g。

(5)在粗提液中加入其体积2倍的无水乙醇，并加入5g氯化钙并搅拌，然 后再加入10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至7，搅拌均匀后，25℃下静置， 待沉淀完全，弃去沉淀，收集滤液；滤液在温度为45℃、压力为0.01MPa的 条件下经减压浓缩，得到浓缩液。

(6)在浓缩液中加入质量浓度为10％的盐酸溶液，调节至浓缩液的pH值 为4后，在25℃下静置直到沉淀完全析出，收集沉淀物；沉淀物经洗涤、40℃ 温度下干燥至恒重后即得丽江大黄提取物。

实施例5一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，该提取物含有 从蓼科大黄属植物丽江大黄(Rheum likiangense.)中提取的总量不低于60％的 如下结构式的化合物：

其中母核的亚乙烯基为反式结构，R₁、R₂、R₃、R₄分别独立选自-H、-OH、 -CH₃、-OCH₃、-葡萄糖基、-O-葡萄糖基。

该丽江大黄提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)选取野生或人工栽培或经引种栽培选育出的优质变种的丽江大黄植物 的地下根或根茎或其地上茎叶及整个植株作为原料。

(2)原料前处理：将原料在45℃温度下干燥至恒重后，经切段或切片或粉 碎，得到提取原料。

(3)提取溶剂的制备：在乙醇质量浓度为98％(？)的醇水溶液中加入10mol/L 的氢氧化钠溶液调节其pH值至11，即得提取溶剂。

(4)将10g提取原料和500mL提取溶剂混合均匀并使物料充分浸润后，在 提取温度为75℃、提取时间为1小时、提取次数为5次的条件下进行提取， 收集合并提取液，该提取液在温度为40℃、压力为0.08MPa的条件下经减压 浓缩，得到粗提液。

将该粗提液定容至250mL，取其中10μL以0.45μm微孔滤膜过滤后进行 HPLC含量测定，结果发现，丽江大黄粗提液中含有本发明结构式化合物的 总量为80.79mg/g。

(5)在粗提液中加入其体积5倍的无水乙醇，并加入5g碳酸钙并搅拌，然 后再加入10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至10，搅拌均匀后，室温下静 置，待沉淀完全，弃去沉淀，收集滤液；滤液在温度为20℃、压力为0.01MPa 的条件下经减压浓缩，得到浓缩液。

(6)在浓缩液中加入质量浓度为10％的盐酸溶液调节至浓缩液的pH值为3 后，在4℃下冷藏静置直到沉淀究全析出，收集沉淀物；沉淀物经洗涤、40℃ 温度下干燥至恒重后即得丽江大黄提取物。

实施例6一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，该提取物含有 从蓼科大黄属植物丽江大黄(Rheum likiangense.)中提取的总量不低于60％的 如下结构式的化合物：

其中母核的亚乙烯基为反式结构，R₁、R₂、R₃、R₄分别独立选自-H、-OH、 -CH₃、-OCH₃、-葡萄糖基、-O-葡萄糖基。

该丽江大黄提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)选取野生或人工栽培或经引种栽培选育出的优质变种的丽江大黄植物 的地下根或根茎或其地上茎叶及整个植株作为原料。

(2)原料前处理：将原料在35℃温度下干燥至恒重后，经切段或切片或粉 碎，得到提取原料。

(3)提取溶剂的制备：在乙醇质量浓度为75％的醇水溶液中加入10mol/L 的氢氧化钾溶液调节其pH值至12，即得提取溶剂。

(4)将10g提取原料和300mL提取溶剂混合均匀并使物料充分浸润后，在 提取温度为95℃、提取时间为12小时、提取次数为2次的条件下进行提取， 收集合并提取液，该提取液在温度为45℃、压力为0.1MPa的条件下经减压 浓缩，得到粗提液。

将该粗提液定容至250mL，取其中10μL以0.45μm微孔滤膜过滤后进行 HPLC含量测定，结果发现，丽江大黄粗提液中含有本发明结构式化合物的 总量为73.15mg/g。

(5)在粗提液中加入其体积0.1倍的无水乙醇，并加入5g氧化钙并搅拌， 然后再加入10mol/L的氢氧化钾溶液调节pH值至9，搅拌均匀后，室温下静 置，待沉淀完全，弃去沉淀，收集滤液；滤液在温度为40℃、压力为0.1MPa 的条件下经减压浓缩，得到浓缩液。

(6)在浓缩液中加入质量浓度为10％的盐酸溶液调节至浓缩液的pH值为4 后，在8℃冷藏静置直到沉淀完全析出，收集沉淀物；沉淀物经洗涤、25℃ 温度下干燥至恒重后即得丽江大黄提取物。

实施例7一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物，该提取物含有 从蓼科大黄属植物丽江大黄(Rheum likiangense.)中提取的总量不低于60％的 如下结构式的化合物：

其中母核的亚乙烯基为反式结构，R₁、R₂、R₃、R₄分别独立选自-H、-OH、 -CH₃、-OCH₃、-葡萄糖基、-O-葡萄糖基。

该丽江大黄提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)选取野生或人工栽培或经引种栽培选育出的优质变种的丽江大黄植物 的地下根或根茎或其地上茎叶及整个植株作为原料。

(2)原料前处理：将原料在35℃温度下干燥至恒重后，经切段或切片或粉 碎，得到提取原料。

(3)提取溶剂的制备：在乙醇质量浓度为75％的醇水溶液中加入10mol/L 的氢氧化钾溶液调节其pH值至12，即得提取溶剂。

(4)将10g提取原料和50mL提取溶剂混合均匀并使物料充分浸润后，在 提取温度为25℃、提取时间为5小时、提取次数为2次的条件下进行提取， 收集合并提取液，该提取液在温度为30℃、压力为0.01MPa的条件下经减压 浓缩，得到粗提液。

将该粗提液定容至250mL，取其中10μL以0.45μm微孔滤膜过滤后进行 HPLC含最测定，结果发现，丽江大黄粗提液中含有本发明结构式化合物的 总量为73.15mg/g。

(5)在粗提液中加入其体积0.5倍的无水乙醇，并加入5g硫酸钙并搅拌， 然后再加入10mol/L的氢氧化钾溶液调节pH值至9，搅拌均匀后，室温下静 置，待沉淀完全，弃去沉淀，收集滤液；滤液在温度为30℃、压力为0.01MPa 的条件下经减压浓缩，得到浓缩液。

(6)在浓缩液中加入质量浓度为10％的盐酸溶液调节至浓缩液的pH值为4 后，在15℃静置直到沉淀完全析出，收集沉淀物；沉淀物经洗涤、25℃温度 下干燥至恒重后即得丽江大黄提取物。

上述实施例1～7所得的丽江大黄提取物，其中包含至少一种以上的结构 式化合物(如含有化合物3，3’，5-三羟基-4’-甲氧基二苯乙烯-3-O-β-D-葡萄糖 苷，或含有化合物3，5-二羟基-4’-甲氧基二苯乙烯-3-O-β-D-葡萄糖苷，或含有 化合物3，5-二羟基-4’-甲氧基二苯乙烯，或含有化合物3，5，3’-三羟基-4’-甲氧 基二苯乙烯。)，并且随着原料产地、采收季节、处理工艺参数的不同，此提 取物中各种结构式化合物的含量和比例有所变化。

实施例8一种具有保护肝损伤活性的丽江大黄提取物在制备保护肝 损伤药物制剂中的应用。

本发明药物制剂由本发明中任意一种丽江大黄提取物与本领域内熟知的 常规或通用的载体、赋形剂、或其它活性成分配伍使用后组合加工制成(但 并不限于)片剂、丸剂、胶囊剂、粉针剂等任何一种适用于临床给药的药物 制剂。

上述实施例1～8是对本发明的进一步详细说明，但不意味着对本发明的 任何限制。在不脱离本发明上述思想的情况下，根据本领域普通技术知识和 常规手段作出的各种替换方式或变更，均包含在本发明之内。