一种用于增加心脏冠脉流量的药物组合物

摘要

本发明涉及一种用于增加心脏冠脉流量的药物组合物，由菊花总黄酮和法菲亚参总皂苷按1∶1的重量比配制而成。上述菊花总黄酮中总黄酮的含量不低于85％(UV法测定)，木樨草素-7-O-D-葡萄糖苷不低于0.4％(HPLC法测定)。上述法菲亚参总皂苷中总黄酮含量不低于80％(UV法测定)。本发明能够明显增加大鼠离体心脏冠脉流量。

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于增加心脏冠脉流量的药物组合物。 

背景技术

菊花系菊科植物Chrysanthemummorifoliumat.)Tzvel的干燥头状花序。菊属植物全世界有30余种，中国约17种，但栽培供药用的主要是菊花一种，药用类群经过长期人工栽培选育和不同的生态环境，加之特殊的加工方法，形成了各具特色的药用品种，如滁菊、毫菊、济菊、怀菊、杭菊、贡菊、祁菊、黄菊等。菊花为常用中药，具有疏风，清热，明目，解毒功效。临床上用于治疗高血压与冠心病。菊花的主要活性成分为挥发油和黄酮类成分，菊花中的总黄酮的含量高。药理研究表明菊花粗提物具有抗菌、抗炎、镇痛、抗病毒、抗衰老、抗肿瘤、抗诱变、抗肝脏脂质过氧化作用、增强免疫功能等多种药理作用。但是菊花总黄酮(总黄酮的含量不低于85％)作为有效成份用于增加离体大鼠冠脉流量的药理活性未见报道。 

法菲娅参为艾苋科(Amaranthaceae)法菲亚属(PfaffiaPedersen)植物，主要生长于亚马孙河流域，1826年首次有植物学记载，有壮阳、镇静、抗肿瘤、治疗溃疡、风湿性关节炎和降血糖等功效。法菲西含有多种氨基酸及维生素，微量矿物质包括铁、镁、钴、硅、锌及高含量的锗，含有超过其干重11％的皂苷成分，包括法菲西酸(pfaffic acid)及其苷类(如法菲西苷pfaffosides A-F)，三萜类(nortriperpene)及其苷类，脱皮甾醇类激素(如蜕皮甾酮ecdysterone)、蕨甾酮(pterosterone)、足甾酮(podecdysone)、豆甾醇(stigmasterol)、谷甾醇(sitostero)及其苷类等。文献报道巴西人参粗提取物具有抗肿瘤、壮阳、对血液系统的作用、抗炎、镇痛活等药理作用。但是，法菲娅参总皂苷(黄酮含量不低于80％)作为有效成份用于增加离体大鼠冠脉流量的药理活性未见报道。 

已知多种传统中药如三七、丹参、葛根、川芎、灯盏花素等的有效部位可从改善心脏血流动力学、血液流变学、调节血管活性物 质及钙平衡、保护线粒体、清除自由基、促进血管新生等多方面机制产生治疗冠心病的作用，并且取得了良好的临床效果，提示中药具有在不同层次、不同靶点发挥作用的特点，为进一步开发出具有治疗冠心病的中药新药提供了新的思路。从文献上看，目前中药有效成分抗实验性心肌缺血的药理作用研究多采用单味中药有效部位，很少进行中药复方有效部位的研究。但是临床上中药多以复方入药，因此开发出复方中药治疗冠心病的有效部位组合物，并进行作用机制的研究，是今后中药新药研究的重要方向，具有重要的意义。 

发明内容

本发明的目的是提供一种在增加心脏冠脉流量方面具有良好的药理活性的药物组合物。 

本发明由是菊花总黄酮和法菲亚参总皂苷按1∶1的重量比配制而成。 

上述菊花总黄酮来源有二，一是用常规的乙醇热回流提取，大孔吸附树脂纯化方法自制，二是商购。无论是自制还是商购，菊花总黄酮中其总黄酮的含量不低于85％(UV法测定)，木樨草素-7-O-D-葡萄糖苷不低于0.4％(HPLC法测定)。 

上述法菲亚参总皂苷来源有二，一是采用常规的乙醇热回流提取，大孔吸附树脂纯化方法自制，二是商购。无论是自制还是商购，法菲亚参总皂苷中其总皂苷含量不低于80％(UV法测定)。 

本发明将菊花总黄酮和法菲亚参总皂苷进行合理的配伍，使两种有效成份协同作用，动物实验证明本发明能够明显增加离体大鼠冠脉流量，从而为人们提供一种新的用于增加心脏冠脉流量的药物组合物。 

具体实施方式

1.自制药物的制备 

1.1菊花总黄酮的制备： 

取江苏产白菊花，粉碎加入10倍量(重量倍)的浓度为70％(v/v)的乙醇回流提取2次：6倍和4倍，每次2小时，合并提取液， 回收溶剂至相对密度为1.2流浸膏，加水稀释成每毫升相当0.2g生药，过滤，滤液备用(测得总黄酮含量为15.07mg.mL-1)；经过预处理的AB-8大孔吸附树脂，湿法装柱，装柱体积为100mL(湿重66g，干重18g)，径高比为1∶8，精密吸取上柱液400mL上柱，控制流速为6mL/min。再分别用3倍柱体积量纯化水和1倍柱体积量的20％(v/v)乙醇洗脱杂质，控制流速为6mL/min，再用3倍柱体积量的60％乙醇(v/v)洗脱菊花总黄酮，控制流速为6mL/min。收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥至恒重，即得菊花总黄酮。总黄酮含量85％(UV法测定)；木樨草素-7-O-D-葡萄糖苷0.4％(HPLC法测定)。 

1.2法菲亚参总皂苷的制备： 

将国产法菲亚参粉碎过60目筛，加10倍量(重量倍)的浓度为70％(v/v)的乙醇，热回流提取两次，每次1小时，提取液放冷，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，加水稀释成0.2g生药每毫升，此为上柱液。 

将处理过的大孔吸附树脂PHD100装入柱子，柱子径高比为1∶5，将三倍于树脂体积的上柱液上柱，控制流速为每小时三倍树脂体积，再用三倍树脂体积量的去离子水洗脱杂质后，再用三倍树脂体积量70％(v/v)乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液上离子交换树脂柱D941(该交换树脂柱体积与前柱相同)，收集过柱液，再用70％乙醇(v/v)洗脱至醋酐-浓硫酸反应呈阴性，合并过柱液和洗脱液，减压浓缩，真空干燥至恒重，即得法菲亚参总皂苷，总皂苷含量80％(UV法测定)。 

1.3将上述菊花总黄酮和法菲亚参总皂苷按1∶1的重量比进行复配。 

1.4上述药物组合物每100mg中，含菊花总黄酮不低于40mg(相当于菊花原药材1.60g)，法菲娅参总皂苷不低于40mg(相当于法菲娅参原药材0.85g)。 

2购买药物的配制 

2.1菊花总黄酮购于上海麦迪普药业有限公司，总黄酮的含量不低于85％(UV法测定)，木樨草素-7-O-D-葡萄糖苷不低于 0.4％(HPLC法测定)。 

2.2法菲亚参总皂苷，购于中国医学科学院药用植物研究所广西分所，其总皂苷含量不低于80％(UV法测定)。 

2.3将上述菊花总黄酮和法菲亚参总皂苷按1∶1的重量比进行复配。 

3.本发明所述药物组合物增加离体大鼠冠脉流量作用的实验 

3.1实验材料 

3.1.1实验仪器及试剂 

Powerlab/8sp Langendorff离体心脏灌流系统，ADInstrument Pty Ltd(澳大利亚)。Krebs-Henseleit液，其组成为(mmol/L)：NaCl 118，KCl 4.7，MgSO4·7H2O 1.2，CaCl2 2.0，NaHCO3 20，KH2PO4 1.2，Glucose 11.1，PH值7.2-7.4。 

3.1.2受试药物及配制 

研究药物两种，在以下表格中分别以编号A和B表示，由江苏盐城卫生职业技术学院应用药物研究所提供。 

A代表菊花总黄酮，其制备方法：江苏产白菊花乙醇热回流提取，大孔吸附树脂纯化，总黄酮含量不低于85％(UV法测定)；木樨草素-7-O-D-葡萄糖苷不低于0.4％(HPLC法测定)，a代表所购买的市售品。 

B代表法菲亚参总皂苷，其制备方法：国产栽培法菲亚参乙醇热回流提取，大孔吸附树脂纯化，总皂苷含量不低于80％(UV法测定)。b代表所购买的市售品。 

使用前以生理盐水溶解配成各所需浓度： 

实验前药物A、B用Krebs-Henseleit液配成A∶B分别为10mg∶10mg/ml、6.66mg∶13.33mg/ml、5mg∶15mg/ml、13.33mg∶6.66mg/ml、15mg∶5mg/ml、20mg∶0mg/ml、0mg∶20mg/ml的药液，按A∶B分别为2mg∶2mg、1.33mg∶2.66mg、1mg∶3mg、2.66mg∶1.33mg、 3mg∶1mg、4mg∶0mg、0mg∶4mg/心脏给药，给药体积为0.2ml。 

3.1.3实验动物 

健康Wistar大鼠，雄性，体重350g±30g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供。 

3.2.实验方法 

3.2.1分组方法 

实验分为药物A组、药物B组和A+B药物组，A+B药物组包括1∶1配比组、1∶2配比组、1∶3配比组、2∶1配比组、3∶1配比组。共设7组，每组14只大鼠(在表2和表3中用n表示)。分组方法、药物剂量及给药浓度见表1。 

表1实验分组方法 

3.2.2实验操作方法 

大鼠断头处死，迅速取出心脏，置于4℃K-H液中，轻轻排出残留血液，将心脏连 接到灌流装置并固定，开始灌流，灌流液维持37℃，并通入95％的氧气。待心电平稳后，将灌注压调节在60-70mmHg进行稳压灌流，稳定后记录给药前冠脉流量，经给药孔缓慢注入0.2ml/心脏配制好的药液，给药完毕后立即记录上述各项指标，持续观察6分钟。 

3.2.3检测指标 

灌注压力(mmHg)；心率(次/分)；给药前及给药后即刻、1、2、3、4、5分钟冠脉流量(ml/min)、冠脉流量变化率(％)。 

3.2.4统计学处理 

数据用均数±标准差 表示，采用SPSS10.0统计软件，组间变化率比较采用one-way ANOVA分析，前后实测值采用配对t检验，P＜0.05为有显著性差异。 

3.3.结果 

3.3.1各组药物对大鼠离体心脏心率的影响 

实验前将灌注压调节在60-70mmHg进行稳压灌流，药物对大鼠离体心脏心率无显著影响，结果见表2。 

表2给药前后各组大鼠离体心脏灌注压力、心率 

3.3.2各组药物对冠脉流量的影响 

给药前各组之间冠脉流量无显著性差异(P＞0.05)；给药后各组大鼠离体心脏冠脉流量均有不同程度的升高，与给药前相比，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)；给药后各配比组与单用药物A、B相比有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)，A+B药1∶1配比组有优于其它组的趋势；自制组和市售组之间结果相同。结果见表3。 

3.4.结论 

由菊花总黄酮A和法菲娅参总苷B按一定比例配伍的药物组合物可以明显升高大鼠离体心脏冠脉流量，在不同比例的5个配比(1∶1、1∶2、1∶3、2∶1 3∶1)组中，以1∶1配比组的效果为优，自制原料和市售原料配制按1∶1复配的产品效果相同。 

表3药物A+B对大鼠离体心脏冠脉流量(ml/min)的影响 

注：1、括号内数值为变化率(％)；2、各组冠脉流量实测值与给药前比较：^*P＜0.05^**P＜0.01；3、各组的变化率与单用药物A组比较^#P＜0.05^##P＜0.01；4、各组的变化率与单用药物B组比较^▲P＜0.05^▲▲P＜0.01。