一种纳他霉素纳米乳抗真菌药物及其制备方法

摘要

本发明公开了一种纳他霉素纳米乳抗真菌药物，该纳米乳粒径在1～100nm之间，由下列质量百分比的原料组成：纳他霉素0.01%～5.00%、助溶剂5.00%～20.00%、表面活性剂20.00%～40.00%、油1.00%～20.00%，余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100%。该纳米乳外观呈淡黄色澄清透明的液体，具有粘度低、稳定性好、分散性强、吸收迅速、靶向释药等特点，并可提高药物的溶解性、生物利用度、降低毒副作用。主要用于治疗由真菌引起的动物疾病，能有效广谱防治动物真菌病。

说明书

技术领域

本发明属于兽药领域，涉及一种用于防治动物真菌病的药物，具体涉及一种纳他霉素纳米乳抗真菌药物及其制备方法。

背景技术

纳他霉素(Natamycin)也称游链霉素、匹马菌素(Pimaricin)或海松素，是一种重要的多烯类抗菌素，可以由Streptomyces  natalensis和Streptomvces  chattanoogensis等链霉素发酵产生。该抗生素是一种很强的广谱抗真菌试剂，能有效地抑制酵母菌等真菌的生长，有些真菌能产生真菌毒素(Mycotoxins) ,真菌毒素对人类有致癌、致畸、致震巅、致出血、致皮炎等作用。因此，纳他霉素用于食品防腐不仅可以解决食品腐败，还能减少真菌毒素对人类的毒害。与其他抗菌成分相比纳他霉素对哺乳动物细胞的毒性极低，可以广泛应用于真菌引起的疾病。除此之外，由于纳他霉素的溶解度低，可用其对食品的表面进行处理以增加食品保质期却不影响食品的风味和口感。目前，纳他霉素作为一种天然的生物防腐剂已被批准用于某些乳制品、肉类、饮料、水果等许多食品的生产和保藏之中。

目前市场上把纳他霉素主要用于食品防腐，还没有大量用于治疗。现有的剂型为，预混剂，悬浮液，其主要缺点是药物在水中溶解度极低，药物发生沉降，导致动物不能充分饮用到足量，另外，拌料使用时由于纳他霉素的临床使用剂量很低，很难混合均匀，影响到用药效果。国内外亟待解决的关键问题是：一方面增加纳他霉素的溶解度来提高疗效，降低加工、包装、贮存和运输的成本，另一方面开发新剂型以提高载药量。

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷与不足，本发明的目的在于提供一种纳米乳抗真菌药物，该纳米乳抗真菌药物高效、低毒、广谱、绿色环保，能全面防治真菌病，克服了传统抗真菌药物耐药性大、抗菌作用弱、毒副作用大、药物残留高等缺点，而且制备工艺简单，生产成本低，不需要特殊设备即可大规模生产，临床上直接按比例兑水引用，给药方便，因此在抗真菌病方面具有广阔的市场前景。

实现上述发明目的的技术方案是一种纳他霉素纳米乳抗真菌药物，其粒径在1～100nm之间，由下列质量百分比的原料组成： 

纳他霉素0.01%～5.00%、助溶剂5.00%～20.00%、表面活性剂20.00%～40.00%、油1.00%～20.00%，余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100%。

所述的表面活性剂是蓖麻油聚氧乙烯醚、氢化蓖麻油聚氧乙烯醚、吐温-80中的任一种。

所述的油为油酸、三乙酸甘油酯、肉豆蔻酸异丙酯或油酸乙酯中的任一种。

所述的助溶剂是冰醋酸。

本发明纳他霉素纳米乳抗真菌药物的优选配比是：纳他霉素0.10%～4.50%、助溶剂7.00%～18.00%、表面活性剂25.00%～38.00%、油1.50%～18.00%， 余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100%。

本发明纳他霉素纳米乳抗真菌药物的进一步优选配比是：纳他霉素0.15%～4.00%、助溶剂8.00%～17.00%、表面活性剂28.00%～35.00%、油2.00%～15.00%， 余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100%。

所述的表面活性剂和助溶剂的质量比例为4:1～2:1。

本发明的另一目的是提供上述纳他霉素纳米乳抗真菌药物的制备方法，具体包括以下步骤：

1）称取纳他霉素、表面活性剂、油、蒸馏水、助溶剂，备用；

2）将纳他霉素完全溶于助溶剂；

3）将表面活性剂加入到步骤2）制备的溶液中搅拌混匀；

4）将油加入到步骤3）制备的溶液中搅拌混匀；

5）将蒸馏水缓慢滴加到步骤4）制备的溶液中，滴加的同时不断搅拌，直至形成均匀透明的体系，即得。

本发明纳他霉素纳米乳抗真菌药物在制备过程中如果体系粘度较大，可以适当水浴20℃～30℃加热和超声乳化处理，有利于体系乳化和分散均匀。

本发明的纳他霉素纳米乳抗真菌药物还可以添加其他组分制备成新的复方纳米乳制剂。

本发明的纳他霉素纳米乳抗真菌药物体系稳定，呈淡黄色；粘度可以根据需要调整，比表面大，表面张力低，浸润性好，能使药物很好的附着于病发部位和病原体上；降低了药物的用量，减少了副作用；增溶了药物，增加了药物的渗透浓度，有较好的渗透能力，能较好的穿过生物体内的黏膜屏障，从而渗透进入病原体内部干扰其代谢而发挥抑菌或杀菌作用。该体系在低温3.5℃下长期放置没有结晶析出，在高温水浴80℃中加热，某些配方会出现暂时浑浊的现象，但如果将其置于室温下很快恢复透明，可见是一种稳定的药物剂型。本发明可以滤过灭菌；制备方法简单、能耗低、毒性小、安全性高、不需要特殊设备即可用于大批量生产，用于治疗或预防疾病。

纳他霉素纳米乳抗真菌药物稳定性测试：

1.离心加速试验

取制得的纳他霉素纳米乳抗真菌药物适量于离心管中，密封管口，置高速离心机中，以12000r/min的转速离心，经20min离心后纳米乳液任保持澄清透明，未见纳他霉素析出及油水分层现象。

2.光稳定性试验

将部分纳他霉素纳米乳抗真菌药物和空白纳米乳装入透明玻璃瓶中，密封置于日光下，室温光照10d，于1d、3d、5d、10d取样。结果表明，纳他霉素纳米乳抗真菌药物颜色由淡黄色变为深黄色，但仍保持澄清透明，无分层。空白纳米乳无变化，保持原来无色状态。可能由于纳他霉素具有环状化学结构，对紫外线较为敏感，故不宜与阳光接触，纳他霉素纳米乳抗真菌药物应避光保存。

3.温度稳定性实验

取部分纳他霉素纳米乳抗真菌药物，封装于几个玻璃瓶中，封闭之后置于冰箱-20℃、4℃、室温25℃和恒温培养箱37℃四种温度条件下留样观察30d，每隔5d取样观察。结果表明，该纳米乳在此四种温度下均保持澄清透明的外观，未破乳、分层和结晶析出。在低温-20℃被冻成冰状，置于30℃水浴使之溶化后，很快恢复原来澄清透明的状态，未见分层、破乳和结晶析出，抗冻性较好，低温稳定性好。

4.长期稳定性

长期稳定性是指纳米乳药物在室温自然变化条件下储藏时，外观随时间延长而发生变化的程度。该纳米乳抗真菌药物持久透明，未发现浑浊或沉淀，则说明长期稳定性好。这是评价纳米乳药物的一个重要指标。

本发明纳他霉素纳米乳抗真菌药物与现有技术相比，具有以下优点：

（1）本发明热力学稳定性好，透光性好，任何不均匀性或沉淀物的存在易被发现，感官品质的提高；

（2）本发明载药量高，一方面显著增加了纳他霉素的溶解度，解决了纳他霉素难溶解的问题，提高了纳他霉素的生物利用度；另一方面还降低了生产、包装、储存和运输的成本；

（4）本发明的纳米乳药物安全、粘度低、粒径小且均匀，使被包容的药物分散度提高，促进药物在体内的吸收；

（5）本发明的纳米乳药物通过饮水给药，临床使用方便；

（6）本发明方法工艺简单，适合大规模工业化生产。

附图说明

图1是本发明纳他霉素纳米乳抗真菌药物的在电镜照片。

图2是本发明纳他霉素纳米乳抗真菌药物的在电镜照片。

以下通过试验例来进一步阐述本发明所述药物的粒径及其均匀分布情况和本发明药物的体外抗菌效果。

试验例1

本发明药物用投射电子显微镜进行微观形态观察，结果显示见图1，图1是纳他霉素纳米乳电镜照片，显示纳他霉素纳米乳滴，呈球形且分布均匀、分散性良好，粒径均小于100nm；图2也是纳他霉素纳米乳的电镜照片，纳米乳液滴为球形，分布均匀，分散性良好。

试验例2

本发明的药物体外抗菌试验结果

以纳他霉素溶液（溶剂为二甲亚砜）、制霉菌素（药效对比）作为对照，测定本发明纳他霉素纳米乳抗真菌药物对青霉菌、黄曲霉菌、白念珠菌和毛霉菌的最小抑菌浓度（MIC）。

体外抗菌试验可见纳他霉素纳米乳抗真菌药物对四种目的菌的MIC均小于纳他霉素溶液和制霉菌素组。结果表明纳米化能有效提高纳他霉素的抗真菌活性，纳他霉素纳米乳新剂型的抑菌效果显著强于传统药物制霉菌素。结果见表1：

表1 最低抑菌浓度（MIC）（单位：mg/kg）

药物纳他霉素纳米乳纳他霉素溶液制霉菌素测定项目MICMICMIC青霉菌1.382.7511.00黄曲霉菌2.755.5011.00白念珠菌1.382.755.50毛霉菌2.755.5011.00

 [0027] 具体实施方式以下通过实施例来进一步阐述本发明纳他霉素纳米乳抗真菌药物及其制备方法。以下实施例主要是用于进一步说明本发明，而不是限制本发明的范围。

实施例1     

1）将0.01 g纳他霉素完全溶于5.00 g冰醋酸；

2）将20.00 g EL-40加入到步骤1）制备的溶液中搅拌混匀；

3）将1.00 g油酸加入步骤2）制备的溶液中搅拌混匀；

4）将73.99 g蒸馏水缓慢滴加到步骤3）制备的液体中，滴加的同时不断搅拌，直至形成均匀透明的体系，即得。

实施例2 

纳他霉素          5.00 g

EL-40             40.00 g

油酸              20.00 g

冰醋酸              20.00 g

蒸馏水              15.00 g

实施例3 

纳他霉素          1.50 g

EL-40             35.00 g

油酸              4.00 g

冰醋酸              13.00 g

蒸馏水              46.50 g

实施例4 

纳他霉素          0.10 g

EL-40             25.00 g

肉豆蔻酸异丙酯    1.50 g

冰醋酸              7.00 g

蒸馏水              66.40 g

实施例5 

纳他霉素          4.50 g

EL-40             38.00 g

肉豆蔻酸异丙酯    18.00 g

冰醋酸              18.00 g

蒸馏水              21.5 g

实施例6 

纳他霉素          2.00 g

RH-40               28.00 g

三乙酸甘油酯            15.00 g

冰醋酸              14.00 g

蒸馏水              41.00 g

实施例7 

纳他霉素          0.10 g

RH-40               28.00 g

三乙酸甘油酯            2.00 g

冰醋酸              7.00 g

蒸馏水              62.90 g

实施例8 

纳他霉素          3.00 g

吐温-80             35.00 g

油酸乙酯          15.00 g

冰醋酸              18.00 g

蒸馏水              29.00 g

实施例9

纳他霉素          1.00 g

吐温-80             30.00 g

油酸乙酯          7.00 g

冰醋酸              10.00 g

蒸馏水              52.00 g

实施例10 

纳他霉素          1.20 g

吐温-80             30.00 g

油酸乙酯          4.00 g

冰醋酸              10.00 g

蒸馏水              54.80 g

实施例11 

纳他霉素          1.50 g

吐温-80             32.00 g

油酸乙酯          5.50 g

冰醋酸              15.00 g

蒸馏水              46.00 g。