糖皮质激素硝基衍生物在制备利尿药物制剂中的应用

摘要

本发明公开了一种糖皮质激素硝基衍生物在制备利尿药物制剂中的应用，所述的糖皮质激素硝基衍生物可有效增加肾上皮细胞NPR-A密度，特别是髓质集合管细胞NPR-A密度，以促进ANP在肾脏中作用，因此可在制备利尿药物制剂中应用。

说明书

技术领域

本发明涉及一种化合物的新用途，具体地说是糖皮质激素硝基衍生物的新用途。

背景技术

心力衰竭在世界范围内是一种多发的、卫生资源消耗极大的疾病。在美国，超过500万人罹患此疾病。作为一种复杂的临床血流动力学疾病，心力衰竭以心脏泵衰竭和水钠潴留为特征。其中三分之一的患者会对利尿剂产生抵抗，进而发生水钠潴留【参见文献：Ravnan，S.L.，Ravnan，M.C.& Deedwania，P.C.Pharmacotherapy in congestive heart failure：diuretic resistanceand strategies to overcome resistance in patients with congestive heart failure.Congest Heart Fail 8，80-85(2002).】。心房钠尿肽(ANP)在正常人群中具有强在的排钠、排水、消除体内水、钠潴留的作用【参见文献：Potter，L.R.，Abbey-Hosch，S.& Dickey，D.M.Natriuretic peptides，theirreceptors，and cyclic guanosine monophosphate-dependent signaling functions.Endocr Rev 27，47-72(2006).】。自从ANP在1981年发现起，人们一直尝试应用它或它的同类物治疗心力衰竭，以消除水、钠潴留，改善预后。然而，所有的尝试均以失败告终，因为心力衰竭患者会产生钠尿肽抵抗，从而丧失对内源性和外源性钠尿肽的敏感性【参见文献：Schrier，R.W.&Abraham，W.T.Hormones and hemodynamics in heart failure.N Engl J Med 341，577-585，1999】。这种钠尿肽抵抗的主要机制之一便是肾脏钠尿肽A型受体(NPR-A)下调。【参见文献：Am J Physiol Renal Physiol 292，F1636-1644(2007)；Schrier，R.W.& Abraham，W.T.Hormones and hemodynamics in heart failure.N Engl J Med 341，577-585(1999)；Michel，J.B.，etal.Urinary cyclic guanosine monophosphate as an indicator of experimental congestive heartfailure in rats.Cardiovasc Res 24，946-952(1990)；and Y echieli，H.，Kahana，L.，Haramati，A.，Hoffman，A.& Winaver，J.Regulation of renal glomerular and papillary ANP receptors in rats withexperimental heart failure.Am J Physiol 265，F119-125(1993)】。钠尿肽在体液调节方面起着重要作用，血容量扩张直接作用于心脏，牵拉心房肌细胞，心房肌细胞释放ANP入血，ANP作用于肾脏NPR-A受体，产生强大的排水、排钠作用，进而减少血容量。然而，自从ANP发现以来，人们悲观地发现，ANP排水、排钠的生物学效应在心力衰竭时丧失了。并且，在慢性心力衰竭时，ANP在血液循环中水平与心力衰竭的严重程度呈比例的上升，并与其水、钠潴留程度和死亡率呈正相关。在肾脏，肾上皮细胞，特别是髓质集合管细胞，是肾脏排水、排钠的主要部位，同时也是ANP的主要作用部位。因此，发现一种可以有效增加肾上皮细胞NPR-A密度，特别是增加髓质集合管细胞NPR-A密度，以促进ANP在肾脏中作用的利尿药物，在临床上显得犹为必要。

发明内容

本发明的目的就是要提供一种可有效增加肾上皮细胞NPR-A密度，特别是髓质集合管细胞NPR-A密度，以促进ANP在肾脏中作用的利尿药物。

本发明是通过以下方式实现的：

糖皮质激素(GC)的以其抗炎、免疫抑制和抑制血管生成作用(即，广泛意义而言的甾体抗炎药物作用)，被广泛用于临床。糖皮质激素受体(GR)的功能受几个受体相关蛋白(RAP)的调节。这些RAP包括热休克蛋白(hsp)90、hsp70、免疫亲和素FK-结合蛋白51(immunophilins FK-binding protein 51)和环胞霉素A结合蛋白40(cyclosporine A bindingprotein 40)。目前，虽然不断有新的与GR有关的RAP被发现，但实验表明只有hsp90和hsp70这两种受体相关蛋白可以决定GR亲合性高低【Kanelakis KC，Shewach DS，Pratt WB.J BiolChem.2002 Sep 13；277(37)：33698-703.Epub 2002 Jul 1.Nucleotide binding states of hsp70 andhsp90 during sequential steps in the process of glucocorticoid receptor.hsp90 heterocomplexassembly.】。其他受体相关蛋白只是调节GR的稳定性和向细胞核的转运。因此，当GR与它的配体(人工合成的或天然的糖皮质激素)结合后，首先是hsp90解离，暴露核定位序列。激素-受体复合物形成二聚体，转移至细胞核。在细胞核，它可以调节对下游靶基因发挥转录抑制或转录活化的调节作用。转录抑制是指配体激活的GR单体通过直接的蛋白-蛋白相互作用，抑制促炎症转录因子如核因子-κB(NF-κB)和激活蛋白-1(AP-1)等的转录调节作用，从而产生抗炎效应；转录活化是指配体激活的GR以二聚体形式与靶基因启动子/增强子区域的糖皮质激素应答元件(glucocorticoid response elements，GREs)结合，诱导基因转录。因此，GR的蛋白与蛋白间的相互作用在受体定位与功能发挥方面起着决定性作用。作为一种磷蛋白，GR含有数个可能发生磷酸化的位点。证据显示，改变GR的磷酸化状态可以影响糖皮质激素受体与配体的结合，hsp90与GR的相互作用，受体亚细胞定位，核胞质穿梭，和转导潜力等诸方面【Singh，V.B.，V.K.Moudgil.1985.Phosphorylation of rat liver glucocorticoid receptor.J.Biol.Chem.260：3684.Pratt，W.B.，D.O.Toff.1997.Steroid receptor interactions with heatshock protein and immunophilin chaperones.Endocr.Rev.18：306.】。同样，也有证据显示，与蛋白磷酸化相似，蛋白硝化也可以显著上调或下调蛋白的功能【Lanone，S.，P.Manivet，J.Callebert，J.M.Launay，D.Payen，M.Aubier，J.Boczkowski，A.Mebazaa.2002.Inducible nitricoxide synthase(NOS2)expressed in septic patients is nitrated on selected tyrosine residues：implications for enzymic activity.Biochem.J.366：399.】。研究显示，硝化糖皮质激素，如NCX1015，可以迅速使GR中酪氨酸硝化，使得hsp90加速解离，GR核转位，延迟hsp70与GR结合。就受体动体学而言，所有这些改变均会促进GR的激活。因此，硝化糖皮激素可能会强化GR受体介导的生物学效应【Paul-Clark MJ，Roviezzo F，Flower RJ，Cirino G，SoldatoPD，Adcock IM，Perretti M.J Immunol.2003 Sep15；171(6)：3245-52.Glucocorticoid receptornitration leads to enhanced anti-inflammatory effects of novel steroid ligands.】。

有研究表明，糖皮质激素可以增加肾脏小管上皮细胞NPR-A密度，特别是集合管细胞NPR-A密度。因此，应用糖皮质激素可以增加肾脏对钠尿肽(如ANP和BNP)的敏感性，产生强大的利尿作用。这种作用是由GR介导的，可被GR的受体阻断剂RU486(米非司酮)所阻断。但是糖皮质激素所诱发的利尿作用有3-4天的等待期，这妨碍了它在临床上的应用(如心力衰竭患者对糖皮质激素强的松的反应非常迟缓)【Liu C，Chen H，Zhou C，Ji Z，Liu G，Gao Y，et al.Potent potentiating diuretic effects of prednisone in congestive heart failure.JCardiovasc Pharmacol.2006；48(4)：173-6.】。心力衰竭患者中应用强的松，通常需要3-4天的等待期，才能使得其利尿作用发挥出来。另外，长期大剂量的应用糖皮质激素也会引发一系列的副作用，如骨质疏松、高血压和胃肠道反应等。因此如何能够缩短糖皮质激素利尿作用等待期以及减少其用量成为我们研究的重点。

本发明人经反复研究发现，将糖皮质激素硝基化后所形成的糖皮质激素硝基衍生物即能够缩短糖皮质激素利尿作用等待期，同时也可减少其用量，由此本发明人发明了糖皮质激素硝基衍生物在制备利尿药物制剂中的应用，尤其是糖皮质激素硝基衍生物在制备用于心力衰竭利尿剂中的应用。

本发明所述的糖皮质激素硝基衍生物有如下共同结构：

在上述结构I中，B为皮质类固醇激素残基即：

在此结构式II中，在次甲基(-CH，如5，8，9，14，17位中)的一个氢原子或在亚甲基(-CH₂，如1，2，3，4，6，7，11，12，15，16位)的两个氢原子可以被下列取代基取代：

其中在1-2的位置上：可以是一个碳碳双键；

在2-3的位置上：可以是取代基N-苯基吡唑，即

另外在2，3位上除上述基团N-苯基吡唑外，2位还可以是Cl或Br；3位也可以是CO，-O-CH₂-CH₂-Cl，OH；

在位置4-5：可以是一个双键；

在位置5-6：可以是一个双键；

在位置6：也可以是Cl，F，CH₃，-CHO；

在位置7：可以是Cl；

在位置9：可以是Cl，F；

在位置11：可以是OH，CO，Cl；

在位置16：可以是CH₃，OH，＝CH₂；

在位置17：除R″外，另外的一个氢可以被下列基团取代，如：OH，CH₃，OCO(O)_ua(CH₂)_vaCH₃，或式中ua是整数0或1，va是整数0至4的一个整数。

除此之外，在位置16-17位也可以是下列基团之一丁醛缩二醇乙醛缩氨基醇丙酮缩二醇

上述三个取代基的16，17位分别与结构II中的16，17位相连

R和R′可以是氢原子或含有1至4个碳原子的直链或含支链的烷基，其中最好R＝R′＝CH₃；

在结构式II中的R″基团可以为通式-(CO-L)_t-(X)_t1-X1-NO₂

在结构式I中的G为-(CO-L)_t-(X)_t1-X1-

式中t和t₁是等于0或1的整数，而当B中不含有羟基(-OH)时，它们不能同时为0。二价桥连基L为：(CR₄R₅)_na(O)_nb(CR₄R₅)_n′a(CO)_n′b(O)_n″b(CO)_n″′b(CR₄R₅)_n″a，其中na，n′a和n″a为0至6的整数，它们可以相同或彼此不同，最好是1至3的整数。nb，n′b，n″b和n″′b是等于0或1的整数，它们可以相同或彼此不同。R₄和R₅可以相同或不同，R₄和R₅可以是氢原子或含有1至5个碳原子的直链或含支链的烷基，碳原子的数目最好为1-3个。结构式I中的X为X₀＝O，NH，NR_1C，其中NR_1C中的R_1C是一个含有1至10个碳原子的直链或含支链的烷基；或者是X₂，其中X₂是OH，CH₃，Cl，N(-CH₂-CH₃)₂，SCH₂F，SH，

在结构式I中的X₁是一个YO二价桥连基

其中Y是一个直链或为支链C1-C20亚烷基，最好是有2至5个碳原子，或者是一个被部分取代的含5至7个碳原子亚环烷基；

其中nf是1至6的一个整数，

其中n₃是0至3的一个整数；

最好是2至4的一个整数

其中R_1f＝H，CH3

本发明所提及硝酸酯类固醇衍生物中的皮质类固醇前体B所列如下，它可以通过已知的工艺过程制备得到(具体参见The Merck Index，12th Ed.of 1996)。这些皮质类固醇前体B根据Merck命名法包括如下物质，其中H₂，H，R，R′，R″为下述物质：布地奈德(budesonide)，氢化可的松(hydrocortisone)，阿氯米松(alclometasone)，阿尔孕酮(algestone)，倍氯米松(beclomethasone)，倍他米松(betamethasone)，氯泼尼松(chloroprednisone)，氯倍他索(clobetasol)，氯倍他松(clobetasone)，氯可托龙(clocortolone)，氯泼尼醇(cloprednol)，可的松(cortisone)，皮质酮(corticosterone)，地夫可特(deflazacort)，地索奈德(desonide)，去羟米松(desoximetasone)，地塞米松(dexamethasone)，双氟拉松(diflorasone)，双氟可龙(diflucortolone)，二氟泼尼酯(difluprednate)，氟扎可特(fluazacort)，氟氯奈德(flucloronide)，氟米松(flumethasone)，氟尼缩松(flunisolide)，氟新诺龙丙酮(fluocinolone acetonide)，醋酸氟轻松(fluocinonide)，氟考丁酯(fluocortyn butyl)，氟可龙(fluocortolone)，氟米龙(fluorometholone)，醋酸氟培龙(fluperolone acetate)，氟强的松醋酸酯(fluprednidene acetate)，氟泼尼龙(fluprednisolone)，氟氢缩松(flurandrenolide)，氟甲酰龙(formocortal)，哈希缩松(halcinonide)，卤贝他索丙酸酯(halobetasol propionate)，卤甲松(halometasone)，卤泼尼松醋酸酯(halopredoneacetate)，氢可他酯(hydrocortamate)，依碳氯替泼诺(loteprednol etabonate)，甲羟松(medrysone)，甲泼尼松(meprednisone)，甲泼尼龙(methylprednisolone)，糠酸莫米松(mometasone furoate)，帕拉米松(paramethasone)，泼尼卡酯(prednicarbate)，强的松龙(prednisolone)，21-二乙胺醋强的松龙(prednisolone 21-diethylaminoacetate)，泼尼松龙磷酸钠(prednisolone sodium phosphate)，强的松(prednisone)，泼尼松龙戊酸酯(prednival)，泼尼立定(prednylidene)，利美索龙(rimexclone)，曲安西龙(triamcinolone)，曲安奈德(triamcinolone acetonide)，21-乙酸基孕烯醇酮(21-acetoxypregnenolone)，可的伐唑(cortivazol)，安西奈德(amcinonide)，丙酸氟替卡松(fluticasone proprionate)，马泼尼酮(mazipredone)，替可的松(tixocortol)，己曲安奈德(triamcinolone hexacetonide)。

上述定义的X₁的桥连基可由上述表明的已知工艺过程制备得到。当桥连基与专利中所列的基团不同时，也可以通过对已知的工艺过程进行修改引入X₁。一般来说，B和X₁之间的可以通过酯或酰胺连接(NH or NR_1C，见X的定义)。任何已知的工艺过程制备均可用来合成此桥连基。

如B和X₁之间的连接的是酯，则最直接的合成路径如下：

酰氯(B-CO-Cl)在卤代醇HO-Y_a-Cl，HO-Y_a-Br，HO-Y_aI中进行反应，其中Y_a是无氧原子的Y或Y₁。

反应的产物B-CO-O-Y-Cl(Br，I)也可由B-CO-OH的钠盐或钾盐与通式Y_aCl₂，Y_aBr_a或Y_aI₂，ClY_aBr，ClY_aI，BrY_aI的二卤代物反应制备而得。

根据文献，反应产物在乙腈中与硝酸银(AgNO₃)反应，转换为最终产品。

通常化学反应的步骤如下：

B-CO-Cl+HO-Y_a-BR→B-CO-O-Y_a-Br+AgNO₃→B-X₁NO₂其中X₁＝Y_aO。

化学反应的步骤也可如下，

B-CO-ONa+Br₂Y_a→B-CO-O-Y_a-Br+AgNO₃→B-X₁NO₂

其中X₁＝Y_aO。

如B和X₁之间的连接的是酰胺，则制备过程首先是酰氯(BCOCl)与氨基醇(化学通式为NA₂-Y_a-CH，NHR_1C-Y_a-OH)发生反应，生成酰胺(化学通式为：B-CO-NH-Y_a-OH和B-CO-NR_1C-Y_a-OH)。

然后这些酰胺与卤代试剂如，PCl₅，PBr₃，SOCl₂等发生反应，可以生成卤代衍生物，化学通式如下：

B-CO-NH-Y_a-Br(Cl)和B-CO-NR_1C-Y_a-Br(Cl)

在乙腈中，上述反应产物与硝酸银(AgNO₃)反应，转换为最终产品BX₁NO₂。其制备工艺顺序如下：

其中，Y_aO为X₁。

一种合成酯类的替代方法为，羧酸(B-CO-OH)的钠或钾盐与卤代醇的硝酸酯(通式为NO₂-O-Y_a-Cl(BR，I))直接反应制备而得。

反应方案如下：B-CO-ONa+BR-Y_a-ONO₂→B-CO-O-Y_a-ONO₂其中Y_aO为X₁。

其它合成路径与上述相似，包括利用二卤代物(Br₂Y_a)与烯醇盐反应。在乙腈中，反应产物与硝酸银(AgNO₃)反应，转换为最终产品BX₁NO₂。一般的合成方案如下：其中B基团为羟基-OH，即可以是-CH₂-OH，＝CH-OH，中的羟基。

桥连基X₁的合成过程参见专利WO95/30641

现有文献报道，是将糖皮质激素硝基衍生物作为抗炎性药物进行研究。

美国专利U.S.Patents 7,605,151，5,824,669，5,837,698，6,197,762，6,579,863，和7,056,905，也披露了糖皮质激素硝基衍生物酯类或盐类的具体结构以及毒理实验等具体细节。

而本发明人发现了糖皮质激素硝基衍生物同样是钠尿肽，心房钠尿肽(ANP)和脑钠肽(BNP)的增敏剂，它们可以增加肾脏小管上皮细胞，特别是集合管细胞NPR-A密度，具有强大的排钠、排水的作用，其关键点在于它没有糖皮质激素所具有的利尿等待期。因此糖皮质激素硝基衍生物可用于制备利尿药物制剂中，尤其是用于制备用于心力衰竭利尿制剂。

糖皮质激素硝基衍生物产生的强大利尿作用是由糖皮质激素受体介导的，其效应可被糖皮质激素受体阻断剂RU486(米非司酮)所消除。本发明发述及的糖皮质激素硝基衍生物产生的利尿作用是由于肾小管上皮细胞(特别是集合管上皮细胞)NPR-A受体上调所致。在离体状态下，糖皮质激素硝基衍生物可以显著上调肾小管上皮细胞(特别是集合管上皮细胞)NPR-A受体密度，促进细胞的第二信使环3’，5’-环一磷酸鸟苷(cGMP)有生成，其效应为表现为时间依赖与剂量依赖；在活体情况下，糖皮质激素硝基衍生物全身应用时可使失代偿性心力衰竭的大鼠产生强大的利尿作用。因此，在有着水、钠潴留的疾病状态下，应用糖皮质激素硝基衍生物可有效消除水肿。这些治疗作用是由糖皮质激素受体介导的，可被糖皮质激素受体阻断剂RU486(米非司酮)所消除。

从治疗意义上而言，治疗的有效剂量包括药物本身的有效剂量，或其活性成分的有效成分。本发明所讲的糖皮质激素硝基衍生物有效剂量在0.001至1000毫克/公斤/日之间；治疗期限为1至360天。

本发明所述的糖皮质激素硝基衍生物作为药物活性成分可在生物体内或体外生物液态环境下释放一氧化氮(NO)。NO基团可与糖皮质激素基团之间相互作用产生比其母体糖皮质素更为强大的作用。这种作用可能是糖皮质激素受体被NO基团迅速硝化，或是与NO迅速改变其微环境有关。

无论是在离体或在体状态下，本发明所述的糖皮质激素硝基衍生物可以显著上调肾小管上皮细胞(特别是集合管上皮细胞)NPR-A受体，促进机体对钠尿肽(如ANP和BNP)的敏感性，产生的利尿作用。因此，糖皮质激素硝基衍生物可以在存在水、钠潴留疾病状态下当作利尿药物使用。这些存在严重水、钠潴留的疾病包括但不限于以下疾病，如心力衰竭、肝硬化腹水等。

本发明所述的包含糖皮质激素硝基衍生物组分的药物可以抑制肾素-血管肾张素-醛固酮系统(RAAS)。肾脏本身包括RAAS的所有成分。其中血管紧张素II和醛固酮可以促进肾脏对水、钠的重吸收。血管紧张素II与血管紧张素II的I型受体(AT₁)结合发挥作用。心力衰竭中，血管紧张素II和醛固酮水平明显上升，同时伴有AT₁密度上调。糖皮质激素可以上调NPR-A，减少血管紧张素II和醛固酮的释放，下调AT₁密度。

本发明所述的包含糖皮质激素硝基衍生物组分的药物可以抑制心力衰竭中的抗利尿激素轴。精氨酸加压素(AVP)，即抗利尿激素，可与肾小管上皮细胞的精氨酸加压素2型(V₂)受体结合，促进水、钠的重吸收，抑制尿液的形成。糖皮质激素可以减少AVP的释放，下调肾脏V₂受体的密度。

本发明包括以糖皮质激素硝基衍生物为活性成分，与生理、药理学允许使用的载体均匀混合，制备成用于利尿的各种形式的药物制剂。

本发明所述的以糖皮质激素硝基衍生物为活性成分的药物制剂其给药途径包括口服、皮下、皮内，肌肉内、静脉和关节内给药，以及直肠、局部给药，具体的给药途径依据患者的条件和疾病而定。

本发明中的糖皮质激素硝基衍生物经小鼠、大鼠急、慢性毒理实验，未发现严重的毒副作用。

本发明中的糖皮质激素硝基衍生物或其相应的盐类、酯类在用于制备口服药剂时，可以其为活性成分，加入常规的药用辅剂如赋形剂、崩解剂、黏合剂、润滑剂、抗氧化剂、包衣剂、着色剂、芳香剂、表面活性剂等混合，然后制成颗粒剂、胶囊剂、片剂的等药物剂型；在用于制备非经口服给药时，可制备成注射液、输液剂或栓剂等药物剂型。制备上述剂型时，可采用常规的药物制剂技术。

上述糖皮质激素硝基衍生物相应的盐类是指糖皮质激素硝基衍生物与药学上可接受的酸形成的盐。例如：与盐酸、硫酸、磷酸、硝酸等无机酸形成的盐，或是与柠檬酸、琥珀酸、酒石酸、甲磺酸等有机酸形成的盐。

本发明更为优选的方案是化学结构如下所示的强的松21-(4′-硝酰甲基)苯甲酸酯

在制备利尿药物制剂中的应用；

或化学结构如下所示的氢化可的松21-(4′-硝酰甲基)苯甲酸酯

在制备利尿药物制剂中的应用。

本发明的可行性通过以下具体实施例的检验，得到了验证。

具体实施方式

强的松21-(4′-硝酰甲基)苯甲酸酯(以下简称NCX1015)以及氢化可的松21-(4′-硝酰甲基)苯甲酸酯(以下简称NCX1022)在制备利尿药物制剂中的应用。

NCX 1015的化学结构式：

NCX 1015的合成路线：

NCX 1015的合成方法：

将含有(33.3mmol)泼尼松龙的四氢呋喃溶液加入到49.9mmol 4-(氯甲基)苯甲酰氯和三乙胺中。该反应搅拌24小时，真空蒸除溶剂。继而加入乙酸乙酯(ethyl acetate)和水，去除不溶物后，分液，有机层用硫酸钠干燥，减压浓缩，即可得到中间产物强的松21-(4′-氯甲基苯甲酸酯)。此中间产物在100mL乙腈和200mL四氢呋喃中与(43.66mmol)硝酸银在黑暗中反应35小时。过滤除去沉淀物后，旋蒸除去溶剂，剩余物用硅胶层析柱层析分离纯化，用四氢呋喃重结晶得到最后产品，强的松21-(4′-硝酰甲基)苯甲酸酯，即NCX1015为白色粉末，分子量为539.59，溶点231-235℃。

NCX 1015的结构鉴定(核磁表征)：

¹H NMR(500MHz，CD₃OD)δ0.84(s，3H，CH₃)，0.92(m，1H，CH-7)，1.02(m，1H，CH-7)，1.40(s，3H，CH₃)，1.32(m，1H，CH-15)，1.49(m，1H，CH-15)，1.66(m，2H CH-12)，1.73(m，1H，CH-14)，1.96(m，1H，CH-8)，2.05(m，2H CH₂-16)，2.30(m，1H，CH-9)2.57(m，2H，6位-CH₂)，4.32(s，1H，-OH)，4.79(m，1H，CHOH)，4.86(s，2H，CH₂O-NO₂)，5.03(d，J＝17.5Hz，1H，COCH₂O)and 5.35(d，J＝17.5Hz，1H，COCH₂O)，5.50(s，1H，-OH)，5.93(s，1H，olefin H)，6.19(d，J＝10.5Hz，1H，olefin H)，7.34(d，J＝10.5Hz，1H，olefin H)，7.62(d，J＝8.0Hz，2H，-Ph)，8.00(d，J＝8.0Hz，2H-Ph)；

EIMS m/z 539[M]⁺，538[M-1]⁺

NCX-1022(NO-hydrocortisone)，有如下结构：

氢化可的松21-(4′-硝酰甲基)苯甲酸酯

NCX 1022  的合成途径与NCX 1015相同。

NCX 1022的结构鉴定(核磁表征)：

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ1.04(s，3H，CH₃)，1.47(s，3H，CH₃)1.15(m，2H)，1.55(m，2H，1.68(m，2H)，1.72(m，2H)，1.83(m，2H)，2.11-2.19(m，4H，)，2.35(m，1H)，2.59(m，1H，)2.81(m，1H，)，4.53(m，1H，)，4.63(s，2H，)，5.13(d，J＝13.5Hz，1H，)and 5.23(d，J＝13.5Hz，1H，)，5.49(s，1H，)，5.69(s，1H，)，7.49(d，J＝7.0Hz)，8.08(d，J＝7.0Hz)；EIMS m/z 541[M]⁺，540[M-1]⁺NCX 1015以及NCX 1022的药理作用：

(一)NCX-1015以及NCX 1022对肾脏内层髓质集合管细胞NPR-A表达的影响

实验方法：

采用大鼠肾脏内层髓质集合管细胞用通用的方法获取【Ye Q et al.：Endothelin inhibitsNPR-A and stimulates eNOS gene expression in rat IMCD cells.Hypertension 41，675-681(2003)】。

肾脏内层髓质集合管细胞在不含有糖皮质激素的DMEM液中培养，然后分别给予强的松龙或氢化可的松、NCX-1015或NCX 1022和空白对照等治疗措施。细胞膜NPR-A的密度即表达量由免疫荧光强度表示。结果显示，与其母体强的松龙或氢化可的松相比，NCX-1015、NCX 1022只需更低的剂量和更短的时间即可达到上调NPR-A密度的效果(见表1、表2)。

表1

肾脏内层髓质集合管细胞膜NPR-A表达量以免疫荧光强度表未，其中“+”(+＝低，++＝中等，+++＝高).

表2

肾脏内层髓质集合管细胞膜NPR-A表达量以免疫荧光强度表未，其中“+”(+＝低，++＝中等，+++＝高).

同样，如表2所示，与其母体氢化可的松相比，NCX-1022只需更低的剂量和更短的时间即可达到上调NPR-A密度的效果。

(二)NCX-1015在失代偿性心力衰竭中利尿作用

为比较NCX-1015与其母体强的松龙在心力衰竭中利尿效果，15只失偿性心力衰竭Wistar大鼠被随机分NCX-1015组、强的松龙组和空白对照等三组。心肌梗死后心力衰竭大鼠模型由冠状动脉结扎法获得。收集12小时内的尿液，测量其尿量及尿钠水平。结果显示，与母体强的松龙相比，NCX-1015产生了更为强大的排尿与排钠作用。详见表3。

表3

所有数据以均值±标准差的方式表达。* 与空白对照相比P＜0.05；#与强的松龙相比P＜0.05。

免疫印迹法分析显示，与空白对照组相比，强的松龙和NCX-1015治疗的心力衰竭大鼠其肾脏髓质NPR-A表达量分别增加了26.5％(P＝0.008)和42.8％(P＝0.008)。然而，NCX-1015治疗的心力衰竭大鼠肾脏髓质NPR-A的表达量较其母体强的松龙治疗组大鼠高出16.3％(P＝0.032)。

(三)NCX-1015在失代偿性心力衰竭中对RAAS的作用

为比较NCX-1015与其母体强的松龙在心力衰竭中对RASS的影响，15只失偿性心力衰竭Wistar大鼠被随机分NCX-1015组、强的松龙组和空白对照等三组。经过24小时治疗后，测量血浆血管紧张素II浓度、血浆醛固酮血浆水平和肾脏AT₁受体密度(％空白)。结果显示，与母体强的松龙相比，NCX-1015对RASS的抑制更为强大。详见表4。

表4

所有数据以均值±标准差的方式表达。*P＜0.01与空白对照相比。$P＜0.05与空白对照相比。&P＜0.01与强的松龙相比。#P＜0.05与强的松龙相比。受体密度应用免疫印迹(Western BlottingAnalysis)分析，并以空白对照组受体平均密度的相对值表达。

(四)NCX-1015在失代偿性心力衰竭中对精氨酸加压素轴的作用

为比较NCX-1015与其母体强的松龙在心力衰竭中利尿效果，15只失偿性心力衰竭Wistar大鼠被随机分NCX-1015组、强的松龙组和空白对照等三组。经过24小时治疗后，测量血浆AVP浓度、肾脏V₂受体密度。结果显示，与母体强的松龙相比，NCX-1015对精氨酸加压素轴的抑制更为强大。详见表5。

表5

所有数据以均值±标准差的方式表达。*P＜0.01与空白对照相比。$P＜0.05与空白对照相比。#P＜0.05与强的松龙相比。受体密度应用免疫印迹(Western Blotting Analysis)分析，并以空白对照组受体平均密度的相对值表达。

从上述实验结果可以看出，NCX-1015可在失代偿性心力衰竭伴水、钠潴留模型中产生强大的利尿作用。与其母体(强的松龙)相比，在离体环境中，NCX-1015与母体强的松龙相比，在获得肾脏小管上皮细胞NPR-A等同效应时，NCX-1015剂量仅为1/10母体(强的松龙)剂量，时间缩短1倍。

药物制剂实施例

下面的实施例说明包含由本发明提供的化合物的药用制剂。

制剂实施例1

按照本领域已知的方法制备片剂，每片含有下述成分：

制剂实施例2

按照本领域已知的方法制备胶囊剂，每个胶囊中含有下述成分：

制剂实施例3

按照本领域已知的方法制备注射剂

取  NCX-1015  200mg，加适量助溶剂(如苯甲醇)，溶于1000ml水中，制成水溶液，混合均匀，分装成4mg/2ml/支浓度的注射液，蒸汽流通灭菌30分钟。

上述事例只用于更好的理解本发明和其实际应用，使得那些有相关背景的技术人员可以理解和应用本发明。然而，那些有相关背景的技术人员应该意识到上述描述和事例只是作为说明和举例之用。上述描述和事例并非用于限制本发明，或使得描述更为具体和精确。在不背离本发明原旨和上述权利声明的原则下，基于技术因素，可有会有多处修改或变更。