一种亚胺培南西司他丁钠药物组合物脂质体注射剂

摘要

本发明提供一种亚胺培南西司他丁钠药物组合物脂质体注射剂，由亚胺培南、西司他丁钠、鞘髓磷脂、胆固醇、乳化剂和冻结保护剂组成。采用本方法制备的亚胺培南西司他丁钠注射剂，提高了制剂产品质量，减少了毒副作用，提高了药物的生物利用度，而且具有良好的制剂稳定性，冻干过程中脂质体不会因脱水、融合、冰晶等发生破裂，水合复溶后，脂质体同样保持良好的包封率。

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗生素脂质体制剂，具体涉及一种亚胺培南西司他丁 钠药物组合物脂质体注射剂，属于医药技术领域。

背景技术

亚胺培南(Imipenem)，化学名称为(5R，6S)-6-[(1R)-1-羟乙基]-3-[[2-[(亚 氨基甲基)氨基]乙基]硫代]-7-氧代-1-氮杂双环[3.2.0]庚-2-烯-2-羧酸单水合 物，分子式C₁₂H₁₇N₃O₄S·H₂O，分子量317.4，结构式：

亚胺培南为碳氢霉烯类抗生素，对革兰是阳性、阴性的需氧和厌氧菌 具有抗菌作用，抗菌谱包括链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、克雷白 杆菌、不动杆菌部分菌株、流感嗜血杆菌、变形杆菌、沙雷杆菌、绿脓杆 菌等。亚胺培南特别适用于多种病原体所致和需氧/厌氧菌引起的混合感 染，以及在病原菌未确定前的前期治疗。临床上本品用于致敏菌所致的各 种感染，特别适用于各种细菌联合感染和需氧及厌氧菌的混合感染，如腹 膜炎、肝胆感染、腹腔内脓肿、阑尾炎、妇科感染、下呼吸道感染、皮肤 和软组织感染、尿路感染、骨和关节感染及败血症等。

西司他丁钠(Cilastatin sodium)，化学名称7-(2-氨基-2-甲酰基乙基) 硫-2-(2，2-二甲基环丙)甲酰胺-庚-2-烯酸钠盐，分子式C₁₆H₂₅N₂NaO₅S，分 子量380.43，结构式：

西司他丁钠无抗菌作用，是一种特异性酶抑制剂，它阻断亚胺培南在 肾脏内的代谢，抑制肾细胞分泌的脱氢酶，使亚胺培南免受水解破坏，继 而增加泌尿道中未经改变的亚胺培南的浓度。

西司他丁钠与亚胺培南以1∶1比例的复配在控制耐药菌、产酶菌感染 以及免疫缺陷患者感染的治疗中发挥了重要作用，是临床评价很高的抗重 症感染药物之一。

但是，由于亚胺培南/西司他丁的溶解性一般(亚胺培南略溶于水)，因 此无法直接用瓶冻的技术生产注射用粉针，现有上市产品系由二者混合后 粉末分装在大输液瓶(并非常用的注射用安剖或西林瓶)内而得，因此临床 溶解、使用也不方便。

目前，迫切需要解决的技术难题就是亚胺培南和西司他丁钠的冻干粉 末由于比重悬殊很大，在生产过程中很难达到1∶1等制剂要求的特定比 例的均匀混合。

而且，由于亚胺培南和西司他丁钠中含有硫，极易与空气中的氧气结 合生成形式的杂质，影响药品质量，同时对热敏感，在溶液中 不稳定。常温下溶液状态保存4小时左右。复杂生产工艺(混合、分装)中 的长时间暴露、输液瓶内的低氧或无氧环境的难度都将影响最终产品的质 量

专利文献CN1568975A披露了一种制备以亚胺培南和西司他丁钠的混 合物作为有效成分的药物组合物的方法，其包括两种技术方案：其一，将 亚胺培南和西司他丁钠分贝制成冻干粉末之后，予以混合；其二，将亚胺 培南和西司他丁钠一起制成冻干粉末，以上步骤仍未很好地解决成分的氧 化分解和含量准确配比的技术难题。

脂质体(liposomes)最初是由英国学者Bangham和Standish将磷脂分散 在水中进行电镜观察时发现的。脂质体是指将药物包封于类脂质双分子形 成的薄膜中间所制成的超微型球状定向药物载体制剂，属于靶向给药系统 的一种新剂型。20世纪60年代末Rahman等人首先将脂质体作为药物载 体应用，近年来，随着生物技术的不断进展，脂质体制备工艺逐步完善， 脂质体作用机制进一步阐明，脂质体作为药物载体，具有诸多优点：如脂 质体既能包封脂溶性药物，又能包封水溶性药物；减轻变态反应和免疫反 应；延缓释放，降低体内消除速度；能有效地保护被包裹药物，减少其氧 化产生杂质，并进一步提高其生物利用度；改变药物在体内的分布，并能 靶向性释药，能降低药物的毒副作用；适合多途径给药等。

发明内容

本发明的目的是提供一种亚胺培南西司他丁钠药物组合物脂质体注 射剂，其不仅实现了亚胺培南和西司他丁钠的准确的1∶1含量配比，而 且通过脂质体保护了两者不受氧化等外界影响，最大可能地降低了杂质的 生成。

普通工艺所制备的亚胺培南西司他丁钠注射剂，物理和化学性质稳定 性差，长期存放药品质量会下降而且还会生成一些杂质，带来毒副作用， 给临床使用留下了隐患。本发明人通过艰苦的试验，选择特定的辅料和制 备工艺，增加本品的稳定性，最终完成了本发明。

本发明的目的是提供一种亚胺培南西司他丁钠药物组合物脂质体注 射剂，主要由亚胺培南、西司他丁钠、鞘髓磷脂、胆固醇、乳化剂和冻结 保护剂制成。

本发明人出乎意料地发现将鞘髓磷脂、胆固醇和普流罗尼F-68三种 材料进行组合，采用海藻糖和PVP作为冻结保护剂，具有意想不到的效果， 从而获得了稳定性优良的脂质体，其具有良好的制剂稳定性，冻干过程中 脂质体不会因脱水、融合、冰晶生成等发生破裂，水化复溶后，脂质体同 样保持良好的包封率。

本发明的技术方案如下：

一种亚胺培南西司他丁钠药物组合物脂质体注射剂，主要由亚胺培 南、西司他丁钠、鞘髓磷脂、胆固醇、乳化剂、和冻结保护剂制成。

本发明所述的亚胺培南西司他丁钠药物组合物脂质体注射剂，其中亚 胺培南和西司他丁钠的重量比为1∶1。

本发明所述的亚胺培南西司他丁钠药物组合物脂质体注射剂，其中亚 胺培南的规格为0.25g/瓶、0.5g/瓶、1g/瓶，西司他丁钠的规格为0.25g/瓶、 0.5g/瓶、1g/瓶。

本发明所述的亚胺培南西司他丁钠药物组合物脂质体注射剂，主要由 以下重量份的各组分制成：

本发明所述的亚胺培南西司他丁钠药物组合物脂质体注射剂，各组分 的优选重量份数为：

所述的所述的冻结保护剂优选为海藻糖和PVP的组合，更优选海藻糖 和PVP两者3∶1的重量比。。

本发明还提供了一种亚胺培南西司他丁钠药物组合物脂质体注射剂 的制备方法，步骤包括：

(1)将鞘髓磷脂、胆固醇、普流罗尼F-68溶于适量的缓冲溶液中， 制成空白的多相脂质体；

(2)将亚胺培南和西司他丁钠溶于适量的缓冲溶液中，搅拌，使其 完全溶解；

(3)将步骤(1)制备的空白脂质体和步骤(2)的亚胺培南西司他 丁钠缓冲溶液经流通蒸汽灭菌后，再将灭菌液经超声法处理两次，每次10 分钟；

(4)在无菌条件下，向60℃熔融状态的空白脂质体中加入亚胺培南 西司他丁钠缓冲溶液，搅拌，然后加入冷冻保护剂，继续搅拌使其溶解， 制得亚胺培南西司他丁钠脂质体溶液；

(5)将上述溶液用45um微孔滤膜过滤，冷冻干燥制得亚胺培南西司 他丁钠脂质体注射剂。

上述所述的制备方法，其中缓冲溶液选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐 缓冲溶液中的一种，优选为PH为6.5的磷酸-磷酸氢二钾缓冲溶液。

本发明提供的亚胺培南西司他丁钠药物组合物脂质体注射剂优点如 下：

(1)此法不涉及有机溶媒的使用，避免了残余有机溶媒毒性的危险， 提高了制剂产品质量，减少的毒副作用；(2)提高了水溶性药物包封率； (3)主药不受任何高温过程，减少了水解程度；(4)粒度小，粒径均匀； (5)用药方便，用药前加入适量溶媒，只需短时间震荡，就能得到良好 的分散。

实施例

下面参照实施例进一步详细阐述本发明，但是本领域技术人员应当理 解，但本发明并不限于这些实施例以及使用的制备方法。而且，本领域技 术人员根据本发明的描述可以对本发明进行对其进行等同替换、组合、改 良或修饰，但这些都将包括在本发明的范围内。

实施例1  亚胺培南西司他丁钠药物组合物脂质体注射剂

处方(1000瓶)：

制备工艺：

(1)将150g鞘髓磷脂、50g胆固醇、50g普流罗尼F-68溶于600m1 的pH6.5的磷酸盐缓冲溶液中，制成空白的多相脂质体；

(2)将100g亚胺培南和100g西司他丁钠溶于400ml的pH6.5的磷 酸盐缓冲溶液中，搅拌，使其完全溶解；

(3)将步骤(1)制备的空白脂质体和步骤(2)的亚胺培南西司他 丁钠缓冲磷酸盐溶液经流通蒸汽灭菌后，再将灭菌液经超声法处理两次， 每次10分钟；

(4)在无菌条件下，向60℃熔融状态的空白脂质体中加入亚胺培南 西司他丁钠缓冲溶液，搅拌，然后加入150g海藻糖和50gPVP，继续搅拌 使其溶解，制得亚胺培南西司他丁钠脂质体溶液；

(5)将上述溶液用0.45um微孔滤膜过滤，冷冻干燥制得亚胺培南西 司他丁钠脂质体注射剂。

实施例2  亚胺培南西司他丁钠药物组合物脂质体注射剂

处方(1000瓶)：

制备工艺：

(1)将175g鞘髓磷脂、100g胆固醇、75g普流罗尼F-68溶于800ml 的pH6.5的磷酸盐缓冲溶液中，制成空白的多相脂质体；

(2)将50g亚胺培南和50g西司他丁钠溶于200ml的pH6.5的磷酸 盐缓冲溶液中，搅拌，使其完全溶解；

(3)将步骤(1)制备的空白脂质体和步骤(2)的亚胺培南西司他 丁钠缓冲磷酸盐溶液经流通蒸汽灭菌后，再将灭菌液经超声法处理两次， 每次10分钟；

(4)在无菌条件下，向60℃熔融状态的空白脂质体中加入亚胺培南 西司他丁钠缓冲溶液，搅拌，然后加入200g海藻糖和100gPVP，继续搅 拌使其溶解，制得亚胺培南西司他丁钠脂质体溶液；

(5)将上述溶液用0.45um微孔滤膜过滤，冷冻干燥制得亚胺培南西 司他丁钠脂质体注射剂。

实施例3  亚胺培南西司他丁钠药物组合物脂质体注射剂

处方(1000瓶)：

制备工艺：

(1)将62.5g鞘髓磷脂、25g胆固醇、50g普流罗尼F-68溶于400ml 的pH6.5的磷酸盐缓冲溶液中，制成空白的多相脂质体；

(2)将25g亚胺培南和25g西司他丁钠溶于100ml的pH6.5的磷酸 盐缓冲溶液中，搅拌，使其完全溶解；

(3)将步骤(1)制备的空白脂质体和步骤(2)的亚胺培南西司他 丁钠缓冲磷酸盐溶液经流通蒸汽灭菌后，再将灭菌液经超声法处理两次， 每次10分钟；

(4)在无菌条件下，向60℃熔融状态的空白脂质体中加入亚胺培南 西司他丁钠缓冲溶液，搅拌，然后加入75g海藻糖和25gPVP，继续搅拌 使其溶解，制得亚胺培南西司他丁钠脂质体溶液；

(5)将上述溶液用0.45um微孔滤膜过滤，冷冻干燥制得亚胺培南西 司他丁钠脂质体注射剂。

实施例4  对比例1-4的制备：

对比例1-3各处方组分及其重量份数如下表1所示。

表1  对比例处方组分

按以上处方组分制备亚胺培南西司他丁钠药物组合物脂质体注射剂， 制备方法同实施例1。

对比例4  的产品根据CN1568975A的实施例3制得。

试验例1  脂质体的考察

将实施例1-3和对比例1-3中所制备的样品进行质量考察，主要进行 脂质体形态观察、粒径测定和脂质体包封率测定。

其中脂质体形态和粒径测定采用光学显微镜法和statistica5.0统计软 件运算，观察求平均值。包封率测定采用柱层析分离结合分光光度法测定， 该方法操作步骤为：用柱层析分离将药物溶液中的脂质体分离出来，利用 表面活性剂破坏脂质体双分子层，使药物释放出来后再以紫外分光光度法 与标准品对照计算出包封率，各项结果如表2。

表2  脂质体的考察

以上结果充分说明本发明实施例1-3制备的脂质体效果很好，形态规 则，粒径大小适合于注射剂，包封率较高，证明本发明的实际了可行性。

试验例2  稳定性考察

将本发明实施例1-3、对比例1-4制备的样品和珠海联邦制药股份有 限公司生产的注射用亚胺培南西司他丁钠(批号：H20084018)分别于高 温40℃、相对湿度75％的条件下加速试验6个月，分别在第0、1、2、3、 6个月取样，检测各项指标的变化如下表3所示。

表3  加速试验结果

结果表明实施例1-3制备的样品各项检测指标均无明显变化，而对比 例1-4和上市制剂加速6个月后有关物质明显增加，含量明显降低，复溶 后澄清度不符合规定。说明了本发明在增加产品稳定性方面的优越性。 试验例3渗漏率试验

取试验例1-3和对比例1-3制备的样品，分别室温条件下，分别于0 天、30天、60天、90天和180天，定期检查，测定包封率，与0天包封 的药量比较，计算渗漏率，结果见表4.

    表4  渗漏率试验结果

  时间  实施例1  实施例2  实施例3  对比例1  对比例2  对比例3   0天  0.35  0.34  0.33  0.80  0.87  1.21   30天  0.40  0.38  0.37  1.35  1.68  2.35   60天  0.61  0.57  0.55  3.73  3.66  5.03   90天   0.67   0.65   0.66   5.05   4.96   10.45   180天   0.72   0.73   0.70   6.57   6.89   19.57

由以上试验结果可知，本发明实施例制备的样品在长期储存过长中渗 漏率变化不大，而对比例的样品渗漏率逐渐增大，脂质体渗漏严重，这说 明本发明制备的亚胺培南西司他丁钠脂质体注射剂具有较高的稳定性。

试验例4  生物利用度的测定

将24只1岁左右比格犬随机分成4组，分别注射给予实施例1和对比 例1-3的亚胺培南西司他丁钠注射剂(0.25g/0.25g)，给药结束后0，0.25，0.5， 1，1.5，2.5，3.5，5.5和7.5h采集静脉血1ml，进行HPLC-MS分析，用 WinNonline version5.2程序进行药动学数据处理。试验结果如下表：

有关药动学参数

由以上实验数据可以看出，本发明实施例制备的脂质体注射剂和对比 例相比，生物利用度大大提高，充分说明了本发明由于赋形剂和活性成分 的制成的脂质体注射剂，具有协同作用，制备的注射剂大大地提高生物利 用度，获得了预料不到技术效果。