大花萱草圣诞红的组织培养方法

摘要

本发明涉及大花萱草圣诞红的组织培养方法，该方法包括以下步骤，在萱草‘圣诞红’开花时摘取花苞或在初春取植株刚萌发的小芽，经过无菌材料的获得、芽的分化和增殖、不定芽壮苗培养、生根培养及炼苗与移栽获得萱草‘圣诞红’植株。与现有技术相比，本发明通过组培技术，可大大提高繁殖速度和苗木的整齐度，更好地保持原有的母本性状，并且能够提高成活率，从而提高产量，移栽成活率可达95％。

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物的组织培养方法，尤其是涉及一种大花萱草圣诞红的 组织培养方法。

背景技术

大花萱草‘圣诞红’为百合科萱草属植物，多年生草本，叶嫩绿色且，绿叶 成丛极为美观；初夏开花，花大，漏斗形，直径10cm左右，红色，花中心黄色， 花色鲜艳，栽培容易，病虫害少，对环境的适应性强。萱草因观赏性强，适应 环境，所以在园林中广泛应用，可大面积片植做地被，也可丛植或配置于花境 中，也是小庭院美化的优良材料。目前国内常见的萱草品种为黄色的金娃娃和 红色的‘红运’，色彩较为单一，而大花萱草‘圣诞红’为红黄复色，大红色 花瓣中部亮黄色，非常美丽漂亮，且耐半荫，又可做疏林地被植物，是良好的花 镜与庭院材料。因作为国外引进的品种引种数量较少，其分株慢，市场需求量大， 种苗供应受限制。目前国内关于大花萱草‘圣诞红’的组培报道尚未见。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种大大提 高繁殖速度和苗木的整齐度，更好地保持原有的母本性状的大花萱草圣诞红的 组织培养方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

大花萱草圣诞红的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)无菌材料的获得

在萱草‘圣诞红’开花时摘取花苞或在初春取植株刚萌发的小芽，用自来 水冲洗2h后于超净工作台上，用浓度为75wt％的乙醇浸泡20-40s，1wt‰的升 汞溶液浸泡10-20min，经无菌水冲洗5-6次后用无菌滤纸吸干表面水份，取花 苞基部切成1cm长接种于花苞诱导培养基上或取小芽基部切成1cm长接种于小 芽诱导培养基上；

(2)芽的分化和增殖

花苞接种于花苞诱导培养基上6周后，花苞开始膨大，出现黄绿色突起，3周 后可见明显的愈伤组织，小芽接种于小芽诱导培养基4周后可见明显的愈伤组 织，继续培养1个月，然后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行培养；

(3)不定芽壮苗培养

在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入 壮苗培养基上，不定芽迅速伸长，20天后可以长到2-3cm；

(4)生根培养

取高度为2-3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，10天后幼苗基 部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至2-3cm；

(5)炼苗与移栽

继续生根培养20-30天，根系长至1-2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗， 室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外， 给予肥水管理即可。

所述的花苞诱导培养基的成分为MS+KT0.1mg/L+NAA1.0mg/L、 MS+KT0.3mg/L+NAA3.0mg/L或MS+KT0.5mg/L+NAA5.0mg/L。

所述花苞诱导培养基的成分优选MS+KT0.3mg/L+NAA3.0mg/L。

所述的小芽诱导培养基的成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L、 MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L或MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。

所述的不定芽增殖培养基的成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L、 MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L或MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。

所述不定芽增殖培养基的成分优选MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。

所述的壮苗培养基的成分为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L、MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1mg/L或MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L。

所述壮苗培养基的成分优选MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L。

所述的生根培养基的成分为MS+NAA0.05mg/L、MS+NAA0.1mg/L或 MS+NAA0.2mg/L，优选MS+NAA0.1mg/L。

所述的培养基的成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为 24-26℃，光照为70-90μmol/ms，pH值为5.5-6.0。

与现有技术相比，本发明通过组培技术，可大大提高繁殖速度和苗木的整 齐度，更好地保持原有的母本性状，并且能够提高成活率，从而提高产量。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。

实施例1

大花萱草圣诞红的组织培养方法，该方法包括以下步骤：

(1)无菌材料的获得

在萱草‘圣诞红’开花时摘取花苞，用自来水冲洗2h后于超净工作台上， 用浓度为75wt％的乙醇浸泡20s，1wt‰的升汞溶液浸泡10min，经无菌水冲洗 5次后用无菌滤纸吸干表面水份，取花苞基部切成1cm长，接种于花苞诱导培 养基上，该花苞诱导培养基的成分为MS+KT0.1mg/L+NAA1.0mg/L；

(2)芽的分化和增殖

花苞接种于花苞诱导培养基上6周后，花苞开始膨大，出现黄绿色突起，3周 后可见明显的愈伤组织，继续培养1个月，然后切下带芽愈伤组织放入不定芽 增殖培养基进行培养，该不定芽增殖培养基的成分为 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L；

(3)不定芽壮苗培养

在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入 壮苗培养基上，该壮苗培养基的成分为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L，不定 芽迅速伸长，20天后可以长到2cm；

(4)生根培养

取高度为2cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，该生根培养基的 成分为MS+NAA0.05mg/L，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天 后可以长至2cm；

(5)炼苗与移栽

继续生根培养20天，根系长至2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室 内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给 予肥水管理即可，移栽成活率可达到95％。

以上的培养基的成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为 24℃，光照为70μmol/ms，pH值为5.5。

实施例2

大花萱草圣诞红的组织培养方法，该方法包括以下步骤：

(1)无菌材料的获得

在萱草‘圣诞红’开花时摘取花苞，用自来水冲洗2h后于超净工作台上， 用浓度为75wt％的乙醇浸泡40s，1wt‰的升汞溶液浸泡20min，经无菌水冲洗 6次后用无菌滤纸吸干表面水份，取花苞基部切成1cm长，接种于花苞诱导培 养基上，该花苞诱导培养基的成分为MS+KT0.5mg/L+NAA5.0mg/L；

(2)芽的分化和增殖

花苞接种于花苞诱导培养基上6周后，花苞开始膨大，出现黄绿色突起，3周 后可见明显的愈伤组织，继续培养1个月，然后切下带芽愈伤组织放入不定芽 增殖培养基进行培养，该不定芽增殖培养基的成分为MS+6-BA3.0mg/L +NAA0.3mg/L，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅 速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好；

(3)不定芽壮苗培养

在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入 壮苗培养基上，该壮苗培养基的成分为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L，不定 芽迅速伸长，20天后可以长到3cm；

(4)生根培养

取高度为3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，该生根培养基的 成分为MS+NAA0.2mg/L，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后 可以长至3cm；

(5)炼苗与移栽

继续生根培养20天，根系长至1cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室 内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给 予肥水管理即可。

以上的培养基的成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为 26℃，光照为90μmol/ms，pH值为6.0。

实施例3

大花萱草圣诞红的组织培养方法，该方法包括以下步骤：

(1)无菌材料的获得

在萱草‘圣诞红’开花时摘取花苞，用自来水冲洗2h后于超净工作台上， 用浓度为75wt％的乙醇浸泡30s，1wt‰的升汞溶液浸泡15min，经无菌水冲洗 5次后用无菌滤纸吸干表面水份，取花苞基部切成1cm长，接种于花苞诱导培 养基上，该花苞诱导培养基的成分为MS+KT0.3mg/L+NAA3.0mg/L；

(2)芽的分化和增殖

花苞接种于花苞诱导培养基上6周后，花苞开始膨大，出现黄绿色突起，3周 后可见明显的愈伤组织，继续培养1个月，然后切下带芽愈伤组织放入不定芽 增殖培养基进行培养，该不定芽增殖培养基的成分为MS+6-BA1.0mg/L +NAA0.1mg/L；

(3)不定芽壮苗培养

在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽，将大丛芽分成小丛或单芽后，放 入壮苗培养基上，该壮苗培养基的成分为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L，不 定芽迅速伸长，20天后可以长到3cm；

(4)生根培养

取高度为3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，该生根培养基的 成分为MS+NAA0.1mg/L，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后 可以长至3cm；

(5)炼苗与移栽

继续生根培养20天，根系长至2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室 内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给 予肥水管理即可。

上述培养基的成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为25 ℃，光照为80μmol/ms，pH值为5.8。

实施例4

大花萱草圣诞红的组织培养方法，该方法包括以下步骤：

(1)无菌材料的获得

在初春取萱草‘圣诞红’植株刚萌发的小芽，用自来水冲洗2h后于超净 工作台上，采用浓度为75wt％的乙醇浸泡30s，再利用1wt‰的升汞溶液浸泡 15min，经无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成1cm 长，将其接种于小芽诱导培养基上，该小芽诱导培养基的成分为 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L；

(2)芽的分化和增殖

小芽接种于小芽诱导培养基4周后可见明显的愈伤组织，继续培养1个月， 然后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行培养，该不定芽增殖培养基 的成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L；

(3)不定芽壮苗培养

在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽，将大丛芽分成小丛或单芽后，放 入壮苗培养基上，该壮苗培养基的成分为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L，不 定芽迅速伸长，20天后可以长到3cm；

(4)生根培养

取高度为3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，该生根培养基的 成分为MS+NAA0.1mg/L，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后 可以长至3cm；

(5)炼苗与移栽

继续生根培养20天，根系长至2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室 内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给 予肥水管理即可。

上述培养基的成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为25 ℃，光照为80μmol/ms，pH值为5.8。

实施例5

大花萱草圣诞红的组织培养方法，该方法包括以下步骤：

(1)无菌材料的获得

在初春取萱草‘圣诞红’植株刚萌发的小芽，用自来水冲洗2h后于超净 工作台上，采用浓度为75wt％的乙醇浸泡30s，再利用1wt‰的升汞溶液浸泡 15min，经无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成1cm 长，将其接种于小芽诱导培养基上，该小芽诱导培养基的成分为 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L；

(2)芽的分化和增殖

小芽接种于小芽诱导培养基4周后可见明显的愈伤组织，继续培养1个月， 然后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行培养，该不定芽增殖培养基 的成分为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L；

(3)不定芽壮苗培养

在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽，将大丛芽分成小丛或单芽后，放 入壮苗培养基上，该壮苗培养基的成分为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L，不 定芽迅速伸长，20天后可以长到3cm；

(4)生根培养

取高度为3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，该生根培养基的 成分为MS+NAA0.1mg/L，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后 可以长至3cm；

(5)炼苗与移栽

继续生根培养20天，根系长至2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室 内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给 予肥水管理即可。

上述培养基的成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为25 ℃，光照为80μmol/ms，pH值为5.8。

实施例6

大花萱草圣诞红的组织培养方法，该方法包括以下步骤：

(1)无菌材料的获得

在初春取萱草‘圣诞红’植株刚萌发的小芽，用自来水冲洗2h后于超净 工作台上，采用浓度为75wt％的乙醇浸泡30s，再利用1wt‰的升汞溶液浸泡 15min，经无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成1cm 长，将其接种于小芽诱导培养基上，该小芽诱导培养基的成分为 MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L；

(2)芽的分化和增殖

小芽接种于小芽诱导培养基4周后可见明显的愈伤组织，继续培养1个月， 然后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行培养，该不定芽增殖培养基 的成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L；

(3)不定芽壮苗培养

在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽，将大丛芽分成小丛或单芽后，放 入壮苗培养基上，该壮苗培养基的成分为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L，不 定芽迅速伸长，20天后可以长到3cm；

(4)生根培养

取高度为3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，该生根培养基的 成分为MS+NAA0.1mg/L，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后 可以长至3cm；

(5)炼苗与移栽

继续生根培养20天，根系长至2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室 内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给 予肥水管理即可。

上述培养基的成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为25 ℃，光照为80μmol/ms，pH值为5.8。