利用稀酸浸提蛋白质类食品中重金属的方法与应用

摘要

本发明公开了一种利用稀酸浸提蛋白质类食品中重金属的方法与应用。本发明所述的方法具体如下：将蛋白质类食品粉碎，加入稀酸浸提；接着去除不溶性物质，超滤浓缩，得到含有重金属离子的溶液。本发明所述的方法可以用于水产品及农产品禽畜类组织中重金属离子铜、铅、镉的浸提，不仅加快了重金属从样品中浸提出来的提取时间，而且也降低了传统的样品前处理带来的污染。相对于国标中的消解法，本发明所述的方法反应条件温和，得到的浸提液可以与酶联免疫检测方法相结合，实现农产品的现场快速检测技术。因此，本发明可以作为酶联免疫技术检测重金属的样品前处理技术进行应用，方便、快捷。

说明书

技术领域

本发明涉及一种提取重金属的方法，特别涉及一种利用稀酸浸提蛋白质类 食品中重金属的方法与应用。该方法用作酶联免疫法检测农产品及水产品中重 金属的一种快速、高效的样品前处理技术。

背景技术

随着城市化、工业化进程的加快，城市生活废弃物和工业“三废”的排放日 益增多，重金属污染物不断积累，并通过食物链的传递放大，使得农产品和水 产品中的重金属超标，食用重金属含量超标的农产品和水产会对人体造成一定 的危害，监测和防治重金属的污染已经成为世界各国普遍关注的问题。

重金属免疫学检测方法是近年来一种新兴的重金属检测方法，随着ELISA 技术基础、应用基础研究的成熟，免疫试剂盒的商业化是大势所趋，其分析检 测范围及应用领域也得到了不断的拓展，它可以代替传统的大型仪器，如原子 吸收分光光度法、电感耦合等离子体-原子发射光谱法、电感耦合等离子体质 谱分析、原子荧光光谱分析等检测方法适应环境及市场产品的现场抽查、生产 企业自查及产品进出口快速通关的要求。

本课题组已经成功制得了重金属铅的酶联免疫试剂盒，可以检测水样中的 重金属铅离子。将其申请专利，申请号为“201010539824.8”、名称为“一种快 速检测重金属铅离子的免疫学方法与试剂盒”。镉离子和铅离子的胶体金试剂条 已制备成功，可以成功检测液态的重金属离子。已有的成果表明，ELISA重金 属检测方法只能检测离子态的重金属，无法检测结合态的重金属。因此，快速、 高效的应用于实际中还应解决繁琐的样品前处理技术的问题。传统上，处理农 产品及水产中重金属的前处理技术有湿法消化法、干法灰化法和微波消解法， 均为将样品转变为液态澄清溶液进行测定。这些重金属的前处理技术虽然能准 确提取样品中的重金属，但相对费时费力，获得的消解液具有强酸性，而ELISA 中的酶反应需要在一个温和的环境下进行，所以传统的样品前处理方法得到的 消解液无法直接应用于酶联免疫法检测重金属。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种利用稀酸浸 提蛋白质类食品中重金属的方法。

本发明的另一目的在于提供所述利用稀酸浸提蛋白质类食品中重金属的方 法应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种利用稀酸浸提蛋白质类食品中 重金属的方法，包括以下步骤：将蛋白质类食品粉碎，加入稀酸浸提；接着去 除不溶性物质，超滤浓缩，得到含有重金属离子的溶液；

所述的稀酸指的是浓度小于6mol/L的酸；优选浓度为1～4mol/L的酸溶液； 更优选为2～4mol/L；

所述的酸溶液优选为盐酸溶液、硫酸溶液或硝酸溶液；

所述的蛋白质类食品优选为水产的蛋白质类食品或农产类的蛋白质类食 品；

所述的水产的蛋白质类食品优选为牡蛎、虾、鱼或贝类；

所述的农产类的蛋白质类食品优选为鸡、鸭、鹅、猪、牛或羊；

所述的浸提的条件优选为4～90℃浸提10～15min；

所述的去除不溶性物质的方式优选为离心；

所述的离心的条件优选为4000～10000rpm离心5～15min；更优选为8000～ 10000rpm离心5～10min；

所述的超滤的条件优选为使用截留分子量为10KDa(千道尔顿)的超滤管， 13000rpm离心；所述的离心次数优选为5次，合并超滤液；

所述的利用稀酸浸提蛋白质类食品中重金属的方法用作酶联免疫技术检测 重金属的样品前处理技术；得到的浸提液作待检测的溶液，直接应用于ELISA 中。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

(1)本发明所述的利用稀酸浸提蛋白质类食品中重金属的方法可以用于水 产品及农产品禽畜类组织中重金属离子铜、铅、镉的浸提，不仅加快了重金属 从样品中浸提出来的提取时间，而且也降低了传统的样品前处理带来的污染。 该方法的反应条件的温和性，使其可以与酶联免疫检测方法相结合，从而实现 农产品的现场快速检测技术。

(2)对于近江牡蛎和鸭肉来说，本发明所述的方法完全可以取代传统的样 品前处理方法进行重金属的浸提。

附图说明

图1是应用ICP和ELISA检测本发明所述方法浸提得到的样品中铜离子含 量的曲线图。

图2是应用ICP和ELISA检测本发明所述方法浸提得到的样品中镉离子含 量的曲线图。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式 不限于此。

实施例1

(1)污染样品的制备：

①近江牡蛎样品：

A、选择100只体型、体重相差±10％左右的近江牡蛎，清除附着物并洗刷 干净。

B、在海水中加入含有重金属的溶液或重金属盐，铜、铅和镉的终浓度分别 为100μg/L、200μg/L、25μg/L，得到污染海水。

C、在自然光照和室温下，将步骤A处理后的近江牡蛎放入步骤B得到的 污染海水暂养，暂养期间不投饵，昼夜连续充气以保证水中溶氧充足。每隔一 天换一次海水并将死掉的近江牡蛎清理出来，暴露10天后，从水池中取出剩余 的所有近江牡蛎，去壳，取出软体组织并用滤纸将水吸净，于搅拌机上搅碎， 得到受到重金属污染的近江牡蛎样品。

②翡翠贻贝样品：

A、选择200只体型、体重相差±10％左右的翡翠贻贝，清除附着物并洗刷 干净。

B、在海水中加入含有重金属的溶液或重金属盐，铜、铅和镉终浓度分别为 100μg/L、200μg/L、25μg/L，得到污染海水。

C、在自然光照和室温下，将步骤A处理后的翡翠贻贝放入步骤B得到的 污染海水暂养，暂养期间不投饵，昼夜连续充气以保证水中溶氧充足。每隔一 天换一次海水并将死掉的翡翠贻贝清理出来，暴露5天后，从水池中取出剩余 的所有翡翠贻贝，去壳，取出软体组织并用滤纸将水吸净，于搅拌机上搅碎， 得到受到重金属污染的翡翠贻贝。

③基围虾样品：将自来水加入水缸中，用充气机爆气4天后加入含有重金 属的溶液或重金属盐，使水中重金属铜、铅和镉的浓度分别为0.350mg/L、 0.05mg/L、0.015mg/L。选择100只体型、体重相差±10％左右的基围虾放入水缸 中暂养，暂养期间每天喂食两次，昼夜连续充气以保证水中溶氧充足。养殖15 天后，从水池中取出所有的基围虾，去壳剖肉后，用滤纸将水吸干，于搅拌机 上搅碎，得到受到重金属污染的基围虾。

④禽畜类样品：

A、根据食品中的限量标准(GB2762-2005)和食品中铜的限量标准 (GB15199-94)得知猪肉、牛肉、鸡肉、鸭肉四种样品中对三种重金属的限量 标准(表1)。

表1禽畜类样品中重金属的限量标准

B、用生理盐水配制铜、铅、镉的混合溶液，重金属的终浓度为各种样品中 重金属限量标准的20倍。

C、将样品组织(分别为猪肉、牛肉、鸡肉、鸭肉)剪碎，置于步骤B制备 的污染液中进行污染。

D、反应5min后，用纱布过滤，反复冲洗，用滤纸吸干样品表面的水分， 搅碎，测定污染样品中的重金属含量。

(2)浸提样品

①水产品

A、称取步骤(1)①制备的重金属污染后的近江牡蛎0.5g，将其置于10mL 离心管中，加入0.5ml 2M硝酸溶液，常温下反应15min，10000rpm离心10min， 取上清液于截留分子量为10KD的超滤离心管中(13000rpm，8min)离心4次。 将4次离心液混合，调节pH值至5.0～6.0，定容至4mL，ICP(原子发射光谱 分析)检测重金属铜、铅、镉的含量，结果测得重金属铜、铅、镉的稀酸浸提 量与国标法样品前处理方法(前处理方法为微波消解法，可参考 GB/T5009.13-1996、GB/T 5009.15-1996或GB/T 5009.12-1996)的检测结果的比 值依次达到80.56％、95.59％、80.85％。

B、称取步骤(1)①制备的重金属污染后的近江牡蛎0.5g，将其置于10mL 离心管中，加入0.5ml 2M硫酸溶液，常温下反应5min，10000rpm离心10min， 取上清液于截留分子量为10KD的超滤离心管中(13000rpm，8min)离心5次。 将5次离心液混合，调节pH值至5.0～6.0，定容至4mL，ICP(原子发射光谱分 析)检测重金属铜、铅、镉的含量，结果测得重金属铜、铅、镉的稀酸浸提量与 国标法样品前处理方法的检测结果的比值依次达到81.94％、97.06％、82.27％。

C、取实施例1中的步骤(1)①制备的重金属污染后的近江牡蛎0.5g，将 其置于10mL离心管中，加入0.5ml 2M硝酸溶液，4℃下反应15min，10000rpm 离心10min，取上清液于截留分子量为10KD的超滤离心管中(13000rpm，8min) 离心4次。将4次离心液混合，调节pH值至5.0～6.0，定容至4mL，ICP(原 子发射光谱分析)检测重金属铜、铅、镉的含量，结果测得重金属铜、铅、镉 的稀酸浸提量与国标法样品前处理方法(前处理方法为微波消解法，可参考 GB/T5009.13-1996、GB/T 5009.15-1996或GB/T 5009.12-1996)的检测结果的比 值依次达到82.47％、91.34％、81.78％。

D、称取实施例1中的步骤(1)①制备的重金属污染后的近江牡蛎0.5g， 将其置于10mL离心管中，加入0.5ml 2M硫酸溶液，4℃下反应5min，10000rpm 离心10min，取上清液于截留分子量为10KD的超滤离心管中(13000rpm，8min) 离心5次。将5次离心液混合，调节pH值至5.0～6.0，定容至4mL，ICP(原子 发射光谱分析)检测重金属铜、铅、镉的含量，结果测得重金属铜、铅、镉的稀 酸浸提量与国标法样品前处理方法的检测结果的比值依次达到81.24％、90.08％、 82.34％。

E、称取步骤(1)②制备的重金属污染后的翡翠贻贝0.5g，将其置于10mL 离心管中，加入0.5ml  1M硝酸溶液，常温下反应10min，8000rpm离心10min， 取上清液于截留分子量为10KD的超滤离心管中(13000rpm，8min)离心4次。 将4次离心液混合，调节pH值至5.0～6.0，定容至4mL，ICP(原子发射光谱分 析)检测重金属铜、铅、镉的含量，结果测得重金属铜、铅、镉的稀酸浸提量与 国标法样品前处理方法的检测结果的比值依次达到65.58％、73.68％、77.27％。

F、称取实施例1中的步骤(1)②制备的重金属污染后的翡翠贻贝0.5g，将 其置于10mL离心管中，加入0.5ml  1M硝酸溶液，90℃下反应10min，8000rpm 离心10min，取上清液于截留分子量为10KD的超滤离心管中(13000rpm，8min) 离心4次。将4次离心液混合，调节pH值至5.0～6.0，定容至4mL，ICP(原子 发射光谱分析)检测重金属铜、铅、镉的含量，结果测得重金属铜、铅、镉的稀 酸浸提量与国标法样品前处理方法的检测结果的比值依次达到71.46％、77.33％、 79.94％。

G、称取步骤(1)③制备的重金属污染后的基围虾0.5g，将其置于10mL离 心管中，加入0.5ml 2M硝酸溶液，常温下反应5min，4000rpm离心15min，取 上清液于截留分子量为10KD的超滤离心管中(13000rpm，8min)离心4次。将 4次离心液混合，调节pH值至5.0～6.0，定容至4mL，ICP(原子发射光谱分析) 检测重金属铜、铅、镉的含量，结果测得重金属铜、铅、镉的稀酸浸提量与国标 法样品前处理方法的检测结果的比值依次达到63.68％、67.32％、71.43％。

②畜禽产品

A、称取步骤(1)④制备的重金属污染后的猪肉0.5g，将其置于10mL离心 管中，加入0.5ml 2M硫酸溶液，在常温下反应5min，8000rpm离心10min，取 上清液于截留分子量为10KD的超滤离心管中(13000rpm，8min)离心4次。将 4次离心液混合，调节pH值至5.0～6.0，定容至4mL，ICP(原子发射光谱分析) 检测重金属铜、铅、镉的含量，结果测得重金属铜、铅、镉的稀酸浸提量与国标 法样品前处理方法的检测结果的比值依次达到60.58％、70.33％、75.97％。

B、称取步骤(1)④制备的重金属污染后的猪肉0.5g，将其置于10mL离心 管中，加入0.5ml 2M硝酸溶液，常温下反应10min，8000rpm离心10min，取上 清液于截留分子量为10KD的超滤离心管中(13000rpm，8min)离心4次。将4 次离心液混合，调节pH值至5.0～6.0，定容至4mL，ICP(原子发射光谱分析) 检测重金属铜、铅、镉的含量，结果测得重金属铜、铅、镉的稀酸浸提量与国标 法样品前处理方法的检测结果的比值依次达到68.59％、89.63％、80.57％。

C、称取步骤(1)④制备的重金属污染后的牛肉0.5g，将其置于10mL离心 管中，加入0.5ml 1M硝酸溶液，在常温下反应15min，8000rpm离心10min， 取上清液于截留分子量为10KD的超滤离心管中(13000rpm，8min)离心4次。 将4次离心液混合，调节pH值至5.0～6.0，定容至4mL，ICP(原子发射光谱分 析)检测重金属铜、铅、镉的含量，结果测得重金属铜、铅、镉的稀酸浸提量与 国标法样品前处理方法的检测结果的比值依次达到77.85％、67.05％、77.71％。

D、称取步骤(1)④制备的重金属污染后的鸡肉0.5g，将其置于10mL离心 管中，加入0.5ml 4M硝酸溶液，常温下反应10min，8000rpm离心10min，取上 清液于截留分子量为10KD的超滤离心管中(13000rpm，8min)离心4次。将4 次离心液混合，调节pH值至5.0～6.0，定容至4mL，ICP(原子发射光谱分析) 检测重金属铜、铅、镉的含量，结果测得重金属铜、铅、镉的稀酸浸提量与国标 法样品前处理方法的检测结果的比值依次达到69.92％、76.41％、77.29％。

E、称取步骤(1)④制备的重金属污染后的鸭肉0.5g，将其置于10mL离心 管中，加入0.5ml 3M硝酸溶液，常温下反应10min，8000rpm离心10min，取上 清液于截留分子量为10KD的超滤离心管中(13000rpm，8min)离心4次。将4 次离心液混合，调节pH值至5.0～6.0，定容至4mL，ICP(原子发射光谱分析) 检测重金属铜、铅、镉的含量，结果测得重金属铜、铅、镉的稀酸浸提量与国标 法样品前处理方法的检测结果的比值依次达到84.09％、88.48％、89.01％。

F、称取步骤(1)④制备的重金属污染后的鸭肉0.5g，将其置于10mL离心 管中，加入0.5ml 2M硫酸溶液，常温下反应10min，8000rpm离心10min，取上 清液于截留分子量为10KD的超滤离心管中(13000rpm，8min)离心4次。将4 次离心液混合，调节pH值至5.0～6.0，定容至4mL，ICP(原子发射光谱分析) 检测重金属铜、铅、镉的含量，结果测得重金属铜、铅、镉的稀酸浸提量与国标 法样品前处理方法的检测结果的比值依次达到75.40％、76.77％、85.71％。

实施例2

本发明方法的精密度：

(1)国标法处理，ICP检测，具体过程如下：

按照实施例步骤(1)制备污染样品，得到加标前的样品，加标前的样品按 照下面的步骤进行检测，得到样品加标前的重金属含量(如表4的C₀值所示)。 对加标前的样品加标，加标量如表4的C值所示，对加标后的样品按照下面的步 骤进行检测，得到样品加标后的重金属含量(如表4的C₁值所示)。根据公式1 求得样品的加标回收率W。

W(％)＝(C₁-C₀)/C×100％    (公式1)

公式中，

W：样品的加标回收率(％)；

C₀：样品加标前的重金属含量(μg/g)；

C₁：样品加标后的重金属含量(μg/g)；

C：实际的加标量(μg/g)。

匀浆处理后的近江牡蛎、翡翠贻贝和基围虾分别各取4份，每份0.5g，分别 置于高压消解罐内，加入5mL、浓度为16M的HNO₃中，室温(常压)放置过 夜后，放入微波消解炉内消解，消解条件如表2所示。接着将消解液赶酸，用去 离子水定容至10mL，然后用ICP测量各重金属的含量，将四份样品的平均值作 为每组样品的测定值。

猪肉、牛肉、鸡肉和鸭肉4种样品，每种取4份，每份0.5g，分别置于高压 消解罐内，加入7mL的浓HNO₃(16M)，室温放置过夜后，补加2mL的浓HNO₃(16M)和1mL的H₂O₂(质量分数30％)，放入微波消解炉内消解，消解条件如 表3所示。将消解液赶酸，用去离子水定容至10mL，然后用ICP测量各重金属 的含量，将四份样品的平均值作为每种样品的测定值。

表2水产品的微波消解条件

表3禽畜样品微波消解条件

表4国标法样品前处理加标回收率

(2)本发明的方法处理，ICP检测，具体过程如下：

按照实施例步骤(1)制备污染样品，得到加标前的样品，加标前的样品按 照下面的步骤进行检测，得到样品加标前的重金属含量(如表5的C₀值所示)。 对加标前的样品加标，加标量如表5的C值所示，对加标后的样品按照下面的步 骤进行检测，得到样品加标后的重金属含量(如表5的C₁值所示)。根据公式1 求得样品的加标回收率W。

W(％)＝(C₁-C₀)/C×100％    (公式1)

公式中，

W：样品的加标回收率(％)；

C₀：样品加标前的重金属含量(μg/g)；

C₁：样品加标后的重金属含量(μg/g)；

C：实际的加标量(μg/g)。

使用本发明的稀酸浸提法浸提，浸提的条件为分别用2M硫酸溶液和2M硝 酸溶液浸提，反应10min，8000rpm离心10min，取上清液于截留分子量为10KD 的超滤离心管中(13000rpm，8min)离心4-5次。将离心液混合，调节pH值至 5.0～6.0，定容至4mL。样品中的重金属铜、铅、镉，测得溶液的浓度从而得到 样品加标后的重金属含量。

表5稀酸浸提法加标回收率

表4和表5的结果表明，水产品中重金属铜、铅、镉的稀硫酸浸提法的加标 回收率为97％～116％，比国标法的加标回收率(93％～118％)稍微高一点；稀 硝酸浸提法的加标回收率为98％～111％，比国标法的加标回收率高。禽畜类农产 品中重金属铜、铅、镉的稀硫酸浸提法的加标回收率为91％～112％，比国标法的 加标回收率(95％～116％)稍微高一点；稀硝酸浸提法的加标回收率为97％～ 107％，比国标法的加标回收率高。稀酸浸提法，不仅浸提样品重金属的回收率低， 而且具有比国标法更高的加标回收率，故是一种有效可行的稀酸浸提方法。

应用实施例

I、对铜离子的检测

(1)将实施例1步骤(1)制备的样品加入等体积的0.1M二乙基三胺五乙 酸(DTPA)溶液，再调节pH值为7.0～7.4。

(2)ELISA检测过程：

①包被：用0.05M pH9.6碳酸盐缓冲液4℃16h包被160ng/mL Cu-DTPA-OVA (制备步骤见“重金属铜离子单克隆抗体的制备及其间接竞争ELISA检测方法 的建立”，中国生物制品学杂志[J]，2011，24(6)：720-723)于酶标板微孔。

②洗涤：甩干板孔中液体，然后向孔中加入PBS-T(0.015M、pH 7.4，含体 积百分比0.05％ Tween-20)洗涤液，每孔300μL，放置3min，轻轻晃动，弃去 洗液，拍干，重复洗板三次。

③封闭：用含0.05g/mL脱脂奶粉的PBST缓冲液封闭，每孔200μL，37℃ 1 h；如前法洗板三次。

④加样：在ELISA酶标板孔中依次加入浓度为0、2、5、10、20、50、100ng/mL Cu²⁺标准品以及步骤(1)制备的样品，再加入铜抗体工作液(1∶160000稀释得到， 铜抗体的制备见“重金属铜离子单克隆抗体的制备及其间接竞争ELISA检测方 法的建立”，中国生物制品学杂志[J]，2011，24(6)：720-723)50μL/孔，用盖板膜封 板。37℃孵育1h；取出酶标板，如前法洗板三次。

⑤加酶标记二抗：加入HRP--羊抗鼠IgG抗体工作液(1∶8000倍稀释，宝泰 克公司)100μL/孔，37℃孵育30min；取出酶标板，洗板五次。

⑥加显色液：每孔中加入A、B底物液(TMB显色液)各50μL，轻轻振荡 混匀，室温避光反应10min。

⑦终止反应：每孔中加入2M H₂SO₄终止液50μL，轻轻振荡混匀；于酶标仪 450nm处测定每孔吸光度值。

⑧结果判定：所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除 以第一个标准(0标准)的吸光度值(B0)再乘以100％，即百分吸光度值。

百分吸光度值(％)＝B/B0×100％

B-标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

B0-0ng/ml标准溶液的平均吸光度值

以标准品百分吸光率为纵坐标，以Cu²⁺标准品浓度(ng/ml)的对数为横坐标， 绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本 所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中Cu²⁺实际浓度。

检测铜离子的结果表明(如图1所示)，两种检测方法直线回归分析显示两 种检测方法具有显著的相关性(P＜T0.01，21)，线性回归方程为 y＝0.8901x+0.031(R2＝0.9374)，式中，y为ICP检测重金镉的浓度(mg/L)，x为酶 联免疫法检测重金属的浓度(mg/L)，R为线性相关系数，线性相关性良好。可见， 本发明所示的方法与酶联免疫法检测重金属铜能有效结合起来。浓度低于 0.28mg/L时，ICP的检测结果比ELISA检测的结果偏高；浓度高于0.28mg/L时， ELISA的检测结果比ICP检测的结果偏高。

II、对镉离子的检测

(1)将实施例1步骤(1)制备的样品加入等体积的0.1M乙二胺四乙酸 (EDTA)溶液，再调节pH值为7.0～7.4。

(2)ELISA检测过程：

①包被：用0.05M pH9.6碳酸盐缓冲液4℃ 16h包被200ng/mL Cd-iEDTA-BSA (详细见“镉离子单克隆抗体的鉴定及竞争ELISA的建立”，免疫学杂志[J]， 2009，25(2)：214-217)于酶标板微孔。

②洗涤：甩干板孔中液体，然后向孔中加入PBS-T(0.015M、pH 7.4，含体 积百分比0.05％ Tween-20)洗涤液，每孔300μL，放置3min，轻轻晃动，弃去 洗液，拍干，重复洗板三次。

③封闭：用含0.05g/mL脱脂奶粉的PBST缓冲液封闭，每孔200μL，37℃ 1 h；如前法洗板三次。

④加样：在ELISA酶标板孔中依次加入浓度为50，100，200，500，1000，2000 ng/mL Cd²⁺标准品以及步骤(1)制备的样品，再加入镉抗体工作液(1∶160000稀 释得到，镉抗体的制备步骤详细见“镉离子单克隆抗体的鉴定及竞争ELISA的建 立”，免疫学杂志[J]，2009，25(2)：214-217)50μL/孔，用盖板膜封板。37℃孵 育1h；取出酶标板，如前法洗板三次。

⑤加酶标记二抗：同步骤I(2)⑤。

⑥加显色液：同步骤I(2)⑥。

⑦终止反应：同步骤I(2)⑦。

⑧结果判定：同步骤I(2)⑧。

检测镉离子的结果表明(如图2所示)，两种检测方法直线回归分析显示两 种检测方法具有显著的相关性(P＜T0.01，21)，线性回归方程为y＝0.9378x+0.0169 (R²＝0.9873)，式中，y为ICP检测重金属镉的浓度(mg/L)，x为酶联免疫法检测 重金属的浓度(mg/L)，R为线性相关系数，线性相关性良好，故样品前处理方法 与酶联免疫法检测重金属镉可以很好的结合起来。浓度低于0.27mg/L时，ICP的 检测结果比ELISA检测的结果偏高；浓度高于0.27mg/L时，ELISA的检测结果 比ICP检测的结果偏高。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施 例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替 代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。