双瓣茉莉的离体快速繁殖方法

摘要

本发明提供一种双瓣茉莉快速繁殖方法，进行规模化生产和繁殖以满足市场需要双瓣茉莉组织培养步骤包括：A.外殖体消毒，B.无菌苗获得，C.腋芽生长培养，D.丛生芽诱导，E.生根培养，F炼苗与移栽。采用植物组织培养的方法繁殖双瓣茉莉，不仅不受外界条件的影响，四季皆可进行，节约苗木占地，降低生产成本，而且可以保存母体的全部优良性状，遗传性状稳定。这种方法可在短时间内形成大量的优良试管苗，进行规模化、工厂化生产，为观赏园艺、香料、制药等产业提供大量的原材料。

说明书

技术领域

本发明涉及双瓣茉莉快速繁殖方法，属于植物的人工繁殖和栽培方法技术领域。 

背景技术

茉莉(Jasminum sambac L)是木樨科(Oleaceae)素馨属多年生的常绿小灌木或略成藤本状的小灌木，性喜温暖湿润，原产于印度和阿拉伯一带，引入我国后，经过长时间的栽培驯化，已经适应我国南方大部分地区气候。作为一种重要的芳香植物，茉莉花是提炼精油和窨制茉莉花茶的重要原料。在国内，由于茉莉花的根或全株具有治疗腹泻、缓解腹部疼痛、消炎等医用价值而作为一种明间草药被栽培应用。还有研究者发现低浓度的茉莉花茶香气能够有效舒缓由于植物神经活动和情绪所带来的疼痛。除了药用价值。茉莉还是一种著名的观赏植物，不仅是菲律宾国花，同时也于2007年被选为江苏省花。因此，茉莉由于其重要的应用价值而备受关注。 

由于茉莉的结实率非常低，在生产应用中都是通过扦插育苗进行繁殖的。但是，长期的扦插繁殖是导致植物活力的减弱和带病毒的重要原因，并严重影响茉莉对逆境的抵抗能力和花香品质及质量，且制约了茉莉的育种进程。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种双瓣茉莉快速繁殖方法，进行规模化生产以及以双瓣茉莉组培为基础的其他学科的研究工作的需要。 

本发明的技术方案如下，该种双瓣茉莉快速繁殖方法的主要特点是： 

A外殖体消毒：选取腋芽饱满且尚未萌发的嫩枝，摘去叶片，然后将枝条剪为约2cm的小段，每段带一对腋芽，用0.1％的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤 15～20min，流水冲洗30～60min后，再在超净工作台上用75％的酒精漂洗30s，无菌水清洗4遍后，用含0.1％升汞灭菌50-60min，无菌水冲洗4-5遍，最后用无菌滤纸吸干表面水分； 

B腋芽诱导：将消毒好的双瓣茉莉茎段切成1.0-1.5cm的带芽节段，接种到以下培养基中：WPM基本培养基，蔗糖(食用糖)20～40g/L，适当pH值；培养温度28±1℃，光照强度1000～3000lx，光照时间10～16h，进行光照培养； 

C腋芽培养：将腋芽萌发后培养20天左右的无菌苗茎尖用剪刀剪下，接种到以下培养基中：WPM基本培养基，蔗糖(食用糖)20～40g/L，植物生长激素0.2～2.0mg/L，适当pH值；培养温度28±1℃， 

D丛生芽诱导：将生长至8cm左右的芽苗切下，分成带有一对腋芽的小段：WPM基本培养基，植物生长激素0.5～1.0mg/L，进行光照培养30～40天； 

E生根培养：选取健壮的试管苗，经过修剪后，在含植物生长激素400～500mg/L浸泡10-15min后接种到如下培养基中：1/2WPM或WPM基本培养基，蔗糖(食用糖)20～40g/L，进行光照培养50～60天。 

F炼苗移栽：将组培瓶盖打开，并添加5～10ml的蒸馏水，进行有菌条件驯化2-3d；用镊子将组培苗从瓶中取出，移栽到已经灭菌的栽培基质中，进行遮阴驯化3周，期间不定期的喷施1/2WPM营养液。 

所述的双瓣茉莉快速繁殖方法的延伸技术方案包括：步骤A中的消毒试剂和时间、步骤B中的pH值范围以及步骤B、C、D、E中双瓣茉莉快速繁殖所述的培养基中涉及的植物生长激素，包括6-卞基腺嘌呤(6-BA)、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)、赤霉素(GA3)、反玉米素(ZT)其中一种或几种。 

所述的双瓣茉莉快速繁殖方法的延伸技术方案包括：步骤A中的种子消毒用试剂0.1％的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤15～20min和含0.1％升汞灭菌 50～60min。 

所述的双瓣茉莉快速繁殖方法的延伸技术方案包括：步骤B中pH值范围为5.8～7.0。 

所述的双瓣茉莉快速繁殖方法的延伸技术方案包括：其特征在于步骤C所涉及到的植物生长激素包括吲哚丁酸(IBA)1.0～2.0mg/L，6-卞基腺嘌呤(6-BA)0.1～0.5mg/L，赤霉素(GA3)0.5～1.0mg/L。 

所述的双瓣茉莉快速繁殖方法的延伸技术方案包括：步骤D中所涉及到的植物生长激素反玉米素(ZT)0.5～1.0mg/L，吲哚丁酸(IBA)0.1～0.5mg/L。 

所述的双瓣茉莉快速繁殖方法的延伸技术方案包括：步骤E中所涉及到的植物生长激素萘乙酸(NAA)400～500mg/L，浸泡时间为10-15min。 

所述的双瓣茉莉快速繁殖方法的延伸技术方案包括：步骤F中添加蒸馏水5～10ml，进行有菌驯化2-3天。 

采用植物组织培养的方法繁殖双瓣茉莉，不仅可以摆脱外界条件的影响，四季都能进行生产，而且可以节约育苗占地，降低生产成本。植物组织培养技术是利用细胞的全能性，采取植物体上的细胞团伙一块组织，通过人为条件的控制，使这些组织形成千百万植株，并且保存了母体的全部优良性状，且遗传性状稳定。这种方法保留了双瓣茉莉的植株活性，可在短期内形成大量优良试管苗，进行规模化、工厂化生产。 

以下便结合实施例并附图，对本发明的具体实施方式作进一步的详述。 

图1是取材用的双瓣茉莉植株图； 

图2是诱导2-3周后萌发的腋芽图(培养条件：WPM基本培养基，食用糖30g/L， 16h/d光照培养)； 

图3是在最佳生长培养基中培养腋芽苗图(培养条件：WPM+IBA2mg/L+6-BA0.5mg/L+GA30.7mg/L+食用糖30g/L，16h/d光照培养)； 

图4是丛生芽诱导图(培养条件：WPM+ZT1mg/L+IBA0.5mg/L+食用糖30g/L，16h/d光照培养)； 

图5是组培苗在步骤E中处理后的生根情况图； 

图6是组培得到完整的植株图； 

图7是经炼苗驯化的移栽组培苗图。 

具体实施方式

下面结合双瓣茉莉快速繁殖的实例说明本发明的具体实施方式。 

实施例1腋芽的诱导和培养 

1、取双瓣茉莉的幼嫩茎段，用0.1％的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤15～20min，流水冲洗60min后，再在超净工作台上用75％的酒精漂洗30s，无菌 水清洗4遍后，用含0.1％HgCL2消毒50～60min(在升汞中加入几滴吐温80)，无菌水冲洗4-5次，最后用无菌滤纸吸干种子表面水分。 

2、将消毒好的双瓣茉莉茎段直接接种到腋芽诱导培养基中：WPM基本培养基中添加，蔗糖(食用糖)30g/L，适当pH值；培养温度28±1℃，光照强度1000～3000lx，光照时间10～16h，进行光照培养。 

3、将腋芽萌发后培养20天左右无菌苗茎尖用剪刀剪下，接种到本发明的腋芽生长培养基中，具体配方为在WPM基本培养基中添加植物激素IBA2.0mg/L、BA0.5mg/L和GA30.7mg/L，蔗糖30g/L，进行光照培养。 

实施例2丛生芽的诱导和试管苗的生根、移栽 

1、培养30天后，待芽苗生长至6-8cm，将芽苗重新接种到本发明的丛生芽诱导培养基中，进行增殖培养。丛生芽诱导培养基是以WPM培养基为基本培养基，并添加植物生长激素ZT1mg/L和IBA0.5mg/L，蔗糖(食用糖)30g/L，进行增殖培养。培养30天以上，诱导率达到98％，大部分芽苗可诱导出丛生芽数达到3～5条。 

2、选取生长健壮的试管苗，将其浸泡在已经灭过菌的含NAA450mg/L的溶液中10min，然后接种到1/2MS基本培养基上，蔗糖(食用糖)15g/L，进行生根诱导。培养40天后，生根率达86％，平均根数目达18.5根。 

3、将双瓣茉莉组培苗生根培养1.5-2个月后开始进行炼苗移栽，首先将组培瓶移入光照培养箱，进行变温变光驯化5-7天，再将组培瓶盖打开，并添加10ml蒸馏水，进行有菌条件驯化2-3天。然后将组培苗移栽到已经灭菌的栽培基质(泥潭∶珍珠岩∶园土＝1∶1∶5)中，放置无加温加光的温室中，进行遮阴驯化3周，期间不定期的喷施1/2WPM营养液，移栽后成活率达78％。 

以上实例的双瓣茉莉带芽茎段组培快繁状况见附图。