一种含有β-隐黄质的浓缩物的提取方法与采用该方法所得到的浓缩物及其用途

摘要

本发明涉及一种从酸浆宿萼提取含有β-隐黄质的浓缩物的方法，采用上述方法得到的含有β-隐黄质的浓缩物及其用途。本发明的方法包括原料预处理、酶处理、提取、皂化、浓缩与纯化等步骤。采用本发明的方法不但解决了现有技术中提取β-隐黄质效率低的技术缺陷，而且获得价值高的β-隐黄质产品，本发明产品的β-隐黄质含量远远高于现有技术或现有产品所达到的含量，因此，为β-隐黄质产品的应用提供了良好前景。本发明原料易获得，提取工艺简单，所得产品含量高，综合成本可控，适合于工业化生产及延长产业链。

说明书

【技术领域】

本发明属于从天然植物提取有效成分的技术领域。更具体地，本发明涉及一种从酸浆宿萼提取含有β-隐黄质的浓缩物的方法，还涉及采用上述方法得到的含有β-隐黄质的浓缩物，还涉及含有β-隐黄质的所述浓缩物的用途。

【背景技术】

酸浆(Physalis alkekengi L.var.franchetii(Masters)Makino)为茄科(Solanaceae)酸浆属(Physalis)的一种多年生草本植物，又名“红姑娘”、“洋姑娘”、“红灯笼”、“锦灯笼”等。酸浆果实为球状浆果，外部的宿萼宽大，呈灯笼形囊状，在我国大部分地区均有分布。酸浆的根及全草均可入药，具有清热、解毒、利尿、降压、强心、抑菌、明目等功能。主治热咳、咽痛、音哑、急性扁挑体炎、小便不利和水肿等病。酸浆果实宿萼中含有丰富的β-隐黄质，主要以脂肪酸酯的形式存在；它的脂肪酸酯为下式化学结构(R＝脂肪酸基)：

β-隐黄质(β-Cryptoxanthin)是一种类胡萝卜素(Carotenoid)，化学命名为(3R)-β，β-胡萝卜素-3-醇，其分子由中央共轭多烯链和末端六元环组成，且其中一个末端六元环上存在单个羟基，因此分子呈非对称型。由于中央共轭多烯链的存在，使得整个分子具有高度的不饱和性，在理论上可形成多种几何(E/Z)异构体，其中以下式全反式异构体最稳定：

β-隐黄质通常呈单体或β-隐黄质酯的形式存在于橘子、红辣椒、木瓜、南瓜、酸浆、柿子、枇杷等高等植物的花或果实组织中。一般而言，含有β-隐黄质的植物同时往往含有叶黄素、玉米黄素等其它类胡萝卜素，由于这些类胡萝卜素结构与化学性质非常相近，所以将它们完全分离非常困难。WO 2004/029275公开了一种利用复合菌剂生产玉米黄质和β-隐黄质的方法，该说明书第12表中β-隐黄质含量为2.1-3.5mg/L。CN 1388830A公开了多种类胡萝卜素的微生物制备方法，在培养过程中通过控制在培养过程中通过控制液态培养基的溶解氧的浓度，改变这样生成的类胡萝卜素化合物(虾青素、金盏花黄质、β-胡萝卜素、海胆酮、角黄素、玉米黄质、β-隐黄质、3-羟基海胆酮、adonirubin等)之比，实施例3表7数据说明在培养物中β-隐黄质的含量只是0.1mg/L。正因如此，目前市场上仅由几种β-隐黄质产品，例如Cotion公司销售的β-隐黄质产品，其β-隐黄质含量仅为0.2％，当然使其应用受到很大的限制。因此，有必要研究一种能够从天然植物中更高效率提取与分离β-隐黄质的生产工艺。在现有技术基础之上，本发明人经过大量实验研究，终于完成了从从酸浆宿萼提取β-隐黄质的方法。

【发明内容】

[要解决的技术问题]

本发明的目的是提供一种从酸浆宿萼提取含有β-隐黄质的浓缩物的方法。

本发明的另一个目的是提供一种含有β-隐黄质的浓缩物。

本发明的另一个目的是提供一种含有β-隐黄质的浓缩物的用途。

[技术方案]

本发明是通过下述技术方案实现的。

本发明涉及一种从酸浆宿萼提取含有β-隐黄质的浓缩物的方法。该方法的步骤如下：

A、原料预处理

在温度30-50℃与避光的条件下，将酸浆宿萼干燥至其水含量以酸浆宿萼重量计10％以下，再粉碎成酸浆宿萼粉；

B、酶处理

(1)取800-1400重量份水并将水温调至20～50℃，然后加入0.5-2.0重量份纤维素酶和0.1-0.4重量份果胶酶，再用无机酸或无机碱将其溶液的pH调节至4～7，在温度20～50℃下活化20-60min，于是得到一种酶处理液；

(2)把8～300重量份所述酶处理液喷洒到8-60重量份由步骤A)得到的酸浆宿萼粉中，再进行搅拌、压实、密封，在温度20～50℃下避光保温4～96h，得到一种酶处理酸浆宿萼粉；

(3)所述的酶处理酸浆宿萼粉在避光与温度30-50℃的条件下干燥至其含水量以酶处理酸浆宿萼粉重量计为10～13％；

C、提取

称取8-12重量份在步骤B)得到的干燥酶处理酸浆宿萼粉，在温度2～50℃条件下使用30-80重量份有机溶剂进行回流提取30～90min，然后分离提取液，剩余物料再重复提取3～6次，合并提取液；

合并的提取液在压力-0.06～-0.09MPa与温度20～40℃的条件下进行真空浓缩，得到一种浓缩物；

D、皂化

所述的浓缩物使用正己烷按照正己烷与所述合并提取液的体积比为1∶10～1∶4进行溶解，得到的浓缩物溶液再与20～50％碱性乙醇溶液在所述浓缩物溶液与所述碱性乙醇溶液的体积比6∶1～12∶1、温度4～50℃、避光与搅拌的条件下进行皂化反应0.5～12h，得到一种皂化液；

E、浓缩与纯化

在搅拌的条件下，使用有机酸或无机酸将所述的皂化液的pH值调节至4～7；然后在压力-0.06～-0.09MPa与温度20～40℃的条件下浓缩至干；得到的浓缩膏用乙酸乙酯溶解，其溶液进行硅胶柱色谱分离，用正己烷作为洗脱剂洗脱，收集含有β-隐黄质的洗脱部分，再在压力-0.06～-0.09MPa与温度20～40℃的条件下进行减压浓缩，得到含有β-隐黄质的浓缩物。

根据本发明的一种优选实施方式，所述的酸浆宿萼可以用酸浆根、酸浆叶或酸浆全草代替。

根据本发明的另一种优选实施方式，所述酸浆宿萼粉的粒度为20-100 目。

根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤B)使用的无机酸选自盐酸、硫酸、硝酸或磷酸；无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾。

根据本发明的另一种优选实施方式，所述的纤维素酶的酶活≥4000IU/g，所述的果胶酶的酶活≥5000IU/g。

根据本发明的另一种优选实施方式，步骤C)使用的有机溶剂选自正己烷、乙酸乙酯、六号溶剂油或石油醚。

根据本发明的另一种优选实施方式，所述的碱性乙醇溶液为氢氧化钠乙醇溶液或氢氧化钾乙醇溶液。

根据本发明的另一种优选实施方式，步骤E)使用的有机酸选自柠檬酸、苹果酸或琥珀酸，无机酸是磷酸或盐酸。

本发明还涉及采用所述方法得到的浓缩物，其特征在于它含有以浓缩物重量计10％以上的β-隐黄质。

本发明还涉及所述浓缩物在制备食品添加剂、功能性食品、药品和饲料添加剂中的用途。

下面将更详细地描述本发明。

本发明涉及一种从酸浆宿萼提取含有β-隐黄质的浓缩物的方法。该方法的步骤如下：

A、原料预处理

在温度30-50℃与避光的条件下，将酸浆宿萼干燥至其水含量以酸浆宿萼重量计10％以下，再粉碎成酸浆宿萼粉；

在本发明中，除了所述的酸浆宿萼外，还可以使用酸浆根、酸浆叶或酸浆全草。

所述的酸浆宿萼以及酸浆根、酸浆叶或酸浆全草都需要进行干燥与粉碎预处理。

在本发明中，在干燥时，可以使用在中药材加工技术中通常使用的干燥设备进行干燥，例如上海博迅实业有限公司医疗器械厂生产的GZX-9146MBE型数显鼓风干燥箱进行干燥。

在本发明中，所述的粉碎是使用在中药材加工技术中通常使用的粉碎设备对酸浆宿萼进行高速剪切粉碎，粉碎到20-100目。

本发明中，所使用的粉碎机可以是在中药材加工技术中通常使用的目前市场上销售的粉碎机，例如江阴市新友机械制造有限公司生产的食品粉碎机。通常是使用粉碎机将原料粉碎到一定粒度，然后用钢筛进行筛分，收集20-100目以下的酸浆宿萼粉。

在本发明中，所述的避光应该理解是让待处理酸浆宿萼处于密闭而不无光的环境下。

B、酶处理

(1)取800-1400重量份水并将水温调至20～50℃，然后加入0.5-2.0重量份纤维素酶和0.1-0.4重量份果胶酶，再用无机酸或无机碱将其溶液的pH调节至4～7，在温度20～50℃下活化20-60min，于是得到一种酶处理液。

纤维素酶(EC 3.2.1.4)是一种重要的酶产品，是一种复合酶，主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成。通常，将纤维素酶分成三类：C1酶、Cx酶和β葡糖苷酶。C1酶是对纤维素最初起作用的酶，破坏纤维素链的结晶结构。Cx酶是作用于经C1酶活化的纤维素、分解β-1，4-糖苷键的纤维素酶。β葡糖苷酶可以将纤维二糖、纤维三糖及其他低分子纤维糊精分解为葡萄糖。

在本发明中，所述的纤维素酶例如是南宁庞博生物工程有限公司生产纤维素酶。

根据本发明，如果所述纤维素酶的酶活低于4000IU/g，则会因为酶活力不高，而需要使用大量的纤维素酶来保证原料细胞壁破壁充分，因此，所述纤维素酶的酶活应高于4000IU/g，鉴于市场上所售纤维素酶的酶活，所述纤维素酶的酶活是4000～10000IU/g，优选地5000～9000IU/g，更优选地6000～8000IU/g。

其中，酶活定义为1克酶粉或1ml酶液于40℃与pH4.6的条件下，1小时分解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖的酶量为1个酶活单位。

果胶酶是分解果胶的一个多酶复合物，通常包括原果胶酶、果胶甲酯水解酶、果胶酸酶。通过它们的联合作用使果胶质得以完全分解。天然的 果胶质在原果胶酶作用下，转化成水可溶性的果胶；果胶被果胶甲酯水解酶催化去除甲酯基团，生成果胶酸；果胶酸经果胶酸水解酶类和果胶酸裂合酶类降解生成半乳糖醛酸。在本发明中，所述的果胶酶例如是南宁庞博生物工程有限公司生产果胶酶。

根据本发明，如果所述果胶酶的酶活低于5000IU/g，则会因为酶活力不高，而需要使用大量的果胶酶来保证将原料所含有的果胶全部水解以保证目标物得到更好的释放，因此，所述果胶酶的酶活应高于5000IU/g；鉴于市面上所售果胶酶的酶活，因此所述果胶酶的酶活是5000～12000IU/g，优选地6000～10000IU/g，更优选地8000～9000IU/g。

优选地，用800-1400重量份水溶解0.8-1.8重量份纤维素酶和0.2-0.4重量份果胶酶；更优选地，用800-1400重量份水溶解1.0-1.6重量份纤维素酶和0.2-0.3重量份果胶酶。

在这个步骤中，使用的无机酸选自盐酸、硫酸、硝酸或磷酸，优选地选自盐酸、硫酸或磷酸；更优选地选自盐酸或磷酸。

在这个步骤中，使用的无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾，优选地选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠或碳酸氢钾，更优选地选自氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠或碳酸氢钾。

在这个步骤中，纤维素酶与果胶酶均为植物体内常见的酶类，其能够保证酶活力的pH范围为4～7，为了在反应过程中保证酶的最大活力，反应液的pH不能过高，也不能过低，因此，需要用无机酸或无机碱将其酶溶液的pH调节至4～7。过高或过低的pH都会因为影响酶的稳定性而使酶遭受不可逆破坏，从而影响反应效果。

(2)把8～300重量份所述酶处理液喷洒到8-60重量份由步骤A)得到的酸浆宿萼粉中，再进行搅拌、压实、密封，在温度20～50℃下避光保温4～96h，得到一种酶处理酸浆宿萼粉。

本发明中，使用通常的机械搅拌器或搅拌设备将所述酶处理液与由步骤A)得到的酸浆宿萼粉混匀，然后使用压实机械设备将混匀混合物的密度提高，再用塑料材料进行密封，以便能够达到避光效果。在本发明中，所 使用的保温设备可以是在实验过程中经常使用的恒温水浴锅，如北京化玻联医疗器械公司生产的DZKW-C型电子恒温水浴锅。

在这个步骤中，优选地使用50～250重量份所述酶处理液与15-50重量份由步骤A)得到的酸浆宿萼粉。更优选地使用100～180重量份所述酶处理液与25-40重量份由步骤A)得到的酸浆宿萼粉。

在这个步骤中，优选地，所述酶处理液与酸浆宿萼粉的混合物在温度25～45℃下避光保温10～85h。更优选地，所述酶处理液与酸浆宿萼粉的混合物在温度30～40℃下避光保温20～75h。

(3)所述的酶处理酸浆宿萼粉在避光与温度30-50℃的条件下干燥至其含水量以酶处理酸浆宿萼粉重量计为10～13％。例如使用上海博迅实业有限公司医疗器械厂生产的GZX-9146MBE型数显鼓风干燥箱进行干燥。

C、提取

称取8-12重量份在步骤B)得到的干燥酶处理酸浆宿萼粉，在温度2～50℃条件下使用30-80重量份有机溶剂进行回流提取30～90min，然后分离提取液，剩余物料再重复提取3～6次，合并提取液。

优选地，称取8-12重量份在步骤B)得到的干燥酶处理酸浆宿萼粉，在温度10～40℃条件下使用35-70重量份有机溶剂进行回流提取40～80min。

所述的有机溶剂选自正己烷、乙酸乙酯、六号溶剂油或石油醚。其中六号溶剂油为无色透明液体，是各种低级烷烃的混合物。产品馏份范围较工业己烷宽，具有工业己烷类似的性质。能与除蓖麻油以外的多数液态油脂混溶，可溶解低级脂肪酸，符合国家标准GB 1669-96。石油醚(BP：60～90℃)为轻质石油产品，是低相对分子质量烷烃类的混合物。正己烷和乙酸乙酯是化工技术领域中非常普遍使用的溶剂。它们都是目前市场上销售的产品。

合并提取液在压力-0.06～-0.09MPa与温度20～40℃的条件下进行真空浓缩，得到一种浓缩物；

本发明中，所用到的提取及浓缩装置例如是由上海振捷实验设备有限公司生产的RE-5210A型旋转蒸发仪，容量为10L，真空泵为由巩义市予华仪器有限责任公司生产的SHZ-D(III)型循环水式真空泵。

D、皂化

所述的浓缩物使用正己烷按照正己烷与所述合并提取液的体积比为1∶10～1∶4进行溶解，得到的浓缩物溶液再与20～50％碱性乙醇溶液在所述浓缩物溶液与所述碱性乙醇溶液的体积比6∶1～12∶1、温度4～50℃、避光与搅拌的条件下进行皂化反应0.5～12h，得到一种皂化液。

20～50％碱性乙醇溶液是用氢氧化钾及氢氧化钠按照常规方法配制的。

根据本发明，如果正己烷与所述合并提取液的体积比小于1∶10，则会由于正己烷用量较少，而不能将浸膏完全溶解；如果正己烷与所述合并提取液的体积比大于1∶4，则会增大反应液的体积，而造成处理上的麻烦。在本发明中，所述正己烷与所述合并提取液的体积比优选地是1∶8～1∶4。更优选地，所述正己烷与所述合并提取液的体积比是1∶6～1∶4。

根据本发明，如果所述浓缩物溶液与所述碱性乙醇溶液的体积比大于12∶1，则会因为碱液用量不足而造成皂化反应不充分，反应液中残留大量未皂化完全的β-隐黄质酯；如果所述浓缩物溶液与所述碱性乙醇溶液的体积比小于6∶1，则会因为碱液用量太大而造成碱液的浪费及后续调节pH时酸的浪费，也会因为反应液维持长时间的高碱性条件而造成β-隐黄质单体的降解。

根据本发明，如果皂化反应时间小于0.5h，则会由于反应时间不够而造成反应不够充分；如果皂化反应时间大于12h，则会由于长时间的高碱性条件而造成β-隐黄质单体的降解。

因此，所述浓缩物溶液与所述碱性乙醇溶液的体积比优选地是8∶1～12∶1、温度10～45℃、皂化反应1.0～10h。更优选地，所述浓缩物溶液与所述碱性乙醇溶液的体积比是8∶1～10∶1、温度20～40℃、皂化反应2.0～8h。

所述的避光是如前面所述的一样。

在本发明中，所用到的搅拌设备是具有加热功能的磁力搅拌装置，如由上海鑫培仪器设备有限公司生产的DF-101S型数显自动恒温搅拌器。

E、浓缩与纯化

在搅拌的条件下，使用有机酸或无机酸将所述的皂化液的pH值调节至4～7；然后在压力-0.06～-0.09MPa与温度20～40℃的条件下浓缩至干；得到 的浓缩膏用乙酸乙酯溶解，其溶液进行硅胶柱色谱分离，用正己烷作为洗脱剂洗脱，收集含有β-隐黄质的洗脱部分，再在压力-0.06～-0.09MPa与温度20～40℃的条件下进行减压浓缩，得到含有β-隐黄质的浓缩物。

在本发明的浓缩与纯化步骤中，所述的有机酸选自柠檬酸、苹果酸或琥珀酸，优选地柠檬酸或苹果酸。所述的无机酸是磷酸或盐酸。

根据本发明，所述皂化液的pH值小于4，则皂化反应过程中所形成的皂会沉淀析出，并夹带大量的β-隐黄质，从而造成β-隐黄质的损失；所述皂化液的pH值大于7，则会由于皂化液在偏碱性条件下，造成β-隐黄质的降解。因此，所述皂化液的pH值选用4～7，优选地4.5～6.5；更优选地5.0-6.0。

得到的浓缩膏用乙酸乙酯溶解，其溶液采用硅胶柱色谱法进行分离。

硅胶层析柱制备：使用正己烷活化层析用硅胶，采用湿法装填，柱床长径比为3∶1～6∶1，使用正己烷平衡色谱柱。使用的硅胶是目前市场上销售的硅胶，例如青岛海洋化工厂分厂生产的G型硅胶，使用的层析柱为定制的玻璃层析柱，例如柱内径为2.0cm，柱高为32cm。

装样品：按照待分离样品(即乙酸乙酯溶解的溶液)体积与柱床体积之比为1∶20，用滴管将待分离样品沿柱壁缓慢的加入到层析柱表面，注意不要破坏柱床表面。

吸附条件：在正常压力下，将下阀门打开，待分离样品由于柱内的正己烷缓慢流出而慢慢的浸入到硅胶柱内；

解吸条件：以100％正己烷作为洗脱剂，在正常压力下，让洗脱剂自然流下.进行洗脱，收集含有β-隐黄质的洗脱部分；

收集的洗脱部分再在压力-0.06～-0.09MPa与温度20～40℃的条件下进行减压浓缩，得到含有β-隐黄质的浓缩物。使用的减压浓缩设备是如前面所述的设备。

得到的浓缩物采用常规HPLC方法进行检测β-隐黄质的含量。

本发明还涉及采用所述方法得到的浓缩物，其特征在于它含有以浓缩物重量计10％以上的β-隐黄质。本发明的产品的β-隐黄质含量远远高于现有技术或现有产品所达到的含量。

所述的浓缩物除了β-隐黄质外还含有少量玉米黄素、叶黄素等其它类 胡萝卜素及一定量的脂溶性杂质。

本发明还涉及所述浓缩物在制备食品添加剂、功能性食品、药品和饲料添加剂中的用途。

应该指出，可以按照食品添加剂、功能性食品、药品和饲料添加剂的相关规定使用和添加本发明含有β-隐黄质的浓缩物。

[有益效果]

本发明的有益效果是：

目前，我国的酸浆资源丰富，主要集中于生产酸浆果脯、酸浆保健型饮料及酸浆酒等产品，或者酸浆宿萼作为药材原料低价销售或直接丢弃处理，造成资源的极大浪费。采用本发明的方法不但解决了现有技术中提取β-隐黄质效率低的技术缺陷，而且还获得价值高的β-隐黄质产品，本发明产品的β-隐黄质含量远远高于现有技术或现有产品所达到的含量，因此，为β-隐黄质产品的应用提供了良好前景。本发明原料易获得，提取工艺简单，所得产品含量高，综合成本可控，适合于工业化生产及延长产业链。

【具体实施方式】

实施例1：本发明含有β-隐黄质的浓缩物的制备

实施步骤如下：

A、原料预处理

将收集的酸浆宿萼置于上海博迅实业有限公司医疗器械厂生产的GZX-9146MBE型鼓风干燥箱中，在温度45℃下进行干燥至含水量＜10％，称取1kg干燥宿萼，经高速剪切粉碎至≤20目。称取100g宿萼粉末，置于1000mL量筒中，其体积为454mL，经计算其堆积密度为0.22g/mL。

B、酶处理

(1)取1000ml水并将水温调至35℃，然后加入1.0g南宁庞博生物工程有限公司生产的纤维素酶和0.2g南宁庞博生物工程有限公司生产的果胶酶，再用盐酸或氢氧化钠稀水溶液将其溶液的pH调节至5.0，在温度25℃下活化30min，于是得到一种酶处理液；

(2)把80克所述酶处理液喷洒到30g由步骤A)得到的酸浆宿萼粉中，一边向加物料，一边喷洒酶处理液，再进行搅拌、压实、用保鲜膜密封，在 温度25℃的恒温水浴锅中避光保温65h，得到一种酶处理酸浆宿萼粉；

(3)所述的酶处理酸浆宿萼粉均匀置于不锈钢托盘中，在上海博迅实业有限公司医疗器械厂生产的GZX-9146MBE型数显鼓风干燥箱中在避光与温度45℃的条件下干燥至其含水量以酶处理酸浆宿萼粉重量计为10.0％；

C、提取

称取10g在步骤B)得到的干燥酶处理酸浆宿萼粉，加入到10L旋转蒸发仪中，在温度20℃条件下使用40g正己烷进行回流提取30min，然后分离提取液，剩余物料再重复提取3次，合并提取液；

使用上海振捷实验设备有限公司生产的RE-5210A型旋转蒸发仪，合并提取液在压力-0.09MPa与温度35℃的条件下进行真空浓缩，得到一种橘红色浓缩物；

D、皂化

称取40g KOH于500mL烧杯中，在搅拌情况下缓慢加入100mL水使之全部溶解，然后向其中加入95％乙醇100mL，得到20％KOH乙醇溶液。

所述的橘红色浓缩物使用正己烷按照正己烷与所述合并提取液的体积比为1∶5进行溶解，得到浓缩物溶液装到三角瓶中。

将盛有浓缩物溶液的三角瓶置于磁力搅拌器上，在所述浓缩物溶液与20％KOH乙醇溶液的体积比6∶1、温度35℃、避光与搅拌速度60rpm/min的条件下进行皂化反应2.0h，反应终止时pH值为10.0，得到一种皂化液；

E、浓缩与纯化

在搅拌的条件下，使用磷酸将所述的皂化液的pH值调节至7.0；静置30min后，取上层反应液，然后在压力-0.09MPa与温度35℃的条件下浓缩至干；得到的浓缩膏用乙酸乙酯溶解得到待分离样品，其溶液进行硅胶柱色谱分离。

取层析用硅胶，加入正己烷并搅拌均匀，超声脱气10min后装柱，柱床高12cm，柱床直径为2.0cm，柱体积约为37mL，用正己烷平衡层析柱。取待分离样品2mL，用滴管沿柱壁缓慢均匀的加入到硅胶柱内，打开下阀门，待样品完全浸入硅胶柱后，反复用正己烷洗脱，收集含有β-隐黄质的洗脱部分，再使用上海振捷实验设备有限公司生产的RE-5210A型旋转蒸发 仪，在压力-0.09MPa与温度20℃的条件下进行减压浓缩，得到含有β-隐黄质的浓缩物，采用常规HPLC方法检测其β-隐黄质含量为10.87％。

实施例2：本发明含有β-隐黄质的浓缩物的制备

实施步骤如下：

A、原料预处理

将收集的酸浆宿萼置于上海博迅实业有限公司医疗器械厂生产的GZX-9146MBE型鼓风干燥箱中，在温度35℃下进行干燥至含水量＜10％，称取1kg干燥宿萼，经高速剪切粉碎至≤20目，采用与实施例1同样方式测定其堆积密度为0.22g/mL。

B、酶处理

(1)取800ml水并将水温调至50℃，然后加入2.0g与实施例1同样的纤维素酶和0.1g与实施例1同样的果胶酶，再用盐酸或氢氧化钠稀水溶液将其溶液的pH调节至4.0，在温度40℃下活化60min，于是得到一种酶处理液；

(2)把8克所述酶处理液喷洒到8g由步骤A)得到的酸浆宿萼粉中，一边向加物料，一边喷洒酶处理液，再进行搅拌、压实、用保鲜膜密封，在温度40℃的恒温水浴锅中避光保温4h，得到一种酶处理酸浆宿萼粉；

(3)所述的酶处理酸浆宿萼粉均匀置于不锈钢托盘中，在上海博迅实业有限公司医疗器械厂生产的GZX-9146MBE型数显鼓风干燥箱中在避光与温度35℃的条件下干燥至其含水量以酶处理酸浆宿萼粉重量计为11.2％；

C、提取

称取12g在步骤B)得到的干燥酶处理酸浆宿萼粉，加入到10L旋转蒸发仪中，在温度2℃条件下使用20g正己烷进行回流提取90min，然后分离提取液，剩余物料再重复提取2次，合并提取液；

使用上海振捷实验设备有限公司生产的RE-5210A型旋转蒸发仪，合并提取液在压力-0.08MPa与温度40℃的条件下进行真空浓缩，得到一种橘红色浓缩物；

D、皂化

按照与实施例1同样方式制备得到50％KOH乙醇溶液。

所述的橘红色浓缩物使用正己烷按照正己烷与所述合并提取液的体积比为1∶4进行溶解，得到浓缩物溶液装到三角瓶中。

将盛有浓缩物溶液的三角瓶置于磁力搅拌器上，在所述浓缩物溶液与50％KOH乙醇溶液的体积比12∶1、温度4℃、避光与搅拌速度60rpm/min的条件下进行皂化反应12.0h，反应终止时pH值为10.2，得到一种皂化液；

E、浓缩与纯化

在搅拌的条件下，使用磷酸将所述的皂化液的pH值调节至4.0；静置35min后，取上层反应液，然后在压力-0.08MPa与温度40℃的条件下浓缩至干；得到的浓缩膏用乙酸乙酯溶解得到待分离样品，其样品按照与实施例1的同样方式进行硅胶柱色谱分离，得到含有β-隐黄质的浓缩物，采用常规HPLC方法检测其β-隐黄质含量为10.85％。

实施例3：本发明含有β-隐黄质的浓缩物的制备

实施步骤如下：

A、原料预处理

将收集的酸浆宿萼置于上海博迅实业有限公司医疗器械厂生产的GZX-9146MBE型鼓风干燥箱中，在温度30℃下进行干燥至含水量＜10％，称取1kg干燥宿萼，经高速剪切粉碎至≤20目，采用与实施例1同样方式测定其堆积密度为0.21g/mL。

B、酶处理

(1)取1400ml水并将水温调至20℃，然后加入0.5g与实施例1同样的纤维素酶和0.3g与实施例1同样的果胶酶，再用盐酸或氢氧化钠稀水溶液将其溶液的pH调节至7.0，在温度20℃下活化20min，于是得到一种酶处理液；

(2)把150g所述酶处理液喷洒到50g由步骤A)得到的酸浆宿萼粉中，一边向加物料，一边喷洒酶处理液，再进行搅拌、压实、用保鲜膜密封，在温度20℃的恒温水浴锅中避光保温96h，得到一种酶处理酸浆宿萼粉；

(3)所述的酶处理酸浆宿萼粉均匀置于不锈钢托盘中，在上海博迅实业有限公司医疗器械厂生产的GZX-9146MBE型数显鼓风干燥箱中在避光与温度30℃的条件下干燥至其含水量以酶处理酸浆宿萼粉重量计为12.2％；

C、提取

称取8g在步骤B)得到的干燥酶处理酸浆宿萼粉，加入到10L旋转蒸发仪中，在温度45℃条件下使用68g正己烷进行回流提取40min，然后分离提取液，剩余物料再重复提取4次，合并提取液；

使用上海振捷实验设备有限公司生产的RE-5210A型旋转蒸发仪，合并提取液在压力-0.06MPa与温度30℃的条件下进行真空浓缩，得到一种橘红色浓缩物；

D、皂化

按照与实施例1同样方式制备得到40％NaOH乙醇溶液。

所述的橘红色浓缩物使用正己烷按照正己烷与所述合并提取液的体积比为1∶6进行溶解，得到浓缩物溶液装到三角瓶中。

将盛有浓缩物溶液的三角瓶置于磁力搅拌器上，在所述浓缩物溶液与40％KOH乙醇溶液的体积比10∶1、温度50℃、避光与搅拌速度65rpm/min的条件下进行皂化反应0.5h，反应终止时pH值为10.4，得到一种皂化液；

E、浓缩与纯化

在搅拌的条件下，使用磷酸将所述的皂化液的pH值调节至6.0；静置30min后，取上层反应液，然后在压力-0.06MPa与温度30℃的条件下浓缩至干；得到的浓缩膏用乙酸乙酯溶解得到待分离样品，其样品按照与实施例1的同样方式进行硅胶柱色谱分离，得到含有β-隐黄质的浓缩物，采用常规HPLC方法检测其β-隐黄质含量为10.76％。

实施例4：本发明含有β-隐黄质的浓缩物的制备

实施步骤如下：

A、原料预处理

将收集的酸浆宿萼置于上海博迅实业有限公司医疗器械厂生产的GZX-9146MBE型鼓风干燥箱中，在温度40℃下进行干燥至含水量＜10％，称取1kg干燥宿萼，经高速剪切粉碎至≤20目，采用与实施例1同样方式测定其堆积密度为0.22g/mL。

B、酶处理

(1)取1200ml水并将水温调至40℃，然后加入1.5g与实施例1同样的 纤维素酶和0.4g与实施例1同样的果胶酶，再用盐酸或氢氧化钠稀水溶液将其溶液的pH调节至6.0，在温度50℃下活化40min，于是得到一种酶处理液；

(2)把200g所述酶处理液喷洒到60g由步骤A)得到的酸浆宿萼粉中，一边向加物料，一边喷洒酶处理液，再进行搅拌、压实、用保鲜膜密封，在温度50℃的恒温水浴锅中避光保温80h，得到一种酶处理酸浆宿萼粉；

(3)所述的酶处理酸浆宿萼粉均匀置于不锈钢托盘中，在上海博迅实业有限公司医疗器械厂生产的GZX-9146MBE型数显鼓风干燥箱中在避光与温度40℃的条件下干燥至其含水量以酶处理酸浆宿萼粉重量计为12.9％；

C、提取

称取9g在步骤B)得到的干燥酶处理酸浆宿萼粉，加入到10L旋转蒸发仪中，在温度50℃条件下使用30g正己烷进行回流提取68min，然后分离提取液，剩余物料再重复提取6次，合并提取液；

使用上海振捷实验设备有限公司生产的RE-5210A型旋转蒸发仪，合并提取液在压力-0.09MPa与温度20℃的条件下进行真空浓缩，得到一种橘红色浓缩物；

D、皂化

按照与实施例1同样方式制备得到30％KOH乙醇溶液。

所述的橘红色浓缩物使用正己烷按照正己烷与所述合并提取液的体积比为1∶7进行溶解，得到浓缩物溶液装到三角瓶中。

将盛有浓缩物溶液的三角瓶置于磁力搅拌器上，在所述浓缩物溶液与30％KOH乙醇溶液的体积比8∶1、温度15℃、避光与搅拌速度68rpm/min的条件下进行皂化反应8h，反应终止时pH值为10.3，得到一种皂化液；

E、浓缩与纯化

在搅拌的条件下，使用磷酸将所述的皂化液的pH值调节至5.0；静置30min后，取上层反应液，然后在压力-0.09MPa与温度20℃的条件下浓缩至干；得到的浓缩膏用乙酸乙酯溶解得到待分离样品，其样品按照与实施例1的同样方式进行硅胶柱色谱分离，得到含有β-隐黄质的浓缩物，采用常规HPLC方法检测其β-隐黄质含量为10.65％。

实施例5：本发明含有β-隐黄质的浓缩物的制备

实施步骤如下：

A、原料预处理

将收集的酸浆宿萼置于上海博迅实业有限公司医疗器械厂生产的GZX-9146MBE型鼓风干燥箱中，在温度50℃下进行干燥至含水量＜10％，称取1kg干燥宿萼，经高速剪切粉碎至≤20目，采用与实施例1同样方式测定其堆积密度为0.21g/mL。

B、酶处理

(1)取900ml水并将水温调至25℃，然后加入0.8g与实施例1同样的纤维素酶和0.15g与实施例1同样的果胶酶，再用盐酸或氢氧化钠稀水溶液将其溶液的pH调节至5.5，在温度30℃下活化50min，于是得到一种酶处理液；

(2)把300g所述酶处理液喷洒到40g由步骤A)得到的酸浆宿萼粉中，一边向加物料，一边喷洒酶处理液，再进行搅拌、压实、用保鲜膜密封，在温度30℃的恒温水浴锅中避光保温45h，得到一种酶处理酸浆宿萼粉；

(3)所述的酶处理酸浆宿萼粉均匀置于不锈钢托盘中，在上海博迅实业有限公司医疗器械厂生产的GZX-9146MBE型数显鼓风干燥箱中在避光与温度50℃的条件下干燥至其含水量以酶处理酸浆宿萼粉重量计为10.8％；

C、提取

称取11g在步骤B)得到的干燥酶处理酸浆宿萼粉，加入到10L旋转蒸发仪中，在温度12℃条件下使用80g正己烷进行回流提取60min，然后分离提取液，剩余物料再重复提取5次，合并提取液；

使用上海振捷实验设备有限公司生产的RE-5210A型旋转蒸发仪，合并提取液在压力-0.08MPa与温度25℃的条件下进行真空浓缩，得到一种橘红色浓缩物；

D、皂化

按照与实施例1同样方式制备得到35％NaOH乙醇溶液。

所述的橘红色浓缩物使用正己烷按照正己烷与所述合并提取液的体积比为1∶8进行溶解，得到浓缩物溶液装到三角瓶中。

将盛有浓缩物溶液的三角瓶置于磁力搅拌器上，在所述浓缩物溶液与35％KOH乙醇溶液的体积比9∶1、温度40℃、避光与搅拌速度60rpm/min的条件下进行皂化反应4h，反应终止时pH值为10.5，得到一种皂化液；

E、浓缩与纯化

在搅拌的条件下，使用磷酸将所述的皂化液的pH值调节至4.5；静置30min后，取上层反应液，然后在压力-0.08MPa与温度25℃的条件下浓缩至干；得到的浓缩膏用乙酸乙酯溶解得到待分离样品，其样品按照与实施例1的同样方式进行硅胶柱色谱分离，得到含有β-隐黄质的浓缩物，采用常规HPLC方法检测其β-隐黄质含量为10.87％。

实施例6：本发明含有β-隐黄质的浓缩物的制备

实施步骤如下：

A、原料预处理

将收集的酸浆宿萼置于上海博迅实业有限公司医疗器械厂生产的GZX-9146MBE型鼓风干燥箱中，在温度48℃下进行干燥至含水量＜10％，称取1kg干燥宿萼，经高速剪切粉碎至≤20目，采用与实施例1同样方式测定其堆积密度为0.20g/mL。

B、酶处理

(1)取1100ml水并将水温调至30℃，然后加入1.8g与实施例1同样的纤维素酶和0.35g与实施例1同样的果胶酶，再用盐酸或氢氧化钠稀水溶液将其溶液的pH调节至6.5，在温度45℃下活化45min，于是得到一种酶处理液；

(2)把250g所述酶处理液喷洒到18g由步骤A)得到的酸浆宿萼粉中，一边向加物料，一边喷洒酶处理液，再进行搅拌、压实、用保鲜膜密封，在温度45℃的恒温水浴锅中避光保温20h，得到一种酶处理酸浆宿萼粉；

(3)所述的酶处理酸浆宿萼粉均匀置于不锈钢托盘中，在上海博迅实业有限公司医疗器械厂生产的GZX-9146MBE型数显鼓风干燥箱中在避光与温度48℃的条件下干燥至其含水量以酶处理酸浆宿萼粉重量计为11.8％；

C、提取

称取10.5g在步骤B)得到的干燥酶处理酸浆宿萼粉，加入到10L旋转 蒸发仪中，在温度32℃条件下使用55g正己烷进行回流提取75min，然后分离提取液，剩余物料再重复提取3次，合并提取液；

使用上海振捷实验设备有限公司生产的RE-5210A型旋转蒸发仪，合并提取液在压力-0.06MPa与温度28℃的条件下进行真空浓缩，得到一种橘红色浓缩物；

D、皂化

按照与实施例1同样方式制备得到45％KOH乙醇溶液。

所述的橘红色浓缩物使用正己烷按照正己烷与所述合并提取液的体积比为1∶10进行溶解，得到浓缩物溶液装到三角瓶中。

将盛有浓缩物溶液的三角瓶置于磁力搅拌器上，在所述浓缩物溶液与45％KOH乙醇溶液的体积比7∶1、温度25℃、避光与搅拌速度64rpm/min的条件下进行皂化反应6.0h，反应终止时pH值为10.1，得到一种皂化液；

E、浓缩与纯化

在搅拌的条件下，使用磷酸将所述的皂化液的pH值调节至5.5；静置30min后，取上层反应液，然后在压力-0.06MPa与温度28℃的条件下浓缩至干；得到的浓缩膏用乙酸乙酯溶解得到待分离样品，其溶液按照与实施例1的同样方式进行硅胶柱色谱分离，得到含有β-隐黄质的浓缩物，采用常规HPLC方法检测其β-隐黄质含量为10.64％。