影响饱腹感、脂类代谢和脂肪利用的组合物和方法

摘要

本发明提供(1)在给予影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项的脂肪酸酰胺的动物体内差别表达的基因和(2)涉及鉴定影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项的新化合物的基因的应用的组合物和方法。

说明书

相关申请的交叉参考

本申请要求于2008年8月14日提交的美国临时申请号61/188907的优先权，将其公开内容引入本文作为参考。

背景技术

发明领域

本发明通常涉及在动物体内差别表达的基因，特别涉及在定期地和长期地给予影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项的脂肪酸酰胺的动物体内差别表达的基因，涉及差别表达的基因在识别影响所述参数中的一项或多项的新化合物中的应用，涉及在动物体内调节相关的表现型。

相关领域说明

脂肪过多和肥胖被认为是世界范围内的人类健康问题。世界卫生组织估计有超过十亿超重的成人，其中仅少于三分之一被划分为肥胖。此外，肥胖也日益被认为是动物的问题，特别是伴侣动物如狗和猫的问题。根据疾病控制中心(CDC)，肥胖至少与其他的健康问题的风险密切相关，所述的其他的健康问题包括高血压、血脂异常、II型糖尿病、心脏病、中风、睡眠呼吸暂停和某些癌症，例如乳腺癌、子宫内膜癌和结肠癌。个体变肥胖的危险因素包括遗传学、情绪/压力、进食过量和久坐的生活方式。

随着对与过度肥胖相关的风险的公共交流的增加，至少在20年前就开始了与肥胖的斗争。已经建立并且重新确立了营养推荐量，其得到了广泛地传播、甚至在学校中被教授。然而，肥胖和超重的人的数量仍在增加。除了健康的饮食和更有规律的体力活动，现在经常开出减肥药物处方。这些药物在不同水平上发挥作用，其包括模拟胃饱满、降低食欲或限制脂肪吸收。然而，部分由于随着时间效果降低和不希望的副作用出现，尚未发现这些药物满足长期治疗。至少基于这些原因，患者对抗肥胖药物的顺应性不能令人满意。显然，在本领域中需要发现并开发新的抗肥胖的药物或膳食补充剂。

脂肪酸酰胺(FAE)或N-酰基-乙醇酰胺是含有连接到乙醇胺上的脂肪酸部分的结构上相关的脂质。FAE是天然存在的脂质家族，其在植物和动物组织中发现，表现出对健康的作用，例如调节能量平衡、控制食物摄取和抗炎性质。FAE也在体内由N-乙酰化磷脂酰-乙醇酰胺衍生物形成。在生物组织(例如脑和神经元细胞)中发现的最普遍的FAE是花生四烯酸乙醇胺(anandamide)(N-花生四烯酰-乙醇胺)和N-油酰-乙醇酰胺(OEA)。在食物中也发现了少量的OEA，并且其主要来自于内源性合成(Di Marzo V，1999，Life Sci.65：645-55)。

在啮齿动物中，报道了腹膜内给予OEA诱导饱腹感和脂质底物的外周利用，从而导致身体脂肪获取减少(Thabuis C等，2007，脂质技术(Lipid Technology)19：225-7)。体外研究和敲除动物模型已经揭示出作用的某些机制，例如PPAR-α信号(Fu J等人，2003，Nature 425：90-3)、近侧小肠的FAT/CD36-依赖的脂质摄取(Yang Y等人，2007，Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol.292：R235-41)、选择性神经元激活(Ahern GP，2003，J Biol Chem.278：30429-34)和生长激素释放肽(ghrelin)信号传导(Cani PD等人，2004，Br J Nutr.92：757-61)。近侧小肠似乎是饱腹感控制的靶器官(ThabuisC等人，如上)。已经表明OEA调节野生型小鼠的食物摄取，但却不调节PPARα(-/-)小鼠的食物摄取。最近发现OEA也能够结合到G-蛋白偶联的大麻素受体GPR119上(Overton HA等人，2006，Cell Metab.3：167-75)。当腹膜内施用时，OEA通过影响若干参数来减少食物摄取：食量的下降、首餐摄取的延迟、和用餐间隔的增加(Oveisi F等人，2004，Pharmacol Res.49：461-6)。OEA口服施用的作用也在急性管饲法施用后24小时进行了检验，并且已经表现出在最初12小时(Id)期间显著减少的食物摄取。然而，前述的研究仅仅在短时期(对于腹膜内施用，6小时至11天；对于口服施用，24小时)内进行，迄今尚未显示出对饱腹感或与身体脂肪相关的其他参数的长期作用。

考虑到处理肥胖的现行方法的问题，一直需要用于筛选物质从而决定其是否可能用于促进动物的非肥胖表现型和使用该物质调节动物的脂肪组织的量的新的方法和组合物。

发明概述

因此，本发明的目的是提供1种或多种在具有表现型的动物体内差别表达的基因或基因片段，所述的表现型包括身体脂肪和血浆甘油三酯的降低和由减少的食物摄取所测定的饱腹感的增加(RBF/IS表现型)，这是由影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项的物质的长期的定期摄入所引起的。

本发明的另一个目的是提供组合产品，其包括多种在具有表现型的动物体内差别表达的多核苷酸，所述的表现型包括由影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项的物质的长期的定期摄入所引起的RBF/IS表现型。

本发明的另一个目的是提供2种或更多种多核苷酸或多肽探针和装置(如含有探针的基质阵列)的组合物，所述的多核苷酸或多肽探针适合于检测在具有RBF/IS表现型的动物体内差别表达的基因的表达，所述的RBF/IS表现型是由影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项的物质的长期的定期摄入所引起的。

本发明的进一步的目的是：与正常的或未处理的动物相比，提供检测在具有RBF/IS表现型的动物体内差别表达的1种或多种基因的差别表达的方法，所述的RBF/IS表现型是由影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项的物质的长期的定期摄入所引起的。

本发明的另一个目的是：与正常的或未处理的动物相比，提供测量试验物质对在具有RBF/IS表现型的动物体内差别表达的1种或多种基因的表达特性的影响的方法，所述的RBF/IS表现型是由影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项的物质的长期的定期摄入所引起的。

本发明的进一步的目的是提供促进动物的RBF/IS表现型的方法。

使用多核苷酸或多肽的新组合实现一个或多个这些其他的目的，所述的多核苷酸或多肽代表在具有RBF/IS表现型的动物体内差别表达的基因或基因片段，所述的RBF/IS表现型是由影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项的物质的长期的定期摄入所引起的。用多核苷酸得到组合物、探针、基于探针的装置和测定在具有RBF/IS表现型的动物体内差别表达的多核苷酸的状态(与正常的或未处理的动物相比)，其用于实现以上所确定的目的(例如预测和诊断与表现型相关的情况)，并且用于筛选测定是否可能用于促进表现型的物质。一旦确定，这些物质可以用于促进表现型。也提供了各种试剂盒，其包含探针、利用探针的装置和物质的组合，以及用于处理信息的各种计算机程序和涉及差别表达的基因的交流信息的交流工具及其使用方法。

本发明的其他和进一步的目的、特征和优点对本领域的技术人员而言是很明显的。

发明详述

定义

除非另有特别说明，本文出现的全部百分数按基于干物质的组合物的重量计。技术人员理解术语“基于干物质”是指在除去组合物中的任何游离水分后测定组合物中成分的浓度。

为了避免不得不详细地陈列和描述每一个范围和范围内的每一个值，本文使用速记法表示的范围。能够选择范围内的任意合适的值，在合适时，可以是较大的值、较小的值或范围的端值。

除非另有说明，否则本文出现的剂量是以毫克或克/千克体重(mg/kg或g/kg)计。

除非上下文中明确地另有说明，如本文所用，词的单数形式包括复数形式，反之亦然。因此，“一种”和“该”通常包括各术语的复数形式。例如，“一种动物”、“一种方法”或“一种物质”包括复数形式的“动物”、“方法”或“物质”。类似地，“包含”、“包括”和“含有”应当被解释为包含性的，而不是排他性的。

术语“动物”是指有脂肪组织的人或其他动物，包括鸟、牛、犬科动物、马、猫科动物、山羊(hircine)、鼠、羊和猪。当在对比试验主题的上下文中使用该术语时，所比较的动物是相同物种的并且可能是相同种族或品种的动物。“伴侣动物”是任何家养的动物，其非限制性地包括猫、狗、兔、豚鼠、雪貂、仓鼠、小鼠、沙土鼠、马、奶牛、山羊、绵羊、驴、猪等。优选地，动物是人或伴侣动物(例如犬科动物或猫科动物)。

术语“抗体”是指与特定的抗原结合的任意的免疫球蛋白，其包括IgG、IgM、IgA、IgD和IgE抗体。该术语包括多克隆抗体、单克隆抗体、单价抗体、人源化抗体、杂缀合抗体、具有多表位特异性的抗体组合物、嵌合抗体、双特异性抗体、双体、单链抗体和抗体片段(例如Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv)或其他抗原结合片段。

术语“阵列”是指基质上的至少2个探针的有序的排列。至少1个探针是对照或标准品，且至少1个探针是诊断探针。基质上的约2至约40,000个探针的排列保证在探针和样品多核苷酸或多肽之间所形成的每一个标记的复合物的大小和信号强度是各自可辨别的。

术语“结合复合物”是指当样品中的多肽特异性地结合(如本文所定义)到结合伙伴(例如抗体或其功能片段)上时所形成的复合物。

如本文所用的，“膳食补充剂”是除动物的正常饮食以外的所要摄入的产品。膳食补充剂可以是任意的形式，例如固体、液体、凝胶、片剂、胶囊、粉剂等。优选地，其以方便的剂型提供。在某些实施方案中，其以散装的销售包装(例如整装粉剂或液体)提供。在其他的实施方案中，添加剂以散装的量包含在其他食物(例如点心、零食(treats)、补充棒、饮料等)。

术语“差别表达”是指增加的或上调的基因表达，或者指减少的或下调的基因表达，其通过样品中转录的信使RNA或翻译的蛋白的不存在、存在或至少2倍的变化来检测。

术语“有效量”是指有效地达到特定的生物学效果(例如本文所述的促进RBF/IS表现型)的化合物、材料、组合物、药物或其他材料的量。

术语“食物”或“食物组合物”是指由动物(包括人)摄取并且向其提供营养的组合物。如本文所用的，“为人食用所配制的食品”是特异性地由人摄取的任意的组合物。“宠物食品”是由宠物、优选地由伴侣动物食用的组合物。“全成分和营养平衡的宠物食品”是以适当的量和比例包含所有已知的对于食品的预期接受者或消费者所需的营养素的食品，所述营养素基于例如在伴侣动物营养的领域中公认的权威推荐。因而这类食品能用作摄取饮食的单一来源来维持生命或促进生产，而不添加补充性的营养来源。营养平衡的宠物食物组合物是本领域中公知的和广泛使用的。

术语“片段”是指(1)寡核苷酸或多核苷酸序列，其是完整序列的一部分并且具有与特定用途的完整的多核苷酸序列相同或相似的活性，或者(2)肽或多肽序列，其是完整序列的一部分并且具有与特定用途的完整的多肽序列相同或相似的活性。这些片段能够包含适合于特定用途的任意数量的核苷酸或氨基酸。通常，寡核苷酸或多核苷酸片段含有至少约10、50、100或1000个核苷酸，多肽片段含有至少约4、10、20或50个来自完整序列的连续的氨基酸。该术语包括片段的多核苷酸和多肽变体。

术语“基因”是指涉及产生多肽的完整的或部分的DNA片段，其包括在编码区之前或之后的区域(先导序列和尾随序列)和位于各编码段(外显子)之间的间插序列(内含子)。该术语包括与基因编码序列的互补链杂交的任意的DNA序列。

术语“基因产物”是指基因的转录产物例如mRNA或其衍生物(例如cDNA)，或者基因转录物的翻译产物。术语“基因产物”通常是指翻译产物，其是蛋白质。在本文中，术语“基因产物”可以与术语“蛋白质”互换使用。

术语“同系物”是指(1)多核苷酸，其包括来自相同或不同的动物种属的多核苷酸，其具有超过30％、50％、70％或90％的与参照多核苷酸的序列相似性，并且其具有与参照多核苷酸相同或基本相同的性质和表现出与参照多核苷酸相同或基本相同的功能、或者在严格条件下能够特异性地杂交到参照多核苷酸，或者(2)多肽，其包括来自相同或不同的动物种属的多肽，其具有超过30％、50％、70％或90％的与参照多肽的序列相似性，并且其具有与参照多肽相同或基本相同的性质和表现出与参照多肽相同或基本相同的功能、或者能够特异性地与参照多肽结合。当其指全长编码序列的片段时，那些片段的功能可以简单地编码某个序列的多肽的选定的部分，或者是能杂交到编码该多肽的另一个多核苷酸片段的适当的相似序列。当其指多肽的片段时，那些片段的功能可以简单地是形成适合于产生抗体的表位。用本领域的技术人员已知的方法确定2个多肽序列或2个多核苷酸序列的序列相似性，例如Karlin和Altschul的算法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：2264-2268(1990))。将该算法引入Altschul等人的NBLAST和XBLAST程序(J.Mol.Biol.215：403-410(1990))。为了获得用于对比目的的缺口比对(gapped alignments)，能够如Altschul等人(Nucl.Acids Res.25：3389-3402(1997))所述使用Gapped Blast。当使用BLAST和Gapped BLAST程序时，使用各程序(例如XBLAST和NBLAST)的默认参数。参见http://ww.ncbi.nlm.nih.gov。

术语“杂交复合体”是指当1个多核苷酸的嘌呤与互补的多核苷酸的嘧啶经氢键连接(例如5’-A-G-T-C-3’与3’-T-C-A-G-5’成碱基对)时在样品多核苷酸之间形成的复合体。互补的程度和核苷酸类似物的使用影响杂交反应的效率和严格性。

术语“联合(in conjunction)”是指对动物给予药物、食物或其他物质，它们(1)共同在组合物(特别是食物组合物)中，或者(2)分别在大约同时或周期地、用相同或不同的施用途径、以相同或不同的频率将药物、食物或其他物质给予动物。“周期地”是指按照具体物质的可接受的剂量日程表给予物质。“大约同时”通常指同时或在彼此的约72小时之内给予物质(食物或药物)。“联合”特别包括施用方案，其中在规定期间内给予物质(例如药物)和无期限地给予本发明的组合物。

术语“个体”当其指动物时是指任意物种或品种的个体动物。

如本文所用的“长期”施用通常指超过1个月的时期。考虑超过2、3或4个月的时期。也包括更延长的时期(其包括超过5、6、7、8、9或10个月)。也包括超过11个月或1年的时期。本文也考虑超过1、2、3或更多年的更长期的使用。在某些动物的情况下，可以预想向动物定期地给予用现有方法鉴别的物质。如本文所用的“定期”是指至少每周施用。考虑更频繁的施用，例如每周2次或3次。也包括包含至少每天1次、2次、3次或更多次施用的疗法。不管本文是否特别举例，都认为任意的施用频率是有用的。技术人员将理解施用频率将是所给予的物质的函数，并且某些组合物可能需要更高或更低频率的施用从而维持所需要的生物化学、生理学或基因表达作用，即所述的作用包括食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项，以及与此有关的基因表达特性。术语“长期的定期”是指物质长期进行定期地施用。

如所用的与表现出RBF/IS表现型的个体相关的“正常”或“正常个体”或“正常动物”是指没有由与RBF/IS表现型相关的基因的差别表达引起的分子的、生物化学的、生理学的、细胞的、系统的和身体的效应。

术语“口服”是指动物摄食或者对人饲喂或对动物饲喂1种或多种本文所述的物质。本文中，术语“摄入”与术语“口服”互换使用。其中，指导人口服或饲喂物质，这种指导可以是指导和/或告知人使用该物质可以和/或将带来相应的益处。这种指导可以是口头指导(例如通过来自例如医生、兽医或其他健康专业人员、或者广播或电视媒体(即广告)的口头指导)、或者书面指导(例如通过来自例如医生、兽医或其他健康专业人员(例如处方)、销售专业人员或组织(例如通过营销宣传材料、小册子或其他说明性附件)、文字媒体(例如互联网、电子邮件或其他计算机相关的媒体)的书面指导)、和/或与该物质相关的包装。

术语“多核苷酸”或“寡核苷酸”是指核苷酸的聚合体。该术语包括DNA和RNA(包括cDNA和mRNA)分子，其为单链或双链序列以及单链序列的线状或环状形式的互补序列。该术语也包括片段、变体、同系物和等位基因，在序列适宜时，其具有与原始序列相同或基本相同的性质并表现出与原始序列相同或基本相同的功能。具体地讲，该术语包括来自不同物种(例如鼠和狗或猫)的同系物。在比对时，序列可以是完全互补的(无不匹配)或者可以有多达约30％序列不匹配。优选地，对于多核苷酸，链含有约50-10,000个核苷酸，更优选地约150-3，500个核苷酸。优选地，对于寡核苷酸，链含有约2-100个核苷酸，更优选地约6-30个核苷酸。多核苷酸或寡核苷酸的精确大小取决于许多因素并且取决于多核苷酸或寡核苷酸的特定的应用和用途。该术语包括合成的和从天然来源分离并纯化的核苷酸聚合体。术语“多核苷酸”包括“寡核苷酸”。

术语“多肽”、“肽”或“蛋白质”是指氨基酸的聚合体。该术语包括天然存在的和非天然存在的(合成的)聚合体和其中人造化学模拟物取代1个或多个氨基酸的聚合体。该术语也包括具有与原始序列相同或基本相同的性质并表现出与原始序列相同或基本相同的功能的片段、变体和同系物。该术语包括任意长度的聚合体，优选地含有约2-1000个氨基酸、更优选地约5-500个氨基酸的聚合体。该术语包括合成的和从天然来源分离并纯化的氨基酸聚合体。

术语“探针”是指(1)寡核苷酸或多核苷酸，其为RNA或者DNA，不论其是在纯化的限制性内切酶消化液中天然存在的还是合成制造的，其能够与具有与探针互补的序列的多核苷酸退火或者特异性地杂交到具有与探针互补的序列的多核苷酸，或者(2)包括肽或多肽的化合物或物质，其能够特异性地结合特定的蛋白质或蛋白质片段从而基本排除其他的蛋白质或蛋白质片段。寡核苷酸或多核苷酸探针可以是单链或双链的。探针的精确长度将取决于许多因素，包括温度、来源和用途。例如，用于诊断，取决于靶序列的复杂度，寡核苷酸探针通常含有约10-100、15-50或15-25个核苷酸。在某些诊断应用中，多核苷酸探针含有约100-1000、300-600个核苷酸，优选约300个核苷酸。对本文的探针进行选择从而与特定的靶序列的不同链“基本上”互补。这意味着探针必须充分互补从而在一系列预定的条件下与其各自的靶序列特异性地杂交或退火。因此，探针序列不需要反映靶的精确的互补序列。例如，非互补核苷酸片段可以连接到探针的5’或3’末端，而探针序列的剩余部分与靶序列互补。或者，如果探针序列具有与靶多核苷酸序列的充分的互补性从而特异性地与靶多核苷酸退火，就能够将非互补碱基或更长的序列散布于探针中。肽或多肽探针可以是蛋白质或肽特异性地与之结合的任意的分子，其包括DNA(对于DNA结合蛋白)、抗体、细胞膜受体、肽、辅因子、凝集素、糖、多糖、细胞、细胞膜、细胞器和细胞器膜。

术语“样品”是指含有例如多核苷酸、多肽、抗体、代谢产物等的任意的动物组织或液体，其包括含有DNA和RNA的细胞或其他组织。实例包括脂肪、血液、软骨、结缔、上皮、淋巴、肌肉、神经、唾液等。样品可以是固体或液体并且可以是DNA、RNA、cDNA、体液如血液或尿液、细胞、细胞制备物或其可溶部分或培养基等分试样、染色体、细胞器等。

术语“单独包装”是指套盒的组分在物理上与1个或多个容器相关并且视作制造、分配、销售或使用的单元。容器非限制性地包括袋子、盒子、瓶子、热缩塑料包装、钉或其他附加的组分、或其组合。单独包装可以是物理上相关的单个食物组合物的容器，以致其被视作制造、分配、销售或使用的单元。

术语“特异性地结合”是指2个分子之间的专门的和精密的相互作用，其取决于其结构、特别是其分子侧基。例如，调节蛋白插入DNA分子的大沟，沿着2个单链核酸之间的骨架的氢键，或者蛋白质表位与激动剂、拮抗剂或抗体之间的结合。

术语“特异性杂交”是指充分互补的序列的2个单链多核苷酸之间的结合，从而允许在本领域常用的预定条件下进行该杂交(有时称之为“基本上互补”)。例如，该术语可以指根据本发明的多核苷酸探针与包含在单链DNA或RNA分子之中的基本上互补的序列的杂交，基本排除多核苷酸探针与非互补序列的单链多核苷酸的杂交。

术语“标准品”是指(1)含有来自给予对照或参照物质、或不给予物质的个体的组织的对照样品，其在适合其用途的背景下与含有来自给予试验物质(例如用于测定试验物质是否引起差别基因表达)的个体的组织的样品相比较。

术语“严格条件”是指(1)在42℃，在具有0.1％牛血清白蛋白、0.1％Ficoll(蔗聚糖)、0.1％聚乙烯吡咯烷酮、50mM磷酸钠缓冲液(pH 6.5)、750mM NaCl、75mM枸橼酸钠的50％(v/v)甲酰胺中进行杂交，(2)在42℃，在50％甲酰胺、5x SSC(0.75M NaCl，0.075M枸橼酸钠)、50mM磷酸钠(pH 6.8)、0.1％焦磷酸钠、5x Denhardt溶液、超声处理的鲑鱼精子DNA(50μg/ml)、0.1％SDS和10％硫酸葡聚糖中进行杂交；在42℃用0.2x SSC和0.1％SDS洗涤或者在50℃用0.015M NaCl、0.0015M枸橼酸钠、0.1％Na₂SO₄洗涤，或者使用相似的低离子强度和高温的洗涤剂和相似的变性剂的类似过程。

术语“变体”是指(1)多核苷酸序列，其含有对多核苷酸序列的1个或多个核苷酸的任意的取代、变异、修饰、替换、删除或加入，并且其具有与原始序列相同或基本上相同的性质并且表现出与原始序列相同或基本上相同的功能，和(2)多肽序列，其含有对多肽序列的1个或多个氨基酸的任意的取代、变异、修饰、替换、删除或加入，并且其具有与原始序列相同或基本上相同的性质并且表现出与原始序列相同或基本上相同的功能。因此，该术语包括单核苷酸多态性(SNP)和等位基因变体，并且其包括在多肽中的保守的和非保守的氨基酸取代。该术语也包括多核苷酸或多肽的化学衍生以及用非天然存在的核苷酸或氨基酸取代核苷酸或氨基酸。

术语“虚拟包装”是指套盒的组分通过在一个或多个物理上的或虚拟的套盒组分上的说明书(用于向使用者说明如何获得其他组分)而相关联，例如，在含有一个组分和指导的包或其他容器中，所述指导向使用者说明去网站、联系记录的信息、浏览可视信息或联系看护者或指导者，以获得如何使用该套盒的说明书。

本文所公开的方法和组合物以及其他的进展不限于本文所记载的特定的方法学、实验设计和试剂，这是因为技术人员将理解其是可以变化的。进一步地，本文所用的术语仅仅是为了描述特定的实施方案，其不意味着并且不限制所公开或所请求保护的内容的范围。

除非另有定义，本文所用的全部技术和科学术语、本领域的术语和首字母缩略词具有本发明的领域或术语所应用的领域中的普通技术人员通常所理解的含义。尽管在本发明的实践中能够使用本文所记载的任意的组合物、方法、制备产品、或者与其相似或等同的其他的手段或材料，但是本文记载了优选的组合物、方法、制备产品、或者其他的手段或材料。

在法律允许下，将本文所引用或参考的全部的专利、专利申请、出版物和其他参考资料引入本文作为参考。那些参考资料的内容仅仅是为了概括本文所做出的论断。不承认任何这些专利、专利申请、出版物或参考资料、或其任意部分是相关的材料或现有技术。特别保留向作为相关的材料或现有技术的这些专利、专利申请、出版物或其他参考资料的任何论断的准确性和相关性提出质疑的权利。

本发明

本发明部分地来自于清楚的证明：当长期的定期口服施用时，已知在腹膜内施用时会影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和/或脂肪利用的脂肪酸酰胺引起身体脂肪和血浆甘油三酯水平降低、由减少的食物摄取所测定的饱腹感增加、和所伴随的与身体脂肪量和食物摄取相关的若干基因的表达的变化。换言之，如本文所举例的，在动物模型中，经过4周的试验期，以2个不同的浓度补充OEA可显著降低食物摄取、减少脂肪组织量和降低血浆甘油三酯。经过多周的试验期，通过给予OEA或其抗水解衍生物的个体的外周组织中的实时PCR测定与身体脂肪量和食物摄取相关的44种基因的表达。在本文的表1和表2中记载了差别表达的基因的基因产物。多变量统计分析表明由这些治疗所引起的全部基因表达模式的显著转变。具体地讲，脂肪瘦素和FAAH(脂肪酸酰胺水解)、肠FAT/CD36和OEA受体GPR119的基因属于引起转变的基因。统计学相关分析表明：这些基因与减少的脂肪垫相关，而脂肪FAAH被发现主要与食物摄取减少相关。

基于不同的标准对表1和表2中所述的蛋白质进行分组。第一，基于在治疗和未经治疗的动物中的各基因的差别表达的统计分析将蛋白质分为4组。第一“组”包括表1和表2中所列的全部的蛋白质。第二组(A组)代表在治疗和未治疗的动物之间的基因表达在统计上有显著差异(p＜0.05水平)的蛋白质。第三组(B组)代表在治疗和未经治疗的动物之间的基因表达在统计上有显著差异(p＜0.01水平)的蛋白质。第四组(C组)代表在治疗和未经治疗的动物之间的基因表达在统计上有显著差异(p＜0.001水平)的蛋白质。

第二，基于蛋白质的功能或生理作用将蛋白质分组。所述功能包括：脂质β-氧化、脂肪生成、脂质转运、胰岛素信号转导、控制食物摄取、脂肪酸乙醇酰胺代谢或信号转导和葡萄糖代谢。

因此，已经鉴定了大量基因，其在表现出身体脂肪和血浆甘油三酯降低和通过减少的食物摄取所测定的饱腹感增加(本文是指减少的身体脂肪/增加的饱腹感(RBF/IS)表现型)的个体中差别表达，这都是由影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和/或脂肪利用的物质(即OEA及其衍生物)的长期的定期摄入所引起的。形成这些基因的多核苷酸及其片段和其所编码的蛋白质和片段能够用于例如诊断和预后性试验，以测定向RBF/IS表现型的转变，或者用于筛选有效促进或支持RBF/IS表现型的试验化合物的试验。

在本发明的某些实施方案中，可以测定至少1种差别表达的基因的表达。在优选的实施方案中，可以测定2种或更多种差别表达的基因的表达，提供基因表达模式或基因表达特性。更优选地，可以进行多种差别表达的基因的测量，提供基因表达模式或特性的附加信息。

在本发明的各种实施方案中，可以用以下2种方法之一或两者来测定基因表达的变化：(1)通过检测由特定的基因产生的mRNA来测定转录；和(2)通过检测由特定的转录物产生的蛋白质来测定翻译。

能够用任意的本领域中已知的多核苷酸定量方法(例如PCR(非限制性地包括RT-PCR和qPCR)、核糖核酸酶保护、RNA印迹法(Northern blotting)、微点阵、巨点阵和其他的杂交方法)，在RNA水平测定减少或增加的表达。根据本发明的所测定或质疑的基因通常是mRNA或逆转录mRNA的形式。基因可以是克隆的和/或扩增的。克隆本身不会对群体内的基因的代表性表现出偏向性。然而，可以更优选使用聚腺苷酸+RNA作为来源，因为其能够以更少的处理步骤使用。

因此，本发明的一个方面提供包含大量的多核苷酸或由其表达的蛋白质的组合，所述的多核苷酸或由其表达的蛋白质在表现出由影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项的物质的长期的定期施用引起的RBF/IS表现型的动物体内为差别表达，其中多核苷酸选自编码表1或表2中所列的蛋白质的基因、或其片段。在一个实施方案中，多核苷酸或表达的蛋白质选自编码表1或表2的A组中所列的蛋白质的基因、或其片段。在另一个实施方案中，多核苷酸或表达的蛋白质选自编码表1或表2的B组中所列的蛋白质的基因、或其片段。在另一个实施方案中，多核苷酸或表达的蛋白质选自编码表1或表2的C组中所列的蛋白质的基因、或其片段。在另一个实施方案中，多核苷酸或表达的蛋白质选自编码涉及1项或多项以下功能的蛋白质的基因：脂质β-氧化、脂肪生成、脂质转运、胰岛素信号转导、控制食物摄取、脂肪酸乙醇酰胺代谢或信号转导、和葡萄糖代谢。

在一个实施方案中，组合包含2种或更多种多核苷酸或者由多核苷酸表达的蛋白质。优选地，组合包含大量的适合于特定的组和应用的多核苷酸或由多核苷酸表达的蛋白质，通常约5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100种或更多种多核苷酸或蛋白质、或其片段。当组合包含1种或多种片段时，片段能够是保持原始的多核苷酸或蛋白质的性质和功能的任意尺寸的片段，优选为原始的多核苷酸或蛋白质的约30％、60％或90％。

多核苷酸和蛋白质能够来自任意的动物，优选犬科动物和猫科动物，最优选犬科动物。来自不同动物种属的多核苷酸和蛋白质的同系物可以通过技术人员熟知的标准的信息采集和分子方法来获得。例如，可以使基因或蛋白质的命名或功能的描述输入若干公开可用的数据库之一，这将产生提供关于来自不同物种的基因的信息(包括序列信息)的一系列来源。一个这种数据库是“Information Hyperlinked over Proteins(iHOP)数据库”，其可以通过url:ihop-net.org在互联网上进入。或者，可以利用已知的基因或蛋白质的公共数据库登记号获得基因或蛋白质的序列信息并且用序列比较检索出其他物种中的同系物或同源基因。例如，可以使来自小鼠的基因或蛋白质的GenBank登记号输入National Institutes of Health’s National Center for Biotechnology Information(NCBI)数据库，从而获得小鼠基因的DNA或多肽序列。使用相同的数据库，可以对小鼠DNA或蛋白质序列、或其长度足以确定基因或蛋白质的片段进行BLAST检索，从而识别来自其他物种(例如犬科动物)的足够的同系物的序列。然后可以使来自其他物种的序列的登记号输入数据库从而获得那些全长的核苷酸或蛋白质序列的信息以及其他的描述性信息。

本发明的另一个方面提供包含2个或更多个探针的组合物，所述的探针用于检测在表现出由影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项的物质的长期的定期摄入所引起的RBF/IS表现型的动物体内的差别基因表达。探针可以包含特异性地与编码表1或表2中所列的蛋白质的基因或其片段杂交的多核苷酸或寡核苷酸。或者，其可以包含特异性地结合到包含表1或表2中所列的蛋白质的多肽或其片段上的多肽结合物质。在某些实施方案中，多肽结合物质是抗体，并且在特定的实施方案中其是单克隆抗体。在一个实施方案中，探针特异性地杂交到编码表1或表2的A组中所列的蛋白质的基因或其片段，或者其特异性地结合到包含表1或表2的A组中所列的蛋白质的多肽或其片段上。在另一个实施方案中，探针特异性地杂交到编码表1或表2的B组中所列的蛋白质的基因或其片段，或者其特异性地结合到包含表1或表2的B组中所列的蛋白质的多肽或其片段上。在另一个实施方案中，探针特异性地杂交到编码表1或表2的C组中所列的蛋白质的基因或其片段，或者其特异性地结合到包含表1或表2的C组中所列的蛋白质的多肽或其片段上。在另一个实施方案中，探针特异性地杂交到或者特异性地结合到编码蛋白质的多核苷酸或者包含蛋白质的多肽，所述的蛋白质的功能选自：脂质β-氧化、脂肪生成、脂质转运、胰岛素信号转导、控制食物摄取、脂肪酸乙醇酰胺代谢或信号转导、和葡萄糖代谢。在优选的实施方案中，探针特异性地杂交到或结合到犬科动物或猫科动物的多核苷酸或多肽。

优选地，组合物包含大量的适合于特定的组和应用的探针，通常约5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、200、500或更多个用于检测多核苷酸或蛋白质、或其片段的探针。技术人员将理解对于单一靶基因或蛋白质可以使用多个不同的探针，从而提高使用探针的试验的敏感度和准确度。例如，可以使用特异性地杂交到靶多核苷酸上的不同序列的若干寡核苷酸探针。同样地，可以使用免疫学上对靶蛋白质上的不同的表位具有特异性的若干抗体。

使用本文所列的来自于任意物种(优选犬科动物或猫科动物)的任意基因的序列信息可以制备探查样品的1种或多种寡核苷酸或多核苷酸探针。探针应具有足够的长度从而特异性地和基本上排他地与合适的互补基因或转录物进行杂交。在某些实施方案中，寡核苷酸探针的长度将是至少约10、12、14、16、18、20或25个核苷酸。在某些实施方案中，需要至少约30、40、50、60、70、80、90或100个核苷酸的更长的探针，并且在某些实施方案中，超过约100个核苷酸的探针是合适的。探针可以包含编码功能蛋白质的全长序列。用技术人员已知的方法制得或获得核酸探针，例如用核苷酸体外合成、从天然来源分离和纯化、或者本发明的多核苷酸的酶裂解。

通过本领域中已知的各种方法可以检测包含杂交到本发明的多核苷酸的核酸探针的杂交复合体。在本发明的某些实施方案中，固定化的核酸探针可以用于快速和特异的检测多核苷酸及其表达模式。通常，核酸探针与固体载体相连接并且靶多核苷酸(例如，基因、转录产物、扩增子或最普遍的是扩增混合物)杂交到探针。通常用荧光团或其他的标记物(例如抗生物素蛋白链菌素)能够对探针或靶或者两者都进行标记。在靶被标记时，通过检测结合的荧光可以对杂交进行检测。在探针被标记时，通常通过标签的淬灭对杂交进行检测。在探针和靶都被标记时，通常通过监视由2个结合的标记的接近度而导致的颜色改变来进行杂交的检测。各种标记策略、标记等，特别是基于荧光的应用，是本领域已知的。

在另一个实施方案中，探针包含多肽结合物质，所述的多肽结合物质特异性地结合到由1种或多种本文所列的多肽或其片段的表达所产生的多肽上。可以使用由表和表2中确认的任意蛋白质或其片段得到的序列信息制备该蛋白质结合探针。

能够用于测定样品中蛋白质的水平的分析技术也是本领域的技术人员所熟知的。所述分析方法包括放射免疫测定、竞争性结合试验、蛋白质印迹分析和ELISA分析。在使用抗体的分析方法中，多克隆和单克隆抗体都适合用于本发明。如本领域的技术人员所理解的，该抗体可以是在免疫学上特异于特定的蛋白质、或蛋白质的表位、或蛋白质片段。制备免疫学上特异于蛋白质或肽的多克隆和单克隆抗体的方法也是本领域中已知的。

本发明的优选的实施方案可以将抗体用于由本文所述的基因的表达所产生的蛋白质的检测和定量。尽管用免疫沉淀法、亲和分离、蛋白质印迹分析等可以检测蛋白质，但是优选的方法使用ELISA型方法，其中将抗体固定在固体载体上并且靶蛋白质或肽暴露于固定的抗体。探针或靶或两者都能被标记。各种标记策略、标记等是本领域已知的。

本发明的另一个方面提供了包含固体载体的装置，将包含大量探针的阵列固定到所述的固体载体上，所述的探针用于检测在由影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项的物质的长期的定期摄入所引起的具有RBF/IS表现型的动物体内的差别基因表达。具体地讲，在本发明的优选的实施方案中，利用检测靶多核苷酸或蛋白质的探针的阵列来观察如本文所定义的与正常表现型相比的差别表达大量基因的RBF/IS的表达模式或特性。该装置可以用于检测编码表1或表2中、或者其亚组(即A组、B组、C组)或功能亚组(其包括选自脂质β-氧化、脂肪生成、脂质转运、胰岛素信号转导、控制食物摄取、脂肪酸乙醇酰胺代谢或信号转导、和葡萄糖代谢的功能)中所述的基因产物的基因的差别表达。在优选的实施方案中，该装置用于检测来自犬科动物或猫科动物的基因的差别表达。

在一个实施方案中，可以使用寡核苷酸或多核苷酸探针的阵列，而另一个实施方案可以使用特异性地与差别表达的基因产物结合的抗体或其他蛋白质的阵列。可以根据已知的方法常规制备该阵列，例如在固体载体上的原位合成或者通过缩微打印技术将预先合成的探针附加到固体载体上。在优选的实施方案中，常规制备核酸或蛋白质结合探针的阵列，以便特异性地检测由2种或更多种本文所述的差别表达的基因或基因片段所产生的转录物或蛋白质。

本发明的另一个方面提供了检测动物体内1种或多种基因的差别表达的方法，所述的动物与正常或未经治疗的动物相比具有以下表现型：所述的表现型包括身体脂肪和血浆甘油三酯的降低和由减少的食物摄取所测定的饱腹感的增加(RBF/IS表现型)，这是由影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项的物质的长期的定期摄入所引起的。该方法通常包含：(a)提供探针，所述的探针包含(i)特异性地杂交到2种或更多种编码表1或表2中所列的蛋白质的基因或其片段的多核苷酸；或者(ii)特异性地结合到2种或更多种选自表1或表2中所列的蛋白质的多肽、或其片段的多肽结合物质；(b)将探针加入到包含来自具有RBF/IS表现型的动物的mRNA或蛋白质的样品中，使探针杂交或结合到样品中的mRNA或蛋白质上，从而在样品中形成杂交或结合复合体；(c)任选地，将探针加入另一个包含来自正常动物的mRNA或蛋白质的样品中，使探针杂交或结合到第二样品中的mRNA或蛋白质上，从而在另一个样品中形成杂交或结合复合体；(d)检测样品中的杂交复合体；和(e)将来自第一样品的杂交或结合复合体与来自标准品或任选地来自另一个样品的杂交或结合复合体进行比较，其中在样品中与标准品或任选的其他样品中的杂交或结合的量之间至少有一项不同，这表明了与不具有该表现型的动物相比，在具有RBF/IS表现型的动物中差别表达的1种或多种基因的差别表达。

该方法可以用于检测编码表1或表2中、或者其亚组(即A组、B组、C组)或功能亚组(其包括选自脂质β-氧化、脂肪生成、脂质转运、胰岛素信号转导、控制食物摄取、脂肪酸乙醇酰胺代谢或信号转导、和葡萄糖代谢的功能)中所述的基因产物的基因的差别表达。在优选的实施方案中，该方法用于检测来自犬科动物或猫科动物的基因的差别表达。在特定的实施方案中，探针结合在基质上，优选地在阵列中。

步骤(c)和部分的步骤(d)和(e)是任选的，并且如果进行2个或更多个试验系统的同期比较，就使用步骤(c)和部分的步骤(d)和(e)。然而，在优选的实施方案中，用于比较的标准品是基于用该方法预先获得的数据。

这些探针暴露于样品从而形成被检测的并且与标准品相比较的杂交或结合复合体。来自样品和标准品的杂交或结合复合体之间的差异表明了多核苷酸的差别表达以及因此与样品中的正常表现型相比的RBF/IS表现型差别表达的基因。在优选的实施方案中，制备探针从而特异性地检测由本发明确定的1种或多种基因或基因片段所产生的多核苷酸或其片段。检测杂交复合体的方法是技术人员已知的。

在一个实施方案中，所述方法进一步包含在进行试验之前将动物或样品暴露于试验物质。然后，通过比较而表明试验物质是否改变了治疗的和未经治疗的动物体内差别表达的基因的表达。

在另一个用于RBF/IS表现型的诊断或预后测定的实施方案中，间隔地进行检测，例如当动物体内试图诱导RBF/IS表现型时用来监视动物的进展。

本发明的另一个方面提供当将试验物质以长期的定期给予动物时试验物质是否可能用于影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项从而诱发RBF/IS表现型的测定方法。该方法通常包含(a)在没有试验物质的试验系统中通过测量选自编码表1或表2所列的蛋白质的基因、或其片段的2种或更多种多核苷酸的转录或翻译产物，从而测定第一基因表达特性；(b)在存在试验物质的试验系统中通过测量选自编码表1或表2所列的蛋白质的基因、或其片段的2种或更多种多核苷酸的转录或翻译产物从而测定第二基因表达特性；和(c)将第一基因表达特性与第二基因表达特性相比较，其中与第一基因表达特性相比的第二基因表达特性的变化表明：当将试验物质给予动物时试验物质可能用于影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项。

在某些实施方案中，在存在参照物质的试验系统中，该方法可以进一步包括将至少第二基因表达特性与参照或标准基因表达特性进行比较的步骤，所述的基因表达特性是通过测量选自编码表1或表2中所列的蛋白质的基因、或其片段的2种或更多种多核苷酸的转录或翻译产物而获得的，当将所述的参照物质给予动物时已知所述的参照物质影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项。该物质可以是例如OEA或其抗水解衍生物。

在一个实施方案中，试验系统包含培养的细胞群体。将包含根据本发明的RBF/IS相关基因的核酸构建体引入培养的宿主细胞。宿主细胞可以是哺乳动物细胞系，非限制性地例如NIH3T3、CHO、HELA和COS，但也可使用非哺乳动物细胞(例如酵母、细菌和昆虫细胞)。将基因的编码序列可操作地连接到适合于所利用的特定的宿主细胞的合适的可调节的表达元件上。根据本领域中任意的可接受的方法(其非限制性地包括转染、转化、磷酸钙沉淀、电穿孔和脂转染)，能够将核酸构建体引入宿主细胞。这些技术是本领域中已知的并且是常规的。也能够使用转化的细胞鉴定调节RBF/IS相关基因的表达的化合物。

使用包含可操作地连接到报道基因上的选择的RBF/IS相关基因的启动子的基因构建体能够进行基因表达分析。可以将报道构建体引入合适的培养的细胞(其非限制性地包括上述的标准宿主细胞系、或者刚从如脂肪、肌肉、或肝细胞分离出的细胞)。在存在或不存在试验物质的情况下，通过监测报道基因的表达而进行该分析。

在优选的实施方案中，试验系统包括动物。通常，将试验化合物给予个体并且分析个体的基因表达特性，从而测定试验化合物对本发明的基因或基因产物的转录或翻译的作用。能够在原位或离体分析基因表达从而测定试验物质的作用。在另一个实施方案中，将试验化合物给予个体，并且根据本领域中适合于测定试验化合物对目标蛋白质的活性的作用的任意的方法，在原位或离体分析由基因表达的蛋白质的活性。此外，当将试验化合物给予个体时，也能够评估化合物的生理的、全身的和物理的作用以及化合物的潜在毒性。

试验物质可以是可能对在具有RBF/IS表现型的动物体内差别表达的多核苷酸或基因有作用的任意的物质。优选的试验物质是脂肪酸酰胺，例如OEA的衍生物。其他的试验物质非限制性地包括氨基酸；蛋白质、肽、多肽、核酸、寡核苷酸、多核苷酸、小分子、大分子、维生素、矿物质、单糖；复合糖；多糖；碳水化合物；中链甘油三酯(MCTs)；三酰基甘油酯(TAGs)；n-3(ω-3)脂肪酸(包括DHA、EPA、ALA)；n-6(ω-6)脂肪酸(包括LA、γ-亚麻酸(GLA)和ARA)；SA、共轭亚油酸(CLA)；胆碱源(例如卵磷脂)；脂溶性维生素(其包括维生素A及其前体(例如类胡萝卜素(例如β-胡萝卜素))、维生素D源(例如维生素D2(麦角钙化醇)和维生素D3(胆钙化醇))、维生素E源(例如生育酚(例如α-生育酚)和生育三烯酚)和维生素K源(例如维生素K1(叶绿醌)和维生素K2(甲萘醌)))；水溶性维生素(其包括B族维生素(例如核黄素、烟酸(包括烟酰胺和烟酸)、吡哆辛、泛酸、叶酸、生物素和钴胺素))；和维生素C(抗坏血酸)；抗氧化剂(其包括某些上述的维生素，特别是维生素E和C)；生物类黄酮(例如儿茶素、槲皮素和茶黄素)；醌类(例如泛醌)；类胡萝卜素(例如番茄红素和番茄黄质)；白藜芦醇和α-硫辛酸；L-肉毒碱；D-柠檬烯；葡糖胺；S-腺苷甲硫氨酸；和壳聚糖。在优选的实施方案中，试验物质是可以被加入到食品中或作为补充剂食用的营养素。

通过上述方法鉴定的物质也视作本发明的一部分。

本发明的另一个方面提供了促进动物体内的RBF/IS表现型的方法。该方法包括长期的定期向动物经口给予影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项的物质。优选地，动物是犬科动物或猫科动物。通常有规律地给予物质至少2周，更优选地至少4周或更长。物质的施用可以无期限地持续，例如1、2、3、6或9个月、或者1年或更长、或者甚至动物一生。通常至少每天给予物质，但是剂量方案取决于物质本身的性质和药效。因此，施用可以更频繁，例如每天2次或3次、或更低频率(例如每周3次、每周2次、每周1次、每个月2次或每个月1次)。

在某些实施方案中，所述物质是脂肪酸酰胺。具体地讲，物质是N-油酰-乙醇酰胺或其抗水解衍生物，例如(Z)-(R)-9-十八碳烯酸酰胺，N-(2-羟基乙基，1-甲基)。在其他的实施方案中，物质是通过上文所述的筛选方法所确定的物质。

在某些实施方案中，所述物质的长期的定期口服施用导致表1或表2的1种或多种基因的表达的改变。在特定的实施方案中，物质的长期的定期口服施用导致一种或多种编码选自瘦素、脂肪酸酰胺水解(FAAH)、FAT/CD36和油酰基-乙醇酰胺受体GPR119的蛋白质的基因表达的改变。

当所述物质用作平常饮食需要的补充剂时，可以将物质直接给予动物。物质能够可选择地与每天的饲料或食物(包括液体(例如饮用水)或作为)接触或混合、或作为膳食补充剂供应。当与每天的饲料或食物联合使用或者加入到每天的饲料或食物中时，施用是普通技术人员所熟知的。施用能够作为动物的膳食方案的一部分。例如，膳食方案可以包含使动物定期摄入有效量的物质从而促进RBF/IS表现型。在另一个实施方案中，将所述物质与调整身体脂肪或促进动物体内的RBF/IS表现型的1种或多种药物、营养制品或营养剂联合给予动物。

在某些实施方案中，根据该方法所给予的物质的每日或周期性剂量范围是约0.001g/kg体重至10g/kg体重。更特别地，剂量超过0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09或0.1g/kg体重。在其他的实施方案中，剂量可以是0.2、0.5、1、3、5、7或10g/kg体重或更多，这取决于物质和施用频率。技术人员熟悉个体的剂量和施用方案的建立。

本发明的另一个方面提供计算机系统，其包含数据库和用户界面，所述的数据库含有确定1种或多种多核苷酸的表达水平的信息，所述的多核苷酸在给予了影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项的物质的动物体内差别表达，其中多核苷酸选自编码表1或表2所列的蛋白质的基因、或其片段，所述的用户界面使用户存取或处理数据库中的信息。该系统包含数据库和用户界面，所述的数据库含有确定1种或多种多核苷酸的表达水平的信息，所述的多核苷酸选自编码表1或表2所列的蛋白质和/或特异性地与表1或表2所列的蛋白质结合的多肽的基因，所述的用户界面与数据库交互作用，特别是用来输入、处理和浏览不同动物或动物的不同种类的信息。在一个实施方案中，数据库进一步含有鉴定表1或表2所列的1种或多种多肽的活性水平的信息。在另一个实施方案中，数据库进一步包含优选来自不同物种的表1或表2所列的1种或多种多核苷酸或多肽的序列信息。在另一个实施方案中，数据库含有描述1个或多个动物种属中的基因的公认描述的附加信息。计算机系统是能够容纳和处理数据并且与用户交流的任意的电子装置，例如设计成帮助利用本发明并且输出与动物状态相关的结果的典型的计算机或分析仪器。

在另一个方面，本发明提供套盒，其包含含有2个或更多个探针的集合的容器，所述的探针用于检测由影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项的物质的长期的定期摄入而引起的RBF/IS表现型的差别基因表达。在适合于使用和套盒组分的单个包装中或虚拟包装中的独立的容器中，套盒包含2个或更多个探针，所述的探针用于检测在具有包括身体脂肪和血浆甘油三酯降低和通过减少的食物摄取所测定的饱腹感增加的表现型(RBF/IS表现型)的动物体内的差别基因表达，这是由影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项的物质的长期的定期摄入所引起的，其中所述的探针包含：(a)多核苷酸，其特异性地杂交到2种或更多种编码表1或表2所列的蛋白质的基因、或其片段；或(b)多肽结合物质，其特异性地结合到2种或更多种选自表1或表2所列的蛋白质的多肽、或其片段；和进一步地至少包含以下之一：(1)如何在基因表达分析中使用探针的说明书，所述的探针用于检测在具有包括身体脂肪和血浆甘油三酯降低和通过减少的食物摄取所测定的饱腹感增加的表现型(RBF/IS表现型)的动物体内的差别基因表达，这是由影响食物摄取、饱腹感、脂类代谢和脂肪利用中的一项或多项的物质的长期的定期摄入所引起的，(2)使用探针的试剂和设备，和(3)已知的经长期的定期摄入导致RBF/IS表现型的组合物。优选地，将探针固定在固体载体上的已知位置。已知的经长期的定期摄入导致RBF/IS表现型的合适的参照物质是N-油酰-乙醇酰胺或其抗水解衍生物。

当套盒包含虚拟包装时，将套盒限定为虚拟环境中的说明书和1个或多个物理的套盒组分。在一个实施方案中，套盒含有探针和/或其他的物理的组分，并且使用探针和其他组分的说明书可通过互联网获得。套盒可以含有其他的组件，例如用于混合样品、探针和试剂的装置和使用套盒的装置(例如试管或混合器皿)。

在另一个方面，本发明提供了用于传递1种或多种本文所述的组合物和方法的信息或说明的手段。该手段包括含有信息或说明的文档、数字存储介质、光学存储介质、音频展示、可视显示等。例如，传递媒介可以是展示的网站、电话亭、小册子、产品标签、包装插页、广告、分发物、公告音频磁带、录像带、DVD、CD、计算机可读的芯片、计算机可读的卡、计算机可读的磁盘、计算机存储器或其任意的组合。有用的信息包括以下1项或多项：(1)促进动物的健康和幸福的方法和(2)当动物的看护者对本发明及其应用有疑问时使用的联系信息。有用的信息包括使用探针的技术、进行基因表达分析的说明和物质的施用量和频率。传递手段可用于指出使用本发明的益处。

实施例

通过以下实施例能够进一步举例说明本发明的各方面。应当理解，提供这些实施例仅仅出于举例说明的目的，除非另有特别说明，其不限制本文所公开的发明的范围。

实施例1

研究长期的OEA口服施用的生理和生化作用。在4周内长期使用作为补充剂的OEA饲养小鼠，从而研究对体重增加和累积的食物摄取等的作用。

材料和方法

动物、饮食和实验设计。将购买的8周龄的成年雄性C3H小鼠单独地关入笼舍并且维持不同的饮食和水2周，随意取食。根据体重将7只小鼠随机地分配在3个组中，并且在2周内用高脂肪饮食(脂质占每日能量的50％)饲养。每kg高脂肪饮食的成分为：284.5g玉米淀粉、89.5g蔗糖、250g酪蛋白、50g纤维素、10g维生素混合物(V1001)、35g矿物质混合物(S10026)和281g芸苔油(UPAE，Jouy en Josas，法国)。然后，以不同的水平将OEA加入饮食从而提供0、10或100mg OEA/kg体重。以各自的饮食喂养小鼠4周。在营养干预期间，监视每日食物摄取并且每周3次对小鼠称重。

取样。在实验期末，在用异氟烷麻醉后通过抽血处死小鼠。通过离心得到血浆(1,000g，10分钟，4℃)。切除肠系膜、附睾、腹股沟和腹膜的脂肪库以及肝、胃、小肠粘膜和腓肠肌并且在液氮中冷冻。血浆和器官样品保存在-80℃直至分析。通过酶处理、使用Beckman Coulter Systems SYNCHRON LX 20(Beckman Coulter，Fullerton，USA)(氧化酶法，用于葡萄糖的Beckman Coulter，GPO法，用于TG的Beckman Coulter，氧化酶和酯酶法，用于胆固醇的Beckman Coulter)，直接测量在处死期间所收集的血浆样品的甘油三酯、葡萄糖、总胆固醇和HDL胆固醇。通过特别的增溶作用、使用沉淀分离试剂盒(Beckman Coulter，Fullerton，USA)分离HDL。

统计分析。以平均值±平均值的标准误(SEM)测定结果。在Statview软件(SAS研究所，Cary，USA)上通过单因素ANOVA进行生理参数的统计分析。统计显著性设为P＜0.05水平。

结果

食物摄取。根据线性回归分析，实验期间的累积食物摄取可以预测最多达到40％的脂肪垫质量的总变异。食用OEA的小鼠的食物摄取少量地(-6.5％)、但显著地(P＜0.05)减少。在整个实验期间，与对照相比，对于OEA的2个剂量的每日食物摄取都有显著差异(双因素ANOVA，P＜0.01)。然而，所观察到的作用不是剂量依赖的。

生理和生化参数。OEA治疗不诱导肝肿大。OEA导致总脂肪垫重量的类似的减少。通过OEA摄入，腹膜脂肪组织大部分地减少，并且作为皮下脂肪库(存储脂肪的主要部位)的指标的腹股沟脂肪垫也减少(P＜0.05)，然而肠系膜脂肪垫独立地未受施用剂量的影响。小鼠的最终体重未受影响。

在2组OEA组中，血浆甘油三酯都显著降低(对于10mg剂量，-72％，P＜0.05；对于100mg剂量，-59％，P＜0.05)。在10mg/kg体重的治疗中，观察到血浆总胆固醇降低的趋势，在100mg/kg体重的治疗中，其达到统计学显著性。

实施例2

通过实时PCR测量外周组织中的45种基因的表达，从而确定由于口服油酰乙醇酰胺(OEA)或非水解的OEA类似物(KDS 5104)(它们影响饱腹感、脂类代谢、脂肪利用、食物摄取和身体脂肪质量)而差别表达的基因。

材料和方法

动物、饮食和实验设计。将购买的8周龄的成年雄性C57bl6j小鼠单独地关入笼舍并且维持高脂肪饮食和水2周，随意取食。将7只小鼠随机地分配在3个组中，并且在2周内用高脂肪饮食(脂质占每日能量的50％)饲养。对于1千克高脂肪饮食的成分为：235g酪蛋白、201g蔗糖、3.5g L-胱氨酸、85g淀粉、116g麦芽糖糊精、60g纤维素、12g维生素混合物(AIN-93M，UPAE，Jouy-en-Josas，法国)、51.5g矿物质混合物(AIN-93Vx，UPAE，Jouy-en-Josas，法国)和236g猪油。然后，将OEA或KDS 5104以100mg/kg/体重的浓度加入到饮食。在治疗下喂养小鼠5周。

化学合成。根据Roe，ET等人，1952，J.American Oil Chemists’Society29(1)：18-22，由高油酸葵花籽油和乙醇胺(Sigma-Aldrich，Saint-Louis，USA)化学合成OEA。使用已知的方法，在三乙胺(Sigma-Aldrich，Saint-Louis，USA)存在的条件下，通过油酰氯与相应的胺：(R)-(-)-2-氨基丙醇(Sigma-Aldrich，Saint-Louis，USA)的化学计量反应合成KDS 5104[(Z)-(R)-9-十八碳烯酸酰胺，N-(2-羟基乙基，1-甲基)]。在0-4℃在搅拌下在二氯甲烷中反应12h。真空除去溶剂，并且将混合物溶解于四氢呋喃/乙醇(1∶1)中，用3N KOH(2当量)的水溶液处理。在除去溶剂之后，溶液保持回流30分钟。将残留物溶解于乙酸乙酯中并且先后用水、氢氧化钠(2N)、盐酸(2N)和盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机相，过滤和减压浓缩(参考Astarita等人，2006，J.Pharmacol.Exp.Ther.318(2)：563-70)。

取样。在实验期末，在用异氟烷麻醉后通过抽血(心脏穿刺)处死小鼠。通过离心得到血浆(1,000g，10分钟，4℃)。切除肠系膜、附睾、腹股沟和腹膜的脂肪库以及肝、胃、小肠粘膜、胰腺和腓肠肌并且用液氮冷冻。血浆、尿液、粪便和器官样品在-80℃保存直至分析。

RNA提取和基因表达。根据生产商的说明，用TRIzol试剂(Invitrogen，Carlsbad，USA)提取来自肝、肠粘膜、脂肪组织、腓肠肌、胰腺和胃的总RNA。在Nanodrop上根据260nm处的吸光率测定RNA浓度。根据生产商的方案，使用Applied Biosystem Thermal Cycler 2720和Superscript II(Invitrogen，Carlsbad，USA)进行逆转录PCR来合成cDNA。使用高通量系统(Biomek 3000，Beckman&Coulter，Fullerton，USA)和Lightcycler 480(罗氏/日立公司，巴塞尔，瑞士)，用SYBR Green Master mix+试剂盒(Eurogentec，费城，USA)在如上所获得的cDNA上进行实时定量PCR(RT-qPCR)。用来自Lightcycler生产商(罗氏)的在线信息学辅助产生用于所选择基因的引物。用于鉴定基因的数据库是(1)NCBI数据库(GenBank)和(2)IHOP(蛋白质超链接信息)数据库(www.ihop-net.org/UniPub/iHOP/bng/)。用AA(Ct)将数值表达为相对于对照小鼠(采用0mg OEA/kg/体重的饮食)的RNA水平的比例(Livak KJ&Schmittgen TD，2001，Methods 25：402-8)。测定以下基因的基因表达(括号中表示缩写和GenBank登记号)。

酰基辅酶A氧化酶(ACO)(NM_015729)

过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活物1α(PGC 1α)(NM_008904)

磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEP CK)(NM_028994)

过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)(NM_011144)

过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)(NM_133249)

酰基辅酶A羧化酶(ACC)(NM_133360)

禁食诱导的脂肪细胞因子(Fiaf)(NM_020581)

脂肪酸转运体/分化簇36(FAT/CD 36)(NM_007643)

脂蛋白脂肪酶(LPL)(NM_008509)

肝脂肪酸结合蛋白1(LFABP 1)(NM_017399)

蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型(PCSK 9)(NM_153565)

解聚素和金属蛋白酶域17(Adam 17)(NM_009615)

生长激素释放肽(NM_021488)

G蛋白偶联受体119(GPR 119)(NM_181751)

胆囊收缩素(CCK)(NM_031161)

肽YY(PYY)(NM_145435)

瘦素(NM_008493)

脂连素(NM_009605)

内脂素(Visfatin)(NM_021524)

固醇调节元件结合蛋白-c 1(SREBP 1c)(NM_011480)

固醇调节元件结合蛋白-C 2(SREBP2 l)(NM_033218)

脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)(NM_010173)

N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶样(NAAA)(NM_025972)

油酰乙醇酰胺合酶(OEA合酶)(NM_178728)

解偶联蛋白2(UCP2)(NM_011671)

葡萄糖转运体4(Glut 4)(NM_009204)

过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)(NM_011145)

大麻素受体1(CB 1)(NM_007726)

胰岛素受体底物1(IRS 1)(NM_010570)

葡萄糖6-磷酸酶(G6P)(NM_008061)

硬脂酰-辅酶A去饱和酶1(SCD 1)(NM_009127)

脂肪酸合酶(FAS 1)(NM_007988)

统计分析。结果以平均值±平均值的标准误(SEM)表示。在Statview软件(SAS研究所，Cary，USA)上通过单因素ANOVA进行生理参数和基因表达数据的统计分析。在Statview软件上用双因素ANOVA分析每日食物摄入。统计显著性设为P＜0.05水平、P＜0.01水平和P＜0.001水平。对于基因表达数据的统计分析，每只小鼠和基因相对于18S的表达来计算数值。

结果

OEA治疗的结果在表1中表示。KD5104治疗的结果在表2中表示。以下命名用于表中：i：近侧小肠，s：胃，l：肝，m：肌肉，p：胰腺；at：脂肪组织，at ep：附睾脂肪组织；at per：腹膜脂肪组织。

表1

参考表1，多变量统计分析表明当OEA治疗时全部基因表达模式有显著的改变。脂肪的瘦素和FAAH(脂肪酸酰胺水解酶)、肠FAT/CD36和OEA受体GPR119的基因是主要引起这种改变的基因，并且也与减少的身体脂肪垫相关。发现脂肪的FAAH主要与食物摄取减少有关。这些数据表明OEA的抗肥胖作用部分地依靠脂肪组织中的脂肪酸酰胺水解路径的调节和通过新发现的GPR119 OEA信号通路的调节以及近侧小肠中的脂肪酸摄入调节。

表2

参考表2，多变量统计分析表明当KDS 5104治疗时全部基因表达模式有显著的改变。肝FAS(脂肪酸合酶)、肠CPT1和油酰乙醇酰胺受体GPR119的基因是主要引起这种改变的基因，并且也与减少的身体脂肪垫相关。发现肠GPR119主要与食物摄取减少有关。这些数据表明KDS 5104的抗肥胖作用部分地依靠脂肪组织中的脂肪酸酰胺水解路径的调节和通过新发现的GPR119内大麻素信号通路的调节以及近侧小肠中的脂肪酸摄入调节。

说明书已经公开并举例了本发明的典型的优选的实施方案，虽然使用了具体术语，但是仅仅以一般的和描述性的意义使用具体术语，并不是为了限制在权利要求中所述的本发明的范围。显然地，根据以上的教导，本发明的许多修改和变化是可能的。因此，应当理解，在所附的权利要求的范围内，本发明可以被实施而毋需被特别记载。