哈维氏弧菌外膜蛋白ompK抗原的制备方法、应用以及表达该抗原的菌株

摘要

本发明涉及哈维氏弧菌外膜蛋白ompK抗原的制备方法、应用以及表达该抗原的菌株。本发明以哈维氏弧菌致病菌株zj2008株为模板，用PCR法克隆抗原ompK的编码基因，将该基因构建到真核表达载体pPIC9K中获得重组载体pPIC9K-ompK；重组载体线性化后转化毕赤酵母细胞GS115，经抗性筛选和PCR鉴定获得整合了重组载体的阳性酵母克隆；重组的酵母经甲醇诱导分泌表达ompK，分子量约为36kDa，产量达2mg/L。重组酵母经甲醇诱导表达3天后离心，收集上清，浓缩后获得粗纯化的蛋白溶液，以浓缩后的蛋白抗原制口服疫苗，免疫实验鱼，一段时间后对攻击感染产生有效的免疫保护性。