利用非天然核苷酸扩增DNA的过程

摘要

这个公开的发明讲述通过模板和引物与DNA聚合酶和非标准核苷酸的三磷酸的相互作用来扩增寡核苷酸的过程，这里的非标准核苷酸可以形成碱基配对并且具有标准的沃森-克里克几何结构，但是，非标准核苷酸碱基对之间的氢键模式不同于标准的碱基对A:T和G:C之间的氢键模式。因此，本发明涉及核苷酸类似物及其衍生物，当它们被嵌入到DNA和RNA中时，增加可复制的核苷酸数目超出天然DNA和RNA中的四种核苷酸。本发明还涉及到聚合酶将非标准核苷酸的三磷酸类似物和衍生物嵌入寡核苷酸中，更具体地说，聚合酶和非标准核苷酸的三磷酸支持聚合酶链反应(PCR)，包括PCR产品中含有多个非标准核苷酸单位。本发明中提供的例子表明这一过程使用6-氨基-5-硝基-3-(1′-β-D-2′-脱氧呋喃型)-2(1氢)-吡啶酮来实施非标准“小碱基”的给-给-受(pyDDA)氢键模式，和2-氨基-8-(1′-β-D-2′-脱氧呋喃型)-咪唑[1，2-α]-1，3，5-三嗪-4(8氢)-烷来实施“大碱基”的受-受-给(puAAD)氢键模式。