具有高活性的表阿霉素的衍生物及其制备和应用

摘要

本发明涉及具有抗癌活性的表阿霉素(EPI)的衍生物，即式(I)所示化合物及其盐或溶剂化物，以及式(I)所示化合物的制备和其作为药物活性成分的应用。本发明所提供的表阿霉素的衍生物在细胞水平具有与表阿霉素相当，甚至更高的活性。

说明书

一、技术领域

本发明涉及具有抗癌活性的表阿霉素的衍生物、其制备方法和在制备成治疗肿瘤或癌症的药物中的应用。

二、技术背景

表阿霉素(EPI)是意大利学者Arcamone等于1975年通过半合成途径合成的一种蒽环类抗肿瘤抗生素，与阿霉素的区别只是在氨基糖部分4位的羟基由顺式变成反式，但这种立体结构的细微变化导致其心脏、骨髓毒性明显降低。表阿霉素主要作用是直接嵌入DNA碱基对之间，干扰转录过程，阻止mRNA的形成。EPI能抑制DNA和RNA的合成，故对细胞周期各阶段均有作用，为细胞周期非特异性药物。EPI对细胞膜和转运系统均有作用，但最主要的作用部位还是细胞核。另外，EPI对拓扑异构酶II亦有抑制作用。EPI与阿霉素(ADM)相比，抗肿瘤活性相等或较高，但毒副作用尤其是心脏毒性低。已证实EPI具有广谱的抗实验性肿瘤的作用。在临床上EPI主要用于治疗白血病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、乳腺癌、软组织肉瘤、胃癌、肝癌、结肠直肠癌、卵巢癌等。虽然与ADM相比，EPI的毒性相对降低，但仍然会导致心肌损伤，引起心力衰竭。比较性研究表明，EPI和ADM引起相同程度心功能减退的蓄积剂量之比为2∶1。因此，在EPI治疗期间仍应严密监测心功能，以减少发生心力衰竭的危险(这种心力衰竭甚至可以在终止治疗几周后发生，并可能对相应的药物治疗无效)；对于目前或既往接受纵隔、心包区合并放疗的病人，EPI心脏毒性的潜在危险可能增加；并且会有骨髓抑制，恶心、呕吐等胃肠道反应，皮炎、色素沉着等皮肤反应，以及静脉炎、蜂窝组织炎等毒付反应。

三、发明内容

本发明涉及具有抗癌活性的表阿霉素(EPI)的衍生物，即式(I)所示化合物。本发明所提供的表阿霉素的衍生物在细胞水平具有与表阿霉素相当，甚至更高的活性。

相应的，本发明涉及式(I)所示的化合物及其盐或溶剂化物：

其中：

R¹表示H、F、OH、C_1-4烃基或OC_1-4烃基；

R²表示H或OH；

W表示O或NH；

R³表示H、F、OH、OC_1-4烃基或C_1-4烃基；

R⁴表示F或OR⁷，其中R⁷表示H或2-吡喃基；

表示含有一个N原子的五元、六元或七元的饱和杂环、不饱和杂环或芳香杂环，或由2个五元、六元或七元环并合在一起的稠环，其中的饱和杂环、不饱和杂环、芳香杂环或稠环中除含有至少一个N原子外，还可以含有0-2个其他相同或不同的杂原子，如N，O或S原子。

本发明中所述的优选式(II)所示化合物、式(III)所示化合物、式(IV)所示化合物、式(V)所示化合物或式(VI)所示化合物。

其中n表示1或2；

p表示0或1；

X表示C＝O或CR²¹R²²；

Y表示C＝O或CR²¹R²²；

Z表示O、S或NR¹⁷；

Q表示CH或N；

R¹⁰表示H、F、Cl、CN、OH、COOC_1-4烃基、OC_1-4烃基、C_1-4烃基或NR¹⁸R¹⁹；R¹⁸和R¹⁹分别表示H或C_1-6烃基或NR¹⁸R¹⁹一起表示吡咯烷-1-基、哌啶-1-基或吗啡啉-1-基。

R¹¹表示H、F、Cl、CN、OH、COOC_1-4烃基、OC_1-4烃基、C_1-4烃基或NR¹⁸R¹⁹；R¹⁸和R¹⁹分别表示H或C_1-6烃基或NR¹⁸R¹⁹一起表示吡咯烷-1-基、哌啶-1-基或吗啡啉-1-基。

R¹²表示H、F、Cl、CN、OH、COOC_1-4烃基、OC_1-4烃基、C_1-4烃基或NR¹⁸R¹⁹；R¹⁸和R¹⁹分别表示H或C_1-6烃基或NR¹⁸R¹⁹一起表示吡咯烷-1-基、哌啶-1-基或吗啡啉-1-基。

R¹³表示H、F、Cl、CN、OH、COOC_1-4烃基、OC_1-4烃基、C_1-4烃基或NR¹⁸R¹⁹；R¹⁸和R¹⁹分别表示H或C_1-6烃基或NR¹⁸R¹⁹一起表示吡咯烷-1-基、哌啶-1-基或吗啡啉-1-基。

R¹⁴表示H、F、Cl、CN、OH、COOC_1-4烃基、OC_1-4烃基、C_1-4烃基或NR¹⁸R¹⁹；R¹⁸和R¹⁹分别表示H或C_1-6烃基或NR¹⁸R¹⁹一起表示吡咯烷-1-基、哌啶-1-基或吗啡啉-1-基。

R¹⁵表示H、F、Cl、CN、OH、COOC_1-4烃基、OC_1-4烃基、C_1-4烃基或NR¹⁸R¹⁹；R¹⁸和R¹⁹分别表示H或C_1-6烃基或NR¹⁸R¹⁹一起表示吡咯烷-1-基、哌啶-1-基或吗啡啉-1-基。

R¹⁶表示H、F、Cl、CN、OH、COOC_1-4烃基、OC_1-4烃基、C_1-4烃基或NR¹⁸R¹⁹；R¹⁸和R¹⁹分别表示H或C_1-6烃基或NR¹⁸R¹⁹一起表示吡咯烷-1-基、哌啶-1-基或吗啡啉-1-基。

R¹⁷表示H、F、Cl、CN、OH、COOC_1-4烃基、OC_1-4烃基、C_1-4烃基或NR¹⁸R¹⁹；R¹⁸和R¹⁹分别表示H或C_1-6烃基或NR¹⁸R¹⁹一起表示吡咯烷-1-基、哌啶-1-基或吗啡啉-1-基。

R²¹表示H、F、Cl、CN、OH、COOC_1-4烃基、OC_1-4烃基、C_1-4烃基或NR¹⁸R¹⁹；R¹⁸和R¹⁹分别表示H或C_1-6烃基或NR¹⁸R¹⁹一起表示吡咯烷-1-基、哌啶-1-基或吗啡啉-1-基。

R²²表示H、F、Cl、CN、OH、COOC_1-4烃基、OC_1-4烃基、C_1-4烃基或NR¹⁸R¹⁹；R¹⁸和R¹⁹分别表示H或C_1-6烃基或NR¹⁸R¹⁹一起表示吡咯烷-1-基、哌啶-1-基或吗啡啉-1-基。

R²³表示H、F、Cl、CN、C_1-4烃基、COOC_1-4烃基或OC_1-4烃基。

本发明中所述的C_1-4烃基：可以是直链的饱和或不饱和烃基，也可是支链的饱和或不饱和烃基，且可被F、Cl、CN、OH、COOH或NR¹⁸R¹⁹取代，R¹⁸和R¹⁹分别表示H或C_1-6烃基、或NR¹⁸R¹⁹一起表示六氢吡啶-1-基、1-吡咯烷基、1-吗啡啉基或1-哌嗪基。

本发明中所述的C_1-6烃基：可以是直链的饱和或不饱和烃基，也可是支链的饱和或不饱和烃基，且可被F、Cl、CN、OH、COOH或NR¹⁸R¹⁹取代，R¹⁸和R¹⁹分别表示H或C_1-6烃基、或NR¹⁸R¹⁹一起表示六氢吡啶-1-基、1-吡咯烷基、1-吗啡啉基或1-哌嗪基。

适合制备成治疗肿瘤或癌症的药物的式(I)所示化合物是R¹表示H、CH₃或OCH₃的化合物；最适合制备成治疗肿瘤或癌症的药物的式(I)所示化合物是R¹表示H或OCH₃的化合物。

适合制备成治疗肿瘤或癌症的药物的式(I)所示化合物是W表示O或NH的化合物；最适合制备成治疗肿瘤或癌症的药物的式(I)所示化合物是W表示O的化合物。

适合制备成治疗肿瘤或癌症的药物的式(I)所示化合物是R³表示H、F、CH₃、CH₂CH₃、OH、OCH₃或OCH₂CH₃的化合物；比较适合制备成治疗肿瘤或癌症的药物的式(I)所示化合物是R³表示H、CH₃、OH或OCH₃的化合物；最适合制备成治疗肿瘤或癌症的药物的式(I)所示化合物是R³表示CH₃的化合物。

适合制备成治疗肿瘤或癌症的药物的式(I)所示化合物是R⁴表示F、OH、CH₃、OCH₃或2-吡喃基的化合物；比较适合制备成治疗肿瘤或癌症的药物的式(I)所示化合物是R⁴表示F、OH、OCH₃或2-吡喃基的化合物；最适合制备成治疗肿瘤或癌症的药物的式(I)所示化合物是R⁴表示F或OH的化合物。

适合制备成治疗肿瘤或癌症的药物的式(I)所示化合物是表示1-吡咯基、丁二酰亚胺基、戊二酰亚胺基、丁内酰胺-1-基、戊内酰胺-1-基、3-甲基-吡咯-1-基、3-甲氧基-吡咯-1-基、3-甲基-丁二酰亚胺基、3-甲氧基-丁二酰亚胺基、3-甲基-戊二酰亚胺基、3-甲氧基-戊二酰亚胺基、3-甲基-丁内酰胺-1-基、3-甲氧基-丁内酰胺-1-基、3-甲基-戊内酰胺-1-基、3-甲氧基-戊内酰胺-1-基、4-甲基-戊内酰胺-1-基、4-甲氧基-戊内酰胺-1-基、2-氰基吗啡啉基、2-吡咯啉-1-基、邻苯二甲酰亚胺基、的化合物；最适合制备成治疗肿瘤或癌症的药物的式(I)所示化合物是R⁵表示1-吡咯基、丁二酰亚胺基、戊二酰亚胺基、丁内酰胺-1-基、戊内酰胺-1-基的化合物。

本发明中式(I)所示化合物的制备方法一：

式(VII)中R¹、R²、R³、R⁴和W表示的基团与式(I)中R¹、R²、R³、R⁴和W表示的基团相同；式(VIII)中R¹⁶与式(VI)中R¹⁶表示的基团相同，R²¹和R²²分别表示H或C_1-4烃基。

本发明中所述的式(VII)所示化合物的盐表示式(VII)所示化合物与盐酸、硫酸、磷酸、甲酸、乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸或对甲苯磺酸中的一种或一种以上的混合物形成的盐。

式(VII)所示化合物或其盐与式(VIII)所示化合物在酸或/和碱性试剂的存在下反应得到式(I)所示化合物。其中所述的式(VII)所示化合物的盐选自盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲酸盐、乙酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐。其中所述的酸性试剂选自盐酸、硫酸、磷酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸或苹果酸中的一种或一种以上的混合物。所述的酸性试剂的用量为式(VII)所示化合物的0.05～500倍(摩尔量)，所述的酸性试剂比较适合的用量为式(VII)所示化合物的0.2～50倍(摩尔量)，所述的酸性试剂最适合的用量为式(VII)所示化合物的0.7～5倍(摩尔量)。所述的碱性试剂选自碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾、乙酸钠、乙酸钾、磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、乳酸钠、乳酸钾、柠檬酸钠、柠檬酸钾、酒石酸钠、酒石酸钾、苹果酸钠、苹果酸钾、丙酸钠、丙酸钾、丁酸钠、丁酸钾、丁二酸钠、丁二酸钾、戊酸钠、戊酸钾、戊二酸钠或戊二酸钾中的一种或一种以上的混合物。碱性试剂的用量为式(VII)所示化合物的0.05～500倍(摩尔量)，碱性试剂比较适合的用量为式(VII)所示化合物的0.2～50倍(摩尔量)，碱性试剂最适合的用量为式(VII)所示化合物的0.7～5倍(摩尔量)。反应的温度在-10～150℃，反应比较适合的温度为0～100℃，反应的最佳温度为10～80℃。反应在溶剂如二氯甲烷、三氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、乙二醇二甲醚、乙醇、甲醇、异丙醇、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙酸甲酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、乙二醇二乙醚、N，N-二乙基甲酰胺、1，2-二氯乙烷、乙腈、水或式(VIII)所示化合物中的一种或多种溶剂的混合液中进行。如有需要，反应可用有机碱如：三乙胺、三甲胺、二异丙基乙胺、4-二甲氨基吡啶、4-(1-吡咯烷基)吡啶、吡啶或N-甲基马啉等作为缚酸剂或催化剂。作为缚酸剂时碱的用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的0.5-10倍，比较合适的用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的1-5倍；作为催化剂时碱的用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的0.01-2倍，比较适合的用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的0.05-0.2倍。式(VII)所示化合物或其盐与式(VIII)所示化合物的投料摩尔比为1∶0.1～1∶10000，式(VII)所示化合物或其盐与式(VIII)所示化合物比较合适的投料摩尔比为1∶0.5～1∶1000，式(VII)所示化合物或其盐与式(VIII)所示化合物最合适的投料摩尔比为1∶1～1∶500。

本发明提供的制备式(I)所示化合物的第二种方法：

其中，式(IX)中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和n所表示基团与式(II)中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和n所表示基团相同；式(X)中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和n所表示基团与式(II)中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和n所表示基团相同，式(X)中R¹、R²、R³、R⁴和W所表示基团与式(VII)中R¹、R²、R³、R⁴和W所表示基团相同。

式(VII)所示化合物或其盐与式(IX)所示化合物反应得到式(X)所示化合物，反应在二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、乙酸乙酯、乙酸甲酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、1，2-二氯乙烷、丙酮、四氢呋喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二乙基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈或水中的一种或一种以上的混合液中进行。反应中可加入或不加入吡啶、4-二甲胺基吡啶、4-二乙胺基吡啶或4-(吡咯烷-1-基)-吡啶中的一种或一种以上的混合物作为催化剂，催化剂的用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的0.01～10倍，催化剂比较合适的用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的0.02～5倍，催化剂的最佳用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的0.05～1倍。反应中可加入三乙胺、三甲胺、吡啶、二异丙基乙胺、N-甲基吗啡啉、N-甲基哌啶、N-乙基哌啶、4-二甲胺基吡啶、4-二乙胺基吡啶、4-(吡咯烷-1-基)-吡啶、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸铯、氢氧化钠或氢氧化钾中的一种或一种以上的混合物作为缚酸剂。缚酸剂的用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的0.4～20倍，缚酸剂比较合适的用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的0.8～10倍，缚酸剂的最佳用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的1～5倍。反应温度为-20～100℃，反应比较适合的温度为-10～80℃，反应的最佳温度为-5～80℃。式(IX)所示化合物与式(VII)所示化合物或其盐的投料摩尔比为1∶0.1～1∶10，式(IX)所示化合物与式(VII)所示化合物或其盐比较合适的投料摩尔比为1∶0.5～1∶5，式(IX)所示化合物与式(VII)所示化合物或其盐最合适的投料摩尔比为1∶0.8～1∶3。

式(X)所示化合物在脱水剂的作用下反应得到式(I)所示化合物。其中所述的脱水剂选自：DCC(二环己基碳化二亚胺)、EDC HCl(1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐)、CDI(N，N’-羰基二咪唑)或DIC(N，N’-二异丙基碳化二亚胺)。脱水剂的用量为式(X)所示化合物的摩尔量的0.1～10倍，脱水剂比较合适的用量为式(X)所示化合物的摩尔量的0.5～5倍，脱水剂最佳使用量为式(X)所示化合物的摩尔量的1～3倍。反应温度为-10～120℃，反应比较适合的温度为0～100℃，反应最适合的温度为20～100℃。反应在二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸甲酯、丙酮、四氢呋喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二乙基甲酰胺、二甲基亚砜或乙腈中的一种或一种以上的混合液中进行。

本发明公开的制备式(I)所示化合物的第三种方法：

其中式(XII)所示化合物中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R²¹、R²²和n所代表基团与式(II)所示化合物中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R²¹、R²²和n所代表基团相同，U表示Cl、Br、I、OTs(对甲苯磺酸酯基)或OMs(甲磺酸酯基)。式①所示化合物中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R²¹、R²²和n所代表基团与式(XII)所示化合物中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R²¹、R²²和n所代表基团相同，式①所示化合物中R¹、R³、R⁴、R²和W所代表基团与式(VII)所示化合物中R¹、R³、R⁴、R²和W所代表基团相同。式②所示化合物中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、Z和p所代表基团与式(IV)所示化合物中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、Z和p所代表基团相同，式②所示化合物中U表示Cl、Br、I、OTs(对甲苯磺酸酯基)或OMs(甲磺酸酯基)。式③所示化合物中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、Z和p所代表基团与式(IV)所示化合物中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、Z和p所代表基团相同，式③所示化合物中R¹、R³、R⁴、R²和W所代表基团与式(VII)所示化合物中R¹、R³、R⁴、R²和W所代表基团相同。

式(VII)所示化合物或其盐与式(XII)所示化合物或式②所示化合物在碱的作用下反应得到式①所示化合物或式③所示化合物。其中所述的碱选自：三乙胺、三甲胺、二异丙基乙胺、吡啶、4-二甲胺基吡啶、4-二乙胺基吡啶、4-(吡咯烷-1-基)-吡啶、N-甲基吗啡啉、N-甲基哌啶、N-乙基哌啶、碳酸铯、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠或氢氧化钾中的一种或一种以上的混合物。碱的用量为式(VII)所示化合物或其盐的摩尔量的0.5～10，碱的比较合适的用量为式(VII)所示化合物或其盐的摩尔量的0.8～7倍，碱的最合适的用量为式(VII)所示化合物或其盐的摩尔量的1～5倍。反应在二氯甲烷、三氯甲烷、1，2-二氯乙烷、丙酮、乙酸乙酯、异丙醇、乙酸甲酯、乙酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、乙腈、乙醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二乙基甲酰胺、二甲基亚砜、四氢呋喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、乙二醇单甲醚、乙二醇单乙醚、乙二醇、乙醇、丙醇或水中的一种或一种以上的混合液中进行。反应温度为-20～120℃，反应比较适合的温度为-10～100℃，反应最合适的温度为0～80℃。式(VII)所示化合物或其盐与式(XII)所示化合物的投料摩尔比为1∶0.2～1∶10，式(VII)所示化合物或其盐与式(XII)所示化合物比较合适的投料摩尔比为1∶0.5～1∶5，式(VII)所示化合物或其盐与式(XII)所示化合物的最佳投料摩尔比为1∶0.8～1∶3。

式①所示化合物或式③所示化合物在还原剂的作用下，反应得到式(I)所示化合物。所述的还原剂选自NaBH₃CN、NaBH₄、KBH₄、KBH₃CN、NaBH(CH₃COO)₃、KBH(CH₃COO)₃或LiAlH₄中的一种或一种以上的混合物。还原剂的用量为式①或③所示化合物的摩尔量的0.5～5倍，还原剂的比较合适的用量为式①或③所示化合物的摩尔量的0.8～3倍，还原剂的最佳用量为式①或③所示化合物的摩尔量的1～3倍。反应在二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、乙二醇、四氢呋喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、乙二醇单甲醚、乙二醇单乙醚、乙酸甲酯、乙酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二乙基甲酰胺或二甲基亚砜中的一种或一种以上的混合液中进行。反应温度为-20～100℃，反应比较适合的温度为-10～80℃，反应最适合的温度为0～50℃。

本发明公开的制备式(I)所示化合物的第四种方法：

式④所示化合物中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和n所代表的基团与式(II)所示化合物中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和n所代表的基团相同。式⑤所示化合物中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、Z和p所代表基团与式(IV)所示化合物中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、Z和p所代表基团相同。

式④所示化合物或式⑤所示化合物与式(VII)所示化合物或其盐在还原剂的作用下反应得到式(I)所示化合物。其中所述的还原剂选自NaBH₃CN、NaBH₄、KBH₄、KBH₃CN、NaBH(CH₃COO)₃、KBH(CH₃COO)₃或LiAlH₄中的一种或一种以上的混合物。还原剂的用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的0.5～5倍，还原剂的比较合适的用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的0.8～4倍，还原剂的最佳用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的1～3倍。反应中可加入碱，如三甲胺、三乙胺、吡啶、N-甲基吗啡啉、N-甲基哌啶、N-乙基哌啶、二异丙基乙胺、碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯、碳酸氢钠或碳酸氢钾中的一种或一种以上的混合物。碱的用量为式(VII)所示化合物或其盐的摩尔量的0.5～10倍，碱的比较合适的用量为式(VII)所示化合物或其盐的摩尔量的0.8～5倍，碱的最佳用量为式(VII)所示化合物或其盐的摩尔量的1～3倍。反应在二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、乙二醇、四氢呋喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、乙二醇单甲醚、乙二醇单乙醚、乙酸甲酯、乙酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二乙基甲酰胺或二甲基亚砜中的一种或一种以上的混合液中进行。反应温度为-20～100℃，反应比较适合的温度为-10～80℃，反应最适合的温度为0～50℃。

本发明公开的制备式(I)所示化合物的第五种方法：

其中式⑥所示化合物中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R²³和n所表示的基团与式(III)所示化合物中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R²³和n所表示的基团相同，式⑥所示化合物中的T表示Cl、Br、I、OTs或OMs。式⑦所示化合物中R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R²³和n所表示的基团与式(III)所示化合物中的R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R²³和n所表示的基团相同，式⑦所示化合物中的R¹、R³、R⁴、R²和W所代表基团与式(VII)所示化合物中R¹、R³、R⁴、R²和W所代表基团相同。

式⑥所示化合物在碱的作用下与式(VII)所示化合物反应得到式⑦所示化合物。反应在二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、乙二醇、四氢呋喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、乙二醇单甲醚、乙二醇单乙醚、乙酸甲酯、乙酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二乙基甲酰胺或二甲基亚砜中的一种或一种以上的混合液中进行。反应温度为-20～100℃，反应比较适合的温度为-10～80℃，反应最适合的温度为0～50℃。其中所述的碱选自：三乙胺、三甲胺、二异丙基乙胺、哌啶、4-二甲胺基吡啶、4-二乙胺基吡啶、4-(吡咯烷-1-基)-吡啶、N-甲基吗啡啉、N-甲基哌啶、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铯、碳酸氢钾、氢氧化钠或氢氧化钾中的一种或一种以上的混合物。碱的用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的0.5～10，碱的比较合适的用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的0.8～7倍，碱的最合适的用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的1～3倍。式(VII)所示化合物或其盐与式⑥所示化合物的投料摩尔比为：1∶0.2～1∶10，式(VII)所示化合物或其盐与式⑥所示化合物比较合适的投料摩尔比为：1∶0.5～1∶5，式(VII)所示化合物或其盐与式⑥所示化合物的最佳投料摩尔比为：1∶0.8～1∶2。

式⑦所示化合物反应得到式(I)所示化合物。其中所述的脱水剂选自分子筛、无水碳酸钾或无水碳酸钠。反应中可加入或不加入乙酸、甲酸、盐酸、硫酸、三氟乙酸、三氯乙酸、丙酸、丁二酸、戊二酸、丙二酸、甲磺酸、柠檬酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、苯磺酸或对甲苯磺酸中的一种或一种以上的混合物作为酸性催化剂。酸性催化剂的用量为式⑦所示化合物的摩尔量的0.02～10倍，酸性催化剂比较适合的用量为式⑦所示化合物的摩尔量的0.02～5倍，酸性催化剂的最佳用量为式⑦所示化合物的摩尔量的0.05～2倍。反应在二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、乙二醇、四氢呋喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、乙二醇单甲醚、乙二醇单乙醚、乙酸甲酯、乙酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二乙基甲酰胺或二甲基亚砜中的一种或一种以上的混合液中进行。反应温度为-20～100℃，反应比较适合的温度为-10～80℃，反应最适合的温度为0～50℃。

本发明中公开的制备式(I)所示化合物的第六种方法：

其中式⑧中R¹⁵和Q表示的基团与式(V)中R¹⁵和Q表示的基团相同。式⑨中R¹⁵和Q表示的基团与式(V)中R¹⁵和Q表示的基团相同，式⑨中R¹、R³、R⁴、R²和W所代表基团相同与式(VII)所示化合物中R¹、R³、R⁴、R²和W所代表基团相同。式⑩中R¹⁵和Q表示的基团与式(V)中R¹⁵和Q表示的基团相同，式⑦中R¹、R³、R⁴、R²和W所代表基团相同与式(VII)所示化合物中R¹、R³、R⁴、R²和W所代表基团相同。

式(VII)所示化合物或其盐与式⑧所示化合物反应得到式⑨或式⑩所示化合物，反应在二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、乙酸乙酯、乙酸甲酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、1，2-二氯乙烷、丙酮、四氢呋喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二乙基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈或水中的一种或一种以上的混合液中进行。反应中可加入或不加入吡啶、4-二甲胺基吡啶、4-二乙胺基吡啶或4-(吡咯烷-1-基)-吡啶中的一种或一种以上的混合物作为催化剂，催化剂的用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的0.01～10倍，催化剂比较合适的用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的0.02～5倍，催化剂的最佳用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的0.05～1倍。反应中可加入三乙胺、三甲胺、吡啶、二异丙基乙胺、N-甲基吗啡啉、N-甲基哌啶、N-乙基哌啶、4-二甲胺基吡啶、4-二乙胺基吡啶、4-(吡咯烷-1-基)-吡啶、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸铯、氢氧化钠或氢氧化钾中的一种或一种以上的混合物作为缚酸剂。缚酸剂的用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的0.4～20倍，缚酸剂比较合适的用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的0.8～10倍，缚酸剂的最佳用量为式(VII)所示化合物的摩尔量的1～5倍。反应温度为-20～100℃，反应比较适合的温度为-10～80℃，反应的最佳温度为0～80℃。式(VII)所示化合物或其盐与式⑧所示化合物的投料摩尔比为：1∶0.2～1∶10，式(VII)所示化合物或其盐与式⑧所示化合物比较合适的投料摩尔比为：1∶0.5～1∶5，式(VII)所示化合物或其盐与式⑧所示化合物的最佳投料摩尔比为：1∶0.8～1∶3。

式⑨或式⑩所示化合物在脱水剂的作用下反应得到式(I)所示化合物。其中所述的脱水剂选自：DCC(二环己基碳化二亚胺)、EDC HCl(1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐)、CDI(N，N’-羰基二咪唑)或DIC(N，N’-二异丙基碳化二亚胺)。脱水剂的用量为式⑨或⑩所示化合物的摩尔量的0.1～10倍，脱水剂比较合适的用量为式⑨或⑩所示化合物的摩尔量的0.5～5倍，脱水剂最佳使用量为式⑨或⑩所示化合物的摩尔量的1～3倍。反应温度为-10～120℃，反应比较适合的温度为0～100℃，反应最适合的温度为20～100℃。反应在二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸甲酯、丙酮、四氢呋喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二乙基甲酰胺、二甲基亚砜或乙腈中的一种或一种以上的混合液中进行。反应中可加入吡啶、4-二甲氨基吡啶、4-二乙氨基吡啶或4-(吡咯烷-1-基)吡啶中的一种或一种以上的混合物作为催化剂。催化剂的用量为式⑨或⑩所示化合物的摩尔量的0.01～1倍，催化剂比较适合的用量为式⑨或⑩所示化合物的摩尔量的0.02～0.8倍，催化剂的最佳用量为式⑨或⑩所示化合物的摩尔量的0.03～0.5倍。

式(I)所示化合物可用于制备治疗癌症或肿瘤的药物，其中所述的癌症包括但不限于肠癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、小细胞肺癌或非小细胞肺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、卵巢癌、前列腺癌、脑胶质瘤、淋巴癌、皮肤癌、色素瘤、甲状腺癌、多发性骨髓癌、骨髓发育不良、多发性骨髓瘤、霍奇金病或非霍奇金淋巴瘤、结肠癌、直肠癌、脑癌、头颈癌、尿道癌、肾癌、膀胱癌、黑色素瘤子宫癌、胰腺癌或各种白血病(包括但不限于白血病、急性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病或慢性淋巴细胞白血病)。

式(I)所示化合物可与一种或一种以上的其他用于治疗增殖性疾病的化合物包括但不限于其他种类抗癌药、免疫增强剂、抗癌增效剂、激素或中药制剂联合使用。联合使用时可以是同时使用，也可以相继使用。可与本发明提供的式(I)所示化合物联合使用的其他用于治疗增殖性疾病的化合物包括但不限于：紫杉醇、环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、沙利多胺、顺铂、revimid、HKI272、tarceva、Irresa、Actimid、BIBW2992、revlimid(来那度胺)、三嗪衍生物如六甲密胺；酶如天冬酰胺酶；抗菌剂如博来霉素、更生霉素、柔红霉素、阿霉素、伊达比星、丝裂霉素、表阿霉素或普卡霉素；烷化剂如白消安、卡铂、卡氮芥、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、异环磷酰胺、罗氮芥、氮芥、苯丙氨酸氮芥、甲基苄肼或噻替哌；抗代谢剂如克拉屈滨、阿糖胞苷、氟尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、羟基脲、巯嘌呤、甲氨蝶呤、吉西他滨、喷托他丁或硫鸟嘌呤；抗有丝分裂剂如依托泊苷、紫杉醇、替尼泊苷、长春花碱、长春烯碱或长春新碱；激素药如芳香酶抑制剂如氨鲁米特；皮质甾类如地塞米松、泼尼松或黄体生成素释放激素(LH-RH)；抗雌激素剂如他莫昔芬、福美司坦或来曲唑；抗雄激素剂如氟利坦；生物反应调节剂如淋巴因子中的阿地流津或其他白细胞介素；干扰素如干扰素-α；生长因子如红细胞生成素、非格司亭或沙格司亭(sagramostim)；分化剂如维生素D衍生物如西奥骨化醇(seocalcitol)；全反式视黄酸；免疫调节剂如左旋咪唑；单克隆抗体；肿瘤坏死因子α；或血管生成抑制剂。其中比较适于与本发明公开的式(I)所示化合物的组合物联合使用的其他用于治疗增殖性疾病的化合物选自：紫杉醇、氟脲嘧啶、依托泊苷、环磷酰胺、顺铂、卡铂、长春新碱、吉西他滨、长春烯碱、苯丁酸氮芥、阿霉素、苯丙氨酸氮芥或西奥骨化醇中的一种或多种。

本发明还涉及含有式(I)所示化合物的制剂。本发明中的制剂是指式(I)所示化合物单独或与必要的药学上可接受的药剂辅料制备成合适的药物剂型，使之适于通过包括但不限于口服、口含、静脉注射、腹腔注射、真皮内给药、皮注、肌肉注射、滴鼻、滴眼、吸入、肛内给药、阴道给药、或表皮给药等给药方式应用。其中所述的合适的药物剂型包括但不限于溶液剂、水针、粉针、冻干粉针、口服液、糖浆、片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、凝胶、软胶囊、栓剂、气雾剂或乳膏剂等剂型。本发明中所述剂型中除至少含有一种式(I)所示化合物外，还可含有制备该剂型所需的合适的载体物质、赋形剂、润滑剂、崩解剂、助流剂、增溶剂、填充剂、溶剂、稀释剂、助悬剂、渗透压调节剂、缓冲剂、止痛剂、防腐剂、抗氧化剂、甜味剂、着色剂和/或粘合剂。

本发明提供的含有式(I)所示化合物制备成粉针、水针或冻干粉针时，使用前可加入适量的无菌药用稀释剂，包括但不限于注射用水、生理盐水、葡萄糖水或其他已知的水性载体，制备成溶液制剂。

本发明中所述的增溶剂包括但不限于聚乙二醇包括但不限于聚乙二醇400、聚乙二醇600或聚乙二醇2000，吐温类包括但不限于吐温20、吐温40或吐温80，聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆(poloxamer)、卵磷脂、大豆卵磷脂、脑磷脂、磷脂酸、二棕榈酸磷脂酰胆碱、氢磷脂酰乙醇氨、磷脂酰丝氨酸、胆固醇、二氨胆固醇、大豆甾酰糖苷、丙二醇、D-甘露醇、海藻糖、苯甲酸苄酯、乙醇、三氨基甲烷、碳酸钠、柠檬酸钠、水杨酸钠、醋酸钠、三乙醇胺、大豆甾醇或麦角固醇中的一种或一种以上的混合物。

本发明中所述的赋形剂包括但不限于：乳糖、糖、D-甘露醇、D-山梨醇、淀粉、α-淀粉、糊精、结晶纤维素、低取代的羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠、阿拉伯胶、支链淀粉、轻质无水硅酸、合成硅酸铝或硅酸铝镁等。

本发明所述的润滑剂包括但不限于：硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石粉、硅胶或十二烷基硫酸镁等。

本发明所述的粘合剂包括但不限于：α-淀粉、蔗糖、明胶、阿拉伯胶、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、结晶纤维素、糖、D-甘露醇、海藻糖、糊精、支链淀粉、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等。

本发明所述的崩解剂包括但不限于：羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、交联羧甲基淀粉钠或处理琼脂中的一种或多种。

本发明所述的助流剂包括但不限于微粉硅胶、Cab-O-Sil(Cabot公司)、Arosil(Degussa公司)或水合硅铝酸钠中的一种或多种。

本发明所述的填充剂包括但不限于：乳糖、糖、淀粉、甘露醇、赤藓糖醇、糖粉、糊精或微晶纤维素。

本发明所述的溶剂包括但不限于：注射用水、生理盐水、林格溶液、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、芝麻油、玉米油、橄榄油、棉子油等。

本发明所述的助悬剂包括但不限于：表面活性剂如硬脂酰基三乙醇胺、月桂基硫酸钠、月桂基氨基丙酸、卵磷脂、苯扎氯铵、苯乙氯铵、甘油一硬脂酸酯；亲水性聚合物如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素等；聚溶剂化物或聚氧乙烯硬化蓖麻油等。

本发明所述的渗透压调节剂包括但不限于：氯化钠、甘油、D-甘露醇、D-山梨醇或葡萄糖等。

本发明所述的缓冲剂包括但不限于：磷酸盐、醋酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、等的缓冲溶液。

本发明所述的止痛剂包括但不限于苯甲醇等。

本发明所述的防腐剂包括但不限于：对羟苯甲酮、氯代丁醇、苯甲醇、苯乙醇、脱氢醋酸或山梨酸等。

本发明所述的抗氧化剂包括但不限于：亚硫酸盐或抗坏血酸盐等。

本发明所述的着色剂包括但不限于：水溶性食用枸橼黄染料(食用染料如食用红No.2或No.3，食用黄No.4或No.5，食用蓝No.1或No.2)；水不溶性色沉染料(如水溶性食用枸橼黄染料的铝盐)、日落黄、柠檬黄或胭脂红；天然染料(如β-胡萝卜素、叶绿素、铁丹)等。

本发明所述的甜味剂包括但不限于：天然或人工甜味剂，如糖精钠、甘草次酸二钾、木糖醇、阿司巴甜、甜橙固体香精、甜蜜素、山梨糖、蔗糖、葡萄糖或甜菊甙等。

细胞毒测试(MTS Assay)

一、细胞株和试剂

HePG-2：人源肝癌细胞株；

A549：人源肺癌细胞株；

LOVO：人源结肠癌细胞株；

A431：表皮样细胞株

THP-1：人源白血病细胞株；

U937：人源淋巴癌细胞株；

NCI-H460：人源肺癌细胞株；

NCI-H446：人源肺癌细胞株；

DU-145：人源前列腺癌细胞株；

786-O：人源肾癌细胞株；

HL-60：人源白血病细胞株；

K562：人源白血病细胞株；

PC-3：人源前列腺癌细胞株；

RPMI 1640培养液；MTT：四氮唑蓝；DMSO：二甲亚砜；96孔细胞培养盘；

二、细胞生长抑制活性测定

1、细胞培养及药物处理：

细胞接种于含10％胎牛血清的RPMI 1640细胞培养液中(补充青霉素、链霉素各100ku/L)，培养器皿置于37℃含5％CO₂的细胞培养箱中，每2-3天换液一次，0.25％胰蛋白酶液消化，传代和收集细胞。

将对数生长期细胞，用含10％胎牛血清的RPMI 1640培养液配制成所需浓度的细胞悬液，按每孔3000-5000细胞(100μl)加入到96孔细胞培养板中，培养24hr后每孔加入不同浓度的受试品100μl，每个浓度有4个平行孔。培养72hr～120hr后弃上清，每孔加入100μl新鲜配制的0.5mg/ml MTT的无血清培养液，37℃培养4hr后弃上清。以200μlDMSO溶解甲臜，轻度振荡15min后，用酶标仪在检测波长570nm、参比波长450nm测定光吸收值(OD-值)。

2、数据处理：

数据用x±s表示；抑制率＝(对照组OD-值-给药组OD-值)/对照组OD-值×100％；用最大抑制率I_max和半数有效浓度(IC₅₀)表示抗癌效应。用MicroCal Origin软件作图，及该软件中的四参数Logistic程序拟合受试物对肿瘤细胞生长的抑制曲线，求出抑制肿瘤细胞增殖的半数有效浓度(IC₅₀：μg/ml)。

3、结果

受试物的暴露浓度为0.001μg/ml、0.003μg/ml、0.009μg/ml、0.027μg/ml、0.082μg/ml、0.247μg/ml、0.741μg/ml、2.222μg/ml、6.667μg/ml、20μg/ml；阿霉素(阳性药)暴露浓度为1.25μg/ml、5μg/ml、20μg/ml。96孔板中，每孔接种3000-5000个细胞，每个浓度4个平行孔。表1列出了化合物在1μM浓度下对HL-60细胞的生长抑制率，表2列出了化合物对多种肿瘤细胞的抑制活性。

表1受试化合物在1μM浓度下对HL-60细胞的生长抑制率

 化合物  抑制率(％) 实施例1  80 实施例4  62 实施例5  35 实施例6  43 实施例7  10

 实施例8  71

表2受试化合物对肿瘤细胞的抑制活性

根据以上细胞数据，本发明所公开的化合物对人源癌细胞均具有抑制活性，且其中的实施例1化合物活性与表阿霉素的活性相当或更好，并且对多种人源肿瘤细胞株，如人白血病K562、人前列腺癌PC-3、淋巴癌U937、肾癌786-O、肺癌A549等细胞系均有非常强的生长抑制作用。因此，本发明所提供的化合物具有广谱的抗肿瘤活性。

具体实施例

实施例13‘-吡咯基表阿霉素

在1L的三口瓶中加入3.076g表阿霉素(Epirubicin)盐酸盐，加入300ml蒸馏水和300ml 1，2-二氯乙烷，30ml 2，5-二甲氧基四氢呋喃和6ml冰醋酸。氩气保护下加热回流45min，反应结束。反应液冷却至室温，将反应液倒入200ml的冰水中，静置分液。有机相用200ml饱和食盐水洗一次，无水硫酸镁干燥，过滤旋干；水相在冰浴搅拌下加入100ml 5％碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取(50ml×3)，合并氯仿层，氯仿层用100ml饱和食盐水洗一次，过滤旋去溶剂，所得粗品与上述所得粗品合并，柱层析提纯，氯仿∶甲醇＝35∶1洗脱，得产品2.91g。MS：592(M-1)

实施例23‘-吡咯基表阿霉素

在1L的三口瓶中加入3.076g表阿霉素(Epirubicin)盐酸盐，加入500ml蒸馏水，30ml 2，5-二甲氧基四氢呋喃，6ml冰醋酸和435mg乙酸钠。氩气保护下于50℃搅拌反应4hr，反应结束。反应液冷却至室温，抽滤得滤饼。滤饼重结晶即得目标化合物。MS：592(M-1)

实施例33’-吡咯基-4’-(吡喃-2-基)表阿霉素MS：677

用实施例1或实施例2中的方法，以4’-(吡喃-2-基)表阿霉素为原料制备得到。

实施例43’-丁二酰亚胺基表阿霉素

50ml单口圆底瓶中加入100mg表阿霉素盐酸盐，用3mlDMF(N，N-二甲基甲酰胺)溶解，加入63μlDIEA(二异丙基乙基胺)和2mgDMAP(4-二甲胺基吡啶)搅拌10min，加入21mg丁二酸酐，氩气保护下室温搅拌1小时。旋干反应液，所得残余物中加入20ml蒸馏水和10ml氯仿，抽滤，得滤饼。将所得滤饼真空干燥，取18mg转入50ml单口瓶中，加入5ml二氯甲烷(分子筛干燥)，12μl三乙胺(分子筛干燥)，再加入69mg三聚氯氰，室温搅拌过夜。反应液中加入20ml二氯甲烷，用20ml水洗一次，所得有机相用20ml饱和食盐水洗一次，旋去溶剂，得粗品。薄层层析纯化，氯仿∶甲醇＝22∶1展开，得目标化合物。MS：624(M-1)

制备该化合物的第二种方法：50ml单口圆底瓶中加入100mg表阿霉素盐酸盐，用3mlDMF溶解，加入63μlDIEA(二异丙基乙基胺)和2mgDMAP(4-二甲胺基吡啶)搅拌10min，加入21mg丁二酸酐，氩气保护下室温搅拌1小时。旋干反应液，所得残余物中加入20ml蒸馏水和10ml氯仿，抽滤，得滤饼。将所得滤饼真空干燥，取18mg转入50ml单口瓶中，加入5ml二氯甲烷(分子筛干燥)，加入28mgCDI(羰基二咪唑)，加热回流1hr。反应液中加入20ml二氯甲烷，用20ml水洗一次，所得有机相用20ml饱和食盐水洗一次，旋去溶剂，得粗品。薄层层析纯化，氯仿∶甲醇＝22∶1展开，得目标化合物。MS：624(M-1)

用实施例4中的方法合成下列化合物：

实施例53’-戊二酰亚胺基表阿霉素MS：638(M-1)

实施例63’-顺丁烯二酰亚胺基表阿霉素MS：623

实施例73’-(吡啶并-(2，3)丁二酰亚胺基)表阿霉素MS：674

实施例83’-(苯并-(2，3)丁二酰亚胺基)表阿霉素MS：673

实施例93‘-丁内酰胺基表阿霉素

取10mg表阿霉素盐酸盐溶于5ml无水DMF，冰浴降温至0～5℃，加入7mg二异丙基乙胺搅拌10min，加入2.4mg 4-氯丁酰氯，反应30min。冰浴下加入100ml水，用氯仿萃取3次(5ml×3)；合并氯仿层，用饱和食盐水洗一次，无水硫酸镁干燥，过滤旋去溶剂。薄层层析纯化，氯仿∶甲醇＝95∶5展开。所得8mg产品溶于3ml无水DMF，通氩气保护，冰浴降温至-5～0℃加入0.3mg氢化钠，搅拌24hr。反应结束，加入50ml水，用氯仿萃取3次(5ml×3)，合并氯仿层，饱和食盐水洗一次，无水硫酸镁干燥，过滤旋去溶剂。薄层层析纯化，氯仿∶甲醇＝30∶1展开，得产品6mg。MS：611。