一种防治电磁辐射损害男性生殖的药物及制备方法

摘要

本发明涉及一种防治电磁辐射损害男性生殖的药物及制备方法。其中药物由生地黄、黄芪、人参、三七、枸杞子、陈皮组成，所述药物采用乙醇回流及水煮醇沉法提取有效成分制备胶囊。本发明药物对因电磁辐射热效应、高温热环境造成的男性生殖功能损害具有明显防治效果，且安全、无毒副作用，对长期从事电磁辐射暴露、高温热环境暴露的职业人群的生殖健康具有防治和保护作用。

说明书

技术领域

本发明属于药物领域，特别涉及一种防治电磁辐射损害男性生殖的药物及制备方法。

背景技术

电磁辐射、高温已成为人们最常接触到的职业环境有害因素，其对男性职业人群生殖健康的影响越来越引起人们的关注。由于作业过程中电磁辐射、高温作用于人体的时间长，个体防护困难，长期大剂量的电磁辐射或高温环境暴露可造成男性生殖系统损害，主要表现在性欲减退、阳痿及早泄，还可损害生精细胞，一过性影响精液质量导致不育、畸形，其危害不容忽视。

有关电磁辐射对健康危害的效应及机制的研究表明电磁辐射具有明确热效应损伤，电磁辐射较大剂量或长时间辐照后动物机体睾丸温度呈明显上升趋势，而睾丸对温度的变化非常敏感，温度升高可能导致睾丸组织的脱水或水肿，大剂量电磁辐射可导致睾丸超微结构异常、精原染色体含量增加，还可诱发精子细胞染色体畸变、睾丸生精细胞凋亡等病理变化，因此男性生殖系统成为电磁辐射及高温热应激损害的主要靶器官之一。目前，已有部分抗电磁辐射的药物或产品，但大部分均是通过提高免疫功能、抗氧化损伤等非特异方式进行防治；在高温热应激损伤防治方面，主要是防治中暑的药物，缺乏针对电磁辐射、热应激生殖系统损害进行防治的药物。

电磁辐射、热应激导致的男性生殖损害与因内分泌、免疫、病原体等其它原因导致的男性不育或生殖功能减退有着本质区别，尤其是损害机制方面更是相差甚远，因此采用常见的激素、补肾壮阳类药物来治疗电磁辐射、热应激导致的男性生殖损害，并不能达到令人满意的临床效果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种防治电磁辐射损害男性生殖的药物及制备方法。本发明所述药物对因电磁辐射热效应、高温热环境造成的男性生殖功能损害具有明显防治效果，且安全、无毒副作用，对长期从事电磁辐射暴露、高温热环境暴露的职业人群的生殖健康具有防治和保护作用。

本发明的技术方案是：防治电磁辐射损害男性生殖的药物，包括生地黄、黄芪、人参、三七、枸杞子、陈皮，其各成分的重量份为：

生地黄    5-15份；

黄芪      2.5-10份；

人参      2.5-10份；

三七      2.5-10份；

枸杞子    2.5-7份；

陈皮      1.5-5份。

本发明较好的技术方案是：

生地黄    10-15份；

黄芪      5-10份；

人参      5-10份；

三七      5-10份；

枸杞子    5-7份；

陈皮      3-5份。

制备防治电磁辐射损害男性生殖的药物的方法，其以下步骤：

(a)将生地黄、黄芪、人参打碎并混合，80％乙醇回流提取2次，每次1～2小时，醇提液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃)，对生地黄、黄芪、人参进行提取；

(b)生地黄、黄芪、人参提取后的药渣与三七、枸杞子、陈皮煎煮2次，每次2～3小时，同时收集挥发油，药液滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃)，加乙醇使溶液含醇量达70％，静置，滤过，滤液与上述浓缩液合并，浓缩至相对密度为1.30～1.35(60℃)的稠膏，加5％-10％淀粉辅料，混合制软材，过筛制粒，于烘箱中低温干燥，整粒，装胶囊即得。

电磁辐射对男性生殖系统的损害与高温热应激造成的男性生殖系统损害，在损伤效应及损伤机理方面极为相似，经中医辨证大部分患者属于阳热亢进，灼伤阴沣，气血不足，肾精亏虚。因此本发明采取清热解毒，养阴补肾的辨证施治原则。

本发明药物以生地黄、黄芪、人参、三七、枸杞子、陈皮为原料，按照中医理论组方，通过现代制药工艺提取各原料药物中的有效成分而制成胶囊药物。其中，生地黄甘、苦，寒，入心、肝、肾经，清热、养阴、生沣，用于内热阴虚、口咽干燥等。生地黄有一定的强心、利尿、升高血压、降低血糖等作用。生地黄的提取物能可以明星增强心肌收缩力，对衰弱心脏更显著；促进血液的凝固，能缩短出血时间；可以减轻大鼠接受60钴照射引起的血小板损害，并有一定的抗辐射损伤作用；生地黄煎剂还有保护肝脏，防止肝糖原减少的作用；另外还具有镇静、抗炎等作用。

黄芪性味甘温，有辅中益气、固本升血之功效，主要药理作用具有显著的免疫调节功能，对缺氧、高寒等应激刺激具有保护作用，有明显抗X线辐射、促进小鼠淋巴细胞增殖和IL-2产生的作用，另外，其具有抗疲劳、抗缺氧、抗肿瘤、抗辐射等作用。

人参性味甘温，有益气健脾、填精补髓之功效，有稳定细胞膜的作用，可提高细胞膜的流动性，还可选择性降低细胞内的钙浓度，对缺血、缺氧、高温等多种应激引起的细胞损伤有保护作用，能促进骨髓细胞有丝分裂，刺激骨髓造血，具有抗疲劳、抗应激、抗突变、抗辐射作用。

三七性味甘微苦温，可活血化瘀，扩张周围血管，消除自由基，并有雄性激素样作用，使大鼠精囊腺重量明显增加。

枸杞子性味甘平，有益精补肾之功效，用于治疗肾精亏虚所致的腰膝酸软，并有抗氧化、延缓衰老与生长刺激作用。

陈皮苦、辛，温，归脾、肺经，可健脾行气通络，既调整肠胃功能，又制约生地黄、人参、黄芪之滋腻。

该复方中药以生地黄为君药清热凉血，养阴生沣；人参、黄芪、枸杞子等为臣药益气健脾、补肾生精填髓，三七、陈皮为佐药祛瘀通络、健脾行气。纵观全方，从肾立论，一则后天之精化源充足，可补肾精之不足而填充脑髓；二则气血运行通畅，既可杜绝痰浊、血瘀等病理因素的产生，又可使产生之痰浊、瘀血消散。诸药合用起到了清热生沣、滋阴益肾、扶正固本之功效，对因电磁辐射热效应、高温环境热应激导致的阳热亢进，灼伤阴沣，气血不足，肾精亏虚具有明确针对性。该方组方合理，符合中医理论和组方原则。

本发明所述的重量份，可以为克、千克等计量单位。

附图说明

图1为中药干预后电磁辐射暴露雄性大鼠睾丸组织病理学观察图，其中，A为正常组，B为电磁辐射组，C为中药干预低剂量组，D为中药干预高剂量组；

图2为睾丸组织透射电镜观察图，其中，A为电磁辐射组；胞质内见较多脂滴(黑色↑)及胞膜呈髓鞘样结构(白色↑)；B为中药干预高剂量组胞核规则(N)，细胞超微结构有明显改善；

图3为中药干预后电磁辐射暴露雄性大鼠生精细胞凋亡观察图，其中，A为电磁辐射组；B为中药干预高剂量组。

具体实施方式

实施例1

取生地黄5kg、黄芪2.5kg、人参2.5kg，将其混合并打碎至40目，加入提取罐中，加入60kg 80％乙醇，加热至60℃，回流提取2次，每次1～2小时，过滤并合并提取液，对醇提液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃)。将生地黄、黄芪、人参提取后的药渣与2.5kg三七、2.5kg枸杞子、1.5kg陈皮混合，加入80kg水，加热至沸，煎煮2次，每次2～3小时，同时收集挥发油，布氏漏斗抽滤，滤液减压浓缩至稠膏状，相对密度为1.10～1.15(60℃)，用乙醇沉淀法处理，加乙醇使溶液含醇量达70％，搅拌均匀，静置，滤过，滤液与前述提取的生地黄、黄芪、人参浓缩液合并，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(60℃)的稠膏，加5％淀粉辅料，混合制软材，过筛制粒，于烘箱中60-70℃低温干燥，整粒，装胶囊即得成品。

实施例2

取生地黄10kg、黄芪5kg、人参5kg，将其混合并打碎至40目，加入提取罐中，加入120kg 80％乙醇，加热至60℃，回流提取2次，每次1～2小时，过滤并合并提取液，对醇提液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃)。将生地黄、黄芪、人参提取后的药渣与5kg三七、5kg枸杞子、3kg陈皮混合，加入140kg水，加热至沸，煎煮2次，每次2～3小时，同时收集挥发油，布氏漏斗抽滤，滤液减压浓缩至稠膏状，相对密度为1.10～1.15(60℃)，用乙醇沉淀法处理，加乙醇使溶液含醇量达70％，搅拌均匀，静置，滤过，滤液与前述提取的生地黄、黄芪、人参浓缩液合并，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(60℃)的稠膏，加5％淀粉辅料，混合制软材，过筛80目制粒，于烘箱中60-70℃低温干燥，整粒，装入0号胶囊即得成品。

实施例3

取生地黄12.5kg、黄芪7.5kg、人参7.5kg，将其混合并打碎至40目，加入提取罐中，加入160kg 80％乙醇，加热至60℃，回流提取2次，每次1～2小时，过滤并合并提取液，对醇提液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.10～1.15。将生地黄、黄芪、人参提取后的药渣与7.5kg三七、6kg枸杞子、4kg陈皮混合，加入200kg水，加热至沸，煎煮2次，每次2～3小时，同时收集挥发油，布氏漏斗抽滤，滤液减压浓缩至稠膏状，相对密度为1.10～1.15(60℃)，用乙醇沉淀法处理，加乙醇使溶液含醇量达70％，搅拌均匀，静置，滤过，滤液与前述提取的生地黄、黄芪、人参浓缩液合并，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(60℃)的稠膏，加5％淀粉辅料，混合制软材，过筛80目制粒，于烘箱中60-70℃低温干燥，整粒，装入0号胶囊即得成品。

实施例4

取生地黄15kg、黄芪10kg、人参10kg，将其混合并打碎至40目，加入提取罐中，加入180kg 80％乙醇，加热至60℃，回流提取2次，每次1～2小时，过滤并合并提取液，对醇提液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.10～1.15。将生地黄、黄芪、人参提取后的药渣与10kg三七、7kg枸杞子、5kg陈皮混合，加入240kg水，加热至沸，煎煮2次，每次2～3小时，同时收集挥发油，布氏漏斗抽滤，滤液减压浓缩至稠膏状，相对密度为1.10～1.15(60℃)，用乙醇沉淀法处理，加乙醇使溶液含醇量达70％，搅拌均匀，静置，滤过，滤液与前述提取的生地黄、黄芪、人参浓缩液合并，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(60℃)的稠膏，加5％淀粉辅料，混合制软材，过筛80目制粒，于烘箱中60-70℃低温干燥，整粒，装入0号胶囊即得成品。

取实施例1-4所述的药物做以下实验：

一、采用正交试验优化中药有效成分提取工艺

生地黄、人参、黄芪为贵重药，经打碎先用80％乙醇回流提取2次，1.5h/次，醇提液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃)；药渣与三七等其余3味水煎煮。根据组方除生地黄、人参、黄芪外，以浸泡时间、煎煮次数、加水量、煎煮时间、醇沉浓度为因素水平，分别为A，B，C，D，E。按水煮醇沉法制得胶囊试样。以试样中黄芪甲甙的含量作为质量依据，进行方差分析确定影响其含量的主要因素：煎煮次数、浸泡与否、醇沉浓度。

L8(2⁷)正交试验法

结合K_i水平及实际确立最佳工艺A2，B2，C2，D2，E2。即药材加水泡1h，煮2次，1.5h/次，煎液浓缩后用95％乙醇沉淀达60％左右静置为提取工艺。

二.动物实验及结果

将制备获得的胶囊内容物以水溶解，制成药剂(每毫升含生药2g)，采用功率密度35W/cm²电磁波连续辐照大鼠4周，模拟亚急性损伤。通过病理观察，检测精子活率、精子活力、精子计数、精子畸形率、性激素以及精细胞凋亡等指标，实验初步证明该组方对微波亚急性生殖损伤具有保护作用。实验具体步骤及结果如下：

(一)实验步骤与方法

1实验动物成年健康雄性SD大鼠40只，体质量180～210g，购自第三军医大学动物实验中心，符合SPF级标准。常规饲养一周后使用。

2药物与试剂人促卵泡生成激素放射免疫分析试剂盒、睾酮放射免疫分析试剂盒、人促黄体生成激素放射免疫分析试剂盒均购自北京北方生物技术研究所。原位细胞凋亡检测试剂盒购自美国Roche公司。

3动物分组将实验动物随机等分为4组：正常组、电磁辐射暴露组、中药干预低剂量组和中药干预高剂量组，每组10只。正常组正常饲养，未接受电磁辐射辐照；电磁辐射暴露组、中药干预低剂量组和中药干预高剂量组采用功率密度35W/cm²电磁波，每天上午9至10点辐照20分钟；电磁辐射暴露组正常饲养，中药干预低剂量组和中药干预高剂量组每天下午3点至4点进行药物灌胃、更换食物和打扫卫生。

4实验给药中药干预低剂量组按10g·kg^-1·d^-1剂量进行灌胃4周，中药干预高剂量组按35g·kg^-1·d^-1剂量进行灌胃4周。正常组、电磁辐射暴露组灌胃等量纯水。4周后，处死动物。

5观察指标及检测方法

5.1睾丸、附睾系数大鼠称重后断头，取出双侧睾丸和附睾称重。并计算睾丸重量/体重为睾丸系数，附睾重量/体重为附睾系数。

5.2精子活力和活率测定采用文献方法取精子悬液。取少许精子悬液滴于载玻片上，在倒置显微镜下镜检100个精子(5个视野)，分别计算快速前向运动精子数、慢速前向运动精子数、非前向运动精子数和不活动精子数。计算精子活力及精子活率。

5.3精子计数采用牛鲍氏计数板，参照红细胞计数方法，进行精子计数，以悬液精子数×稀释倍数/右侧附睾尾重量表示，单位为(精子数/100mg附睾尾组织)。

5.4精子畸形率检查取一滴精子悬液置洁净载玻片一侧，推片，晾干，甲醇固定5分钟，2％伊红染色2小时，冲洗，晾干，高倍镜下(×400)检查200个完整的精子，记录无钩、香蕉、无定形、双尾畸形及其它尾部畸形精子数。畸形率以畸形精子总数/200表示。

5.5内分泌激素的测定用10％乌拉坦麻醉后，1000-1500mg/kg腹腔注射(ip)，用促凝负压管直接心脏取血。血液置4℃冰箱中凝固，然后离心10分钟，分离出上层血清，置于-20℃冰箱中保存。用放射免疫法测定促卵泡生长激素(plasma follicle stimulating hormone，FSH)、促黄体生成激素(luteinizing hormone，LH)和睾酮(testosterone，T)值，操作按试剂盒说明书进行。

5.6睾丸组织学大鼠处死后取睾丸，10％formalin液中固定，石蜡包埋，切片6μm，HE染色。光镜下观察睾丸组织形态，对睾丸生精功能进行评价。

5.7透射电镜观察取睾丸少量组织，迅速切成1mm×1mm×1mm小块，在3％戊二醛浓液中固定，常规电镜制片，透射电镜观察。

5.8TUNEL法检测生殖细胞凋亡操作过程按试剂盒说明书进行。光镜下观察结果，凋亡细胞细胞核呈棕黄色为阳性。并计数100个生精小管中，有1、2、3个以上生殖细胞发生凋亡的生精小管数。

6统计学分析所有数据应用SPSS13.0分析软件进行单因素方差分析。P＜0.05为相差显著，P＜0.01为相差非常显著。

(二)实验结果

2.2组织病理学观察

电磁辐射组生精小管内生殖细胞排列紊乱，生精细胞数减少或缺如，生精上皮变薄，管腔内精子数明显减少，参见图1A。中药干预低剂量组和中药干预高剂量组近似正常。尤其是中药干预高剂量组光镜下可见睾丸曲系精管各级生精细胞发育正常，排列整齐，管腔内有大量成熟精子，参见图1B、C、D。

2.2透射电镜观察

电磁辐射组可见大量凋亡细胞，可见生精细胞肿胀，细胞质空泡化，染色质边集、固缩、断裂，脂滴增多，退变的髓鞘样结构增多，参见图2A。中药干预高剂量组生精细胞大多正常，细胞超微结构则有明显改善，参见图2B。

2.3TUNEL法检测

电磁辐射组与其它各组比较大鼠生精细胞凋亡率明显增高(P＜0.01，表1)，以精原细胞和精母细胞凋亡为主，精子细胞凋亡少见，参见图3A，但中药干预低剂量组有2个生殖细胞发生凋亡的生精小管数低于中药干预高剂量组。其余各组凋亡生精细胞凋亡偶见，参见图3B。

表1TUNEL法检测中药干预对电磁辐射暴露大鼠生精细胞凋亡的影响(n＝5，)

a：P＜0.01，与电磁辐射组比较

2.4睾丸、附睾系数缺氧组睾丸、附睾系数较正常组偏高，正常组与电磁辐射组比较，P＜0.05，见表2。

2.5精子活率、精子活力电磁辐射组精子活率、活力明显降低，各组与电磁辐射比较，P＜0.01。电磁辐射生殖损伤防治胶囊提高精子活力，电磁辐射生殖损伤防治胶囊高剂量组的精子活率与电磁辐射组比较，P＜0.01，见表2。

2.6精子计数电磁辐射组精子计数明显减少，各组与电磁辐射组比较P＜0.01。中药干预高剂量组与电磁辐射组比较，P＜0.01，见表2。

2.7精子畸形率电磁辐射组畸形率增高，各组与电磁辐射组比较，P＜0.05，见表2。

2.8内分泌激素测定FSH各组相比较差异无显著性；电磁辐射组LH、T含量明显下降，各组与电磁辐射组比较，P＜0.01；药物干预高剂量组LH、T含量与电磁辐射组比较，P＜0.01，见表3。

表2中药干预对电磁辐射暴露雄性大鼠附睾精子参数变化的影响(n＝9，)

与正常组比较，a p＜0.05，b p＜0.01；与电磁辐照组比较，c p＜0.05，d p＜0.01；

表3中药干预对电磁辐射暴露雄性大鼠血清FSH、LH、T水平水平变化影响(n＝9，)

与正常组比较，a p＜0.01；与电磁辐照组比较，b p＜0.01；

结论：本发明所述药物对因电磁辐射热效应、高温热环境造成的男性生殖功能损害具有明显防治效果，且安全、无毒副作用，对长期从事电磁辐射暴露、高温热环境暴露的职业人群的生殖健康具有防治和保护作用。