一种用添加营养物质提高球孢白僵菌孢子萌发率的方法

摘要

一种用添加营养物质提高球孢白僵菌孢子萌发率的方法，属于营养物质添加在生物农药中的应用技术领域。本发明以球孢白僵菌(Beauveriabassiana)(保藏编号为CCTCC No：M209238)为发酵菌株，将其产生的孢子配制成一定浓度的孢子悬浮液，在该孢子悬浮液中添加最终浓度为0.5%-10%的麸皮浸出液，在适当的条件下(250mL的三角瓶，装液量50mL；25℃、180rpm摇床12h)进行培养。在此培养条件下，球孢白僵菌孢子的萌发率由对照例(不添加任何营养物质)的4.63%提高到80%以上，最高达95.31%。利用此策略可以大大提高白僵菌孢子的萌发率，为其田间使用提供了基础和保证。

说明书

技术领域

一种用添加营养物质提高球孢白僵菌孢子萌发率的方法，涉及营养物质添加在生物农药中的应用技术领域。

背景技术

白僵菌( Beauveria bassiana) 是一种广谱性的昆虫病原真菌,在防治农林害虫上具有显著的应用潜力。白僵菌孢子的萌发率直接决定其杀虫效果。白僵菌孢子的萌发率越高，其毒力越强，杀虫率越高。因此，提高白僵菌孢子的萌发率就成为提高白僵菌杀虫效果的关键所在。利用在白僵菌孢子悬浮液中添加麸皮浸出液（营养物质）的策略提高白僵菌孢子的萌发率，尚未见文献报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种用在球孢白僵菌孢子悬浮液中添加营养物质的策略提高球孢白僵菌孢子萌发率的方法，利用本发明能大大提高球孢白僵菌孢子的萌发率。

本发明的技术方案：一种用添加营养物质提高球孢白僵菌孢子萌发率的方法，以球孢白僵菌（Beauveria bassiana）CCTCC No：M209238为发酵菌珠，将其产生的孢子配制成一定浓度的孢子悬浮液，在该孢子悬浮液中添加麸皮浸出液，控制反应液中的球孢白僵菌孢子最终浓度为2×10⁷孢子/mL，控制反应液中的麸皮浸出液最终质量浓度为0.5%-10%，置于25℃、180rpm摇床上进行培养12h后，大大提高白僵菌孢子的萌发率。菌珠CCTCC No：M209238已在中国专利200910264664.8中公开，公布日2010年6月9日，公布号CN101724571A。

控制反应液中的麸皮浸出液最终质量浓度为2%，提高白僵菌孢子的萌发率。

本发明的有益效果：利用本发明能大大提高球孢白僵菌孢子的萌发率。孢子萌发率由4.63%提高到80%以上，最高达95.31%。白僵菌孢子可用于抑制茶叶小绿叶蝉，其孢子萌发率的大大提高，一定程度上增强了白僵菌孢子的毒力。本发明的在孢子悬浮液中添加营养物质（麸皮浸出液）的策略对其它生物农药的应用具有一定的指导意义。

具体实施方式

孢子悬浮液的制备：

1、洗脱。本发明所用的菌种为球孢白僵菌Beauveria bassiana (保藏编号为CCTCC No：M209238 )，取适量新鲜或在4℃冰箱中保存3个月以内（最好用保藏的）的培养物于250 mL的三角瓶中，加入适量0.05%的吐温-80溶液和玻璃珠，用玻璃棒将培养物捣碎，置于25℃、180rpm摇床上振荡30min（以上）。

2、过滤。振荡后，将三角瓶取出，用2-4层纱布过滤，取滤液。

3、离心。将滤液离心，条件为：8000rpm、5min、4℃，弃去上清。

4、复溶。将离心后的沉淀物，加入一定量的0.05%的吐温-80溶液复溶，搅匀，配制成孢子悬浮液。

5、打散。将复溶后的孢子悬浮液添加适量的玻璃珠后，置于25℃、180rpm摇床上振荡1h（以上），将孢子充分打散，使其均匀的分散在吐温溶液中。

6、计数。将以上孢子悬浮液用血球计数板计数。

7、稀释。计数后，将孢子悬浮液的浓度稀释为4×10⁷孢子/mL，待用。

麸皮浸出液的制备：

浓度为a%的麸皮浸出液是指：将a g麸皮添加到100mL蒸馏水中，沸水浴30min（以上），冷却后用2-4层纱布过滤，再用蒸馏水将滤液补足至100mL，该溶液即为浓度为a%的麸皮浸出液。

制备浓度分别为1%、 2%、 4% 、6%、 8%、 10% 、12% 、14% 、16% 、18%、 20%的麸皮浸出液各100mL。

对照实施例：不添加任何营养物质，将孢子悬浮液与吐温-80溶液1:1混合。即量取25mL浓度为4×10⁷孢子/mL的孢子悬浮液和25mL浓度为0.05%的吐温-80溶液于250mL的三角瓶中混合均匀，则反应液中孢子的最终浓度为2×10⁷孢子/mL。再置于25℃、180rpm摇床上培养12h后，取样用血球计数板检测其孢子萌发率。结果：球孢白僵菌孢子萌发率为4.63%。

实施例1：采用在孢子悬浮液中添加营养物质策略，添加方式为将孢子悬浮液与浓度为1%的麸皮浸出液体积比1:1混合，其余条件同对照实施例。则反应液中孢子的最终浓度为2×10⁷孢子/mL，反应液中麸皮浸出液的最终浓度为0.5%。结果：球孢白僵菌孢子萌发率为：65.59%。

实施例2：采用在孢子悬浮液中添加营养物质策略，添加方式为将孢子悬浮液与浓度为10%的麸皮浸出液体积比1:1混合，其余条件同对照实施例。则反应液中孢子的最终浓度为2×10⁷孢子/mL，反应液中麸皮浸出液的最终浓度为5%。结果：球孢白僵菌孢子萌发率为：83.05%。

实施例3：采用在孢子悬浮液中添加营养物质策略，添加方式为将孢子悬浮液与浓度为20%的麸皮浸出液体积比1:1混合，其余条件同对照实施例。则反应液中孢子的最终浓度为2×10⁷孢子/mL，反应液中麸皮浸出液的最终浓度为10%。结果：球孢白僵菌孢子萌发率为：47.92%。