棉花中噻苯隆和敌草隆及其代谢物的残留量测定方法

摘要

本发明涉及棉花中噻苯隆和敌草隆及其代谢物的残留量测定方法，具体是：称取样品20.0g，置于具塞锥形瓶中，加入50mL乙腈，10mL蒸馏水，在振荡器上振荡提取60min，滤液加入6.0-10g氯化钠，振荡2-5min，静止分层，收集上层有机相，经无水硫酸钠脱水，在40℃水浴下减压浓缩近干，氮气吹干，加入10-20mL乙酸乙酯，然后采用C18柱，5mL乙酸乙酯预淋，上样，10mL乙酸乙酯淋洗，收集淋洗液，在40℃水浴下减压浓缩近干，氮气吹干，甲醇2mL定容，滤膜过滤，采用DAD检测器测定。本发明的测定方法简化了提取步骤，减少了二氯甲苯等溶剂的使用量，通过使用固相萃取净化，减少了样品中杂质的干扰，使结果更为准确、灵敏、可靠。

说明书

术领域：

本发明属于棉花中农药残留量的测定技术领域，涉及棉花中噻苯隆和敌草隆及其代谢物的残留量测定方法。

背景技术：

植物的生长发育过程受外界环境条件，如水分、阳光、棉花、温度等的影响和内部遗传因素的控制，而调节控制植物生理活动的是某些代谢物质，即植物激素。植物激素的发现，是生物学领域中的巨大进步。它推动了“化学调控”在农业中的应用，使人们有可能通过化学调控而改变植物生长、发育的固有模式。研究植物激素的目的，不仅是为了揭示其在调节植物生长发育过程中的作用机制及调节控制的规律性，更重要的是探索植物生长物质的应用技术，使之能按生产需要，调控植物的生长发育，提高作物的品质与产量。目前化学调控技术，已在农、林、牧、园艺、花卉、育种、栽培管理、提高植物抗性等领域中广泛应用，并取得了一定的效果，受到了生物、化工科技工作者与栽培、育种工作者的重视。在某些情况下，合理地应用植物生长物质的生产效果甚至比栽培与育种快得多。

噻苯隆(thidiazuron)化学名称1-苯基-3-(1，2，3-噻二唑-5-基)脲，是一种植物生长调节剂，在棉花种植上做落叶剂使用。敌草隆(Diuron)化学名称N-3，4-二氯苯基-N’，N’-二甲基脲为内吸传导型广谱除草剂，属于内吸型除草剂，能够抑制作物光合作用，用于防除非耕作区一般杂草。主要用于棉花、玉米、高梁、甘蔗、水稻、茶园、果园、葡萄园以及非耕地。其测定方法有液相方法、气相方法等。申请号：200710022396公开了一种去除水中除草剂敌草隆的方法，它是采用介质阻挡放电方法对含除草剂敌草隆的水进行处理，将水体中的敌草隆降解；将污染物降解为二氧化碳、水和简单有机物，反应条件温和，可控制性较强，反应器设备及其操作比较简单。其他有关敌噻苯隆和敌草隆及其代谢物(DCPU，DCPMU)的残留量在棉花中的残留检测分析，目前国内并未见公开报道。

发明内容：

本发明通过棉花中的噻苯隆和敌草隆及其代谢物添加回收率研究，采用液相色谱法，建立简捷可行的棉花中苯隆和敌草隆及其代谢物残留分析方法。具体是使用有机溶剂对棉花中噻苯隆及其代谢物、敌草隆及其代谢物进行提取，然后在提取液中加入氯化钠，通过液液分配分离出有机溶剂层，并利用旋转蒸发将分离出的有机溶剂层完全浓缩至干，利用固相萃取法去除提取液中干扰物质，最后采用液相色谱法进行检测方法的研究。为实现上述目的，本发明提供如下的技术方案：

棉花中噻苯隆和敌草隆及其代谢物的残留量测定方法，按如下的步骤进行：

(1)提取：称取样品20.0g，置于具塞锥形瓶中，加入50-80mL乙腈，10-20mL蒸馏水，在振荡器上振荡提取60-100min，滤液置于500mL分液漏斗中，加入6.0-10g氯化钠，振荡2-5min，静止分层，收集上层有机相，经无水硫酸钠脱水，在40℃水浴下减压浓缩近干，氮气吹干，加入10-20mL乙酸乙酯，待净化；

(2)净化：采用C18柱，5mL乙酸乙酯预淋，上样，10mL乙酸乙酯淋洗，收集淋洗液，在40℃水浴下减压浓缩近干，氮气吹干，甲醇2mL定容，滤膜过滤。

(3)测定：采用DAD检测器测定，其中流动相：甲醇/水，50/50(V/V)流速：0.5mL/min色谱柱：XDB-C18，1.8μm，4.6×50mm，进样：5μL，柱温：40℃波长：0-4min 290nm，4min后254nm。

本发明所述的敌草隆及其代谢物为：敌草隆(diuron)3-(3，4-dichlorophenyl)-1，1-dimethylurea及其可转化为3，4-dichloroaniline的代谢物。

本发明所述的噻苯隆(thidiazuron)及其代谢物为噻苯隆及其含代谢物的苯胺。

棉花中噻苯隆和敌草隆及其代谢物的残留量的具体测定方法如下：

一、试剂与仪器

Agilent 1200液相色谱仪，BUCHI旋转蒸发器，HZQ-C空气浴振荡器，IKA匀浆机乙腈(分析纯，重蒸)，乙酸乙酯(分析纯，重蒸)，无水硫酸钠，氯化钠(分析纯)，甲醇(色谱纯)

标样：噻苯隆(98.3％)，噻苯隆代谢物thidiazolylurea(90.0％)，敌草隆(99.6％)，敌草隆代谢物DCPU(99.5％)，DCPMU(99.0％)

混合农药标准储备液：分别准确称取以上农药标准品，以甲醇为溶剂，配制成质量浓度均为20mg·L^-1的混合标准储备液，于冰箱中保存。

二、样品的制备

1、前处理过程

提取：称取样品20.0g，置于具塞锥形瓶中，加入50mL乙腈，10mL蒸馏水，在振荡器上振荡提取60min，滤液置于500mL分液漏斗中，加入6.0g左右的氯化钠，振荡2min，静止分层，收集上层有机相，经无水硫酸钠脱水，在40℃水浴下减压浓缩近干，氮气吹干，加入10mL乙酸乙酯，待净化。

净化：C18柱，5mL乙酸乙酯预淋，上样，10mL乙酸乙酯淋洗，收集淋洗液，在40℃水浴下减压浓缩近干，氮气吹干，甲醇2mL定容，滤膜过滤。

2、仪器条件

Agilent 1200，DAD检测器

流动相：甲醇/水，50/50(V/V)

流速：0.5mL/min

色谱柱：XDB-C18，1.8μm，4.6×50mm

进样：5μL

柱温：40℃

波长：0-4min 290nm，4min后254nm。

3、保留时间

噻苯隆代谢物，1.048min，噻苯隆thidiazolylurea，3.625min

敌草隆代谢物DCPU，5.214min，.敌草隆代谢物DCPMU，6.879min，敌草隆，7.621min

4、仪器精密度试验

将农药的混合标样，按上述仪器条件连续进样5针，测得噻苯隆及其代谢物thidiazolylurea和敌草隆及其代谢物DCPU、DCPMU的相对标准偏差，见表1

表1.相对标准偏差

  农药  RSD(％)  噻苯隆  1.62  thidiazolylurea  2.83  敌草隆  1.31  DCPU  0.52  DCPMU  1.91

5、加标回收率和相对标准偏差

在空白棉花中添加混合标准品，回收率和相对标准偏差见表2，表3。结果符合要求，证明了该方法有较好的回收率和重复性。

表2噻苯隆及其代谢产物添加回收率

表3敌草隆及其代谢产物添加回收率试验

本发明棉花中噻苯隆和敌草隆残留量的测定方法和现有方法比较，所具有的积极效果在于：

(1)本发明的方法简化了提取步骤，减少了二氯甲苯等溶剂的使用量，通过使用固相萃取净化，减少了样品中杂质的干扰，使结果更为准确、灵敏、可靠。

(2)本发明的测定方法具有操作简单快捷，回收率高，灵敏度高，杂质干扰小的特点。

附图说明：

图1为混合标样色谱图；

图2为添加色谱图。

具体实施方式：

为了更充分的解释本发明的实施，提供棉花中噻苯隆和敌草隆及其代谢物的残留量测定方法的制备实施实例。这些实施实例仅仅是解释、而不是限制本发明的范围。其中所用的原料均有市售。

实施例1

(1)提取：称取棉花20.0g，置于具塞锥形瓶中，加入50mL乙腈，10mL蒸馏水，在振荡器上振荡提取60min，滤液加入6.0g氯化钠，振荡2min，静止分层，收集上层有机相，经无水硫酸钠脱水，在40℃水浴下减压浓缩近干，氮气吹干，加入10mL乙酸乙酯，待净化；

(2)净化：采用C18柱，5mL乙酸乙酯预淋，上样，10mL乙酸乙酯淋洗，收集淋洗液，在40℃水浴下减压浓缩近干，氮气吹干，甲醇2mL定容，滤膜过滤。

(3)测定：采用DAD检测器测定，其中流动相：甲醇/水，50/50(V/V)流速：0.5mL/min色谱柱：XDB-C18，1.8μm，4.6×50mm，进样：5μL，柱温：40℃波长：0-4min 290nm，4min后254nm。

实施例2

(1)提取：称取棉花20.0g，置于具塞锥形瓶中；加入80mL乙腈，20mL蒸馏水，在振荡器上振荡提取100min，滤液加入10g氯化钠，振荡5min，静止分层，收集上层有机相，经无水硫酸钠脱水，在40℃水浴下减压浓缩近干，氮气吹干，加入20mL乙酸乙酯，待净化；

(2)净化：采用C18柱，5mL乙酸乙酯预淋，上样，10mL乙酸乙酯淋洗，收集淋洗液，在40℃水浴下减压浓缩近干，氮气吹干，甲醇2mL定容，滤膜过滤。

(3)测定：采用DAD检测器测定，其中流动相：甲醇/水，50/50(V/V)流速：0.5mL/min色谱柱：XDB-C18，1.8μm，4.6×50mm，进样：5μL，柱温：40℃波长：0-4min 290nm，4min后254nm。

实施例3

(1)提取：称取棉花20.0g，置于具塞锥形瓶中，加入50mL乙腈，10mL蒸馏水，在振荡器上振荡提取60min，滤液加入8g氯化钠，振荡4min，静止分层，收集上层有机相，经无水硫酸钠脱水，在40℃水浴下减压浓缩近干，氮气吹干，加入10mL乙酸乙酯，待净化；

(2)净化：采用C18柱，5mL乙酸乙酯预淋，上样，10mL乙酸乙酯淋洗，收集淋洗液，在40℃水浴下减压浓缩近干，氮气吹干，甲醇2mL定容，滤膜过滤。

(3)测定：采用DAD检测器测定，其中流动相：甲醇/水，50/50(V/V)流速：0.5mL/min色谱柱：XDB-C18，1.8μm，4.6×50mm，进样：5μL，柱温：40℃波长：0-4min 290nm，4min后254nm。

保留时间：噻苯隆代谢物，1.048min，噻苯隆thidiazolylurea，3.625min，敌草隆代谢物DCPU，5.214min，敌草隆代谢物DCPMU，6.879min，敌草隆，7.621min。

在详细说明的较佳实施例之后，熟悉该项技术人士可清楚地了解，在不脱离上述申请专利范围与精神下可进行各种变化与修改，凡依据本发明的技术实质对以上实施例所作任何简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围。且本发明亦不受说明书中所举实例实施方式的限制。