银化硅胶柱层析提取红花籽油中亚油酸的方法

摘要

本发明涉及一种银化硅胶柱层析提取红花籽油中亚油酸的方法，步骤如下：采用活化的银化硅胶作为固定相，用氯仿浸泡装入层析柱，溶胀沉淀一定时间，称取红花籽油加到层析柱内，使用优选的洗脱剂进行洗脱，定量收集，脱除洗脱液，得到亚油酸产品。本发明根据柱层析法的分离原理即物质在固定相上的吸附力不同而使物质得到分离，同时利用银化硅胶层析柱中银离子能与不饱和脂肪酸的碳-碳双键形成络合物来分离提取亚油酸，本方法提取到的亚油酸纯度较高，满足分析、医药、保健品等行业的需要。

说明书

技术领域

本发明属于多不饱和脂肪酸的制备领域，尤其是一种银化硅胶柱层析提取红花籽油中亚油酸的方法。

背景技术

红花籽油是从红花干燥成熟果实中提取一种健康的优质食用油，其主要成份为人体必需但又不能在体内自行合成的不饱和脂肪酸---亚油酸，它能有效溶解胆固醇，具有降血脂、清除血管内壁沉积物以及降血压的作用；研究表明，红花籽油中亚油酸含量是已知植物食用油中最高的，平均含量达78％左右。

亚油酸是人体必须脂肪酸，有多种生理功能，如抗辐射、降低胆固醇和防治动脉硬化、促进生长发育，增强机体免疫力以及美容美发等多种生理功能。亚油酸还是代谢过程中有重要生理活性作用的激素类物质--前列腺素的前体，如果人体缺乏亚油酸会导致皮肤变红并增加脱水和感染的敏感性，婴幼儿亚油酸缺乏会导致发育障碍，因此，高纯度的亚油酸在医药、食品等行业有着广泛的应用。

目前，富集纯化多不饱和脂肪酸一般采用低温结晶、吸附分离、尿素包合、超临界萃取、脂肪酶催化水解等方法，以上方法分离纯化多不饱和脂肪酸存在的普遍问题是很难得到较高纯度的相关产品，难以满足对多不饱和脂肪酸纯度要求较高的医药、保健品等行业的需要。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种产品纯度高、提取工艺简单的银化硅胶柱层析提取红花籽油中亚油酸的方法。

本发明实现目的的技术方案如下：

一种银化硅胶柱层析提取红花籽油中亚油酸的方法，步骤如下：

(1)银化硅胶的制备：避光条件下，将硅胶加入到含有5％-15％的硝酸银水溶液中，在沸水浴中搅拌下加热25-35min，然后冷却、抽滤，在真空干燥箱内活化15-25h，制得银化硅胶，置于阴暗处备用；

(2)装柱：将银化硅胶置于氯仿中，搅拌，排除气泡，静置1-1.5h，使其充分溶胀，将其置于用锡纸包裹的层析柱内，备用，得到银化硅层析柱；

(3)洗脱：称取红花籽油，用滴管滴加到银化硅层析柱内，使用乙酸乙酯/氯仿作为洗脱剂进行梯度洗脱，其中每一梯度洗脱液为30-50mL，份2次洗脱，流速为1-2mL/min；

(4)收集：每30-50mL收集一次，旋蒸，除去洗脱剂，用正己烷溶解，加入饱和的NaCl溶液去除Ag⁺，在有机相中加入无水硫酸钠，离心10min，上清液置于棕色瓶中，-20℃保存，即为亚油酸。

而且，所述乙酸乙酯与氯仿梯度浓度为：0、1％、2％、3％，为乙酸乙酯在氯仿中的体积浓度。

而且，所述亚油酸的纯度为：99.6％。

本发明的优点和效果是：

1、本发明根据柱层析法的分离原理即物质在固定相上的吸附力不同而使物质得到分离，同时利用银化硅胶层析柱中银离子能与不饱和脂肪酸的碳-碳双键形成络合物来分离提取亚油酸，本方法提取到的亚油酸纯度较高，满足分析、医药、保健品等行业的需要。

2、本发明将具有药用价值的红花籽油作为主要原料，将其中主要功效且难以分离的亚油酸单独提取出来，提高了红花籽油的药用价值。

3、本发明在柱层析分离过程中采用乙酸乙酯与氯仿溶液的梯度洗脱方法，有效地提高了亚油酸的洗脱率，使红花籽油的提取更加充分。

具体实施方式

下面结合具体实施方案对本发明进一步说明，其具体实施方案应该理解为仅为举例说明，不是限定性的，不能以下述举例说明来限定本发明的保护范围。

本发明思想为：制备10％的银化硅胶，装柱；将一定量的红花籽油装入到制好的银化硅胶层析柱中，采用优选的洗脱剂进行梯度洗脱，按照一定剂量依次收集洗脱液，经气相检测，收集相应部分洗脱液，旋蒸，得到需要的亚油酸成品。

具体实施例

一种银化硅胶柱层析提取红花籽油中亚油酸的方法，步骤如下：

1、银化硅胶的制备：避光条件下，称取6-10g硅胶，加入到含有10％的硝酸银水溶液中，在沸水浴中搅拌下加热30min，然后冷却、抽滤，在真空干燥箱内活化20h，制的银化硅胶，置于阴暗处备用；

2、装柱：称取6g银化硅胶，加入20mL氯仿，搅拌，排除气泡，静置1h，使其充分溶胀，在层析柱底部预先放入脱脂棉，加入20mL氯仿，将溶胀的银化硅胶缓慢倾入，柱外用锡纸包裹，沉积2h后使用；

3、洗脱：将层析柱中多余氯仿从柱底排出，直到距银化硅胶面0.5cm，称取0.2g红花籽油，用滴管滴加到层析柱内，使用0、1％、2％、3％的乙酸乙酯-氯仿溶剂体系作为洗脱剂洗脱，0、1％、2％、3％均为乙酸乙酯在氯仿中的体积浓度，其中每一浓度洗脱液为40mL，分两次洗脱，流速为1-2mL/min。

4、收集：每40mL收集一管，旋蒸，除去洗脱剂，用2mL正己烷溶解，加入饱和的NaCl溶液去除Ag+，在有机相中加入一定量无水硫酸钠，脱水，6000r/min，离心10min，上清液置于棕色瓶中，-20℃保存，用气相色谱检测脂肪酸组成，计算亚油酸纯度及得率，分别为99.6％和47％。