一种治疗妇科功血疾病的中药组合物、其制备方法以及其胶囊剂的质量控制方法

摘要

本发明涉及一种治疗妇科功血疾病的中药组合物，其由如下重量份的原药材组成：赤芍900-1100、益母草900-1100、三七200-400、仙鹤草900-1100、地榆炭500-700、蒲黄炭500-700。赤芍、三七用80％乙醇提取，益母草等其余四味用水提取，通过适当的工艺来制备上述中药组合物。本发明还涉及该中药组合物胶囊剂的质量控制方法，包括鉴别和含量测定两部分，其中鉴别采用薄层色谱法，分别用赤芍对照药材、芍药苷对照品、三七对照药材、仙鹤草对照药材、益母草对照药材和盐酸水苏碱对照品进行鉴别；含量测定以含赤芍确定，以芍药苷(C

说明书

技术领域

本发明属于中药制剂领域，具体地说，涉及一种治疗妇科功血疾病的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。

背景技术

崩漏是指月经周期、经期、经量出现严重紊乱，经血非时暴下或淋漓不尽者，是妇科的多发病和疑难病。有人统计以崩漏而就诊者约占妇科门诊的1/3，本病相当于西医之功能性子宫出血，而与无排卵型功血尤其相似。

功能失调性子宫出血是由于神经内分泌系统功能失调所引起的异常子宫出血，简称“功血”，是妇产科常见病之一。据统计本病50％发生于更年期，30％发生于生育期，20％发生于青春期。由于功血的发病机制不同，临床上将功血分为无排卵型功血和排卵型功血两大类。无排卵型功血最常见，约占80％左右，多发生于青春期和更年期，临床表现为月经失去周期性，出现不规则子宫出血。排卵型功血多发生于生育期女性，可分为排卵型月经过多、黄体功能不健、黄体萎缩不全及月经中期出血几种类型。其特点是排卵功能正常，月经尚有周期性，但月经的周期、经期、经量发生异常改变。功血应排除内、外生殖器器质性病变、全身出血性疾病及妊娠所导致的异常子宫出血。

关于无排卵型功血的治疗西医多以激素疗法，止血药物为主，如效果不好，可进一步采取手术刮宫甚至子宫摘除术，给病人造成了极大的痛苦。而中医药通过数千年的临床实践，对本病的治疗积累了丰富的经验，创制了许多疗效确切的方剂。

作为治疗妇科疾病如功能失调性子宫出血的良药，本发明胶囊剂已经由申请人申请多项产品及方法专利并投入工业生产多年，推广于市场，疗效确切。

随着中药技术的发展，提高药效并且提高生产效率，提高药品质量的可控性，降低成本是申请人要解决的一大难题。

经过长期理论研究和工业生产实践，申请人找到了最佳制备用量和制备方案以及鉴别、含量测定等质量控制方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗妇科功血疾病的中药组合物。

本发明的另一个目的是提供上述中药组合物的制备方法。

本发明的第三个目的是提供上述中药组合物胶囊剂的质量控制方法。

本发明提供的治疗妇科功血疾病的中药组合物，由如下重量份的原料组成：赤芍900-1100份、益母草900-1100份、三七200-400份、仙鹤草900-1100份、地榆炭500-700份、蒲黄炭500-700份。

优选地，由如下重量份的原料组成：赤芍1000份、益母草1000份、三七300份、仙鹤草1000份、地榆炭600份、蒲黄炭600份。

上述中药组合物可以通过添加适当的辅料，制备成胶囊、片剂、颗粒剂、丸剂、软胶囊剂。

上述中药组合物的制备方法，包括如下步骤：

1、按重量份称取赤芍、益母草、三七、仙鹤草、地榆炭、蒲黄炭，备用；

2、取赤芍、三七粉碎成粗粉，加4-8倍量80％乙醇，回流提取1-3次，每次1h-3h，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至60℃时相对密度1.05-1.10的清膏，离心，浓缩至60℃时相对密度1.15-1.20的稠膏，备用；

3、取益母草等其余四味，加水煎煮1-3次，每次加8-12倍量的水，煎煮0.5h-1.5h，合并水煎液，滤过，滤液浓缩至60℃时相对密度1.15-1.20的稠膏，加乙醇制成含醇量为70％的溶液，静置16h-32h，取上清液，并浓缩至60℃时相对密度1.15-1.20的稠膏，与上述赤芍等浸膏合并，制成各种剂型。

此外，本发明还提供了上述制得的中药组合物胶囊剂的质量控制方法，该方法包括鉴别和含量测定两部分，其中鉴别包括采用薄层色谱法，分别用赤芍对照药材、芍药苷对照品、三七对照药材、仙鹤草对照药材、益母草对照药材和盐酸水苏碱对照品进行的鉴别；含量测定以含赤芍确定，以芍药苷(C₂₃H₂₈O₁₁)计，不得少于12.0mg/粒，胶囊粒重为0.35g/粒-0.45g/粒。

其中，鉴别方法包括以下鉴别中的一种或多种：

A、赤芍的鉴别：取所述胶囊内容物0.5g-1.5g，加水12ml-38ml，超声处理15min-45min，滤过，滤液加水饱和的正丁醇溶液提取1-5次，每次10ml-30ml，合并提取液，加氨试液20ml-60ml洗涤，弃去洗液，蒸干，加1ml-3ml甲醇溶解残渣，作为供试品溶液；

取赤芍对照药材1g-3g，加甲醇15ml-45ml，超声处理0.5h-1.5h，滤过，滤液蒸干，残渣加水12ml-38ml，温热使溶解，滤过，滤液与供试品溶液同法提取制成对照药材溶液；

取芍药苷对照品，加甲醇制成浓度为1mg/ml-3mg/ml的溶液，作为对照品溶液；

吸取上述三种溶液各4μl，以三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸为30-50∶2-8∶5-15∶0.1-0.3的混合液为展开剂，进行薄层色谱法试验，喷以5％香草醛硫酸甲醇溶液，在95℃-115℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

B、三七的鉴别：以A的供试品溶液作为供试品溶液；

取三七对照药材0.5g-1.5g，加水5d-15d，搅匀，加水饱和的正丁醇溶液20ml-60ml，超声处理20min-60min，滤过，滤液加氨试液20ml-60ml洗涤，弃去氨液，加入正丁醇饱和的水溶液20ml-60ml洗涤，弃去正丁醇水溶液，蒸干，残渣加甲醇1ml-3ml溶解，作为对照药材溶液；

取人参皂苷Rb1、Rg1及三七皂苷R1对照品，加甲醇制成各浓度均为0.5mg/ml-1.5mg/ml的混合溶液作为对照品溶液；

吸取上述三种溶液各2μl，以在10℃以下放置过夜的三氯甲烷∶甲醇∶水为10-16∶4-10∶1-3的混合液的下层溶液为展开剂，进行薄层色谱法试验，喷以10％硫酸乙醇溶液，在95℃-115℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置365nm波长的紫外光灯下检视，显相同颜色的荧光斑点；

C、仙鹤草的鉴别：取所述胶囊内容物0.5g-1.5g，加0.2％-0.8％氢氧化钠溶液15ml-45ml，超声处理10min-30min，滤过，滤液加盐酸调pH值至2-3，滤过，滤液加乙酸乙酯提取1-3次，每次10ml-30ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml-3ml溶解，作为供试品溶液；

取仙鹤草对照药材4g-12g，加水25ml-75ml，煎煮0.5h-1.5h，滤过，滤液蒸干，残渣加0.2％-0.8％氢氧化钠溶液15ml-45ml，温热使溶解，滤过，滤液与供试品溶液同法提取制成对照药材溶液；

吸取上述两种溶液各15μl，以水饱和的甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸为4-8∶2-4∶0.5-1.5的混合溶液为展开剂，进行薄层色谱法试验，喷以0.5％-1.5％三氯化铁乙醇溶液显色，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

D、益母草的鉴别：取所述胶囊内容物0.9g-1.5g，加乙醇22ml-38ml，加热回流0.5h-1.5h，放冷，滤过，滤液浓缩至2.5ml-7.5ml，加于内径5mm-15mm、活性炭0.3g-0.7g、100目-120目中性氧化铝1g-3g的活性炭-氧化铝柱上，用15ml-45ml乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加0.2ml-0.8ml乙醇溶解，作为供试品溶液；

取益母草对照药材1.5g-4.5g，与供试品溶液同法制成对照药材溶液；

取盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成浓度为2.5mg/ml-7.5m/mlg的溶液，作为对照品溶液；

吸取上述三种溶液各10μl，以正丁醇∶盐酸∶水为3-5∶0.5-1.5∶0.2-0.8的混合溶液为展开剂，进行薄层色谱法试验，喷以稀碘化铋钾试液显色，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

稀碘化铋钾试液参照《中国药典2005年版二部附录XVB试液》：取次硝酸铋0.85g，加冰醋酸10ml与水40ml溶解后，即得。临用前取5ml，加碘化钾溶液(取碘化钾溶液4ml加水至10ml，混匀)5ml，再加冰醋酸20ml，加水稀释至100ml，即得。

碘化钾溶液参照《中国药典2005年版二部附录XVB试液》：取碘化钾16.5g，加水使溶解成100ml，即得。本液应临用新制。

其优选的鉴别方法包括以下鉴别中的一种或多种：

A、赤芍的鉴别：取所述胶囊内容物1g，加水25ml，超声处理30min，滤过，滤液加水饱和的正丁醇溶液提取3次，每次20ml，合并提取液，加氨试液40ml洗涤，弃去洗液，蒸干，加2ml甲醇溶解残渣，作为供试品溶液；

取赤芍对照药材2g，加甲醇30ml，超声处理1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml，温热使溶解，滤过，滤液与供试品溶液同法提取制成对照药材溶液；

取芍药苷对照品，加甲醇制成浓度为2mg/ml的溶液，作为对照品溶液；

吸取上述三种溶液各4μl，以三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸为40∶5∶10∶0.2的混合液为展开剂，进行薄层色谱法试验，喷以5％香草醛硫酸甲醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

B、三七的鉴别：以A的供试品溶液作为供试品溶液；

取三七对照药材1g，加水10d，搅匀，加水饱和的正丁醇溶液40ml，超声处理40min，滤过，滤液加氨试液40ml洗涤，弃去氨液，加入正丁醇饱和的水溶液40ml洗涤，弃去正丁醇水溶液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液；

取人参皂苷Rb1、Rg1及三七皂苷R1对照品，加甲醇制成各浓度均为1mg/ml的混合溶液，作为对照品溶液；

吸取上述三种溶液各2μl，以在10℃以下放置过夜的三氯甲烷∶甲醇∶水为13∶7∶2的混合液的下层溶液为展开剂，进行薄层色谱法试验，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置365nm波长的紫外光灯下检视，显相同颜色的荧光斑点；

C、仙鹤草的鉴别：取所述胶囊内容物1g，加0.5％氢氧化钠溶液30ml，超声处理20min，滤过，滤液加盐酸调pH值至2-3，滤过，滤液加乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；

取仙鹤草对照药材8g，加水50ml，煎煮1h，滤过，滤液蒸干，残渣加0.5％氢氧化钠溶液30ml，温热使溶解，滤过，滤液与供试品溶液同法提取制成对照药材溶液；

吸取上述两种溶液各15μl，以水饱和的甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸为6∶3∶1的混合溶液为展开剂，进行薄层色谱法试验，喷以1％三氯化铁乙醇溶液显色，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

D、益母草的鉴别：取所述胶囊内容物1.2g，加乙醇30ml，加热回流1h，放冷，滤过，滤液浓缩至5ml，加于内径10mm、活性炭0.5g、100目-120目中性氧化铝2g的活性炭-氧化铝柱上，用30ml乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加0.5ml乙醇溶解，作为供试品溶液；

取益母草对照药材3g，与供试品溶液同法制成对照药材溶液；

取盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成浓度为5mg/ml的溶液，作为对照品溶液；

吸取上述三种溶液各10μl，以正丁醇∶盐酸∶水为4∶1∶0.5的混合溶液为展开剂，进行薄层色谱法试验，喷以稀碘化铋钾试液显色，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

本发明的质量控制方法还包括以下含量测定：

1、精密称取芍药苷对照品10mg，加50％甲醇制成浓度为0.1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；

2、取所述胶囊内容物0.1g，精密称定，置具塞的三角烧瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，冷浸过夜后，超声处理30分钟，再称重，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液；

3、精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液∶甲醇为70∶30的混合液为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于2500。

本发明中药组成物的处方中，赤芍，苦、微寒，归肝经，功能清热凉血，善治血热妄行之出血症。同时又有祛瘀止痛之功效，可治疗妇女血脉瘀阻所致之崩漏腹痛等症，用为君药。

益母草，辛、苦，微寒。归心、肝、膀胱经。不仅能清热解毒凉血，而且性善走散，能活血祛瘀而止痛，为妇人经产要药。如《本草求真》云：“行血，祛瘀生新，调经解毒，为胎前产后要剂”。三七，甘、微苦，温。归肝，胃经。能入血分，功善止血，又能化瘀生新，具有止血而留瘀之特长，对体内外各种出血而兼有瘀滞者，尤为适宜。同时又有化瘀定痛之功，不仅能治疗各种外伤性瘀滞肿痛，而且对瘀血阻滞之腹痛亦有良效。二者共助君药以增强其化瘀之功，并协同发挥止血之效，用为臣药。

仙鹤草，苦、涩，平。归肺、肝、脾经。其药性平和，入血分以收敛止血为其特长，临床上广泛用于各种出血证，而尤以治疗崩漏下血等下焦出血症见长。地榆炭，苦、酸，微寒。归肝、胃、大肠经。善入血分，有凉血泄热，收敛止血之功，可用于多种出血证。由于本品性沉降而走下焦，故对下焦血热之疾效果更佳。如《太平圣惠方·卷第七十三·治妇人漏下五色诸方》以地榆同醋煎服，治妇人漏下赤色不止。蒲黄炭，甘、平。归肝、心包经。功能专擅收涩止血，用于崩漏不止。如《圣济总录·卷第一百五十二·经血暴下》蒲黄丸，以之合龙骨，艾叶同用，治妇人月经过多，漏下不止。《备急千金要方·卷四·赤白带下崩中漏下第三》蒲黄散，以之与鹿茸，当归二味补益肝肾、调理冲任之品同用，以治肝肾冲任亏损漏下不止者。三者共助臣药三七，以增强止血调经之功，用为佐药。

诸药合用，使血热得凉，瘀血得散，出血得止，经归正常。

本发明提供的治疗妇科功血疾病的中药组合物、其制备方法以及其胶囊剂的质量控制方法，具有如下优点：

1、本发明的中药组合物具有疗效更确切，止血速度更快等优点。

2、本发明制备方法将赤芍、三七用乙醇提取后采用了离心的制备方法，可以去除不溶于乙醇的物质和机械杂质，使中药组合物纯度更高。

3、本发明质量控制方法中的鉴别方法用赤芍、三七、仙鹤草、益母草对照药材和芍药苷、盐酸水苏碱对照品来做对照，直接比较斑点大小和位置，使操作更加简便，直观；含量测定方法用芍药苷对照品作检测，使质量更有保障，药效更为确切。

具体实施方式

以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。

实施例1 本发明治疗妇科功血疾病中药组合物胶囊剂的制备

(1)称取赤芍1000g、益母草1000g、三七300g、仙鹤草1000g、地榆炭600g、蒲黄炭600g，备用。

(2)取赤芍、三七粉碎成粗粉，加6倍量80％乙醇，回流提取二次，第一次2h，第二次1h，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至相对密度1.05-1.10(60℃)的清膏，离心(3000转/分，5分钟)，浓缩至相对密度1.15-1.20(60℃)的稠膏，备用。

(3)取益母草等其余四味，加水煎煮二次，每次加10倍量的水，煎煮1h，合并水煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.15-1.20(60℃)的稠膏，加乙醇制成含醇量为70％的溶液，静置24h，取上清液回收乙醇，并浓缩至相对密度1.15-1.20(60℃)的稠膏，与上述赤芍、三七浸膏合并，加34g淀粉，混匀，真空干燥制粒，加4g微粉硅胶，混匀，装胶囊，制成1000粒，粒重约为0.4g/粒。

实施例2 本发明治疗妇科功血疾病中药组合物片剂的制备方法

(1)称取赤芍1000g、益母草1000g、三七300g、仙鹤草1000g、地榆炭600g、蒲黄炭600g，备用。

(2)取赤芍、三七粉碎成粗粉，加6倍量80％乙醇，回流提取二次，第一次2h，第二次1h，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至相对密度1.05-1.10(60℃)的清膏，离心(3000转/分，5分钟)，浓缩至相对密度1.15-1.20(60℃)的稠膏，备用。

(3)取益母草等其余四味，加水煎煮二次，每次加10倍量的水，煎煮1h，合并水煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.15-1.20(60℃)的稠膏，加乙醇制成含醇量为70％的溶液，静置24h，取上清液回收乙醇，并浓缩至相对密度1.15-1.20(60℃)的稠膏，取二分之一的赤芍、三七浸膏合并，混匀，干燥成干膏粉，加入糊精30g，以余下的赤芍、三七清膏为粘合剂，混匀，制粒，干燥，压片，喷以320g包衣液，制得每片重约0.38g的薄膜包衣片1000片。

实施例3 本发明治疗妇科功血疾病中药组合物颗粒剂的制备方法

(1)称取赤芍1000g、益母草1000g、三七300g、仙鹤草1000g、地榆炭600g、蒲黄炭600g，备用。

(2)取赤芍、三七粉碎成粗粉，加6倍量80％乙醇，回流提取二次，第一次2h，第二次1h，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至相对密度1.05-1.10(60℃)的清膏，离心(3000转/分，5分钟)，浓缩至相对密度1.15-1.20(60℃)的稠膏，备用。

(3)取益母草等其余四味，加水煎煮二次，每次加10倍量的水，煎煮1h，合并水煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.15-1.20(60℃)的稠膏，加乙醇制成含醇量为70％的溶液，静置24h，取上清液回收乙醇，并浓缩至相对密度1.15-1.20(60℃)的稠膏，取二分之一的赤芍、三七浸膏合并，混匀，干燥成干膏粉，加入糊精35g，以余下的赤芍、三七清膏为粘合剂，混匀，制成颗粒，干燥，即得。

实施例4 本发明治疗妇科功血疾病中药组合物丸剂的制备方法

(1)称取赤芍900g、益母草900g、三七400g、仙鹤草900g、地榆炭700g、蒲黄炭700g，备用。

(2)取赤芍、三七粉碎成粗粉，加4倍量80％乙醇，回流提取二次，第一次2h，第二次1h，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至相对密度1.05-1.10(60℃)的清膏，离心(3000转/分，5分钟)，浓缩至相对密度1.15-1.20(60℃)的稠膏，备用。

(3)取益母草等其余四味，加水煎煮二次，每次加10倍量的水，煎煮1h，合并水煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.15-1.20(60℃)的稠膏，加乙醇制成含醇量为70％的溶液，静置24h，取上清液回收乙醇，并浓缩至相对密度1.15-1.20(60℃)的稠膏，取二分之一的赤芍、三七浸膏合并，混合，浓缩至80℃相对密度1.20的清膏，干燥，粉碎成细粉，加入150g乳糖、35g微晶纤维素、15g羧甲基淀粉钠，混匀，以余下的赤芍、三七清膏为粘合剂制软材，炼丸，制丸，60℃条件下干燥14小时，抛光、干燥，即得成品。

实施例5 本发明治疗妇科功血疾病中药组合物软胶囊剂的制备方法

(1)称取赤芍1100g、益母草1100g、三七200g、仙鹤草1100g、地榆炭500g、蒲黄炭500g，备用。

(2)取赤芍、三七粉碎成粗粉，加6倍量80％乙醇，回流提取二次，第一次2h，第二次1h，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至相对密度1.05-1.10(60℃)的清膏，离心(3000转/分，5分钟)，浓缩至相对密度1.15-1.20(60℃)的稠膏，备用。

(3)取益母草等其余四味，加水煎煮二次，每次加10倍量的水，煎煮1h，合并水煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.15-1.20(60℃)的稠膏，加乙醇制成含醇量为70％的溶液，静置24h，取上清液回收乙醇，并浓缩至相对密度1.15-1.20(60℃)的稠膏，取二分之一的赤芍、三七浸膏合并，混合，浓缩至80℃相对密度为1.20的清膏，混合，浓缩至70℃相对密度为1.22的清膏，干燥，粉碎成100目的细粉，细粉加入橄榄油520克，蜂蜡18克，以胶体磨混合30分钟，得混合物备用；将明胶、甘油、水以10∶3∶10的配比配制成明胶液240g，与前述混合物用自动旋转轧囊机压制成0.6g/粒的软胶囊，在温度20℃、相对湿度52％的条件下干燥24小时，取出，选丸，用乙醇洗涤，在上述条件下干燥48小时，即得软胶囊剂。

实施例6 本发明中药组合物胶囊剂的鉴别方法

本发明中药组合物胶囊剂的鉴别方法包括如下方法中的一种或多中：

A、赤芍的鉴别：取实施例1胶囊剂内容物1g，加水25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液加水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，加氨试液40ml洗涤，弃去洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。

取赤芍对照药材2g，加甲醇30ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml，温热使溶解，滤过，滤液与供试品溶液同法提取制成对照药材溶液。

取芍药苷对照品，加甲醇制成浓度为2mg/ml的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸甲醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

B、三七的鉴别：取A的供试品溶液作为供试品溶液。

取三七对照药材1g，加水10滴，搅匀，加水饱和的正丁醇40ml，超声处理40分钟，滤过，滤液加氨试液40ml洗涤，弃去氨液，再加正丁醇饱和的水40ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液。

取人参皂苷Rb1、Rg1及三七皂苷R1对照品，加甲醇制成各浓度均为1mg/ml的混合溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，显相同颜色的荧光斑点。

C、仙鹤草的鉴别：取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物1g，加0.5％氢氧化钠溶液30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液加盐酸调节pH值至2-3，滤过，滤液加乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。

取仙鹤草对照药材8g，加水50ml，煎煮1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加0.5％氢氧化钠溶液30ml，温热使溶解，滤过，滤液与供试品溶液同法提取制成对照药材溶液。

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯(用水饱和)-乙酸乙酯-甲酸(6∶3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

D、益母草的鉴别：取实施例1的胶囊剂内容物1.2g，加乙醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液浓缩至约5ml，加于活性炭-氧化铝柱上(活性炭-氧化铝柱为活性炭0.5g/100-120目中性氧化铝2g，内径10mm)，用乙醇30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。

取益母草对照药材3g，与供试品溶液同法制成对照药材溶液。

取盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成浓度5mg/ml的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-盐酸-水(4∶1∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例7 本发明中药组合物胶囊剂的鉴别方法

A、赤芍的鉴别：取实施例1的胶囊剂内容物0.5g，加水12ml，超声处理15分钟，滤过，滤液加水饱和的正丁醇提取1次，每次10ml，合并正丁醇液，加氨试液20ml洗涤，弃去洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

取赤芍对照药材1g，加甲醇15ml，超声处理0.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水12ml，温热溶解，滤过，滤液与供试品溶液同法制成对照药材溶液。

取芍药苷对照品，加甲醇制成浓度1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(30∶8∶5∶0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸甲醇溶液，95℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

B、三七的鉴别：取A的供试品溶液作为供试品溶液。

取三七对照药材0.5g，加水5滴，搅匀，加水饱和的正丁醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液加氨试液20ml洗涤，弃去氨液，再加正丁醇饱和的水20ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为对照药材溶液。

取人参皂苷Rb1、Rg1及三七皂苷R1对照品，加甲醇制成各浓度均为0.5mg/ml的混合溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(10∶10∶1)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，95℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，显相同颜色的荧光斑点。

C、仙鹤草的鉴别：取实施例1的胶囊剂内容物0.5g，加0.2％氢氧化钠溶15ml，超声处理10分钟，滤过，滤液加盐酸调节pH值至2，滤过，滤液加乙酸乙酯提取1次，每次10ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

取仙鹤草对照药材4g，加水25ml，煎煮0.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加0.2％氢氧化钠溶液15ml，温热使溶解，滤过，滤液与供试品溶液同法制成对照药材溶液。

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯(用水饱和)-乙酸乙酯-甲酸(4∶4∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

D、益母草的鉴别：取实施例1的胶囊剂内容物0.9g，加乙醇22ml，加热回流0.5小时，放冷，滤过，滤液浓缩至约2.5ml，加于活性炭-氧化铝柱上(活性炭-氧化铝柱为活性炭0.3g/100-120目中性氧化铝1g，内径5mm)，用乙醇15ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇0.2ml使溶解，作为供试品溶液。

取益母草对照药材1.5g，与供试品溶液同法制成对照药材溶液；再取盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成2.5mg/ml的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-盐酸-水(3∶1.5∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例8 本发明药物胶囊剂的鉴别方法

A、赤芍的鉴别：取实施例1的胶囊剂内容物1.5g，加水38ml，超声处理45分钟，滤过，滤液加水饱和的正丁醇提取5次，每次30ml，合并正丁醇液，加氨试液60洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液。

取赤芍对照药材3g，加甲醇45ml，超声处理1.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水38ml，温热使溶解，滤过，滤液与供试品溶液同法提取制成对照药材溶液。

取芍药苷对照品，加甲醇制成3mg/ml的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(50∶2∶15∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸甲醇溶液，115℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

B、三七的鉴别：取上述的供试品溶液作为供试品溶液；另取三七对照药材1.5g，加水15滴，搅匀，加水饱和的正丁醇60ml，超声处理60分钟，滤过，滤液加氨试液60ml洗涤，弃去氨液，再加正丁醇饱和的水60ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为对照药材溶液；再取人参皂苷Rb1、Rg1及三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml各含1.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(16∶4∶3)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，115℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，显相同颜色的荧光斑点；

C、仙鹤草的鉴别：取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物1.5g，加0.8％氢氧化钠溶液45ml，超声处理30分钟，滤过，滤液加盐酸调节pH值至3，滤过，滤液加乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液；另取仙鹤草对照药材12g，加水75ml，煎煮1.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加0.8％氢氧化钠溶液45ml，温热使溶解，滤过，滤液同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯(用水饱和)-乙酸乙酯-甲酸(8∶2∶1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1.5％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

D、益母草的鉴别：取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物1.5g，加乙醇38ml，加热回流1.5小时，放冷，滤过，滤液浓缩至约7.5ml，加于活性炭-氧化铝柱上，活性炭-氧化铝柱为活性炭0.7g/中性氧化铝100-120目，3g，内径15mm，用乙醇45ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇0.8ml使溶解，作为供试品溶液。另取益母草对照药材4.5g，同法制成对照药材溶液；再取盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成每1ml含7.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-盐酸-水(5∶0.5∶0.8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例9 本发明药物胶囊剂的含量测定方法

A、精密称取芍药苷对照品10mg，加50％甲醇制成浓度0.1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；

B、取上述实施例1的方法制备的胶囊剂内容物0.1g，精密称定，置具塞的三角烧瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，冷浸过夜后，超声处理30分钟(功率200W，频率40KHz)，再称重，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液；

C、照高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇(70∶30)为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2500，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测得供试品溶液和对照品溶液的峰面积分别为2059025和2432109，按公式“芍药苷含量＝样品峰面积×对照品浓度×50×平均粒重/(对照品峰面积×样品重量)”计算，即得芍药苷含量为14.58mg/粒，大于12.0mg/粒。

实验例1

实验条件：

动物：清洁级ICR小白鼠。

药物：本发明实施例1的胶囊剂0.4g/粒，每1g胶囊内容物含生药11.25g；公开号为CN1435243A的专利制得的胶囊剂0.4g/粒，每1g胶囊内容物含生药11.25g；均由湖南株洲千金药业股份有限公司提供。

实验室温度20℃-25℃，相对湿度42％-76％。

实验方法及结果：

一、对小白鼠凝血时间的影响

小白鼠30只，随机分为3组，每组10只。第一组为阴性对照组，给与等容积生理盐水；第二组为公开号为CN1435243A的专利制得的胶囊剂组，给与公开号为CN1435243A的专利制得的胶囊剂0.4g/kg；第三组为本发明实施例1的胶囊剂组，给与本发明胶囊剂11.25g生药/kg。各组皆灌胃给药，0.2ml/10g，每天1次，连续3天。末次给药60min后小鼠眼球采血，用玻片法测定小鼠凝血时间。结果见表1。

表1 本发明胶囊对小鼠凝血时间的影响(X±s)

  组别  动物数(只)  剂量(g/kg)  凝血时间(min)  第一组  10  2.04±0.74  第二组  10  0.40  1.72±0.56  第三组  10  11.25  1.38±0.42*

与阴性对照组比较，*P＜0.05

由表1可见，本发明胶囊剂可缩短小鼠凝血时间，与阴性对照组比较，有显著性差异(P＜0.05)，说明本发明胶囊剂对小鼠有促凝血作用，且较第二组促凝血效果更优。

二、对小白鼠出血时间的影响

小白鼠30只，随机分为3组，每组10只。第一组为阴性对照组，给与等容积生理盐水：第二组为公开号为CN1435243A的专利制得的胶囊剂组，给与公开号为CN1435243A的专利制得的胶囊剂0.4g/kg；第三组为本发明实施例1的胶囊剂组，给本发明胶囊剂11.25g生药/kg。各组皆灌胃给药，0.2ml/10g，每天1次，连续3天。末次给药60min后，距尾尖1/3处剪断鼠尾，测定出血时间。结果见表2。

表2 本发明胶囊对小鼠出血时间的影响(X±S)

  组别  动物数(只)  剂量(B/kg)  出血时间(min)  第一组  10  22.37±5.03  第二组  10  0.40  19.68±9.58  第三组  10  11.25  15.74±3.39**

与阴性对照组比较，**P＜0.01

由表2可见，本发明胶囊可缩短小鼠出血时间，与阴性对照组比较，有显著性差异(P＜0.01)。说明本发明胶囊可缩短小鼠出血时间，而第二组胶囊对小鼠出血时间无明显影响。

实验结论：

本发明胶囊与公开号为CN1435243A的专利制得的胶囊剂相比较，可以缩短小鼠的出血时间，具有凝血更快，药效更确切等优点。

实验例2

实验条件：

实验室温度20℃-25℃，相对湿度42％-76％。

一、对家兔血小板聚集功能的影响

家兔40只，随机分为5组，每组8只。第一组为阴性对照组，给与等容积生理盐水；第二组为阳性对照组，给宫血宁胶囊(云南白药股份有限公司生产)0.15g/Kg；第三、四、五组为本发明胶囊组，分别给与本发明实施例1的胶囊组2.1g生药/kg、4.2g生药/kg、8.4g生药/kg。各组皆灌胃给药，5ml/kg，每天1次，连续7天。末次给药60min后耳缘静脉采血，用装有A溶液(由0.077mol/LEDTA 3ml、4％甲醛溶液5ml、浓磷酸盐缓冲液2ml、蒸馏水12ml组成)或B溶液(由0.077mol/LEDTA 3ml、浓磷酸盐缓冲液5ml、蒸馏水12ml组成)的注射器分别采血0.5ml，充分混匀，室温静置15min，150g离心8min，取上清血浆计数血小板，按下式计算循环血小板聚集率，结果见表3。

表3本发明胶囊对家兔循环血小板聚集率的影响(X±s)

与阴性对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

由表3可见，本发明胶囊可升高家兔循环血小板聚集率，与阴性对照组比较，大剂量组有显著性差异(P＜0.05)，说明本发明胶囊可轻度促进循环血小板聚集，阳性对照药宫血宁胶囊亦可升高家兔循环血小板聚集率。

二、对家兔纤溶系统功能的影响

家兔40只，随机分为5组，每组8只。第一组为阴性对照组，给与等容积生理盐水；第二组为阳性对照组，给与宫血宁胶囊0.15g/kg；第三、四、五组为本发明胶囊组，分别给本发明胶囊2.1g生药/kg、4.2g生药/kg、8.4g生药/kg。各组皆灌胃给药，5ml/kg，每天1次，连续7天。末次给药60min后耳缘静脉采血，3.8％枸橼酸钠抗凝(1∶9)，3000rpm离心10min分离血浆。取0.5ml血浆，加蒸馏水9.0ml，再加1％醋酸0.1mI使pH达到4.5，充分混合后，置于4℃冰箱10min，再以3000rpm离心10min。弃去上清液，加硼酸缓冲液(pH＝9)0.5ml，用玻璃棒搅拌约1min。然后37℃水浴，2min后加1/40mol/L CaCl₂0.5ml，待其凝固，观察凝块完全溶解所需时问(优球蛋白溶解时间，ELT)，结果见表4

表4本发明胶囊对家兔优球蛋白溶解时间的影响(X±s)

由表4可见，本发明胶囊对家兔ELT有缩短趋势，但与阴性对照组比较统计学无显著性差异(P＞0.05)，说明本发明胶囊对家兔ELT无明显影响。阳性对照组宫血宁胶囊对家兔ELT亦无明显影响。

三、对家兔在体子宫收缩的影响

家兔40只，随机分为5组，每组8只。第一组为阴性对照组，给与等容积生理盐水；第二组为阳性对照组，给与缩宫素注射液0.8U/kg；第三、四、五组为本发明胶囊组，分别给与本发明实施例1胶囊2.1g生药/kg、4.2g生药/kg.、8.4g生药/kg。各组家兔静脉注射戊巴比妥钠30mg/kg麻醉，仰卧固定，剪去腹部手术部位毛，消毒，于下腹部正中切开皮肤，打开腹腔，找出子宫。在一侧子宫角选取长约3cm的一段，中点穿一丝线与肌张力换能器连接。子宫的阴道端和卵巢端分别缝合固定在塑料杯底部两侧支点上。将腹壁围绕塑料杯四周缝合固定。塑料杯内放置乐氏液，用手术灯照射保温。子宫负荷1g。待子宫收缩稳定后描记子宫正常收缩曲线，然后除阳性对照组肌肉注射缩宫素1次外，其余各组十二指肠给药1次，5ml/kg。观察记录给药后30min、60min、90min、120min子宫收缩曲线，结果见表5-表8

由表5可见，本发明胶囊增强家兔在体子宫收缩力，具有剂量依赖关系，与阴性对照组比较，中、大剂量组各个观察时间均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)：中、大剂量组作用持续2小时以上。

由表6可见，本发明胶囊增强家兔在体子宫平均收缩力，具有剂量依赖关系，与阴性对照组比较，大剂量组各个观察时间均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)；大剂量组作用持续2小时以上。

由表7可见，本发明胶囊增强家兔在体子宫收缩频率，具有剂量依赖关系，与阴性对照组比较，中剂量组给药后30min有显著性差异(P＜0.05)，大剂量组给药后30min和60min均有显著性差异(P＜0.01)：作用持续1小时左右。

由表8可见，本发明胶囊增强家兔在体子宫收缩张力，具有剂量依赖关系，与阴性对照组比较，小剂量组给药后60min有显著性差异(P＜0.01)，中、大剂量组给药后30min、60min和90min均有显著性差异(P＜0_05或P＜0.01)；作用持续90min左右。

由此可见，本发明胶囊可加强家兔子宫收缩力和收缩频率。阳性对照药缩宫素注射液亦可加强家兔子宫收缩力和收缩频率。

试验结论

本发明胶囊灌胃给药，缩短小鼠凝血时间和出血时间，升高家兔循环血小板聚集率，对家兔ELT有缩短趋势；增强家免在体子宫收缩力、平均收缩力、收缩频率和子宫收缩张力。结果说明，本发明胶囊有促凝血作用和止血作用，轻度促进循环血小板聚集，加强子官收缩力和收缩频率。

实验例3 本发明含量测定方法精密度试验

取芍药苷对照品2.85mg，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，按实施例3中“含量测定”方法测定5次，记录峰面积积分值，结果见表9。

表9、精密度试验结果

结果表明：本发明含量测定方法精密度好。

实验例4 本发明含量测定方法稳定性试验

按实施例3中“含量测定”方法测定，对实施例12中制得的供试品溶液，分别在0、4、8、16、24小时进行测定，结果见表10。

表10、稳定性试验结果

结果表明，在24小时内基本稳定。

实验例5 本发明含量测定方法重复性试验

取实施例1中制得的胶囊，去胶囊壳，称样量分别为0.1011g，0.0997g，0.1062g，0.1073g，0.1023g，照实施例12中供试品溶液制备方法制备供试品溶液5份，按实施例9中“含量测定”方法测定，结果见表11。

表11、重复性实验结果

结果表明：本发明含量测定方法重复性好。

实验例6 本发明含量测定方法加样回收率试验

精密称取已知含量为14.58mg/粒的实施例1中制得的样品5份，每份约50mg，分别精密加入芍药苷对照品溶液(1.77mg/ml)1ml，按实施例9中“含量测定”方法测定，结果见表12。

表12、回收率测定结果

结果表明，本方法回收率较好。