牛磺酸及其药学上可接受的盐在制备抑制子宫收缩药物中的用途

摘要

本发明公开了一种牛磺酸及其药学上可接受的盐的新用途。本发明公开的牛磺酸或其药学上可接受的盐的新用途，即在制备保胎药或妊娠期保护孕妇和/或胎儿正常发育的保健品中的应用。牛磺酸或其药学上可接受的盐对母体子宫平滑肌收缩有调节作用，有助于减少早期流产的发生。牛磺酸或其药学上可接受的盐没有药物副作用，成本低且效果好，没有副作用。

说明书

技术领域

本发明涉及牛磺酸的新医药领域，特别涉及牛磺酸及其药学上可接受的盐在制备抑制子宫收缩药物中的用途，以及作为保胎药及保健品在人类妊娠期及其提高人类辅助生殖效率方面的应用。

背景技术

目前国内市场上针对孕妇使用的保胎药及保健品十分稀少。国际生殖医学界对于一些重要营养物的新用途越来越重视，如日本正在强制推行“叶酸+生物素”为该国孕妇的口服营养物。

牛磺酸的化学名称为2-氨基乙磺酸(Taurine，简写Tau)，俗称牛胆酸、牛胆碱等，因首次从牛胆汁中分离而得名。牛磺酸在自然海洋生物中含量最高，是一种可以直接从动植物中提取或人工合成的小分子物质。近年研究表明：牛磺酸是人体条件性必需氨基酸，具有广泛的生物学作用，是调节机体正常生理功能的重要活性物质。牛磺酸的生理学功能主要包括：稳定细胞膜生化特性、抗氧化、清除氧自由基、调节细胞渗透压平衡、维持细胞内钙稳态、调节神经系统等作用。临床上已将牛磺酸用于预防治疗心血管疾病、酒精肝、糖尿病等。但是，至今国内外尚未见牛磺酸作为保胎药及保健品在妊娠妇女和动物中使用的报道。

发明内容

本发明目的是提供一种牛磺酸及其药学上可接受的盐的新用途。

本发明所提供的牛磺酸或其药学上可接受的盐的新用途，是牛磺酸或其药学上可接受的盐在制备抑制子宫收缩药物中的应用。

由于牛磺酸或其药学上可接受的盐可抑制子宫收缩，所以牛磺酸或其药学上可接受的盐也可用于制备保胎药，和/或妊娠期保护孕妇的保健品，和/或，胎儿正常发育的保健品。

牛磺酸或其药学上可接受的盐可以作为保胎药或保健品应用于妊娠期抗流产药、保胎药、保健品中，也可以添加在辅助生殖技术使用的胚胎体外培养液和操作液中。

本发明可以是适合药物及保健品的任何剂型，可以加一种或多种其他妊娠期需补充的物质。在用于口服时，可将其制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊、分散片、口服液、颗粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、缓释片、控释片、控释胶囊；制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如，糖浆、口服液、注射液等，优选剂型是口服制剂或注射剂，如片、胶囊、颗粒、分针、水针、输液等。

上述药物可采用现有制药领域中的常规方法生产，加入药物可接受的辅料，包括固体制剂的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂和助流剂、pH值调节剂及溶剂。

牛磺酸或其药学上可接受的盐日服用剂量0.5-4000mg/日，优选为500-4000mg/日。胚胎体外培养液添加浓度在2.5mM-10mM。

体内体外实验证明牛磺酸或其药学上可接受的盐有利于胚胎和胎儿的发育，因此可用于妊娠早期胚胎发育阶段。牛磺酸或其药学上可接受的盐对母体子宫平滑肌收缩有调节作用，有助于减少流产的发生和提高人类辅助生殖的效率。牛磺酸或其药学上可接受的盐的成本低且效果好，无任何副作用。

附图说明

图1为牛磺酸对小鼠胚胎体外培养胚胎囊胚率的影响。

图2为妊娠第四天小鼠子宫角注射不同浓度牛磺酸转运抑制剂β-丙氨酸对着床的影响。

图3为牛磺酸对离体小鼠子宫平滑肌收缩的影响。

具体实施方式

下述实施例中如无特殊说明所用方法均为常规方法，所用试剂均可从商业途径获得。

实施例1、牛磺酸用于制备保胎药或妊娠期保护孕妇和/或胎儿正常发育的保健品

1)牛磺酸对胚胎体外发育的影响

将发育良好的昆明小鼠受精卵移入过夜平衡的含不同终浓度牛磺酸(0mM、5mM、10mM)、10mM牛磺酸和10mM β-丙氨酸(牛磺酸转运抑制剂)、10mM β-丙氨酸的mKSOM培养液中(mKSOM培养液培养液的组成成分见表1)，每滴培养液放6～10个受精卵，置于37℃，5％CO₂饱和湿度的培养箱中培养至囊胚期，培养112小时后统计囊胚率。用Hochest 33342(5μg/ml)对囊胚进行染色，统计囊胚细胞总数来评价牛磺酸对小鼠胚胎体外发育的影响。

表1.mKSOM(小鼠胚胎培养液)的组成

牛磺酸对昆明小鼠胚胎在三种培养液中体外发育的影响结果如表2所示。

表2.牛磺酸对昆明小鼠胚胎体外发育的影响

表2中b表示平均值±标准误，^*代表和对照组相比差异显著(^*，P＜0.05，^**，P＜0.01)；第一列和第二列中的“-”表示未添加任何物质的mKSOM培养液，“5”表示在mKSOM培养液中添加该物质，使其终浓度为5mM，“10”表示在mKSOM培养液中添加牛磺酸，使其终浓度为10mM；

图1为各处理组胚胎发育至囊胚时的状况。图1中，con表示表示未添加任何物质的mKSOM培养液，10mM Tau表示在mKSOM培养液中添加牛磺酸，使其终浓度为10mM；10mM β-ala表示在mKSOM培养液中添加β-丙氨酸，使其终浓度为10mM；10mM Tau+β-ala在mKSOM培养液中添加牛磺酸和β-丙氨酸，使它们的终浓度均为10mM。

上述实验结果表明，添加10mM牛磺酸能显著提高胚胎体外发育4-细胞率、囊胚率、囊胚总细胞数。

2)牛磺酸对胚胎着床的影响

10只昆明小鼠母鼠分成2组，实验组和对照组，每组5只。

给母鼠超数排卵，见栓第1天记为妊娠第1天(D1)。对照组小鼠只饮自来水，实验组小鼠在饮水中添加牛磺酸，至浓度为1.5％(质量百分含量)。第八天(D8)统计胚胎数目。牛磺酸对胚胎着床的影响如表3所示。表明妊娠母鼠饮水中添加1.5％(质量百分含量)牛磺酸能显著提高小鼠胚胎着床数目(P＜0.01)。

表3.饮用牛磺酸对妊娠母鼠D8胚胎数目的影响

3)牛磺酸对小鼠胚胎着床的影响

超数排卵的妊娠昆明白雌鼠于妊娠第4天(D4)上午通过一侧子宫角注射牛磺酸的选择性转运抑制剂β-丙氨酸来进行体内抑制实验。

超数排卵的妊娠D4昆明白雌鼠20只，分成4组，分别为实验组1、实验组2、实验组3和对照组1，每组5只。

实验组1：小鼠在右侧子宫角注射3μl浓度为2μg/ml的β-丙氨酸，左侧子宫角注射同样剂量的生理盐水；

实验组2：小鼠在右侧子宫角注射3μl浓度为20μg/ml的β-丙氨酸，左侧子宫角注射同样剂量的生理盐水；

实验组3：小鼠在右侧子宫角注射3μl浓度为200μg/ml的β-丙氨酸，左侧子宫角注射同样剂量的生理盐水；

对照：小鼠的两侧子宫角都注射同样剂量的生理盐水。

实验重复3次。

受试动物于妊娠第9天(D9)剖检，采集子宫，统计每侧子宫角着床的胚胎个数。β-丙氨酸对植入期小鼠胚胎着床的影响结果如表4。

表4.β-丙氨酸对植入期小鼠胚胎着床的影响(个)

由表4可见，妊娠D4子宫角注射牛磺酸的选择性转运抑制剂β-丙氨酸，呈剂量依赖性的显著降低妊娠D9着床的胚胎数。当β-丙氨酸在200μg/ml时，右侧子宫角没有胚胎着床。

图2中A，B，C，分别为实验组1、实验组2、实验组3妊娠D9收集的右侧子宫；D为对照组右侧子宫。

4)牛磺酸抗流产药物的作用

自然交配妊娠昆明白雌鼠每只于妊娠第四天下午皮下注射75ug RU486(流产药物：米非司酮)，通过腹腔注射不同剂量牛磺酸进行体内流产保护实验。受试动物于妊娠第9天(D9)剖检，统计每侧子宫角着床的胚胎个数。

自然交配妊娠昆明白雌鼠20只，分成4组，分别为实验组1、实验组2、实验组3和对照组，每组5只。

实验组1：自然交配妊娠昆明白雌鼠每只于妊娠第4天下午皮下注射75ugRU486

实验组2：自然交配妊娠昆明白雌鼠每只于妊娠第4天下午皮下注射75ugRU486和37.5mg牛磺酸(Tau)。

实验组3：自然交配妊娠昆明白雌鼠每只于妊娠第4天下午皮下注射75ugRU486和75mg牛磺酸(Tau)。

对照：自然交配妊娠昆明白雌鼠不注射任何药物。

实验重复3次。

表5.着床的胚胎数(个)

实验结果表明，腹腔注射37.5mg或75mg牛磺酸时，由流产药米非司酮(RU486)引起的流产率从85.49％降至75％或46.1％。可见，牛磺酸对流产药物米非司酮引起的流产有一定的保护作用。

5)牛磺酸对离体小鼠平滑肌收缩的影响

将麻醉后颈椎脱臼法处死小鼠，打开腹腔，迅速剪取子宫，立即置于缓冲液中，小心清除子宫周围的系膜及结缔组织，取两侧子宫体长约1.0-1.5cm一段作为标本。打开RM B6240生物信号采集系统(成都仪器厂)，调零、定标。将标本的两端用丝线分别结扎，下端系于L型钩上固定，置于盛有6ml乐氏液的恒温浴槽中，上端连接张力换能器。恒温浴槽内的温度保持为(37±0.5)℃，同时通入混合气(60～80个气泡/分钟)。标本负荷0.94g，平衡30分钟，待实验系统稳定后，开始描记10分钟正常子宫平滑肌自律曲线，在装有已建立规律宫缩的子宫平滑肌浴槽中以累加的方式加入牛磺酸(Tau)(先加入牛磺酸使其终浓度为10mM，20分钟后再加入牛磺酸使其终浓度为20mM，20分钟后再加牛磺酸，使终浓度为30mM。各浓度替换之间不换液，直接加贮液)，另外一组是30mM牛磺酸与30mM转运抑制剂胍基乙磺酸(Guanidinoethane sulfonate，GES)同时共同添加，记录子宫肌条收缩情况，每次所有给药实验结束后换成常规乐氏液，观察子宫是否能够恢复正常收缩。

表6.牛磺酸对离体小鼠子宫平滑肌收缩的影响

(^**，P＜0.01，表示差异极显著；^****，P＜0.0001，表示差异极极显著；对照为给药前的子宫)。

表7.胍基乙磺酸对离体小鼠子宫平滑肌收缩的影响

表6是对附图3中图A的数据统计，表7是针对附图3中图B、C的数据统计。

表6和表7的数据为3个标本的平均值±标准差。

实验结果如表6、7和图3所示，表明牛磺酸以剂量依赖方式抑制小鼠离体子宫收缩，10mM牛磺酸已能明显抑制收缩幅度，但对收缩频率未见明显影响，当浓度至30mM时几乎完全抑制收缩(与对照差异极显著)，给药结束后换成正常乐氏液，子宫收缩又能恢复至正常收缩状态。终浓度为30mM的牛磺酸与其抑制剂-胍基乙磺酸(GES)共同添加时，牛磺酸不能发挥抑制子宫收缩的作用，单独添加30mM GES对子宫收缩未有影响(与对照差异不显著)。说明牛磺酸确实能够抑制离体子宫的收缩。

图3中，A为牛磺酸对小鼠离体子宫收缩的影响；B为终浓度为30mM的牛磺酸与30mM牛磺酸转运抑制剂-胍基乙磺酸(GES)共同添加对子宫收缩的影响；C为终浓度为30mM GES对子宫收缩的影响。图3A中，“10”代表牛磺酸累积浓度为10mM、“20”代表牛磺酸累积浓度为20mM、“30”代表牛磺酸累积浓度为30mM。图3B中，“30+30”代表牛磺酸累积浓度为30Mm和胍基乙磺酸的终浓度为30mM。图3C中，“30”代表胍基乙磺酸的终浓度为30mM。