一种用于中药饮片炮制原理研究的模拟炮制方法

摘要

本发明提供一种用于中药饮片炮制原理研究的模拟炮制方法，属于中药技术领域，该方法针对中药炮制原理研究的关键问题，建立了一种以“空白饮片”为载体，以填充有效组分(成分)模拟饮片的炮制加工过程，通过研究炮制前后有效组分(化学成分)变化规律来揭示饮片炮制原理的研究方法。该发明较之以往的单成分模拟加热炮制方法，更接近于主要药效成分群在饮片中的真实存在状态，因此研究结果更为可靠。同时组分的添加，更能从整体上反映多成分群的变化规律。该发明不仅揭示了饮片炮制前后化学成分的变化规律，而且明确了同一中药不同饮片的药效物质基础，为揭示饮片炮制原理，指导不同饮片的临床合理应用以及建立具有饮片个性特色的质量评价标准提供科学依据。

说明书

一、技术领域

本发明属于中药技术领域，涉及一种用于中药饮片炮制原理研究的新方法。该方法是以空白饮片为载体，填充组分或有效成分模拟饮片炮制工艺过程，通过饮片炮制前后组分或化学成分变化规律的研究，揭示中药饮片炮制原理。

二、背景技术

饮片入药，生熟异治是中药的鲜明特色。中药材必须经过炮制成饮片后才能入药，这是中医临床用药的一个特点。中药炮制经过数千年的演变发展，形成了独具特色的炮制理论体系。中药经炮制后，由于其科学内涵(物质基础和生物活性)的变化而导致药性和相关药理作用的改变。只有基本探明饮片炮制前后科学内涵的变化规律，才能以此为纽带剖析炮制与药理作用改变的相关性；只有在探明中药炮制前后其主成分结构和量比关系及其生物活性整体变化规律的基础上，才能全面、客观地反映炮制改变中药饮片物质基础及其功能主治的变化规律；必须在基本探明炮制改变药性的科学内涵变化规律的前提下，才有可能为炮制工艺优化和饮片质量优劣提供现代科学的评判标准。因此，炮制理论及炮制原理的研究是炮制学科一项非常重要而又艰巨的任务，而如何建立科学、客观、有效的研究方法又成为中药饮片炮制原理研究的关键。

本发明正是基于目前中药炮制研究的这一关键问题，建立了一种以“空白饮片”为载体，以组分填充进行模拟炮制，进而研究其炮制前后化学成分变化规律的炮制原理研究方法。该方法与目前普遍采用的单成分加热模拟炮制不同，其模拟炮制条件和炮制前后成分的变化更贴近于饮片的真实炮制变化情况，不仅可以明确不同方法炮制饮片后组分或成分的变化规律，而且明确了同一中药不同饮片的药效物质基础，为进一步揭示饮片炮制原理奠定了基础，而且也为建立具有饮片个性特色的炮制工艺和质量评价标准提供了科学依据。

三、发明内容

本发明目的在于建立一种科学有效的炮制原理研究方法，使之可以广泛应用于生熟异治中药饮片的炮制原理研究。以空白饮片为载体，将有效组分或化学成分填充至空白饮片进行模拟炮制，利用HPLC法对生、制模拟饮片进行化学成分的定性、定量分析，不仅可以明确饮片炮制前后某类化学成分或某一化学成分的变化规律，而且明确了生、制饮片的有效物质基础，从而为揭示中药饮片的炮制原理提供科学依据。

本发明通过以下方案来实施：

1.“空白饮片”的制备及及检测：将中药饮片(生片)以有机溶剂充分提取，使饮片中化学成分尽可能提取完全，并进行必要的HPLC检测。

2.模拟炮制所需组分的制备与分析：

(1)中药饮片(生片)以乙醇提取，提取物减压回收溶剂至无醇味，提取物以现代化学分离手段进行分离，制备饮片模拟炮制所需各填充组分。

(2)模拟炮制各填充组分化学成分分析：以HPLC法对模拟炮制各填充组分进行成分分析，明确各组分的化学成分组成和量比关系。

3.组分填充饮片的模拟炮制：将各组分溶液按比例填充至空白饮片，首先制备各组分模拟生片，再按照《中国药典》或《全国炮制规范》，模拟炮制成各种制片。

4.组分填充饮片炮制前后的成分分析：

(1)组分模拟生片和制片的HPLC定性分析。

(2)组分模拟饮片炮制前后变化显著成分的HPLC定量分析。

5.通过炮制前后HPLC图谱及主要成分的含量变化情况，揭示模拟饮片不同组分的变化情况和可能的转变途径和方式，阐明饮片炮制前后主要药效成分群的变化规律，为深入揭示饮片的炮制原理提供实验依据。

四、附图说明

1.图1目前普遍采用的模拟炮制方法与本发明的比较

2.图2大黄饮片(生片)与空白饮片的HPLC图谱比较

3.图3大黄饮片模拟炮制主要成分变化趋势示意图

五、具体实施方式

大黄为中医临床上应用最为广泛的中药之一，常以不同的炮制品组方入药，以发挥其独特的治疗作用。生大黄气味重浊，走而不守，直达下焦，以攻积导滞、泻火解毒为主，泻下作用峻烈，易伤胃气；大黄酒炙后泻下作用稍缓，并借酒升提之性，引药上行，可清上焦实热；醋大黄泻下作用减弱，以消积化瘀为主，用于食积痞满，症瘕癖积；熟大黄经酒蒸后，泻下作用缓和，能减轻腹痛等副作用，并增强了活血祛瘀的功效；大黄炭泻下作用极弱，并有止血作用，用于大肠有积滞的大便下血。本方法通过大黄生、酒、醋、熟、炭等五种饮片的组分模拟炮制研究，对本发明的具体实施方式进行说明。

1.空白饮片的制备及检测

大黄生片，以乙醇充分提取。提取后的饮片挥去溶剂，50℃鼓风干燥2小时，得到空白饮片。

空白饮片检测方法：HPLC法。色谱条件：Waters 2996-2695液相色谱仪(四元泵，在线脱气，自动进样)。Zorbax Eclipse XDB-C₁₈柱(4.6mm×250mm，5μm)，phenomenex保护柱，柱芯(C₁₈，5μm，3mm×4mm)；流动相：甲醇(A)-1.0％冰醋酸溶液(B)梯度洗脱，0～10min：A由5％升至30％，10～40min：A由30％升至60％，40～60min：60％A，60～70min：A由60％升至100％，70～75min：100％A；检测波长：280nm，430nm。柱温：30℃；流速为1.0mL·min-1。各供试品进样5μL。

在此条件下，空白饮片中仅检测到极微量的成分残留，大部分成分以提取完全。达到空白饮片的实验要求。

2.模拟炮制所需组分的制备

大黄生片粗粉，以乙醇渗漉提取，减压回收提取液15倍量，提取物以水稀释上D101大孔树脂柱，分别以水及不同浓度乙醇洗脱，收集乙醇洗脱部位，减压回收溶剂，得到组分1、组分2和组分3。

3.模拟炮制所需组分的分析

方法：HPLC法。色谱条件：同空白饮片检测条件。

结果：三个组分样品分离较好，组分1主要为鞣质类成分和少量苷类成分，组分2主要为蒽醌苷类、苯丁酮苷类及二苯乙烯苷类成分，组分3主要为蒽醌苷元。

4.组分模拟饮片的制备

1)组分模拟大黄生片制备

将空白饮片分为三份，置于密闭容器中，分别喷洒组分1、2、3溶液，充分拌匀，使空白饮片均匀吸收各组分溶液，取出，晾至饮片表面干燥，至烘箱中50℃干燥。制备成三种组分模拟大黄生片。

2)组分模拟大黄酒片制备

大黄不同组分模拟生片，按照药典附录ⅡD酒制法，分别加黄酒闷润3h，170℃左右，炒制2min，出锅，放凉。分别制备成组分1、组分2和组分3模拟大黄酒片。

3)组分模拟大黄熟片制备

大黄不同组分模拟生片，按照药典附录ⅡD酒炖法，分别加黄酒闷润17h，至酒被吸尽后，放入蒸锅中隔水炖约26h，至饮片黑褐色，内外颜色一致时，出锅，摊开，晾干。

制备成三种组分模拟大黄熟片。

4)组分模拟大黄炭片制备

大黄不同组分模拟生片，按照药典附录ⅡD炒炭法，于230℃左右，炒至冒浓黄烟(投入生片后，淡青烟冒出---黄烟---浓黄烟)时，喷少许清水灭去火星，快速出锅，摊开，晾凉。制备成三种组分模拟大黄炭片。

5.组分模拟饮片的HPLC分析

方法：HPLC法。色谱条件：同空白饮片检测条件。

结果：

1)组分1模拟饮片比较

同一组分模拟炮制的不同饮片HPLC图谱比较显示，组分1模拟大黄生片与酒片、醋片的HPLC图谱较相似，熟片和炭片的化学成分变化较大。280nm下，组分1模拟熟片中没食子酸的峰面积与模拟生片相比明显增加(127％)，其他成分峰面积则有不同程度的降低，表儿茶素、没食子酸乙酯、芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和番泻苷A均未检测到。模拟炭片中没食子酸和大黄酸峰面积分别增加了82％、22％。

2)组分2模拟炮制饮片比较

组分2模拟大黄生、酒、醋片HPLC图谱相似，与模拟生片相比模拟熟片与模拟炭片色谱峰变化较大，色谱峰面积显著降低。组分2模拟生片中不含没食子酸，而模拟熟片中没食子酸大幅增加。与模拟生片相比，其他四种模拟饮片中苷类成分的峰面积均称不同程度下降趋势，尤以炭片和熟片显著。另外，五种蒽醌苷元的峰面积也明显增加。见附图4。

3)组分3模拟炮制饮片比较

组分3模拟饮片色谱峰较少，但其变化趋势较为明显。280nm下，模拟生、酒饮片中均无没食子酸，炮制为熟片和炭片后该成分峰面积显著增加。模拟熟片和炭片中大黄酚、大黄素甲醚的峰面积与生片相比分别增加了73％、120％。

6.结论

蒽醌苷类成分为大黄泻下的主要有效成分，该类成分炮制以后主要表现为自身的破坏以及向其相应苷元转化，同时蒽醌苷元也存在着自身破坏与相应苷类成分向其转化的动态过程。同时，大黄中还含有大量的其他苷类成分，如苯丁酮、二苯乙烯苷等，炮制后也存在着破坏与转化为相应苷元的变化过程。另外，鞣质也是大黄饮片中一类主要有效成分，其变化过程较为复杂。由于不同饮片炮制工艺不同，因此炮制后，鞣质一部分被完全破坏，另一部分转化为儿茶素、没食子酸等单体鞣质。同时，由于部分苷类成分中含有没食子酯基，因此在加热炮制过程中，不仅可转化为相应的苷元，还分解产生没食子酸。单体鞣质也同样存在着不同程度的破坏与转化。这也是大黄熟片和炭片中没食子酸含量显著增加的原因。本发明通过大黄饮片模拟炮制研究，基本明确了大黄饮片炮制前后化学成分的变化规律和可能的变化途径，为揭示大黄饮片炮制原理的科学内涵提供了科学依据，同时该方法也为其他中药饮片炮制原理的研究提供了参考，形成了一种新的中药饮片炮制原理研究模式，也为规范饮片炮制工艺和建立具有饮片个性特色的质量评价标准提供了科学依据，对于炮制学科及饮片行业的发展具有重要意义。