稳定指示细胞自噬活动的表达载体及其建立和应用方法

摘要

本发明属于生物医学领域，旨在提供一种稳定指示细胞自噬活动的表达载体及其建立和应用方法。本发明通过构建含有EGFP-LC3自噬报告基因的慢病毒表达质粒，采用四质粒系统，建立能够使细胞稳定表达EGFP-LC3基因的慢病毒表达载体。使用该表达载体感染宿主细胞，可将EGFP-LC3基因稳定整合入宿主细胞基因组，使宿主细胞稳定高效表达EGFP-LC3，指示细胞自噬变化。应用该表达载体可建立稳定的自噬指示细胞，并采用基于Top-hat算子和形态滤波的图像分析方法快速定量分析细胞自噬改变。本发明具有自噬指示稳定可靠、实时灵敏、自噬定量快速准确、操作简便等特点，极大地方便了自噬观察分析，可广泛应用于自噬相关研究。