一种三叉神经根切片及其制作方法

摘要

本发明涉及一种三叉神经切片制作方法，包括下列步骤S1、将固定好的三叉神经根整根进行大包埋；S2、将被包埋的三叉神经根沿横切面分段切断成小段；S3、将每一小段三叉神经根再次在包埋框中进行小包埋，并在组织切片机上进行切片。实施本发明的三叉神经根切片及其制作方法，能够保持三叉神经根的组织结构，防止其神经纤维束的脱失、位移，可制作出高质量的横断面的三叉神经根切片。

说明书

技术领域

本发明涉及一种标本处理方法，更具体地说，涉及一种三叉神经根切片的制片方法。

背景技术

三叉神经(trigeminal nerve)是粗大的脑神经，为混合神经，含有感觉和运动两种纤维。而三叉神经痛是在面部三叉神经分布区内反复发作的阵发性剧烈神经痛，是耳-神经外科、口腔科、内科等的常见病之一，也是国际公认的疑难杂症之一。因此，在医学领域，为了研究正常的或是病态的三叉神经根显微结构，常常需要制作三叉神经根连续组织切片。在现有技术制作三叉神经根连续组织切片中，通常采用在未被石蜡包埋情况下→神经根便被分段切断→将此小段的神经根常规石蜡包埋→分别进行切片，最后进入各种选择性组织染色程序。

在临床解剖学中，三叉神经可分为感觉根和运动根，其分支繁多，走行，分布庞杂。一般认为，躯体感觉纤维的胞体位于半月节内，其中枢突形成感觉根，约30～40束，集成一略扁的神经根〔2.8mm×(6～7)mm〕进入脑干内，长约20mm。运动根源于运动核，与中脑核发出的本体感受纤维集合而成，由6～10个根丝合成小束，宽1.5～2mm，在出脑干处，与感觉根之间被少量脑桥的横纤维分开，出脑干后走行于感觉根的前内侧。

由于三叉神经根长度长，常规切片机未能对其横切面切片，需分段进行，且三叉神经根的分支多，细小、柔软，所以，直接对没有经过石蜡包埋的三叉神经根进行分段切断，往往会使得整个三叉神经根松散变形，甚至纤维束脱落，终使组织切片未能展示原来的真实结构。

因此，需要一种能够制作三叉神经根保持原有组织结构、高质量的组织切片的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术的切片前过程中，容易出现整个三叉神经根松散、纤维束脱落、质量差的缺陷，提供一种能够制作反映组织原状、高质量的的三叉神经根切片制作方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：构造一种三叉神经根切片的石蜡制片方法，包括下列步骤：

S1、将固定好的三叉神经根整根进行大包埋；

S2、将被包埋的三叉神经根沿横切面分段切断成小段；

S3、将每一小段三叉神经根再次在包埋框中进行小包埋，并在组织切片机上进行切片。

在本发明所述的三叉神经根切片的制片方法中，在步骤S2中，所述三叉神经根小段的长度范围为4～5mm。

在本发明所述的三叉神经根切片的制片方法中，在步骤S2中，将融化的石蜡注入包埋框包埋所述三叉神经根整根，然后置于室温下冷却成形，再将成形的石蜡块取出，并沿神经根横切面，将蜡块分次切成长度为5mm的小段。

在本发明所述的三叉神经根切片的制片方法中，所述步骤S3进一步包括将所述三叉神经根小段蜡块修整后再放入包埋框中补蜡包埋。

在本发明所述的三叉神经根切片的制片方法中，所述步骤S3进一步包括依序在组织切片机上进行连续的常规切片，切片厚度为4～8μm。

在本发明所述的三叉神经根切片的制片方法中，所述方法进一步包括采用伊红对获得的切片进行染色。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是，构造一种采用本发明的三叉神经根切片制作方法所制作的三叉神经根切片。

实施本发明的三叉神经根切片及其制作方法，能够利用常用的组织切片机和石蜡包埋法，最大限度地保持三叉神经根的组织结构，防止其神经纤维束的脱失、位移，可制作出高质量的横断面的三叉神经根连续组织切片。

附图说明

下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明，附图中：

图1是本发明的三叉神经根切片制作方法的第一实施例的方法流程图；

图2是本发明的三叉神经根切片制作方法的第二实施例的方法流程图。

具体实施方式

图1是本发明的三叉神经根切片制作方法的第一实施例的方法流程图。如图1所示，该方法包括下列步骤：S1、将固定好的三叉神经根整根进行大包埋；S2、将被包埋的三叉神经根沿横切面分段切断成小段；S3、将每一小段三叉神经根再次在包埋框中进行小包埋，并在组织切片机上进行切片。在本发明的其他实施例中，还可包括如染色、脱蜡等常规切片制作步骤。

图2是本发明的三叉神经根切片制作方法的第二实施例的方法流程图。该方法包括下列步骤：S1、固定，将新鲜三叉神经根整根转移到含有固定液的器皿中固定过夜；S2、将固定好的三叉神经根整根进行大包埋。可采用本领域技术人员已知的任何包埋剂和包埋方法包埋所述三叉神经根。在本发明的优选实施例中，采用的包埋剂是石蜡。S3、将被包埋的三叉神经根沿横切面分段切断成小段。每一小段的长度范围为4～5mm。优选5mm。S4、顺序将所述三叉神经根小段按顺序分别再次在包埋框中用石蜡包埋，再依序在组织切片机上进行连续切片成厚度为5μm的切片。在本发明的其他实施例中，也可根据需要将所述三叉神经根小段切成其他厚度。优选的厚度范围为4～8μm。S5、采用二甲苯脱蜡，再经逐级梯度乙醇水化。该脱水步骤采用75％、85％、95％以及100％的乙醇逐级脱水。S6、采用染色剂染色脱蜡后的三叉神经根切片。所述染色剂优选伊红。

下面结合实施例对本发明的三叉神经根切片及其制作方法进行说明。

实施例1

本实施例以人尸体上获取的三叉神经根为样本来制备三叉神经根切片，其具体包括下列步骤：

1、取材和固定。选取常规福尔马林(甲醛溶液)固定处理的尸体，每具随即解剖一侧颅内段(即脑干至半月节之间)的三叉神经的神经根样本，并采用10％的福尔马林固定24小时。

2、大包埋及分段，将融化的石蜡注入包埋框包埋所述三叉神经根整根，然后置于室温下冷却成形，再将成形的石蜡块取出，并沿神经根横切面，将蜡块分次切成长度为5mm的小段。

在本发明的其他实施例中，还可采用石蜡和蜂蜡的混合物。也可在浸蜡以后将其放置到冷水中冷却。也可将蜡块切成其他厚度的大切片。

3、小包埋及切片，顺序将所述三叉神经根小段按顺序分别再次在包埋框中用石蜡包埋，再依序在组织切片机上进行连续切片成厚度为5μm的切片，也可根据需要，将所述三叉神经根小段切成其他厚度的切片。包埋和切片过程可与步骤2中相同和不同。

实施例2

1、取材和固定。选取常规福尔马林(甲醛溶液)固定处理的尸体，每具随即解剖一侧颅内段(即脑干至半月节之间)的三叉神经的神经根样本，并采用80-95％的乙醇溶液固定24小时。

2、大包埋及分段，将融化的石蜡和蜂蜡混合物(7∶3)注入包埋框包埋所述三叉神经根整根，然后置于室温下冷却成形，再将成形的石蜡块取出，并沿神经根横切面，将蜡块分次切成长度为5mm的小段。

3、小包埋及切片，顺序将所述三叉神经根小段按顺序分别再次在包埋框中用石蜡包埋，再依序在组织切片机上进行连续切片成厚度为8μm的切片。包埋和切片过程可与步骤3中相同和不同。

4、脱蜡及脱水，采用二甲苯脱蜡，再经逐级梯度乙醇脱水。可用二甲苯脱蜡，再逐级经纯酒精及梯度酒精直至蒸馏水。脱水步骤可采用75％、85％、95％以及100％的乙醇逐级脱水

5、染色，染色的目的是使细胞组织内的不同结构呈现不同的颜色以便于观察。未经染色的细胞组织其折光率相似，不易辨认。经染色可显示细胞内不同的细胞器及内含物以及不同类型的细胞组织。染色剂种类繁多，应根据观察要求及研究内容采用不同的染色剂及染色方法，还要注意选用适宜的固定剂才能取得满意的结果。经典的苏木精(Hematoxylin)和伊红(曙红，Eosin)染色法是组织学标本及病理切片标本的常规染色，本领域技术人员了解并熟悉这一常规方法并能熟练应用。在本发明的实施例中，可采用伊红进行染色。

实施本发明的三叉神经根切片及其制作方法，能够保持三叉神经根的组织结构，防止其神经纤维束的脱失、位移，可制作出高质量的横断面的三叉神经根切片。

此外，本领域技术人员知悉，本发明的三叉神经根切片制作方法还可以用于其他类似和相近的生物组织切片的制作。并且在本发明的三叉神经根切片的制作方法中，除本发明中陈述的步骤以外，还可包括本领域技术人员已知的其他切片制作步骤，并且也可采用任何已知的试剂进行各个步骤的处理。因此，虽然本发明是通过具体实施例进行说明的，本领域技术人员应当明白，在不脱离本发明范围的情况下，还可以对本发明进行各种变换及等同替代，也就是说，在现有技术中公开的各种切片制造方法和试剂都可以用于本发明。因此，本发明不局限于所公开的具体实施例，而应当包括落入本发明权利要求范围内的全部实施方式。