二肽醇前药及其用途

摘要

本申请涉及2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑4-基]甲基}硫代)-4-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二腈的前药衍生物，用于制备它们的方法，它们用于治疗和/或预防疾病的用途，以及它们用于制造用以治疗和/或预防疾病的药物的用途，所述疾病尤其是心血管病症。

说明书

本申请涉及2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-4-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二腈的前药衍生物，用于制备它们的方法，它们用于治疗和/或预防疾病的用途，以及它们用于制造用以治疗和/或预防疾病的药物的用途，所述疾病尤其是心血管病症。

前药是在释放出真正的活性成分之前，在活体内酶促和/或化学类型的单阶段或多阶段生物转化经历的活性成分衍生物。前药残留通常用于改善作为基础的活性成分的性能曲线[P.Ettmayer等人，J.Med.Chem.47，2393-2404(2004)]。为了达到最优的作用曲线，必须设计前药残留以及所需的释放机理以非常精确地适配各个活性成分、适应症、活性位点和给药途径。大量药物作为前药给药，其相对于作为基础的活性成分具有改进的生物利用度，例如通过改善物化性质，特别是溶解性，主动或被动吸收性能或者组织特异性分布来改进。在关于前药的综述性文献中示例性提到：H.Bundgaard(编辑)，Design of Prodrugs：Bioreversiblederivatives for various functional groups and chemical entities，ElsevierScience Publishers B.V.，1985。

腺苷，一种嘌呤核苷酸，存在于所有细胞中，并在大量生理学和病理生理学刺激下释放出来。腺苷在细胞内作为5′-单磷酸腺苷(AMP)和S-腺苷高半胱氨酸分解的中间产物产生，但是也可以由细胞释放，然后通过结合到特异性的受体，作为类激素物质或者神经递质起作用。在各个组织中的可激发和/或工作细胞中特别通过腺苷Al-受体影响重要的功能[参见K.A.Jacobson和Z.-G.Gao，Nat.Rev.Drug Discover.5，247-264(2006)]。

化合物2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-4-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二腈[化合物(A)]是口服有效的腺苷-Al-受体激动剂，并在目前进行的深入临床试验中作为预防和治疗特别是心血管病症的可能的新型药物活性成分[WHO Drug Information，卷20，第2期(2006)；有关制备和使用，参见WO 03/053441，实施例6]。

但是，化合物(A)在水、生理介质和有机溶剂中仅具有有限的溶解性，和口服给药晶体材料的悬浮液后仅具有低的生物利用度。这一方面仅允许以低剂量静脉内给药活性成分；基于生理盐水的输注溶液以常用溶剂仅能困难地制备。另一方面，难以配置片剂形式。因此，本发明的任务在于鉴别化合物(A)的衍生物或前药，其在所述介质中具有改善的溶解性，和/或在口服给药后具有改善的生物利用度，同时在给药后允许在患者体内发生活性成分(A)的受控释放。通过改善的静脉内给药可以开辟该活性成分的额外的治疗应用领域。

关于基于这些化合物的羧酸酯的前药衍生物和可能性质的综述例如在K.Beaumont等人，Curr.Drug Metab.4，461-485(2003)中给出。

本发明涉及通式(I)的化合物

其中

R^A是下列式的基团

其中

^*表示至O原子的连接位点，

L¹和L²彼此独立地是键或-CH₂-，

R¹、R²和R³彼此独立地是氢或甲基，

R⁴和R⁶相同或不同，并且相互独立地是氢或天然α-氨基酸或者其同系物或异构体的侧基，

R⁵和R⁷彼此独立地是氢或甲基，

L³是直链或支链的(C₂-C₄)-烷烃二基，其另外经氨基取代，

R⁸、R⁹和R¹⁰彼此独立地是氢或甲基，

m是数字2、3、4、5或6，

L⁴是直链或支链的(C₂-C₄)-烷烃二基，其另外经羧基取代，

R¹¹是氢或甲基，

和

n是数字1、2、3或4，

及其盐、溶剂合物和盐的溶剂合物。

根据本发明的化合物是式(I)的化合物及其盐、溶剂合物和盐的溶剂合物，由式(I)涵盖的和下列式的化合物及其盐、溶剂合物和盐的溶剂合物，以及由式(I)涵盖的和在下文中作为工作实施方案提到的化合物及其盐、溶剂合物和盐的溶剂合物，就式(I)涵盖的和在下文提到的化合物而言，其尚不是盐，溶剂合物和盐的溶剂合物。

取决于其结构，根据本发明的化合物可以以立体异构体形式(对映异构体，非对映异构体)存在。因此，本发明涉及对映异构体或非对映异构体和它们的各自混合物。立体异构体纯的成分可以以本身已知的方式从这些对映异构体和/或非对映异构体的混合物中分离。

如果根据本发明的化合物可以以互变异构体形式存在，那么本发明包括所有互变异构形式。

在本发明范围内，盐是生理可接受的根据本发明的化合物的盐。但是，其本身不适合于药学应用但是可以用于例如分离或纯化本发明的化合物的盐也包括在内。除了单盐(Mono-Salz)，本发明任选地还包括可能的多盐，例如二盐或三盐。

根据本发明的化合物的生理学可接受的盐包括无机酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸、马来酸和苯甲酸的盐。

根据本发明的化合物的生理学可接受的盐还包括常见碱的盐，例如，比如和优选，碱金属盐(例如钠盐和钾盐)，碱土金属盐(例如钙盐和镁盐)和铵盐，衍生自氨或具有1-16个碳原子的有机胺，例如，比如和优选，乙胺，二乙胺，三乙胺，乙基二异丙基胺，单乙醇胺，二乙醇胺，三乙醇胺，胆碱，二环己胺，二甲基氨基乙醇，普鲁卡因，二苄基胺，吗啉，N-甲基吗啉，精氨酸，赖氨酸，乙二胺，哌啶和N-甲基哌啶。

在本发明范围内，溶剂合物是指通过与溶剂分子配位形成固态或液态的配合物的本发明化合物的形式。水合物是溶剂合物的特殊形式，其中与水发生配位。在本发明范围内，溶剂合物优选是水合物。

在本发明的范围内，除非另外说明，取代基具有如下含义：

(C₂-C₄)-烷烃二基，在本发明的范围内，是指具有2-4个碳原子的直链或支链的二价烷基残基。优选的是具有2-4个碳原子的直链烷烃二基残基。示例性和优选地提到：乙烷-1，2-二基(1，2-亚乙基)、乙烷-1，1-二基、丙烷-1，3-二基(1，3-亚丙基)、丙烷-1，1-二基、丙烷-1，2-二基、丙烷-2，2-二基、丁烷-1，4-二基(1，4-亚丁基)、丁烷-1，2-二基、丁烷-1，3-二基、丁烷-2，3-二基。在基团L³情况下，所述烷烃二基残基额外经氨基取代，和在基团L⁴情况下，额外经羧基取代。

α-氨基酸的侧基在R⁴和R⁶意义上，既包括天然产生的α-氨基酸的侧基，也包括这些α-氨基酸的同系物和异构体的侧基。就此而言，α-氨基酸既可以以L-构型也可以以D-构型存在，或者可以以L-形式和D-形式的混合物存在。作为侧基示例性提到：甲基(丙氨酸)、丙烷-2-基(缬氨酸)、丙烷-1-基(正缬氨酸)、2-甲基丙烷-1-基(亮氨酸)、1-甲基丙烷-1-基(异亮氨酸)、丁烷-1-基(正亮氨酸)、叔丁基(2-叔丁基甘氨酸)、苯基(2-苯基甘氨酸)、苄基(苯基丙氨酸)、对-羟基苄基(酪氨酸)、吲哚-3-基甲基(色氨酸)、咪唑-4-基甲基(组氨酸)、羟基甲基(丝氨酸)、2-羟基乙基(高丝氨酸)、1-羟基乙基(苏氨酸)、巯基甲基(半胱氨酸)、甲基硫代甲基(S-甲基半胱氨酸)、2-巯基乙基(高半胱氨酸)、2-甲基硫代乙基(蛋氨酸)、氨基甲酰基甲基(天冬酰胺)、2-氨基甲酰基乙基(谷氨酸)、羧甲基(天冬氨酸)、2-羧乙基(谷氨酸)、4-氨基丁烷-1-基(赖氨酸)、4-氨基-3-羟基丁烷-1-基(羟基赖氨酸)、3-氨基丙烷-1-基(鸟氨酸)、2-氨基乙基(2，4-二氨基丁酸)、氨基甲基(2，3-二氨基丙酸)、3-胍基丙烷-1-基(精氨酸)、3-脲基丙烷-1-基(瓜氨酸)。在R4意义上，优选的α-氨基酸侧基是甲基(丙氨酸)、丙烷-2-基(缬氨酸)、丙烷-1-基(正缬氨酸)、2-甲基丙烷-1-基(亮氨酸)、1-甲基丙烷-1-基(异亮氨酸)、丁烷-1-基(正亮氨酸)、苄基(苯基丙氨酸)、对羟基苄基(酪氨酸)、咪唑-4-基甲基(组氨酸)、羟基甲基(丝氨酸)、1-羟基乙基(苏氨酸)、氨基甲酰基甲基(天冬酰胺)、2-氨基甲酰基乙基(谷氨酸)。在R⁶意义上，优选的α-氨基酸侧基是咪唑-4-基甲基(组氨酸)、4-氨基丁烷-1-基(赖氨酸)、3-氨基丙烷-1-基(鸟氨酸)、2-氨基乙基(2，4-二氨基丁酸)、氨甲基(2，3-二氨基丙酸)、3-胍基丙烷-1-基(精氨酸)。在每一情况下，L-构型是优选的。

优选的是式(I)的化合物，其中

R^A是下列式的基团

其中

^*表示至O原子的连接位点，

L¹是键，

L²是键或-CH₂-，

R¹和R³彼此独立地是氢或甲基，

R⁴是氢、甲基、丙烷-2-基、丙烷-1-基、2-甲基丙烷-1-基、1-甲基丙烷-1-基、丁烷-1-基、苄基、p-羟基苄基、咪唑-4-基甲基、羟基甲基、1-羟基乙基、氨基甲酰基甲基或2-氨基甲酰基乙基，

R⁶是氢、咪唑-4-基甲基、4-氨基丁烷-1-基、3-氨基丙烷-1-基、2-氨基乙基、氨甲基或3-胍基丙烷-1-基，

L³是直链(C₂-C₄)-烷烃二基，其另外经氨基取代，

R⁸和R¹⁰彼此独立地是氢或甲基，

m是数字2、3或4，

L⁴是直链(C₂-C₄)-烷烃二基，其另外经羧基取代，

R¹¹是氢或甲基，

和

n是数字2、3或4，

及其盐、溶剂合物和盐的溶剂合物。

特别优选的是式(I)的化合物，其中

R^A是下列式的基团

其中

^*表示至O原子的连接位点，

L¹和L²均为键，

R⁴是氢、甲基、丙烷-2-基、丙烷-1-基、2-甲基丙烷-1-基、1-甲基丙烷-1-基、丁烷-1-基、苄基、对羟基苄基、咪唑-4-基甲基、羟基甲基、1-羟基乙基、氨基甲酰基甲基或2-氨基甲酰基乙基，

R⁶是咪唑-4-基甲基、4-氨基丁烷-1-基、3-氨基丙烷-1-基、2-氨基乙基、氨甲基或3-胍基丙烷-1-基，

L³是下列式的基团：-CH(NH₂)-CH₂-、-CH₂-CH(NH₂)-、-CH₂-CH(NH₂)-CH₂-、-CH(NH₂)-CH₂-CH₂-或-CH₂-CH₂-CH(NH₂)-，

m是数字2、3或4，

L⁴是下列式的基团：^**-CH₂-CH(COOH)-或^**-CH₂-CH₂-CH(COOH)-，其中

^**表示至毗邻的羰基基团的连接位点，

和

n是数字2或3，

及其盐、溶剂合物和盐的溶剂合物。

非常特别优选的是式(I)的化合物，其中

R^A是下列式的基团

其中

^*表示至O原子的连接位点，

L¹和L²均为键，

R⁴是氢、甲基、丙烷-2-基、2-甲基丙烷-1-基、苄基、羟基甲基

或1-羟基乙基，

和

R⁶是咪唑-4-基甲基、4-氨基丁烷-1-基、3-氨基丙烷-1-基、2-氨基乙基、氨甲基或3-胍基丙烷-1-基，

及其盐、溶剂合物和盐的溶剂合物。

还非常特别优选的是式(I)的化合物，其中

R^A是下列式的基团

其中

^*表示至O原子的连接位点，

L³是下列式的基团：-CH(NH₂)-CH₂-、-CH₂-CH(NH₂)-、-CH(NH₂)-CH₂-CH₂-或-CH₂-CH₂-CH(NH₂)-，

和

m是数字2或3，

及其盐、溶剂合物和盐的溶剂合物。

本发明的主题还在于用于制备根据本发明的式(I)的化合物的方法，其特征在于，化合物(A)

要么

[A]首先在惰性溶剂中，在存在缩合剂的条件下，用式(II)、(III)或(IV)的羧酸进行酯化

其中L¹、L³、L⁴、R¹、R⁴、R⁵和R¹¹各具有上述含义，和

PG¹是临时氨基保护基，例如，比如叔丁氧基羰基

和

PG²是临时羧基保护基，例如，比如叔丁基，

以获得式(V)，(VI)或(VII)的化合物，

其中L¹、L³、L⁴、R¹、R⁴、R⁵、R¹¹、PG¹和PG²各具有上述含义，

然后，在脱去保护基PG¹或PG²之后，在惰性溶剂中，在存在缩合剂的情况下，在化合物(V)的情况下与式(VIII)的化合物相偶联，在化合物(VI)的情况下与式(IX)的化合物相偶联，和在化合物(VII)的情况下与式(X)的化合物相偶联

其中L²、R⁶、R⁷、R⁸、PG²、m和n各具有上述含义，

和

R^2a和R^3a，和R^9a和R^10a，在每一情况下相同或不同，并各自具有R²、R³、R⁹和R¹⁰的上述含义，或是临时氨基保护基，例如，比如叔丁氧基羰基，

和随后再次脱去任选存在的保护基，

要么

[B]在惰性溶剂中，在存在缩合剂的情况下，与式(XI)、(XII)或(XIII)的化合物相偶联

其中L¹、L²、L³、L⁴、R¹、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R¹¹、m和n各具有上述含义，

R^2a和R^3a，和R^9a和R^10a，在每一情况下相同或不同，并各自具有R²、R³、R⁹和R¹⁰的上述含义，或是临时氨基保护基，例如，比如叔丁氧基羰基，

和

PG²是临时羧基保护基，例如，比如叔丁基，

和随后再次脱去任选地存在的保护基，

并任选地用相应的(i)溶剂和/或(ii)酸或碱将所得的式(I)的化合物转变成其溶剂合物、盐和/或盐的溶剂合物。

(A)→(I)的转变要么通过各个任选的合适的经保护的羧酸组分或胺组分(方法变型方案[A])的顺序偶联进行，要么通过用合适的经保护的二肽醇(Dipeptoid)衍生物(方法变型方案[B])直接酰化。在此，偶联反应(形成酯或酰胺)根据已知肽化学的已知方法进行[参见例如，M.Bodanszky，Principles of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，Berlin，1993；H.-D.Jakubke和H.Jeschkeit，Peptide，Proteine，VerlagChemie，Weinheim，1982]。

用于所述偶联反应的惰性溶剂的实例是醚例如乙醚、叔丁基甲基醚、二噁烷，四氢呋喃、乙二醇二甲醚或二乙二醇二甲醚，烃例如苯、甲苯、二甲苯、己烷、环己烷或石油馏分，卤代烃例如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、1，2-二氯乙烷、三氯乙烯或氯苯，或其它溶剂例如丙酮、乙酸乙酯、吡啶、二甲亚砜、二甲基甲酰胺、N，N′-二甲基亚丙基脲(DMPU)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)或乙腈。还可以使用所述溶剂的混合物。优选的是二氯甲烷、二甲基甲酰胺或这两种溶剂的混合物。

在这些偶联反应中合适的缩合剂的实例是碳二亚胺例如N，N′-二乙基-、N，N′-二丙基-、N，N′-二异丙基-、N，N′-二环己基碳二亚胺(DCC)或N-(3-二甲基氨基异丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，碳酰氯衍生物例如N，N′-羰基二咪唑(CDI)，1，2-噁唑鎓化合物例如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓-3-硫酸盐或2-叔丁基-5-甲基异噁唑鎓高氯酸盐，酰氨基化合物例如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹啉，或异丁基氯甲酸酯(Isobutylchlorformiat)，丙烷膦酸酐，氰基膦酸二乙酯，双-(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯，苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐，苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷)鏻六氟磷酸盐(PyBOP)，O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲阳离子四氟硼酸盐(TBTU)，O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲阳离子六氟磷酸盐(HBTU)，2-(2-氧代-1-(2H)-吡啶基)-1，1，3，3-四甲基脲阳离子四氟硼酸盐(TPTU)，O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲阳离子六氟磷酸盐(HATU)或O-(1H-6-氯苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲阳离子四氟硼酸盐(TCTU)，任选地与其它助剂例如1-羟基苯并三唑(HOBt)或N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)组合，和作为碱使用碱金属碳酸盐，例如碳酸钠或碳酸钾，或有机碱例如三乙胺，N-甲基吗啉，N-甲基哌啶，N，N-二异丙基乙胺或4-N，N-二甲基氨基吡啶。N-(3-二甲基氨基异丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)与4-N，N-二甲基氨基吡啶的组合优选用于形成酯。N-(3-二甲基氨基异丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)与1-羟基苯并三唑(HOBt)或N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)以及任选的碱例如N，N-二异丙基乙胺的组合优选用于形成酰胺。

偶联通常在0℃至+60℃的温度进行，优选+20℃至+40℃。所述反应优选在常压、升高或降低压力下进行(例如0.5至5bar)。通常在常压进行。

式(I)的化合物也可以在根据上述方法的制备中直接以盐形式产生。这些盐可以任选地通过用碱或酸在惰性溶剂中处理，通过色谱法或离子交换树脂处理转变成各种游离碱或酸。本发明的化合物的其它盐可以任选地通过借助离子交换色谱例如用树脂进行抗衡离子交换而制备。

在残基R⁴，R⁶，L³和/或L⁴中任选存在的官能团，例如，特别是氨基、胍基、羟基、巯基和羧基官能团，如果合适或需要的话，也可以在上述反应顺序中以临时保护的形式存在。在此，这些保护基的引入和脱除按照常规的由肽化学已知的方法实施[参见例如，T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，Wiley，New York，1999；M.Bodanszky和A.Bodanszky，The Practice of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，Berlin，1984]。

作为氨基和胍基保护基优选使用叔丁氧基羰基(Boc)或苄氧基羰基(Z)。羟基或羧基官能团的保护基优选使用叔丁基或苄基。这些保护基的脱去根据常规方法，优选通过在惰性溶剂例如二噁烷、二氯甲烷或乙酸中与强酸例如盐酸、氢溴酸或三氟乙酸进行反应实施；任选地，所述脱去也可以在不添加惰性溶剂情况下实施。在苄基和苄氧基羰基作为保护基的情况下，这些也可以在存在钯催化剂的情况下氢解脱除。上述保护基的脱除可以任选地在一锅法反应中同时实施或者在分开的反应步骤中实施。

式(II)、(III)、(IV)、(VIII)、(IX)、(X)、(XI)、(XII)和(XIII)的化合物是市售可得的、文献已知的或者可以按照文献常规方法制备。例如其中L¹或L²是-CH₂-的式(II)和(VIII)的化合物可以按照已知的羧酸链延伸方法，例如Arndt-Eistert反应[Eistert等人，Ber.Dtsch.Chem.Ges.60，1364-1370(1927)；Ye等人，Chem.Rev.94，1091-1160(1994)；Cesar等人，Tetrahedron Lett.42，7099-7102(2001)]或从其中L¹或L²是键的相应化合物出发，与N-羟基-2-巯基吡啶(N-Hydroxy-2-thiopyridon)反应[参见Barton等人，Tetrahedron Lett.32，3309-3312(1991)]获得。

化合物(A)，2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-4-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二腈的制备记载于WO 03/053441的实施例6中。

根据本发明的化合物的制备可以通过下面合成图解来阐明：

图解1

图解2

图解3

根据本发明的化合物及其盐代表了活性成分化合物(A)的有用前药。一方面，它们显示出在各个pH的良好稳定性，另一方面，它们显示出在生理pH和特别在体内有效转变为活性成分化合物(A)。根据本发明的化合物此外还具有在含水或其它生理相容介质中改进的溶解性，使得它们适合于治疗用途，特别是静脉给药。此外，在口服给药后悬浮液的生物利用度与母体物质(A)相比提高。

式(I)的化合物适合于单独地或与一种或多种其它活性成分相组合来预防和/或治疗各种疾病，例如和特别是心血管系统的病症(心血管病症)，用于保护心脏免受下列心脏损害以及物质代谢病症。

在本发明范围内，心血管系统的病症或心血管病症，是指例如下列病症：高血压，周围和心脏的血管病症，冠心病，冠状动脉的再狭窄例如，比如，周边血管气球状扩张之后的再狭窄，心肌梗死，急性冠状动脉综合征，具有ST抬高的急性冠状动脉综合征，无ST抬高的急性冠状动脉综合征，稳定和不稳定型心绞痛，心肌机能不全，变异型心绞痛，持续的缺血性机能障碍(“冬眠心肌“)，暂时性的缺血后机能障碍(“顿抑心肌“)，心力衰竭，心动过速，心房性心博过速，心律不齐，心房和心室的纤维性颤动，持续的心房纤维性颤动，持久的心房纤维性颤动，具有正常的左心室功能的心房纤维性颤动，具有削弱的左心室功能的心房纤维性颤动，预激综合征，周围血液流动紊乱，升高的纤维蛋白原水平和低密度的LDL，和升高的血纤蛋白溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)浓度，尤其是高血压，冠心病，急性冠状动脉综合征，心绞痛，心力衰竭，心肌梗死和心房纤维性颤动。

在本发明的范围内，术语心力衰竭包括急性的和慢性的心力衰竭现象，以及更具体的或者相关疾病类型，比如急性失代偿性心力衰竭，右心衰竭，左心衰竭，整体衰竭，缺血性心肌病，扩张型心肌病，先天性心脏缺陷，心脏瓣膜缺陷，在心脏瓣膜缺陷时的心力衰竭，二尖瓣狭窄，二尖瓣闭锁不全，主动脉瓣狭窄，主动脉瓣闭锁不全，三尖瓣狭窄，三尖瓣闭锁不全，肺动脉瓣狭窄，肺动脉瓣闭锁不全，组合性心脏瓣膜缺陷，心肌炎，慢性心肌炎，急性心肌炎，病毒性心肌炎，糖尿病性心力衰竭，酒精性心脏病，心脏存储病症(kardialeSpeichererkrankung)，以及舒张性和收缩性的心力衰竭。

此外，根据本发明的化合物特别适合于降低心肌区域受到炎症损害，和预防二次炎症。

根据本发明的化合物还特别适合于预防和/或治疗血栓栓塞性病症，局部缺血后的再灌注损害，微和大血管损害(血管炎)，动脉的和静脉的血栓栓塞，水肿，局部缺血比如心肌梗死，中风和暂时性缺血性发作，在冠状动脉旁路手术(CABG)情况的心脏保护，主要的经皮冠状动脉腔内血管成形术(PTCA)，在血栓溶解以后的PTCA，救护PTCA，心脏移植和心脏直视(offenen Herz)手术，并且用于与移植有关的器官保护，旁路手术，导管检查及其他外科手术的程序。

根据本发明的化合物可以使用的其他适应症领域例如是预防和/或治疗：尿生殖区病症，例如，比如：急性肾衰竭，不稳定性膀胱，泌尿生殖器失禁，勃起机能障碍和女性性机能障碍，以及预防和/或治疗炎症病症例如，比如：炎症性皮肤病和关节炎，尤其是类风湿性关节炎，中枢神经系统和神经变性紊乱病症(中风后状态，阿尔茨海默氏病，帕金森病，痴呆，亨廷顿氏舞蹈病，癫痫症，抑郁症，多发性硬化)，疼痛状态和偏头痛，肝纤维化和肝硬化，癌以及与癌治疗有关的恶心和呕吐，以及用于伤口愈合。

其它的适应症领域是例如预防和/或治疗呼吸系统病症例如，比如哮喘，慢性的阻塞性呼吸障碍(COPD，慢性支气管炎)，肺气肿，支气管扩张，囊性纤维化(胰管粘稠物阻塞症)和肺部高血压，尤其肺动脉高血压。

最后，根据本发明的化合物还合适于预防和/或治疗物质代谢病症例如，比如糖尿病(Diabet)，尤其糖尿病(Diabet mellitus)，妊娠期糖尿病，胰岛素依赖性糖尿病和无胰岛素依赖性糖尿病，糖尿病后遗症例如，比如，视网膜病，肾病和神经病，物质代谢病症例如，比如，新陈代谢综合征，高血糖，血胰岛素增多，胰岛素抵抗，葡萄糖不耐性和肥胖，以及动脉硬化和血脂障碍(高胆甾醇血，高甘油三酯血症，正餐后的血浆甘油三酯浓度升高，α-血蛋白过少，组合的高血脂)，尤其是，糖尿病，新陈代谢综合征和血脂障碍。

本发明还涉及根据本发明的化合物用于预防和/或治疗病症，特别是上述病症的用途。

本发明还涉及根据本发明的化合物用于制备用以预防和/或治疗病症，特别是上述病症的药物的用途。

本发明还涉及通过使用有效量的至少一种根据本发明的化合物用于预防和/或治疗病症、特别是上述病症的方法。

根据本发明的化合物可以单独使用，或者如果需要，与其它活性成分组合使用。本发明还涉及这样的药物，其包括至少一种根据本发明的化合物和一种或多种活性成分，特别是用于预防和/或治疗上述病症的活性成分。

合适的组合活性成分可以示例性和优选提到：改变脂类代谢的活性成分，抗糖尿病药，降血压剂，促进血液流动和/或具有抗血栓形成效果的药剂，抗心律失常药，抗氧化剂，趋化因子受体拮抗剂，p38-激酶抑制剂，NPY-激动剂，增食欲素激动剂，减食欲剂，PAF-AH-抑制剂，消炎药(COX-抑制剂，LTB₄-受体拮抗体)和镇痛药例如比如，阿斯匹林。

本发明特别涉及至少一种根据本发明的化合物与至少一种改变脂类代谢的活性成分、抗糖尿病药、降血压活性成分、抗心律失常药和/或具有抗血栓形成效果的试剂的组合。

根据本发明的药物可以优选与一种或多种下列物质相组合：

●改变脂类代谢作用的活性成分，例如和优选选自HMG-CoA-还原酶抑制剂，HMG-CoA-还原酶表达抑制剂，角鲨烯合成抑制剂，ACAT-抑制剂，LDL-受体诱导物，胆固醇吸收抑制剂，聚合胆汁酸吸收剂，胆汁酸重吸收抑制剂，MTP-抑制剂，脂肪酶抑制剂，LpL-活化剂，贝特类，烟酸，CETP-抑制剂，PPAR-α-，PPAR-γ-和/或PPAR-δ-激动剂，RXR-调节剂，FXR-调节剂，LXR-调节剂，甲状腺激素和/或甲状腺模拟物，ATP-柠檬酸裂解酶抑制剂，Lp(a)-拮抗剂，大麻素受体1-拮抗剂，来普汀受体激动剂，蛙皮素受体激动剂，组胺受体激动剂和抗氧化剂/自由基清除剂；

●在Rote Liste 2004/II，第12章提到的抗糖尿病药，和例如并优选选自下列的物质：磺酰脲类，双胍，氯茴苯酸衍生物，葡糖苷酶抑制剂，二肽基-肽酶IV抑制剂(DPP-IV-抑制剂)，噁二唑二酮类(Oxadiazolidinone)，噻二唑二酮类，GLP 1-受体激动剂，胰高血糖素拮抗剂，胰岛素敏化剂，CCK 1-受体激动剂，来普汀受体激动剂，参与糖质新生和/或糖原分解的刺激的肝酶抑制剂，葡萄糖摄取的调节剂，以及钾通道打开剂例如，比如，在WO 97/26265和WO 99/03861中公开的那些；

●降血压活性成分，例如并优选选自：钙拮抗剂，血管紧张素AII-拮抗剂，ACE-抑制剂，凝乳酶抑制剂，β-肾上腺素受体拮抗剂，α-肾上腺素能受体拮抗剂，利尿剂，醛甾酮拮抗剂，盐皮质激素受体拮抗体，ECE-抑制剂，以及血管肽酶抑制剂；

●具有抗血栓栓塞效果的试剂，例如并优选选自：血小板聚集抑制剂或者抗凝血剂；

●抗心律失常药，尤其是用于治疗室上性心律不齐和心动过速的那些；

●用于预防和治疗缺血性和再灌注损害的物质；

●加压素受体拮抗体；

●有机的硝酸盐和NO-给体；

●具有积极收缩力活性的化合物；

●抑制环磷酸鸟苷(cGMP)和/或环磷酸腺苷(cAMP)的化合物，例如，比如，磷酸二酯酶的抑制剂(PDE)1，2，3，4和/或5，尤其PDE5抑制剂比如西地那非，伐地那非和他达那非，以及PDE 3-抑制剂比如米力农；

●钠尿肽例如，比如，心钠素(ANP，阿那立肽)，B型钠尿肽或者脑钠尿肽(BNP，奈西立肽)，C型钠尿肽(CNP)和尿扩张素；

●所述前列环素受体(IP受体)激动剂，例如，比如伊洛前列素，贝前列素和西卡前列素；

●钙敏化剂例如并优选左西孟旦；

●钾补充剂；

●独立于NO和血红素的鸟苷酸环化酶活化剂，比如特别是描述在WO 01/19355，WO 01/19776，WO 01/19778，WO 01/19780，WO 02/070462和WO 02/070510中的化合物；

●独立于NO但取决于血红素的鸟苷酸环化酶刺激物，比如描述在WO 00/06568，WO 00/06569，WO 02/42301和WO 03/095451中的化合物；

●人嗜中性弹性蛋白酶(HNE)的抑制剂，例如，比如，西维来司他和DX-890(Reltran)；

●抑制信号传递级联的化合物，例如比如，酪氨酸激酶抑制剂，尤其索拉非尼，伊马替尼、吉非替尼和埃罗替尼；

●影响心脏能量代谢的化合物，例如，比如，乙莫克舍，二氯乙酸盐，雷诺嗪和三甲氧苄嗪；

●镇痛药；和/或

●用于预防并治疗恶心和呕吐的物质

改变脂类代谢作用的活性成分优选表示选自下列的化合物：HMG-CoA-还原酶抑制剂，角鲨烯合成抑制剂，ACAT-抑制剂，胆固醇吸收抑制剂，MTP-抑制剂，脂肪酶抑制剂，甲状腺激素和/或甲状腺模拟物，烟酸受体激动剂，CETP-抑制剂，PPAR-α-激动剂，PPAR-γ-激动剂，PPAR-δ-激动剂，聚合胆汁酸吸收剂，胆汁酸重吸收抑制剂，抗氧化剂/自由基清除剂，以及大麻素受体1-拮抗剂。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与下面物质相组合给药：选自他汀类药物的HMG-CoA-还原酶抑制剂，例如比如并优选洛伐他汀，辛伐他汀，普伐他汀，氟伐他汀，阿伐他汀，罗苏伐他汀，西立伐他汀或匹伐他汀。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与下面物质相组合给药：角鲨烯合成抑制剂，例如比如并优选BMS-188494或TAK-475。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与下面物质相组合给药：ACAT-抑制剂，例如比如并优选阿伐麦布，甲亚油酰胺，帕替麦布，依鲁麦布或SMP-797。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与下面物质相组合给药：胆固醇吸收抑制剂，例如比如并优选依折麦布、替奎安或帕马苷。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的化合物与下面物质相组合给药：MTP-抑制剂，例如比如并优选英普他派，BMS-201038，R-103757或JTT-130。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：脂肪酶抑制剂，例如比如并优选奥利斯特。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：甲状腺激素和/或甲状腺模拟物，例如比如并优选D-甲状腺素或3，5，3′-碘塞罗宁(T3)。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：烟酸受体激动剂，例如比如并优选烟酸，阿昔莫司，阿昔呋喃或酒石酸烟醇。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：CETP抑制剂，例如比如并优选托彻普(Torcetrapib)，JTT-705，BAY 60-5521，BAY 78-7499或CETP疫苗(Avant)。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：PPAR-γ-激动剂，例如比如并优选匹格列酮或罗格列酮。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：PPAR-δ-激动剂，例如比如并优选GW-501516或BAY68-5042。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：聚合胆汁酸吸收剂，例如比如并优选考来烯胺，考来替泊，考来替兰，考来胶或2-甲基咪唑和1-氯-2，3-环氧丙烷的聚合物(Colestimid)。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：胆汁酸再吸收抑制剂，例如比如并优选ASBT(＝IBAT)抑制剂，例如，比如AZD-7806，S-8921，AK-105，BARI-1741，SC-435或SC-635。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：抗氧化剂/自由基清除剂，例如比如并优选普罗布考，AGI-1067，BO-653或AEOL-10150。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：大麻素受体1-拮抗剂，例如比如并优选利莫那班或SR-147778。

抗糖尿病药优选是指胰岛素和胰岛素衍生物，和口服有效的降血糖活性成分。胰岛素和胰岛素衍生物在此既包括动物胰岛素、人或生物技术来源的胰岛素，也包括它们的混合物。口服有效的降血糖活性成分优选包括磺酰脲类，双胍类，氯茴苯酸衍生物，糖苷酶抑制剂，DPP-IV-抑制剂和PPAR-γ-激动剂。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与胰岛素组合给药。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：磺酰脲，例如比如并优选甲苯磺丁脲，格列本脲，格列美脲，格列吡嗪或格列齐特。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：双胍，例如比如并优选二甲双胍。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：氯茴苯酸衍生物，例如比如并优选瑞格列奈或那格列胺。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：糖苷酶抑制剂，例如比如并优选米格列醇或阿卡波糖。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：DPP-IV-抑制剂，例如比如并优选西他列汀或维达列汀。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：PPAR-γ激动剂，例如选自噻唑烷二酮类，例如比如并优选匹格列酮或罗格列酮。

降血压药剂优选是指选自下列的化合物：钙拮抗剂，血管紧张素AII-拮抗剂，ACE-抑制剂，肾素抑制剂，β-肾上腺素受体拮抗剂，α-肾上腺素受体拮抗剂和利尿剂。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：钙拮抗剂，例如比如并优选硝苯地平，氨氯地平，维拉帕米或地尔硫卓。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：血管紧张素AII-拮抗剂，例如比如并优选氯沙坦，缬沙坦，坎地沙坦，恩布沙坦，奥美沙坦或替米沙坦。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：ACE-抑制剂，例如比如并优选依那普利，卡托普利，赖诺普利，雷米普利，地拉普利，福辛普利，奎诺普利，培哚普利或川多普利。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：肾素抑制剂，例如比如并优选阿利克仑，SPP-600或SPP-800。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：β-肾上腺素受体拮抗剂，例如比如并优选普萘洛尔、阿替洛尔、噻吗洛尔、吲哚洛尔、阿普洛尔、氧烯洛尔、喷布洛尔、布拉洛尔、美替洛尔、纳多洛尔、甲吲洛尔、卡拉洛尔、索他洛尔、美托洛尔、倍他洛尔、塞利洛尔、比索洛尔、卡替洛尔、艾司洛尔、拉贝洛尔、卡维洛尔、阿达洛尔、兰地洛尔、奈比洛尔、依泮洛尔或布新洛尔。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：α-肾上腺素受体拮抗剂，例如比如并优选哌唑嗪。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：利尿剂，例如比如并优选呋喃苯胺酸，丁尿胺，托塞米，苄氟噻嗪，氯噻嗪，双氢氯噻嗪，双氢氟噻嗪，甲氯噻嗪，多噻嗪，三氯甲噻嗪，氯噻酮，吲达帕胺，美托拉宗，喹噻酮，乙酰唑胺，二氯磺胺，甲醋唑胺，甘油，异山梨醇，甘露糖醇，阿米洛利或氨苯蝶啶。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：醛固酮或盐皮质激素受体拮抗剂，例如比如并优选螺内酯或依普利酮。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：加压素受体拮抗剂，例如比如并优选考尼伐坦，托伐普坦，利希普坦或SR-121463。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：有机硝酸盐或NO给体，例如比如并优选硝普钠，硝酸甘油，单硝酸异山梨酯，二硝酸异山梨醇，吗多明或SIN-1，或与吸入NO相组合。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：具有积极收缩活性的化合物，例如比如并优选强心苷类(地高辛)和β-肾上腺素能和多巴胺能激动剂例如异丙肾上腺素，肾上腺素，去甲肾上腺素，多巴胺或多巴酚丁胺。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：Antisympathotonika例如蛇根碱，可乐定或α-甲基多巴，或与钾通道激动剂相组合，例如米诺地尔，二氮嗪，双肼屈嗪或肼屈嗪。

具有抗血栓栓塞效果的试剂优选是指选自下列的化合物：血小板聚集抑制剂或抗凝血剂。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：血小板聚集抑制剂，例如比如并优选阿斯匹林，氯吡格雷，噻氯匹定或双嘧达莫。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：血栓栓塞抑制剂，例如比如并优选希美加群，美拉加群，比伐卢定或克赛。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：GPIIb/IIIa拮抗剂，例如比如并优选替罗非班或阿昔单抗。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：因子Xa抑制剂，例如比如并优选利伐沙班(BAY59-7939)，DU-176b，阿哌沙班，奥米沙班，非德沙班，雷扎沙班，磺达肝素，艾卓肝素，PMD-3112，YM-150，KFA-1982，EMD-503982，MCM-17，MLN-1021，DX 9065a，DPC 906，JTV 803，SSR-126512或SSR-128428。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：肝素或低分子量(LMW)肝素衍生物。

在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与下面物质组合给药：维生素K拮抗剂，例如比如并优选香豆素。

抗心律不齐药优选是指选自下列的Ia型抗心律不齐药(例如奎尼丁)，Ic型抗心律不齐药(例如氟卡尼，普罗帕酮)，II型抗心律不齐药(例如美托洛尔，阿替洛尔，索他洛尔，氧烯洛尔和其它β-受体阻断剂)，III型抗心律不齐药(例如索他洛尔，胺碘酮)和IV型抗心律不齐药(例如地高辛和维拉帕米，地尔硫卓和其它钙拮抗剂)。

在本发明范围内，特别优选的是含有至少一种本发明的化合物和一种或多种选自下列的活性成分的组合：HMG-CoA-还原酶抑制剂(他汀类)，利尿剂，β-肾上腺素受体拮抗剂，α-肾上腺素受体拮抗剂，有机硝酸盐和NO给体，钙拮抗剂，ACE-抑制剂，血管紧张素AII-拮抗剂，醛固酮和盐皮质激素受体拮抗剂，加压素受体拮抗剂，血小板聚集抑制剂，抗凝血剂和抗心律不齐药，及其用于预防和/或治疗上述病症的用途。

本发明还涉及这样的药物，其包括至少一种根据本发明的化合物，通常连同一种或多种惰性、无毒、药学上合适的助剂，及其用于上述目的的用途。

根据本发明的化合物可以全身和/或局部起效。为此，它们可以以合适的方式给药，例如比如口服、肠胃外、经肺、经鼻、舌下、舌、颊、直肠、皮、经皮、结膜或耳途径或作为植入物或支架。根据本发明的化合物可以以适合于这些给药途径的给药形式给药。

适合于口服给药的是这样的给药形式，其根据现有技术起效和快速或以改性方式释放出根据本发明的化合物，且其含有晶体和/或非晶态和/或溶解形式的根据本发明的化合物，例如，比如片剂(未包衣或包衣片剂，例如具有肠溶衣或者以延迟方式溶解或不溶并控制根据本发明的化合物的释放的包衣)，在口腔中快速崩解的片剂，或膜/板片，膜/冻干剂、胶囊(例如硬和软明胶胶囊)，糖包衣片剂，颗粒剂，丸剂，粉末，乳剂，悬浮剂，气雾剂或溶液。

肠胃外给药可以以绕开吸收步骤(例如静脉内，动脉内，心内，脊柱内或腰髓内)或连接有吸收步骤(例如肌肉内，皮下，皮内，经皮或腹膜内)实施。适合于肠胃外给药的给药形式尤其是用于注射和输注的溶液、悬浮液、乳液、冻干剂或灭菌粉末形式的制剂。

适合于其它给药途径的例如是用于吸入的药物形式(尤其是粉末吸入器，喷雾器)、滴鼻剂、滴鼻溶液或滴鼻喷雾，用于舌、舌下或颊给药的片剂，膜/板片或胶囊，栓剂，眼或耳用制剂，阴道胶囊，含水悬浮液(洗液，振荡合剂)，亲脂性悬浮液，软膏剂，乳膏，经皮治疗系统(例如，比如贴剂)，乳，膏体，泡沫，扑粉，植入物或支架。

口服或肠胃外给药是优选的，特别是口服和静脉内给药。

根据本发明的化合物可以转变成上述给药形式。其可以以本身已知的方式通过与惰性、无毒、药学上合适的助剂混合实现。所述助剂尤其包括载体(例如微晶纤维素，乳糖，甘露糖醇)，溶剂(例如液体聚乙二醇)，乳化剂和分散剂或润湿剂(例如十二烷基硫酸钠，聚氧山梨聚糖油酸酯)，粘合剂(例如聚乙烯基吡咯烷酮)，合成和天然聚合物(例如白蛋白)，稳定剂(例如抗氧化剂例如，比如抗坏血酸)，着色剂(例如无机颜料例如比如氧化铁)和味道和/或气味掩蔽剂。

通常经证实有利的是肠，在胃外给药情况下量为大约0.001-1mg/kg，优选大约0.01-0.5mg/kg体重，以取得有效结果。在口服给药时，剂量为大约0.01-100mg/kg，优选大约0.01-20mg/kg，和非常优选大约0.1-10mg/kg体重。

此外可能必要的是，视需要偏离上述量，特别是取决于体重，给药途径，对活性成分的个体响应，制剂性质和给药时间点和间隔。这样，在某些情况可能以少于上述最低量给药是足够的，而在其它情况下，可能必须超过上述上限。在给药较大量的情况下可能有利的是将它们在一天内分成多个单一剂量给药。

下面的示例性实施方案阐述本发明。本发明不受限于所述实施例。

在下面试验和实施例中，百分比数据，除非另外指出，是指重量百分比。份为重量份。溶剂比，稀释比和液体/液体溶液的浓度数据均基于体积。

A.实施例

缩写和同义词：

Boc   叔丁氧基羰基

DIEA  N，N-二异丙基乙胺

DMAP  4-N，N-二甲基氨基吡啶

DMF   N，N-二甲基甲酰胺

DMSO  二甲亚砜

d.Th. 理论值的(收率)

EDC   1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

ESI   电喷射离子化(在MS中)

h     时间

HOBt  1-羟基苯并三唑

HPLC  高压、高效液相色谱

LC-MS 偶联有液相色谱的质谱

min   分钟

MS    质谱

NMR   核磁共振谱

p     对

Pd/C  披钯活性炭

Ph    苯基

quant.  定量的(收率)

RT      室温

R_t      停留时间(在HPLC中)

tert.   叔

TFA     三氟乙酸

THF     四氢呋喃

UV      紫外光谱

v/v     (溶液的)体积比

Z       苄氧基羰基

LC-MS和HPLC方法：

方法1(LC-MS)：

MS仪器类型：Micromass ZQ；HPLC仪器类型：Waters Alliance2795；柱：Phenomenex Synergi 2μHydro-RP Mercury 20mm×4mm；洗脱液A：1l水+0.5ml 50％甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml 50％甲酸；梯度：0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min5％A；流速：0.0min 1ml/min→2.5min/3.0min/4.5min 2ml/min；烘箱：50℃；UV检测：210nm。

方法2(LC-MS)：

仪器：Micromass Quattro LCZ，具有HPLC Agilent Serie 1100；柱：Phenomenex Synergi 2μHydro-RP Mercury 20mm×4mm；洗脱液A：1l水+0.5ml 50％甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml 50％甲酸；梯度：0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；流速：0.0min 1ml/min→2.5min/3.0min/4.5min 2ml/min；烘箱：50℃；UV检测：208-400nm。

方法3(LC-MS)：

MS仪器类型：Micromass ZQ；HPLC仪器类型：HP 1100Series；UV DAD；柱：Phenomenex Synergi 2μHydro-RP Mercury 20mm×4mm；洗脱液A：1l水+0.5ml 50％甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml50％甲酸；梯度：0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；流速：0.0min 1ml/min→2.5min/3.0min/4.5min2ml/min；烘箱：50℃；UV检测：210nm。

方法4(LC-MS)：

MS仪器类型：Micromass ZQ；HPLC仪器类型：HP 1100Series；UV DAD；柱：Phenomenex Gemini 3μ30mm×3.00mm；洗脱液A：1l水+0.5ml 50％甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml 50％甲酸；梯度：0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；流速：0.0min 1ml/min→2.5min/3.0min/4.5min 2ml/min；烘箱：50℃；UV检测：210nm。

方法5(制备HPLC)：

HPLC仪器类型：Abimed/Gi lson Pump 305/306；ManometricModule 806；UV Knauer Variable Wavelength Monitor；柱：GromsilC18，10nm，250mm×30mm；洗脱液A：1l水+0.5ml 99％三氟乙酸，洗脱液B：1l乙腈；梯度：0.0min 2％B→10min 2％B→50min90％B；流速：20ml/min；体积：628ml A和372ml B。

方法6a(制备HPLC)：

柱：VP 250/21Nukleodur 100-5C18ec，Macherey & Nagel Nr.762002；洗脱液A：水/0.01％三氟乙酸，洗脱液B：乙腈/0.01％三氟乙酸；梯度：0min 0％B→20min 20％B→40min 20％B→60min30％B→80min 30％B→90min 100％B→132min 100％B；流速：5ml/min；温度：RT；UV检测：210nm。

方法6b(制备HPLC)：

柱：VP 250/21Nukleodur 100-5 C18 ec，Macherey & Nagel Nr.762002；洗脱液A：1升水/1ml 99％三氟乙酸，洗脱液B：1升乙腈/1ml 99％三氟乙酸；梯度：0min 30％B→20min 50％B→40min 80％B→60min 100％B；流速：5ml/min；温度：RT；UV检测：210nm。

方法7(分析HPLC)：

柱：XTerra 3.9×150WAT 186000478；洗脱液A：10ml 70％高氯酸，在2.5升水中，洗脱液B：乙腈；梯度：0.0min 20％B→1min 20％B→4min 90％B→9min 90％B；温度：RT；流速1ml/min。

方法8(LC-MS)：

仪器：Micromass Quattro LCZ，具有HPLC Agilent Serie 1100；柱：Phenomenex Onyx Monolithic C18，100mm×3mm；洗脱液A：1l水+0.5ml 50％甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml 50％甲酸；梯度：0.0min90％A→2min 65％A→4.5min 5％A→6min 5％A；流速：2ml/min；烘箱：40℃；UV检测：208-400nm。

方法9(LC-MS)：

仪器：Micromass Platform LCZ，具有HPLC Agilent Serie 1100；柱：Thermo Hypersil GOLD 3μ，20mm ×4mm；洗脱液A：1l水+0.5ml 50％甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml 50％甲酸；梯度：0.0min100％A→0.2min 100％A→2.9min 30％A→3.1min 10％A→5.5min 10％A；烘箱：50℃；流速：0.8ml/min；UV检测：210nm。

方法10(LC-MS)：

MS仪器类型：Micromass ZQ；HPLC仪器类型：HP 1100Series；UV DAD；柱：Phenomenex Gemini 3μ30mm×3.00mm；洗脱液A：1l水+0.5ml 50％甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml 50％甲酸；梯度：0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；流速：0.0min 1ml/min→2.5min/3.0min/4.5min 2ml/min；烘箱：50℃；UV检测：210nm。

方法11(LC-MS)：

MS仪器类型：Micromass ZQ；HPLC仪器类型：Waters Alliance2795；柱：Phenomenex Synergi 2.5μMAX-RP 100A Mercury 20mm×4mm；洗脱液A：1l水+0.5ml 50％甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml50％甲酸；梯度：0.0min 90％A→0.1min 90％A→3.0min 5％A→4.0min 5％A→4.01min 90％A；流速：2ml/min；烘箱：50℃；UV检测：210nm。

方法12(LC-MS)：

仪器：Micromass Quattro LCZ，具有HPLC Agilent Serie 1100；柱：Phenomenex Synergi 2.5μMAX-RP 100A Mercury 20mm×4mm；洗脱液A：1l水+0.5ml 50％甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml 50％甲酸；梯度：0.0min 90％A→0.1min 90％A→3.0min 5％A→4.0min 5％A→4.1min 90％A；流速：2ml/min；烘箱：50℃；UV检测：208-400nm。

方法13(LC-MS)：

仪器：Micromass QuattroPremier，具有Waters UPLC Acquity；柱：Thermo Hypersil GOLD 1.9μ，50mm ×1mm；洗脱液A：1l水+0.5ml50％甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml 50％甲酸；梯度：0.0min 100％A→0.1min 100％A→1.5min 10％A→2.2min 10％A；烘箱：50℃；流速：0.33ml/min；UV检测：210nm。

起始化合物和中间体：

实施例1A

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-L-缬氨酸酯三氟乙酸盐

在40ml二氯甲烷和10ml DMF中，混合1g(1.92mmol)2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-4-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二腈[WO 03/053441，实施例6]，0.460g(2.11mmol)N-Boc-L-缬氨酸，0.442g(2.31mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.023g(0.19mmol)4-二甲基氨基吡啶，并在室温搅拌过夜。得到澄清溶液。然后将该混合物倒入半饱合氯化铵溶液和二氯甲烷的混合物中。有机相经分离出来，相继用水、饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。残留物通过快速色谱法在硅胶上用二氯甲烷/乙酸乙酯作为洗脱液(梯度10∶1→7∶1→5∶1)纯化。合并相应的级分和在真空中去除溶剂。在高真空下干燥残留物之后，留下0.85g(理论值的62％)Boc-保护的中间体。

将残留物容纳在5ml二氯甲烷和5ml无水三氟乙酸中，和在室温搅拌该溶液2h。将该混合物浓缩至干燥，和用乙酸乙酯搅拌残留物。过滤分离出沉积物，用乙醚洗涤和随后在高真空中干燥。得到935mg(quant.)作为无色晶体的标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝5.5min；

LC-MS(方法10)：R_t＝2.06min；MS(ESIpos)：m/z＝619(M+H)⁺。

实施例2A

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-L-丙氨酸酯三氟乙酸盐

在25ml二氯甲烷和25ml DMF中，混合1.5g(2.88mmol)2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-4-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二腈，1.64g(8.66mmol)N-Boc-L-丙氨酸，0.719g(3.75mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.176g(1.44mmol)4-二甲基氨基吡啶，并在室温搅拌2h。该混合物在真空中浓缩并将残留物容纳在乙酸乙酯中。该溶液用5％柠檬酸萃取两次和用碳酸氢钠溶液萃取两次。有机相经浓缩和残留物用50ml乙醚和50ml戊烷搅拌。沉淀物经抽吸过滤和用戊烷洗涤。在高真空下干燥残留物之后，留下1.23g(理论值的62％)Boc-保护的中间体。

将残留物容纳在18ml二氯甲烷和2ml无水三氟乙酸中，和溶液在室温在超声浴中处理1h。将该混合物浓缩至干燥，和剩下的残留物用乙醚搅拌。过滤分离出沉积物，用乙醚洗涤和随后在高真空中干燥。得到1200mg(理论值的96％)作为无色晶体的标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝5.3min；

LC-MS(方法12)：R_t＝1.73min；MS(ESIpos)：m/z＝591(M+H)⁺。

实施例3A

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-O-叔丁基-L-丝氨酸酯

在40ml二氯甲烷和10ml DMF中，混合1g(1.92mmol)2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-4-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二腈，0.612g(2.12mmol)N-(叔丁氧基羰基)-O-叔丁基-L-丝氨酸，0.442g(2.31mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.024g(0.192mmol)4-二甲基氨基吡啶，并在室温搅拌过夜。然后将该混合物倒入半饱合氯化铵溶液和二氯甲烷的混合物中。有机相经分离出来，相继用水、饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残留物容纳在二氯甲烷中和与乙醚混合。抽吸过滤分离出产生的沉积物和用乙醚洗涤。在高真空下干燥之后，留下1.25g(理论值的85％)经保护的中间体。

将残留物容纳在100ml二氯甲烷和10ml无水三氟乙酸中，和将在室温搅拌该溶液1h。然后将该混合物倒入半饱和碳酸氢钠溶液和二氯甲烷的混合物中。有机相经分离出来，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。在高真空下干燥得到1020mg(理论值的95％)作为无色粉末的标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝5.4min；

LC-MS(方法11)：R_t＝1.65min；MS(ESIpos)：m/z＝663(M+H)⁺。

实施例4A

N²-(叔丁氧基羰基)-N-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]乙基}-L-α-谷氨酸

在140ml DMF中，混合1.5g(4.45mmol)(2S)-5-(苄氧基)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氧代戊酸，783mg(4.89mmol)叔丁基-(2-氨基乙基)氨基甲酸酯，938mg(4.89mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和749mg(0.489mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物，并在室温搅拌过夜。然后将该混合物倒入半饱合氯化铵溶液和乙酸乙酯的混合物中。有机相经分离出来，相继用水、饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。所述残留物用乙醚搅拌。抽吸过滤分离出沉积物，用乙醚洗涤和在高真空下干燥。留下1.9g(理论值的89％)经保护的中间体。

LC-MS(方法12)：R_t＝2.19min；MS(ESIpos)：m/z＝480(M+H)⁺。

将1.9g(3.96mmol)所得中间体溶于125ml甲醇中，并在添加250mg 10％披钯活性炭之后，在常压和室温氢化2h。然后过滤出所述催化剂，和在真空中去除溶剂。得到1500mg(理论值的97％)作为无色泡沫的标题化合物。

LC-MS(方法10)：R_t＝1.94min；MS(ESIpos)：m/z＝390(M+H)⁺。

实施例5A

N²-(叔丁氧基羰基)-N-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]乙基}-L-谷氨酸

在140ml DMF中，混合1.5g(4.45mmol)(4S)-5-(苄氧基)-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氧代戊酸，783mg(4.89mmol)叔丁基(2-氨基乙基)氨基甲酸酯，938mg(4.89mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和749mg(4.89mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物，并在室温搅拌过夜。然后将该混合物倒入半饱合氯化铵溶液和乙酸乙酯的混合物中。有机相经分离出来，相继用水、饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。所述残留物用乙醚搅拌。抽吸过滤分离出沉积物，用乙醚洗涤和在高真空下干燥。留下2.1g(理论值的98％)经保护的中间体。

LC-MS(方法10)：R_t＝2.47min；MS(ESIpos)：m/z＝480(M+H)⁺。

将2.1g(4.38mmol)所得中间体溶于140ml甲醇，并在添加250mg10％披钯活性炭之后，在常压和室温氢化2h。然后过滤出所述催化剂和在真空中去除溶剂。得到1540mg(理论值的90％)作为无色泡沫的标题化合物。

LC-MS(方法11)：R_t＝1.35min；MS(ESIpos)：m/z＝390(M+H)⁺。

实施例6A

N²-(叔丁氧基羰基)-N-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]乙基}-L-天冬酰胺

在75ml DMF中，混合1.5g(4.64mmol)(3S)-4-(苄氧基)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-氧代丁酸，818mg(5.1mmol)叔丁基-(2-氨基乙基)氨基甲酸酯，978mg(5.1mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和781mg(5.1mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物，并在室温搅拌过夜。然后将该混合物倒入半饱合氯化铵溶液和乙酸乙酯的混合物中。有机相经分离出来，相继用水、饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。所述残留物用乙醚搅拌。抽吸过滤分离出沉积物，用乙醚洗涤和在高真空下干燥。留下2.1g(理论值的81％)经保护的中间体。

LC-MS(方法10)：R_t＝2.47min；MS(ESIpos)：m/z＝466(M+H)⁺。

将2.1g(4.51mmol)所得中间体溶于140ml甲醇，和在添加250mg10％披钯活性炭之后，在常压和室温氢化2h.然后过滤出所述催化剂和在真空中去除溶剂。得到1690mg(理论值的99％)作为无色泡沫的标题化合物。

LC-MS(方法11)：R_t＝1.35min；MS(ESIpos)：m/z＝376(M+H)⁺。

实施例7A

5-(2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基)1-叔丁基-L-谷氨酸酯

在80ml二氯甲烷和20ml DMF中，混合3.117g(6mmol)2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-4-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二腈，2g(6.59mmol)(4S)-5-叔丁氧基-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氧代戊酸盐，1.38g(7.19mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.073g(0.6mmol)4-二甲基氨基吡啶，并在室温搅拌过夜。然后将该混合物倒入半饱合氯化铵溶液和二氯甲烷的混合物中。有机相经分离出来，相继用水、饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用石油醚将所述残留物从二氯甲烷中沉淀出来。所述产物经抽吸过滤，用乙醚洗涤和在高真空下干燥。留下4.44g(理论值的92％)经保护的中间体。

LC-MS(方法10)：R_t＝3.38min；MS(ESIpos)：m/z＝805(M+H)⁺。

将57mg(0.07mmol)所得的中间体容纳在6ml二氯甲烷和0.6ml无水三氟乙酸中，和在室温搅拌该溶液2.5h。然后将该混合物倒入半饱和碳酸氢钠溶液和二氯甲烷的混合物中。有机相经分离，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。在高真空下干燥得到50mg(quant.)作为无色粉末的标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝5.4min；

LC-MS(方法11)：R_t＝1.72min；MS(ESIpos)：m/z＝705(M+H)⁺。

实施例8A

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫烷基)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-L-亮氨酸酯三氟乙酸盐

类似于实施例1A，从2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-4-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二腈和Boc-L-亮氨酸出发制备标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝5.5min；

LC-MS(方法12)：R_t＝1.75min；MS(ESIpos)：m/z＝633(M+H)⁺。

实施例9A

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫烷基)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-D-丙氨酸酯三氟乙酸盐

类似于实施例2A，从2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-4-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二腈和Boc-D-丙氨酸出发制备标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝5.2min；

LC-MS(方法13)：R_t＝1.15min；MS(ESIpos)：m/z＝591(M+H)⁺。

实施例10A

N²-(叔丁氧基羰基)-N-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]乙基}-D-α-谷氨酸

类似于实施例4A，从(2R)-5-(苄氧基)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氧代戊酸出发制备标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝4.4min；

LC-MS(方法11)：R_t＝1.37min；MS(ESIpos)：m/z＝390(M+H)⁺。

实施例11A

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫烷基)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基甘氨酸酯三氟乙酸盐

类似于实施例2A，从2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-4-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二腈和Boc-甘氨酸出发制备标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝5.1min；

LC-MS(方法13)：R_t＝1.13min；MS(ESIpos)：m/z＝577(M+H)⁺。

实施例12A

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫烷基)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-L-苯基丙氨酸酯三氟乙酸盐

类似于实施例2A，从2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-4-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二腈和Boc-L-苯基丙氨酸出发制备标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝5.1min；

LC-MS(方法13)：R_t＝1.13min；MS(ESIpos)：m/z＝577(M+H)⁺。

示例性实施方案：

实施例1

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-L-赖氨酰-L-缬氨酸酯二盐酸盐

在20ml DMF中，混合1.5g(1.77mmol)来自实施例1A的化合物，2.36g(5.31mmol)2，5-二氧代吡咯烷-1-基-N²，N⁶-双(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸盐和1.5ml N，N-二异丙基乙胺，并在室温搅拌过夜。然后在真空中去除溶剂，和残留物通过快速色谱法在硅胶上用二氯甲烷/乙酸乙酯作为洗脱液(梯度3∶1→2∶1)纯化。合并相应的级分，和在真空中去除溶剂。在高真空下干燥残留物之后，留下1.2g(理论值的66％)经保护的中间体。

HPLC(方法7)：R_t＝6.7min。

将1.2g(1.27mmol)所得的中间体容纳在3ml二氯甲烷中，和在搅拌条件下，添加50ml在二氯甲烷中的饱和氯化氢溶液。在室温搅拌所述混合物30min，在此期间沉淀出目标化合物。溶剂被蒸发出来和剩下的残留物与70ml乙醚搅拌。过滤掉乙醚，和过滤残留物用乙醚洗涤和随后在高真空中干燥。得到893mg(理论值的86％)作为无色晶体的标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝5.1min；

LC-MS(方法12)：R_t＝1.47min；MS(ESIpos)：m/z＝747(M+H)⁺；

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ＝0.94和0.95(2d，6H)，1.4(m，2H)，1.55(m，2H)，1.75(m，2H)，2.14(m，1H)，2.7-2.8(m，2H)，3.95(m，1H)，4.3-4.5(m，2H)，4.65(s，2H)，7.12(d，2H)，7.51(d，2H)，7.58(d，2H)，7.95(d，2H)，7.97(s，1H)，8.0(m，2H)，8.3(m，2H)，8.8(d，1H)。

实施例2

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-β-丙氨酰-L-缬氨酸酯盐酸盐

在6ml DMF中，混合0.1g(0.12mmol)来自实施例1A的化合物，0.051g(0.18mmol)2，5-二氧代吡咯烷-1-基N-(叔丁氧基羰基)-β-丙氨酸盐和82μlN，N-二异丙基乙胺并在室温搅拌过夜。然后在真空中去除溶剂，和残留物通过快速色谱法在硅胶上用二氯甲烷/乙酸乙酯作为洗脱液(梯度4∶1→3∶1→2∶1)纯化。合并相应的级分，和在真空中去除溶剂。在高真空下干燥残留物之后，留下0.052g(理论值的56％)经保护的中间体。

HPLC(方法7)：R_t＝6.3min。

将0.05g(0.063mmol)所得的中间体容纳在1ml二氯甲烷中，和在搅拌条件下添加15ml在二氯甲烷中的饱和氯化氢溶液。在室温搅拌所述混合物3h，在此期间沉淀出目标化合物。溶剂被蒸发出来和剩下的残留物用10ml乙醚搅拌。过滤掉乙醚，和过滤残留物用乙醚洗涤和随后在高真空中干燥。得到41mg(理论值的85％)作为无色晶体的标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝5.2min；

LC-MS(方法12)：R_t＝2.1min；MS(ESIpos)：m/z＝690(M+H)⁺；

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ＝0.89和0.9(2d，6H)，2.04(m，2H)，2.5(m，2H)，2.9-3.0(m，2H)，4.2(m，1H)，4.25(m，2H)，4.35-4.5(m，2H)，4.67(s，2H)，7.12(d，2H)，7.5(d，2H)，7.57(d，2H)，7.8(m，2H)，7.94(s，1H)，7.95(d，2H)，8.5(d，1H)。

实施例3

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-L-精氨酰-L-缬氨酸酯二盐酸盐

在200ml DMF中，混合2.24g(4.72mmol)N²，N⁵-双(叔丁氧基羰基)-N⁵-{[(叔丁氧基羰基)氨基](亚氨基)甲基}-L-鸟氨酸，0.96g(7.08mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物和1.09g(5.66mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐。搅拌30分钟之后，添加2g(2.36mmol)来自实施例1A的化合物和1.65mlN，N-二异丙基乙胺，并在室温搅拌该混合物过夜。该混合物随后经浓缩和剩下的残留物用水搅拌。其经抽吸过滤，和残留物通过快速色谱法在硅胶上用二氯甲烷/乙酸乙酯作为洗脱液(梯度4∶1→3∶1)纯化。合并相应的级分和在真空中去除溶剂。在高真空下干燥残留物之后，留下1.12g(理论值的44％)经保护的中间体。

HPLC(方法7)：R_t＝6.1min。

将1.12g(1.04mmol)中间体容纳在10ml二氯甲烷中，与10ml无水三氟乙酸混合和在室温搅拌过夜。所述混合物随后经浓缩和所述残留物用THF汽提两次。进行过滤，并将过滤残留物容纳在25ml THF和5ml甲醇的混合物中。在搅拌条件下，添加20ml在乙醚中的2M氯化氢溶液。在短时间继续搅拌之后，沉淀出的沉淀物经抽吸过滤，和过滤残留物用乙醚洗涤。在高真空下干燥之后，留下920mg(理论值的99％)作为无色晶体的标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝5.1min；

LC-MS(方法10)：R_t＝1.7min；MS(ESIpos)：m/z＝775(M+H)⁺；

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ＝0.95和0.97(2d，6H)，1.6(m，2H)，1.75(m，2H)，2.14(m，1H)，3.25(m，2H)，4.05(m，1H)，4.25(t，1H)，4.3(m，2H)，4.4-4.5(2m，2H)，4.65(s，2H)，7.12(d，2H)，7.48(d，2H)，7.58(d，2H)，7.95(m，3H)，8.4(m，2H)，8.9(d，1H)。

实施例4

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-L-赖氨酰-L-丙氨酸酯二盐酸盐

在40ml DMF中，混合1.2g(1.7mmol)来自实施例2A的化合物，1.13g(2.55mmol)2，5-二氧代吡咯烷-1-基-N²，N⁶-双(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸酯和1.5ml N，N-二异丙基乙胺，并在室温搅拌过夜。所述混合物随后经浓缩和所述残留物在乙酸乙酯和水之间分配。有机相经分离出和相继用5％柠檬酸萃取两次和用5％碳酸氢钠溶液萃取两次。所述有机相随后经浓缩和残留物通过快速色谱法在硅胶上用二氯甲烷/乙酸乙酯作为洗脱液(梯度3∶1→2∶1)纯化。合并相应的级分和在真空中去除溶剂。所述残留物用50ml乙醚和50ml戊烷搅拌和经抽吸过滤。在高真空下干燥残留物之后，留下1.14g(理论值的73％)经保护的中间体。

HPLC(方法7)：R_t＝6.4min；

LC-MS(方法11)：R_t＝2.64min；MS(ESIpos)：m/z＝919(M+H)⁺。

将1.14g(1.24mmol)中间体容纳在10ml二氯甲烷，和在搅拌条件下添加60ml在二氯甲烷中的饱和氯化氢溶液。所述混合物在室温搅拌过夜，在此期间沉淀出目标化合物。浓缩溶剂到大约1/3的体积，并将所得悬浮液与200ml乙醚混合。进行过滤，和过滤残留物用乙醚洗涤和随后在高真空中干燥。得到1.0g(quant.)作为无色晶体的标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝5.0min；

LC-MS(方法10)：R_t＝1.67min；MS(ESIpos)：m/z＝719(M+H)⁺；

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ＝1.35(d，3H)，1.4(m，2H)，1.6(m，2H)，1.75(m，2H)，2.75(m，2H)，3.8(m，1H)，4.25(m，2H)，4.3-4.5(m，3H)，4.63(s，2H)，7.12(d，2H)，7.48(d，2H)，7.58(d，2H)，7.9-8.0(m，5H)，8.3(m，2H)，9.05(d，1H)。

实施例5

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-L-赖氨酰-L-丝氨酸酯二盐酸盐

在40ml DMF中，混合0.58g(1.675mmol)N²，N⁶-双(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸，0.28g(1.83mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物和0.35g(1.83mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐，和随后添加1.01g(1.52mmol)来自实施例3A的化合物。所述混合物在室温搅拌过夜和随后倒入半饱合氯化铵溶液和二氯甲烷的混合物中。有机相经分离出来，相继用水、饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。所述残留物通过快速色谱法在硅胶上首先经二氯甲烷/乙酸乙酯作为洗脱液(梯度3∶1→2∶1)纯化；然后用二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇(150∶50∶5)洗脱。合并相应的级分并浓缩。在高真空下干燥残留物之后，留下1.23g(理论值的81％)经保护的中间体。

HPLC(方法7)：R_t＝6.5min；

LC-MS(方法12)：R_t＝2.99min；MS(ESIpos)：m/z＝991(M+H)⁺。

将1.216g(1.48mmol)中间体容纳在6ml二氯甲烷中，与6ml无水三氟乙酸混合和在室温搅拌过夜。所述混合物随后经浓缩，和所述残留物再用二氯甲烷汽提。进行过滤，并将过滤残留物容纳在25ml二氯甲烷和25ml乙酸乙酯的混合物中。在搅拌的同时，添加20ml在乙醚中的2M氯化氢溶液。在短时间继续搅拌之后，抽吸过滤分离出沉积物，用乙醚洗涤和在高真空下干燥。所述残留物随后从20ml甲醇和20ml乙酸乙酯中重结晶。沉淀物再经抽吸过滤，用乙酸乙酯洗涤和在高真空下干燥。得到845mg(理论值的70％)作为无色晶体的标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝4.9min；

LC-MS(方法10)：R_t＝1.62min；MS(ESIpos)：m/z＝735(M+H)⁺。

实施例6

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-N-(2-氨基乙基)-L-α-谷氨酸酯二盐酸盐

在40ml二氯甲烷和10ml DMF中，混合1g(1.92mmol)2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-4-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二腈，0.824g(2.11mmol)来自实施例4A的化合物，0.442g(2.31mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.024g(0.19mmol)4-二甲基氨基吡啶，并在室温搅拌过夜。然后将该混合物倒入半饱合氯化铵溶液和二氯甲烷的混合物中。有机相经分离出来，相继用水、饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。所述残留物首先通过快速色谱法在硅胶上通过二氯甲烷/乙酸乙酯(3∶1)作为洗脱液纯化；然后用二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇(梯度300∶100∶5→300∶100∶10)洗脱。合并相应的级分和在真空中去除溶剂。在高真空下干燥残留物之后，留下1.52g(理论值的89％)经保护的中间体。

HPLC(方法7)：R_t＝6.0min；

LC-MS(方法11)：R_t＝2.54min；MS(ESIpos)：m/z＝891(M+H)⁺。

将1.518g(1.7mmol)中间体容纳在5ml二氯甲烷中，与5ml无水三氟乙酸混合，并在室温搅拌1h。所述混合物随后经浓缩，和所述残留物再用二氯甲烷汽提。然后将所述残留物溶解在20ml乙酸乙酯中。在搅拌的同时，添加20ml在乙醚中的2M氯化氢溶液。短时间继续搅拌后，继之以抽吸过滤，和过滤残留物用乙醚洗涤和干燥。得到1300mg(理论值的99％)标题化合物。其然后从25ml甲醇和25ml乙酸乙酯中重结晶。沉淀物再经抽吸过滤，用乙酸乙酯洗涤和随后在高真空中干燥。留下1080mg(理论值的83％)标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝4.9min；

LC-MS(方法10)：R_t＝1.59min；MS(ESIpos)：m/z＝691(M+H)⁺；

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ＝2.05(m，2H)，2.45(m，2H)，2.85和2.95(2m，2H)，3.25和3.5(2m，2H)，3.7(m，1H)，4.3(m，2H)，4.4(m，2H)，4.65(s，2H)，7.12(d，2H)，7.48(d，2H)，7.58(d，2H)，7.93(s，1H)，7.94(d，2H)，8.1(m，3H)，8.45(m，3H)，8.95(t，1H)。

实施例7

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-N-(2-氨基乙基)-L-谷氨酸酯二盐酸盐

在40ml二氯甲烷和10ml DMF中，混合1g(1.92mmol)2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-4-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二腈，0.824g(2.11mmol)来自实施例5A的化合物，0.442g(2.31mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.024g(0.192mmol)4-二甲基氨基吡啶，并在室温搅拌过夜。然后将该混合物倒入半饱合氯化铵溶液和二氯甲烷的混合物中。分离出有机相，相继用水、饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用乙醚将所述残留物从二氯甲烷中沉淀出来。沉淀物经过滤出，用乙醚洗涤和在高真空下干燥。留下1.5g(理论值的87％)经保护的中间体。

HPLC(方法7)：R_t＝6.0min；

LC-MS(方法10)：R_t＝3.12min；MS(ESIpos)：m/z＝891(M+H)⁺。

将1.5g(1.7mmol)中间体容纳在20ml二氯甲烷中，与5ml无水三氟乙酸混合，并在室温搅拌1h。所述混合物随后经浓缩，和所述残留物用甲苯汽提数次。然后将所述残留物容纳在15ml二氯甲烷，5ml乙酸乙酯和1ml甲醇中。在搅拌的同时，添加20ml在乙醚中的2M氯化氢溶液。短时间继续搅拌后，继之以抽吸过滤，和过滤残留物用乙醚洗涤两次并干燥。然后将所述残留物溶解在50ml稀盐酸(pH 3)中并冻干。留下1265mg(理论值的98％)标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝4.9min；

LC-MS(方法11)：R_t＝1.19min；MS(ESIpos)：m/z＝691(M+H)⁺。

实施例8

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-N-(2-氨基乙基)-L-天冬氨酸酯二盐酸盐

在40ml二氯甲烷和10ml DMF中，混合1g(1.92mmol)2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-4-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二腈，0.794g(2.12mmol)来自实施例6A的化合物，0.442g(2.31mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.024g(0.192mmol)4-二甲基氨基吡啶，并在室温搅拌过夜。然后将该混合物倒入半饱合氯化铵溶液和二氯甲烷的混合物中。有机相经分离出来，相继用水、饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用乙醚将所述残留物从二氯甲烷中沉淀出来。沉淀物经过滤出，用乙醚洗涤和在高真空下干燥。留下1.28g(理论值的74％)经保护的中间体。

HPLC(方法7)：R_t＝6.0min；

LC-MS(方法10)：R_t＝3.13min；MS(ESIpos)：m/z＝877(M+H)⁺。

将1.28g(1.46mmol)中间体容纳在20ml二氯甲烷中，与5ml无水三氟乙酸混合，和在室温搅拌1h。所述混合物随后经浓缩，和所述残留物用甲苯汽提数次。然后将所述残留物容纳在15ml二氯甲烷，5ml乙酸乙酯和1ml甲醇中。在搅拌的同时，添加5ml在乙醚中的2M氯化氢溶液。短时间继续搅拌后，继之以抽吸过滤，和过滤残留物经乙醚洗涤并干燥。留下1096mg(quant.)标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝4.9min；

LC-MS(方法10)：R_t＝1.58min；MS(ESIpos)：m/z＝677(M+H)⁺。

实施例9

(2S)-5-(2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙氧基)-2-[(3-羧基丙酰基)氨基]-5-氧代戊酸

在70ml DMF中，混合0.432g(2.48mmol)4-叔丁氧基-4-氧代丁酸，0.475g(2.48mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，0.380g(2.48mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物和1.59g(2.254mmol)来自实施例7A的化合物，并在室温搅拌过夜。然后将该混合物倒入半饱合氯化铵溶液和乙酸乙酯的混合物中。有机相经分离出来，相继用水、饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。残留物通过快速色谱法在硅胶上用二氯甲烷/乙酸乙酯作为洗脱液(梯度10∶1→5∶1→3∶1)纯化。合并相应的级分，和在真空中去除溶剂。所述残留物随后分份通过制备HPLC(方法6b)纯化。合并相应的级分，和在真空中去除溶剂。在高真空下干燥残留物之后，留下1.63g(理论值的84％)经保护的中间体。

HPLC(方法7)：R_t＝6.3min；

LC-MS(方法11)：R_t＝2.71min；MS(ESIpos)：m/z＝861(M+H)⁺。

将1.285g(1.49mmol)中间体容纳在10ml二氯甲烷中，与10ml无水三氟乙酸混合，和在室温搅拌1h。所述混合物随后经浓缩，和所述残留物用甲苯汽提数次。剩下的残留物随后用乙醚搅拌，和沉淀出的固体经抽吸过滤和用乙醚洗涤。在高真空下干燥之后，留下1.06g(理论值的95％)标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝5.4min；

LC-MS(方法10)：R_t＝2.23min；MS(ESIpos)：m/z＝749(M+H)⁺。

实施例10

(2S)-5-(2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙氧基)-2-[(3-羧基丙酰基)氨基]-5-氧代戊酸二钠盐

将0.5g(0.667mmol)来自实施例9的化合物溶于12.5ml乙腈和62.5ml水中，并添加13ml 0.1N氢氧化钠水溶液。在短时间搅拌之后，所述混合物经冻干。在高真空下干燥之后，留下0.53g(quant.)标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝5.4min；

LC-MS(方法11)：R_t＝2.06min；MS(ESIpos)：m/z＝749(M+H)⁺。

实施例11

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫烷基)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-L-赖氨酰-L-亮氨酸酯二盐酸盐

在200ml DMF中，混合0.928g(2.68mmol)N²，N⁶-双(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸，0.362g(2.68mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物和0.411g(2.144mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐。然后添加1.335g(1.787mmol)来自实施例8A的化合物和935μl N，N-二异丙基乙胺，并在室温搅拌该混合物过夜。随后在真空中浓缩，并将残留物容纳在乙酸乙酯中和相继用水、用5％柠檬酸萃取，和用5％碳酸氢钠溶液萃取两次。有机相经浓缩和残留物通过快速色谱法在硅胶上用二氯甲烷/乙酸乙酯作为洗脱液(梯度3∶1→2∶1)纯化。合并相应的级分，和在真空中去除溶剂。在高真空下干燥残留物之后，留下1.39g(理论值的81％)经保护的中间体。

HPLC(方法7)：R_t＝6.8min。

将1.385g(1.44mmol)所得的中间体容纳在20ml二氯甲烷中，和在搅拌条件下添加50ml在二氯甲烷中的饱和氯化氢溶液。在室温搅拌所述混合物1h，在此其间沉淀出目标产物。溶剂被蒸发出来，和剩下的残留物与70ml戊烷混合，短时间搅拌和随后经抽吸过滤。在高真空下干燥得到1.17g(理论值的97％)标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝5.17min；

LC-MS(方法10)：R_t＝1.76min；MS(ESIpos)：m/z＝761(M+H)⁺。

实施例12

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫烷基)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-L-赖氨酰-D-丙氨酸酯二盐酸盐

在24ml DMF中，混合0.59g(1.702mmol)N²，N⁶-双(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸，0.345g(2.553mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物和0.391g(2.042mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐。在室温搅拌5min，添加1.2g(1.702mmol)来自实施例9A的化合物和1.5mlN，N-二异丙基乙胺，并在室温搅拌该混合物过夜。该混合物随后经浓缩，和所述残留物在500ml乙酸乙酯和500ml水之间分配。有机相经分离出来和相继用5％柠檬酸萃取三次，用10％碳酸氢钠萃取三次。所述有机相随后经浓缩和残留物通过快速色谱法在硅胶上用二氯甲烷/乙酸乙酯作为洗脱液(梯度2∶1→1∶1)纯化。合并相应的级分和在真空中去除溶剂。所述残留物用30ml乙酸乙酯搅拌和随后与100ml乙醚混合。所述产物经抽吸过滤，和剩下的残留物用乙醚洗涤。在高真空下干燥之后，留下0.773g(理论值的49％)经保护的中间体。

HPLC(方法7)：R_t＝6.1min。

将0.74g(0.805mmol)所得的中间体容纳在200ml二氯甲烷中。在搅拌条件下将氯化氢气体通入该溶液中。在此其间，沉淀出受保护的标题化合物。在室温继续搅拌，在1小时后反应完成。所述混合物在真空中浓缩至一半体积，过滤出沉淀物。过滤残留物用乙醚洗涤和随后在高真空下在100℃干燥。以此方式得到539mg(理论值的85％)作为无色晶体的标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝5.0min；

LC-MS(方法13)：R_t＝1.04min；MS(ESIpos)：m/z＝719(M+H)⁺；

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ＝1.3(d，3H)，1.35(m，2H)，1.52(m，2H)，1.75(m，2H)，2.75(m，2H)，3.8(m，1H)，4.3(m，2H)，4.3-4.5(m，3H)，4.63(s，2H)，7.12(d，2H)，7.48(d，2H)，7.58(d，2H)，7.8-8.0(m，5H)，8.25(m，2H)，9.0(d，1H)。

实施例13

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫烷基)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-N-(2-氨基乙基)-D-α-谷氨酸酯二盐酸盐

在20ml二氯甲烷和5ml DMF中，混合0.522g(1.0mmol)2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫代)-4-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]吡啶-3，5-二腈，0.430g(1.104mmol)来自实施例10A的化合物，0.231g(1.204mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.012g(0.1mmol)4-二甲基氨基吡啶，并在室温搅拌过夜。然后将该混合物倒入半饱合氯化铵溶液和二氯甲烷的混合物中。有机相经分离出来，相继用水、饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。所述残留物通过快速色谱法在硅胶上首先用二氯甲烷/乙酸乙酯(3∶1)作为洗脱液纯化；然后用二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇(梯度300∶100∶5→300∶100∶10)洗脱。合并相应的级分和在真空中去除溶剂。在高真空下干燥残留物之后，留下0.711g(理论值的79％)经保护的中间体。

HPLC(方法7)：R_t＝6.0min；

LC-MS(方法13)：R_t＝1.54min；MS(ESIpos)：m/z＝891(M+H)⁺。

将0.711g(0.798mmol)所得的中间体容纳在4ml二氯甲烷中，与4ml无水三氟乙酸混合，和在室温搅拌1h。所述混合物随后经浓缩，和所述残留物再用二氯甲烷汽提。然后将所述残留物溶解在50ml乙酸乙酯中。在搅拌的同时，添加20ml在乙醚中的2M氯化氢溶液。短时间继续搅拌后，继之以抽吸过滤，和过滤残留物用乙醚洗涤和干燥。得到590mg(理论值的97％)标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝4.9min；

LC-MS(方法11)：R_t＝1.22min；MS(ESIpos)：m/z＝691(M+H)⁺；

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ＝2.05(m，2H)，2.45(m，2H)，2.85und 2.95(2m，2H)，3.25和3.5(2m，2H)，3.7(m，1H)，4.3(m，2H)，4.4(m，2H)，4.65(s，2H)，7.12(d，2H)，7.48(d，2H)，7.58(d，2H)，7.93(s，1H)，7.94(d，2H)，8.1(m，3H)，8.45(m，3H)，8.93(t，1H)。

实施例14

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫烷基)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-L-精氨酰-L-丙氨酸酯二盐酸盐

在20ml DMF中，混合0.269g(0.567mmol)N⁵-[N，N′-双(叔丁氧基羰基)氨基甲酰基]-N²-(叔丁氧基羰基)-L-鸟氨酸，0.115g(0.851mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物和0.131g(0.681mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐。搅拌30分钟之后，添加0.2g(0.284mmol)来自实施例2A的化合物和200μlN，N-二异丙基乙胺，并在室温搅拌该混合物过夜。该混合物随后经真空浓缩，和将残留物容纳在二氯甲烷和相继用5％柠檬酸，5％碳酸氢钠溶液和水萃取。有机相经浓缩和残留物通过快速色谱法在硅胶上用二氯甲烷/乙酸乙酯(3∶1)作为洗脱液纯化。合并相应的级分，和在真空中去除溶剂。在高真空下干燥残留物之后，留下0.179g(理论值的60％)经保护的中间体。

HPLC(方法7)：R_t＝5.8min。

将0.178g(0.17mmol)所得的中间体容纳在30ml在二氯甲烷中的饱和氯化氢溶液中，和在室温搅拌过夜。所述混合物在真空中浓缩至一半体积，和过滤出产生的沉淀物。过滤残留物用乙醚洗涤和随后在高真空中干燥。以此方式得到119mg(理论值的82％)作为无色晶体的标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝4.9min；

LC-MS(方法10)：R_t＝1.58min；MS(ESIpos)：m/z＝747(M+H)⁺；

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ＝1.35(d，3H)，1.55(m，2H)，1.75(m，2H)，3.25(m，2H)，3.85(m，1H)，4.25(m，2H)，4.3-4.5(m，3H)，4.65(s，2H)，7.12(d，2H)，7.48(d，2H)，7.58(d，2H)，7.75(t，1H)，7.93(s，1H)，7.94(d，2H)，8.3(m，3H)，9.1(d，1H)。

实施例15

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫烷基)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-L-组氨酰-L-丙氨酸酯二盐酸盐

在20ml DMF中，混合0.145g(0.567mmol)N-(叔丁氧基羰基)-L-组氨酸，0.115g(0.851mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物和0.131g(0.681mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐。搅拌30分钟之后，添加0.2g(0.284mmol)来自实施例2A的化合物和200μlN，N-二异丙基乙胺，并在室温搅拌该混合物过夜。该混合物随后经真空浓缩，和将残留物容纳在二氯甲烷中和相继用5％柠檬酸，5％碳酸氢钠溶液和水萃取。有机相经浓缩，和残留物通过快速色谱法在硅胶上用甲苯/乙醇(3∶1)作为洗脱液纯化。合并相应的级分，和在真空中去除溶剂。在高真空下干燥残留物之后，留下0.206g(理论值的88％)经保护的中间体。

HPLC(方法7)：R_t＝5.3min。

将0.206g(0.249mmol)所得的中间体容纳在30ml在二氯甲烷中的饱和氯化氢溶液中和在室温搅拌2h。所述混合物在真空中浓缩至一半体积，和过滤出产生的沉淀物。过滤残留物用乙醚洗涤和随后在高真空中干燥。以此方式得到171mg(理论值的90％)作为无色晶体的标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝4.8min；

LC-MS(方法10)：R_t＝1.59min；MS(ESIpos)：m/z＝728(M+H)⁺；

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ＝1.35(d，3H)，3.15和3.25(2dd，2H)，4.25(m，3H)，4.3-4.5(m，3H)，4.65(s，2H)，7.12(d，2H)，7.4(s，1H)，7.48(d，2H)，7.58(d，2H)，7.93(s，1H)，7.94(d，2H)，8.5(m，3H)，9.05(s，1H)，9.2(d，1H)。

实施例16

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫烷基)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-N-[(2S)-2，4-二氨基丁酰基]-L-丙氨酸酯二盐酸盐

在20ml DMF中，混合0.181g(0.567mmol)(2S)-2，4-双[(叔丁氧基羰基)氨基]丁酸，0.115g(0.851mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物和0.131g(0.681mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐。在室温搅拌30min，添加0.2g(0.284mmol)来自实施例2A的化合物和200μl N，N-二异丙基乙胺，并在室温搅拌该混合物过夜。该混合物随后经真空浓缩，并将残留物容纳在二氯甲烷和相继用5％柠檬酸，5％碳酸氢钠溶液和水萃取。有机相经浓缩和残留物通过快速色谱法在硅胶上用甲苯/乙醇(10∶1)作为洗脱液纯化。合并相应的级分，和在真空中去除溶剂。在高真空下干燥残留物之后，留下0.217g(理论值的86％)经保护的中间体。

HPLC(方法7)：R_t＝6.3min。

将0.212g(0.238mmol)所得的中间体容纳在25ml在二氯甲烷中的饱和氯化氢溶液中，和在室温搅拌1.5h。所述混合物在真空中浓缩至一半体积，和过滤出产生的沉淀物。过滤残留物用乙醚洗涤和随后在高真空中干燥。以此方式得到171mg(理论值的94％)作为无色晶体的标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝4.8min；

LC-MS(方法10)：R_t＝1.56min；MS(ESIpos)：m/z＝691(M+H)⁺。

实施例17

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫烷基)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-L-赖氨酰-甘氨酸酯二盐酸盐

在15ml DMF中，混合0.185g(0.535mmol)N²，N⁶-双(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸，0.108g(0.803mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物和0.123g(0.642mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐，和在室温搅拌5mi n。然后添加0.37g(0.535mmol)来自实施例11A的化合物和466μlN，N-二异丙基乙胺，并在室温搅拌该混合物过夜。该混合物随后经真空浓缩，和所述残留物在500ml乙酸乙酯和200ml水之间分配。有机相经分离出来，相继用5％柠檬酸萃取三次和用5％碳酸氢钠溶液萃取三次和经硫酸镁干燥。有机相经浓缩，和所述残留物用50ml乙酸乙酯搅拌10min。然后缓慢添加100ml乙醚，和沉淀物经抽吸过滤。在高真空下干燥之后，留下0.303g(理论值的63％)经保护的中间体。

HPLC(方法7)：R_t＝6.1min。

将0.279g(0.308mmol)所得中间体容纳在120ml二氯甲烷中。在搅拌的同时将氯化氢气体通入该溶液中，在此其间沉淀出经保护的标题化合物。该混合物随后在室温搅拌1h。该混合物随后经真空浓缩至一半体积，并缓慢加入30ml无水THF。在继续搅拌15min之后，沉淀物经过滤出。过滤残留物用乙醚洗涤和随后在高真空中干燥。以此方式得到212mg(理论值的88％)作为无色晶体的标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝4.8min；

LC-MS(方法10)：R_t＝1.52min；MS(ESIpos)：m/z＝705(M+H)⁺。

实施例18

2-{4-[2-氨基-6-({[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}硫烷基)-3，5-二氰基吡啶-4-基]苯氧基}乙基-L-赖氨酰-L苯基丙氨酸酯二盐酸盐

在7ml DMF中，混合0.166g(0.48mmol)N²，N⁶-双(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸，0.097g(0.72mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物和0.110g(0.576mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐，并在室温搅拌5min。然后添加0.375g(0.48mmol)来自实施例12A的化合物和418μl N，N-二异丙基乙胺，并在室温搅拌该混合物过夜。该混合物随后经真空浓缩，和残留物容纳在200ml乙酸乙酯，相继用10％柠檬酸萃取两次和用10％碳酸氢钠溶液萃取两次和用硫酸镁干燥。有机相经浓缩，将残留物容纳在10ml乙酸乙酯中，和所述产物通过添加乙醚干燥。沉淀物经抽吸过滤和在高真空下干燥。留下0.338g(理论值的71％)经保护的中间体。

HPLC(方法7)：R_t＝6.7min。

将0.32g(0.321mmol)所得中间体容纳在100ml二氯甲烷中。在搅拌的同时，将氯化氢气体通入该溶液中，在此其间沉淀出经保护的标题化合物。在室温进一步搅拌所述混合物1h和随后在真空中浓缩至一半体积，和缓慢添加10ml无水THF。在继续搅拌15min之后，沉淀物被过滤出。过滤残留物用乙醚洗涤和随后在高真空中干燥。以此方式得到188mg(理论值的67％)作为无色晶体的标题化合物。

HPLC(方法7)：R_t＝5.0min；

LC-MS(方法11)：R_t＝1.33min；MS(ESIpos)：m/z＝795(M+H)⁺。

B.测定溶解性、稳定性和释放行为

a)测定溶解性：

将测试物质溶解在5％的葡萄糖水溶液中。悬浮液在室温振荡24小时。在于224000g超速离心30分钟后，上清液用DMSO稀释和用HPLC分析。测试物质在DMSO中的两点校准曲线用于定量化。

用于酸的HPLC方法：

Agilent 1100，具有DAD(G1315A)，四元泵(G1311A)，自动进样仪CTC HTS PAL，脱气机(G1322A)和柱温箱(G1316A)；柱：Phenomenex Gemini C18，5μm，50mm×2mm；温度：40℃；洗脱液A：水/磷酸pH2，洗脱液B：乙腈；流速：0.7ml/min；梯度：0-0.5min 85％A，15％B；爬坡0.5-3min 10％A，90％B；3-3.5min10％A，90％B；爬坡3.5-4min 85％A，15％B；4-5min 85％A，15％B。

用于碱的HPLC方法：

Agilent 1100，具有DAD(G1315A)，四元泵(G1311A)，自动进样仪CTC HTS PAL，脱气机(G1322A)和柱温箱(G1316A)；柱：VDSoptilab Kromasil 100 C18，3.5μm，60mm×2.1mm；温度：30℃；洗脱液A：水+5ml高氯酸/升，洗脱液B：乙腈；流速：0.75ml/min；梯度：0-0.5min 98％A，2％B；爬坡0.5-4.5min 10％A，90％B；4.5-6min 10％A，90％B；爬坡6.5-6.7min 98％A，2％B；6.7-7.5min 98％A，2％B。

代表性工作实施例在5％葡萄糖水溶液中的溶解性如表1所示：

表1

  实施例No.  溶解性[mg/升]  1  ＞500  3  450  4  ＞500  5  ＞500  6  ＞500  7  100  10  390  11  ＞500  12  ＞500  13  ＞500

  实施例No.  溶解性[mg/升]  14  ＞500  15  450  17  ＞500  18  450

没有观察到实施例化合物在这些溶液中的分解。

在此测试中，测得作为基础的活性物质[化合物(A)]在5％葡萄糖水溶液中的溶解性为＜0.1mg/升。

b)在不同pH值的缓冲液中的稳定性：

将0.3mg测试物质称量到2ml HPLC小瓶中并向其中添加0.5ml乙腈或乙腈/DMSO(9∶1)。通过将所述样品容器置入超声浴中大约10秒来溶解所述物质。然后添加0.5ml的各种(缓冲)溶液，再次在超声浴中处理所述样品。

所用(缓冲)溶液：

pH 2：0.03mol柠檬酸，0.061mol氯化钠和0.0082mol盐酸，补充至(ad)1升水；

pH 4：用1N盐酸将1升Millipore水调节至pH 4.0；

pH 5：0.096mol柠檬酸和0.2mol氢氧化钠，补充至1升水；

pH 6：0.06mol柠檬酸和0.16mol氢氧化钠，补充至1升水；

pH 7.4：90.0g氯化钠，13.61g磷酸二氢钾和83.35g 1N氢氧化

钠溶液，补充至1升水；该溶液然后用Millipore水以1∶10稀释。

pH 8：0.013mol硼砂和0.021mol盐酸，补充至1升水。

在37℃，在24小时期间每小时用HPLC分析各5μl的样品溶液的未反应的测试物质和形成的母体物质(A)的含量。相应峰的面积百分比用于定量分析。

HPLC方法：

Agilent 1100，具有DAD(G1314A)，二元泵(G1312A)，自动进样仪(G1329A)，柱温箱(G1316A)，恒温箱(G1330A)；柱：Kromasil 100C18，125mm×4.6mm，5μm；柱温：30℃；洗脱液A：水+5ml高氯酸/升，洗脱液B：乙腈；梯度：0-2.0min 90％A，10％B；2.0-18.0min64％A，36％B；18.0-20.0min 64％A，36％B；20.0-21.0min 10％A，90％B；21.0-23.0min 90％A，10％B；23.0-26.0min 90％A，10％B；流速：2.0ml/min；UV检测：294nm。

对于代表性工作实施例，在各个时间点峰面积(F)相对于在起始时间峰面积的比率在表2中示出：

表2

  实施例No.pH  4h后的测试物质％[F(t＝4h)×100/F(t＝0h)]  24h后的测试物质％[F(t＝24h)×100/F(t＝0h)]  1  4  100  100  1  6  100  100  1  7.4  99  96  1  8  99  90  2  4  100  100  2  7.4  100  100  3  4  100  100  3  7.4  99  55  4  4  100  100  4  5  100  98  4  6  97  84  4  7.4  48  2  5  4  100  100  5  5  100  98  5  6  95  70  实施例No.pH  4h后的测试物质％[F(t＝4h)×100/F(t＝0h)]  24h后的测试物质％[F(t＝24h)×100/F(t＝0h)]  6  2  100  100  6  4  100  100  6  5  96  80  6  6  78  25

  实施例No.pH  4h后的测试物质％[F(t＝4h)×100/F(t＝0h)]  24h后的测试物质％[F(t＝24h)×100/F(t＝0h)]  6  7.4  8  0  7  4  100  98  7  7.4  51  2  9  4  100  100  9  7.4  100  100  10  4  100  99  10  7.4  100  99  11  4  100  100  11  7.4  90  55  12  4  99  98  12  7.4  49  2  13  4  100  99  13  7.4  24  0  14  4  100  100  14  7.4  68  8

在该试验中，发现随着测试物质的含量下降，活性物质化合物(A)增加。

c)在大鼠和人血浆中的体外稳定性：

将1mg测试物质称入2ml HPLC小瓶中，并添加1.5ml DMSO和1ml水。通过将样品容器置入超声浴中大约10秒溶解所述物质。在37℃将0.5ml大鼠或人血浆添加到0.5ml该溶液中。振荡该溶液，并移出大约10μl用于第一次分析(时间点t₀)。在开始孵育达至多2小时内，另外移出4-6个等份样品用于定量分析。在测试期间将所述样品保持在37℃，通过HPLC进行表征和定量分析。

HPLC方法：

Agilent 1100，具有DAD(G1314A)，二元泵(G1312A)，自动进样仪(G1329A)，柱温箱(G1316A)，恒温箱(G1330A)；柱：Kromasil 100C18，250mm×4mm，5μm；柱温：30℃；洗脱液A：水+5ml高氯酸/升，洗脱液B：乙腈；梯度：0-8.0min 53％A，47％B；8.0-18.0min53％A，47％B；18.0-20.0min 90％A，10％B；20.0-21.0min 90％A，10％B；21.0-22.5min 98％A，2％B；22.5-25.0min 98％A，2％B；流速：2ml/min；UV检测：294nm。

表3表明，对于代表性的工作实施例，在用大鼠血浆孵育后产生活性成分化合物(A)的最大可能量的50％的相应时间(t_50％A)。为了进行评价，在每一情况下使用峰面积与相对于起始时间点的各个时间点的比率。

表3

  实施例No.  在大鼠血浆中的t_50％A[min]  1  60  2  30  3  55  4  1.7  5  8.0  6  1.1  7  0.5  9  ＞120  10  ＞120  12  2  13  0.5  14  0.5

d)在Wistar大鼠中的静脉注射药物动力学：

在给药所述物质前一天，在麻醉情况下向试验动物(雄性Wistar大鼠，体重200-250g)的颈静脉植入用于获得血液的导液管。

在试验当天，使用玻璃注射器(推注给药，给药时间长度＜10s)在尾静脉中作为溶液给药限定剂量的溶液形式的测试物质。在给药所述物质后的24小时内，经导液管相继取出血样(8-12个时间点)。为了获得血浆，所述样品在加肝素的管中离心分离。在每个时间点，向限定的血浆体积混入乙腈，使蛋白质沉淀。在离心分离后，用合适的LC/MS-MS方法定量测定在上清液中的测试物质和任选的测试物质的已知分解产物。

从测得的血浆浓度计算测试物质和从该测试物质释放出的活性成分化合物(A)的药物动力学参数例如AUC、C_max、T_1/2(半衰期)和CL(清除率)。

在静脉给药来自实施例4，来自实施例5，来自实施例6和来自实施例7的化合物之后，在第一测试点时在血浆中已经不再能检测到这些物质。直至24小时的时间点，仍仅能检测到活性成分(A)。

e)在Wistar大鼠中的口服(p.o.)药物动力学：

在给药所述物质前一天，在麻醉情况下向试验动物(雄性Wistar大鼠，体重200-250g)的颈静脉植入用于获得血液的导液管。

在试验当天，用咽管向胃中给药限定剂量的溶液形式的测试物质。在给药所述物质24小时内，经导液管相继取出血样(8-12个时间点)。为了获得血浆，所述样品在加肝素的管中离心分离。在每个时间点，向限定的血浆体积混入乙腈，使蛋白质沉淀。在离心分离后，用合适的LC/MS-MS方法定量测定在上清液中的测试物质和任选的测试物质的已知的分解产物。

从测得的血浆浓度计算测试物质和从该测试物质释放出的活性成分化合物(A)的药物动力学参数例如AUC、C_max和T_1/2(半衰期)。

在口服给药来自实施例4，来自实施例5和来自实施例6的化合物之后，在第一测试点在血浆中已经不再能检测到这些物质。直至24小时的时间点，仍仅能检测到活性成分(A)。

f)检测对经麻醉大鼠心率的影响：

使用体重大于250g的雄性Wistar大鼠。在试验前夜，对所述动物保持禁食，但让其自由饮用饮用水。准备和研究在麻醉(100mg/kg腹腔注射(i.p.))条件下进行。注射和输注通过在颈静脉中的导液管进行，血压记录通过在股动脉中的导液管(换能器：Braun，Melsungen)进行。在准备后，将所述动物连接至生理盐水的持续输注以补偿液体损失。在大约1小时的平衡时间后，静脉推注给药测试物质或安慰剂溶液。在平衡期间和在推注后的至少30分钟的时间段，借助数字评价程序来记录心率和动脉血压。

在表4中，示出了在静脉推注100μg/kg活性物质(A)或代表性工作实施例的等效剂量后第一个30分钟内的最大心率降低。

表4

  实施例No.  心率降低[％]  A  24  1  10  4  19  5  12

  实施例No.  心率降低[％]  6  17  7  15

C.药物组合物的工作实施例

本发明的化合物可以例如以如下方式转变成药物制剂：

片剂：

组成：

100mg本发明的化合物，50mg乳糖(一水合物)，50mg玉米淀粉(天然)，10mg聚乙烯基吡咯烷酮(PVP 25)(BASF，Ludwigshafen，德国)和2mg硬脂酸镁。

片剂重量212mg。直径8mm，曲率半径12mm。

制备：

本发明的化合物，乳糖和淀粉的混合物用在水中的5％PVP溶液(m/m)造粒。颗粒经干燥和随后与硬脂酸镁混合5min。所述混合物经常规压片机压制(片剂规格见上文)。作为标准值，对于压制使用15kN的压力。

口服悬浮液：

组成

1000mg本发明的化合物，1000mg乙醇(96％)，400mg(黄原胶，来自FMC，Pennsylvania，USA)和99g水。

10ml口服悬浮液对应于单一剂量的100mg本发明的化合物。

制备：

将Rhodigel悬浮在乙醇中，并将本发明的化合物添加到该悬浮液中。在搅拌条件下添加水。混合物搅拌大约6小时，直到Rhodigel完全溶胀。

口服溶液：

组成

500mg本发明的化合物，2.5g聚山梨酯(Polysorbate)和97g聚乙二醇400。单一剂量的100mg本发明的化合物对应于20g口服溶液。

制备：

在搅拌条件下，将本发明的化合物悬浮在聚乙二醇和聚山梨酯的混合物中。继续搅拌直到本发明的化合物完全溶解。

静脉注射溶液：

本发明的化合物以低于饱和溶解度的浓度溶于生理相容的溶剂(例如等渗盐水溶液，5％葡萄糖溶液和/或30％PEG 400溶液，在每一情况下调节为pH 3-5)。所述溶液任选地经灭菌过滤和/或灭菌和无热源地分配至注射容器中。