一种评价洁尔阴洗液成品质量的新方法

摘要

本发明涉及洁尔阴洗液的质量评价方法。是以洁尔阴洗液为对象，以洁尔阴洗液所含总成分为分析对象，以1H-NMR为检测手段，采用主成分分析或最小偏二乘法为数据处理方法，以正常生产且符合现有产品质量标准的洁尔阴洗液样本的1H-NMR数据为基准，以其他产品样本数据点是否与洁尔阴洗液样本一致而判断其质量是否合格的方法。

说明书

技术领域

本发明涉及产品的品质评价方法

背景技术

药品质量控制的主要目的是对原料来源、生产过程及产品质量是否稳定进行控制，以保证用药的有效性和安全性。洁尔阴洗液是成都恩威集团生产的国药准字(Z10930008)的外用洗液，由蛇床子、艾叶、独活、石菖蒲、苍术、薄荷、黄柏、黄芩、苦参、地肤子、茵陈、土荆皮、栀子、山银花等制成，对多种致病病原体均有杀灭、抑制作用。洁尔阴洗液的质量控制是依据卫生部发布的编号为WS-365(Z-044)-97的洁尔阴洗液标准。其主要检验内容包括定性法，即用薄层层析(TLC)法对洁尔阴洗液中苦参碱、盐酸小檗碱和栀子苷进行定性检测^[1]；定量法，即用高效液相色谱法(HPLC)对洁尔阴洗液中蛇床子素的含量进行定量检测。并根据检测结果作为判断洁尔阴洗液是否合格的依据。

目前所采用的定性定量方法仅检测了构成洁尔阴洗液的部分原药，并不能检测所有组成原药。此外，对辅料部分也没有进行相应的检测和控制。

本发明针对洁尔阴洗液质量标准中的缺陷，提出了以氢核磁共振(¹H-NMR)技术结合主成分分析(principal component analysis)法建立一种洁尔阴洗液的新质量控制方法。

氢核磁共振(¹H-NMR)技术理论上可以检测任何含有氢的有机化学成分，能够提供足够丰富的中药中化学成分信息。而主成分分析法能从氢核磁共振谱的大量数据中，获得具有统计学意义的、综合性的、有价值的化学成分信息。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种新的洁尔阴洗液的品质评价方法。

本发明所指的品质评价指标是洁尔阴洗液的总内含物的变化规律。

本发明所用的测定技术是氢核磁共振技术。

本发明所指的数据处理方法是主成分分析或最小篇二乘法。

本发明涉及样品采集、处理，氢核磁共振测定、数据处理和分析以及结果判断方式由下述方式完成。

1.基本样品的数量和批次

基本样品的数量不得少于30个，生产批次不得少于10批。

2.基本样品的采集处理

精密量取各批次洁尔阴洗液样品1-10ml，置于PE管中，离心20min(4000r/min)。精密取上清液0.2-0.4ml，加入0.3-0.1ml D₂O溶液(含1％TSP)，置于φ0.5mm核磁管中，用于¹H-NMR检测。

3.氢核磁共振测定

上述样品在Bruker AV II-600MHz核磁共振谱仪上测定。测定条件：恒温296K，以D₂O作为内锁，扫描16-128次，采样时间域为64k，谱宽为12335.526Hz，采样时间为2.66s，脉冲间隔D1为3.00s，采用标准的预饱和脉冲序列(zgpr)压制水峰信号。获得自由衰减信号(FID信号)。

FID信号经过傅立叶变换转为一维NMR谱图，并以内标TSP(δ0.00)的化学位移值为基准校正图谱。每张图谱按0.01×10^-6-0.1×10^-6积分间隔分段积分，得到一个化学位移值段与积分值一一对应数据矩阵。

4.数据处理和分析

将所有样品的数据矩阵进行归一化处理，然后导入SIMPCA-11软件，启动主成分分析模式，提取主成分1和主成分2。

5.结果判断方式

5.1建立洁尔阴基本样品的氢核磁共振数据库和二维分布图形

以主成分1的得分值为横坐标，主成分2的得分值为纵坐标绘制二维分布图形，设定95％可信区域。将95％可信区域外的样品剔出后，再绘制二维分布图形并固定，即得洁尔阴基本样品的氢核磁共振数据库和二维分布图形。

5.2洁尔阴洗液的品质评价

首先将待测洁尔阴洗液样品按上述的采集处理、氢核磁共振测定、图谱处理等方法进行处理后，获得对应的数据；然后将数据导入由基本样品构成的氢核磁共振数据库和二维分布图形中，观察待测洁尔阴洗液样品在二维分布图形中的分布情况，如待测样品的得分点分布在95％可信区间内，则判定该样品为合格品；如待测样品的得分点分布在95％可信区间之外，则判定该样品为不合格品。

6.基本样品的氢核磁共振数据库的扩充

待测样品经上述的判别后，如判别为合格品，则将其数据纳入基本样品的氢核磁共振数据库，以扩充数据库和增加基本样品的代表性和判别能力。

附图说明

图1是实施例1中洁尔阴洗液基本样品数据库的主成分分析结果图示(●基本洁尔阴洗液样品)。

图2是实施例1中全药材制剂样本与洁尔阴洗液基本样品的主成分分析结果图示(●基本洁尔阴洗液样品；全药材制剂)。

图3是实施例1中全辅料制剂样本与洁尔阴洗液基本样品的主成分分析结果图示(●基本洁尔阴洗液样品；◆全辅料制剂)。

图4是实施例1中缺蛇床子制剂、缺黄柏制剂、缺苦参制剂、缺栀子制剂和缺全药材制剂与洁尔阴洗液基本样品的主成分分析结果图示(●基本洁尔阴洗液样品；缺蛇床子制剂；缺栀子制剂；缺黄柏制剂；缺苦参制剂)。

图5是实施例2中洁尔阴洗液基本样品数据库的PLS-DA预测图图示(●基本洁尔阴洗液样品)。

图6是实施例2中洁尔阴洗液基本样品数据库除去溢出样本后的PLS-DA预测图图示(●基本洁尔阴洗液样品)。

图7是实施例2中洁尔阴洗液验证样本导入的PLS-DA预测图后的分析结果图示(●基本洁尔阴洗液样品；洁尔阴洗液验证样本)。

图8是实施例2中全辅料制剂样本导入的PLS-DA预测图后的分析结果图示(●基本洁尔阴洗液样品；○全辅料制剂样本)。

图9是实施例2中全药材制剂样本导入的PLS-DA预测图后的分析结果图示(●基本洁尔阴洗液样品；全药材制剂样本)。

图10是实施例2中缺黄柏制剂、缺苦参制剂、缺栀子制剂、缺蛇床子和独活制剂、缺黄芪制剂、缺地肤子制剂、缺薄荷制剂、缺石菖蒲制剂样本导入的PLS-DA预测图后的分析结果图示(●基本洁尔阴洗液样品；缺黄柏制剂样本；缺苦参制剂样本；■缺栀子制剂样本；缺蛇床子和独活制剂样本；○缺黄芪制剂样本；▲缺地肤子制剂样本；缺薄荷制剂样本；缺石菖蒲制剂样本)。

具体实施例

实施例1：

实验以2007年1-11月生产的洁尔阴洗液29批次，精密量取各批次洁尔阴洗液样品1.5ml，置于PE管中，离心20min(4000r/min)。精密取上清液0.4ml，加入0.1ml D₂O溶液(含1％TSP)，置于φ0.5mm核磁管中，在Bruker AV II-600MHz核磁共振谱仪上测定。测定条件：恒温296K，以20％D₂O(体积比)作为内锁，扫描64次，采样时间域为64k，谱宽为12335.526Hz，采样时间为2.66s，脉冲间隔D1为3.00s，采用标准的预饱和脉冲序列(zgpr)压制水峰信号。获得自由衰减(FID)信号。FID信号经过傅立叶变换转为一维氢核磁共振谱图，并以内标TSP(δ0.00)的化学位移值为基准校正图谱。每张图谱按0.05×10^-6积分间隔分段积分，得到一个数据矩阵(舍去水峰所在的区间δ5.0～4.5)。将数据矩阵中洁尔阴样品的数据导入SIMCA-P软件，启动主成分分析程序，提取主成分1和2。以主成分1的得分值为横坐标，主成分2的得分值为纵坐标绘制二维得分分布图形(如图1)，设定95％可信区域。其中有4个样品得分点落在了95％置信区间外，说明这4个样品与其余样品有差异。造成这种差异的原因可能来自样品本身或者样品制备过程中，故将这4个样本点剔出，以其余25个样品点作为洁尔阴洗液的基本数据库。

按洁尔阴洗剂的制备条件和方法，分别制备去除蛇床子、黄柏、苦参、栀子、全部药材或全部辅料的缺蛇床子制剂、缺黄柏制剂、缺苦参制剂、缺栀子制剂、缺全药材制剂和缺全辅料制剂。上述各制剂按发明内容中2.基本样品的采集处理；3.氢核磁共振测定；4.数据处理和分析的方法处理，获得相应的氢核磁共振数据。

将全药材制剂的数据导入洁尔阴洗液的基本数据库，进行主成分分析，获得主成分1和主成分2，以主成分1的得分值t(1)为横坐标，主成分2的得分值t(2)为纵坐标绘制二维得分分布图形(如图2)，图示中显示基本洁尔阴洗液样本点分布在t(1)的0至5和t(2)的-10至10构成的矩阵之内，而全药材制剂样本则处于t(1)的-50至-55和t(2)的-10至10构成的矩阵内，表明全药材制剂样本与洁尔阴洗液基本样本之间有明显差异。

将全辅料制剂的数据导入洁尔阴洗液的基本数据库，进行主成分分析，获得主成分1和主成分2，以主成分1的得分值为横坐标，主成分2的得分值为纵坐标绘制二维得分分布图形(如图3)，图示中显示基本洁尔阴洗液样本点分布在t(1)的-5至10和t(2)的-15至15构成的矩阵之内，而全全辅料制剂样本则处于t(1)的-35至-45和t(2)的0至10构成的矩阵内，表明全辅料制剂样本与洁尔阴洗液基本样本之间有明显差异。

将缺蛇床子制剂、缺黄柏制剂、缺苦参制剂和缺栀子制剂的数据导入洁尔阴洗液的基本数据库，进行主成分分析，获得主成分1和主成分2，以主成分1的得分值为横坐标，主成分2的得分值为纵坐标绘制二维得分分布图形(如图4)，图示中显示基本洁尔阴洗液样本点分布在t(1)的-10至5和t(2)的-10至10构成的矩阵之内；而缺蛇床子制剂样本点分布则处于t(1)的15至20和t(2)的0至5构成的矩阵内，缺黄柏制剂样本点分布则处于t(1)的15至20和t(2)的0至-5构成的矩阵内，缺栀子制剂样本点分布则处于t(1)的20至25和t(2)的-5至-15构成的矩阵内，缺苦参制剂样本点分布则处于t(1)的15至20和t(2)的15至25构成的矩阵内，表明各种缺味制剂样本与洁尔阴洗液基本样本之间有明显差异。

实施例2

实验以2005年-2007年生产的洁尔阴洗液126个样本，按实施例1“精密量取-------得到一个数据矩阵(舍去水峰所在的区间δ5.0～4.5)”同样操作，将获得数据矩阵的数据导入SIMCA-P软件，启动PLS-DA预测程序，随机去除6个样本，以其余120个样本建立预测模型(图5)，预测模型中有两个溢出样品，剔出这两个样品后，得到洁尔阴标准样品的预测模型(图6)。将随机去除的6个样本数据导入模型(图7)进行验证分析，这6个样本点均分布在洁尔阴标准样品点群内，说明这6个样本均为合格品。

将实施例1中的全辅料制剂的数据导入洁尔阴标准样品的预测模型(图8)，全辅料制剂的样本点分布在分界线之上，与洁尔阴标准样品点群有明显差别。

将实施例1中的全药材制剂的数据导入洁尔阴标准样品的预测模型(图9)，全药材制剂的样本点分布在分界线之上，与洁尔阴标准样品点群有明显差别。

按洁尔阴洗剂的制备条件和方法，分别制备去除蛇床子和独活、黄芪、地肤子、薄荷、石菖蒲的缺蛇床子和独活制剂、缺黄芪制剂、缺地肤子制剂、缺薄荷制剂、缺石菖蒲制剂。上述各制剂按发明内容中2.基本样品的采集处理；3.氢核磁共振测定；4.数据处理和分析的方法处理，获得相应的氢核磁共振数据。将实施例1中的缺黄柏制剂、缺苦参制剂、缺栀子制剂以及新获得的缺蛇床子和独活制剂、缺黄芪制剂、缺地肤子制剂、缺薄荷制剂、缺石菖蒲制剂的数据导入洁尔阴标准样品的预测模型(图10)，各种缺味制剂的样本点均分布在分界线之上，与洁尔阴标准样品点群有明显差别。

参考文献：

[1]中华人民共和国卫生部部标准WS-365(Z-044)-97；