(Z)-2-苯基-3-(吡咯-2-基)-丙烯腈衍生物及其盐、组合物以及制备方法和用途

摘要

本发明提供了一类新的酪氨酸激酶抑制剂，它们为具有如通式(I)的(Z)-2-苯基-3-(吡咯-2-基)-丙烯腈衍生物或其药理上可接受的盐，其制备方法及其在治疗或者预防有机体中和蛋白激酶相关疾病中的应用；本发明还提供了含有通式(I)化合物或者/和其药理上可接受盐的药物组合物。

说明书

技术领域

本发明涉及一类丙烯腈衍生的化合物和它们在药理上可以接受的盐、组合物以及它们的合成方法和用途。

背景技术

蛋白酪氨酸激酶是一类能催化ATP上的磷酸基转移到许多重要调节蛋白质的酪氨酸残基上，使其发生磷酸化而调节这些调节蛋白的功能。根据蛋白酪氨酸激酶的结构的不同可分为受体型和非受体型。受体型酪氨酸激酶由含有配体结合位点的细胞外结构域、单次跨膜的疏水α螺旋区、含有酪氨酸蛋白激酶(RTK)活性的细胞内结构域组成，它们的配体是生物体内调节细胞生长、发育、分化和死亡的生长因子；而非受体型蛋白酪氨酸激酶只有具有酪氨酸蛋白激酶(RTK)活性的细胞内结构域组成。

蛋白酪氨酸激酶在调节细胞的发育、生长、分化、死亡等重要生物学过程中起着十分重要的作用。大量的研究表明，蛋白酪氨酸激酶功能的失调和许多疾病，尤其是恶性肿瘤的发生发展关系密切。在恶性肿瘤中，蛋白酪氨酸激酶的异常主要表现在三个方面，一是受体酪氨酸激酶以及它们的配体-生长因子的高表达；二是酪氨酸激酶的突变或者缺失；三是酪氨酸激酶和一种异常蛋白结合引起它的持续性活化。这些异常是肿瘤细胞异常增生、异常分化、持续性生长和不产生凋亡的重要原因之一。因此，以酪氨酸激酶为靶点来开发新一代高效、特异、低毒性的抗肿瘤药是过去十多年抗肿瘤研发中最为热门的领域，也取得了许多令人鼓舞的成果。

美国专利5521184发现一类嘧啶胺类衍生物对蛋白酪氨酸激酶中的BCR/abl、PDGFR、和c-kit都有明显的抑制作用，其中的首选化合物伊马替尼(imatinib)已被成功用于临床治疗慢性粒细胞性白血病和无法用手术切除的胃肠道间质瘤；美国专利5457105发明了一类喹唑啉类化合物，具有抑制表皮生长因子受体(epidermalgrowth factor receptor，EGFR)酪氨酸激酶的作用，其中的首选化合物吉非替尼(gefitinib)已被成功用于治疗非小细胞性肺癌；美国专利5747498发明了另外一类具有抑制EGFR酪氨酸激酶的喹唑啉类化合物，其中的首选化合物埃罗替尼(erlotinib)也被成功用于非小细胞性肺癌的治疗。美国专利7235576发明了一类芳基脲类化合物，对于多种蛋白酪氨酸激酶，包括PDGFR，VEGFR，Kit和Raf等都具有抑制作用，其中的首选化合物索拉非尼(sorafenib)被成功用于治疗晚期肝癌和肾癌。美国专利6573293发明了另外一类具有对多种蛋白酪氨酸激酶有抑制作用的小分子化合物，它们属于吲哚满酮类，其中的首选化合物舒尼替尼(sunitinib)已被临床用于治疗晚期肾癌和胃肠道间质瘤。

发明内容

本发明首先所要解决的技术问题是提供一类新的酪氨酸激酶抑制剂，它们为具有如通式(I)的(Z)-2-苯基-3-(吡咯-2-基)-丙烯腈衍生物或其药理上可接受的盐：

其中：

R1、R5独立地从下列基团中选择：-H、卤素、烷基、环烷基、芳香基、杂芳香基、杂脂环基、羟基、烷氧基、-C(O)NR₁₀R₁₁、-NR₁₅R₁₆、-(CO)R₁₇、-(CH₂)_rR₁₈；

R2从下列基团中选择：-H、卤素、烷基、三卤甲基、羟基、烷氧基、氰基、芳香基、杂芳香基、-NR₁₅R₁₆、-NR₁₅C(O)R₁₆、-C(O)R₁₆、-S(O)₂NR₁₅R₁₆；

R3从下列基团中选择：-H、卤素、烷基、三卤甲基、羟基、烷氧基、芳香基、杂芳香基、-(CO)R₁₇、-NR₁₅R₁₆、-NR₁₅S(O)₂R₁₆、-S(O)₂N R₁₅R₁₆、-N R₁₅R₁₆、-NR₁₅C(O)R₁₆、-SO₂R₁₉，-SO₂R₁₉中的R₁₉可从下列基团中选择：烷基、取代及未取代的芳香基、取代及未取代的芳烷基，取代及未取代的杂芳香基，取代及未取代的杂芳烷基；

R4从下列基团中选择：-H、卤素、烷基、羟基、烷氧基、-NR₁₅R₁₆；

R6、R8从以下基团中选择：-H、烷基、取代及未取代的芳香基、取代及未取代的杂芳香基；

R7是C(O)R₁₂，C(O)R₁₂中的R₁₂是-NR₁₃(CH₂)_nR₁₄，-NR₁₃(CH₂)_nR₁₄中的R₁₃是-H或者未取代的低链烷基，-NR₁₃(CH₂)_nR₁₄中的R₁₄是-NR₁₅R₁₆或-N⁺(O)R₁₅R₁₆，n是2或者3；

R9从以下基团中选择：-H、烷基、环烷基、未取代或取代的芳香基、未取代或取代的杂芳香基，R9和R8可以结合形成环烷，杂环基团；

R10和R11独立地从以下基团中选择：-H、烷基、芳香基；

R15和R16独立地从以下基团中选择：-H、烷基、以及被羟基、氨基烷基、氰基烷基、环烷基、芳香基和杂芳香基取代的低链烷基；R15和R16可以结合形成杂环基团；

R17从以下基团中选择：-H、羟基、烷氧基、芳氧基；

R18从以下基团中选择：羟基、-C(O)R₁₇、-N R₁₅R₁₆和-C(O)N R₁₅R₁₆；

r是1，2，3，或者4。

上述化合物和其药理上可接受的盐能够起到调控蛋白酪氨酸激酶的作用，由此作用而产生对蛋白酪氨酸激酶相关的疾患例如恶性肿瘤的治疗和预防效果。

优选的本发明化合物为通式(I)化合物或其药理上可接受的盐，其中：

R1，R5是-H；

R2是-Cl，-F，-Br，或者氰基；

R3是-Cl，-F，-Br，或者氰基；

R4是-H；

R6是低链烷基；

R7是-C(O)R₁₂，这里R₁₂是-N R₁₃(CH₂)_nR₁₄，这里R₁₃是-H或者未被取代的低链烷基；n是2或者3；R₁₄是-N R₁₅R₁₆，这里R₁₅和R₁₆是独立的未被取代的低链烷基；

R8是低链烷基；

R9是-H。

本发明进一步优选的化合物为式(I)化合物或其药理上可接受的盐，其中：R7优选自如下基团(但不局限于)：N-(2-二甲氨基乙基)胺基羰基，，N-甲基胺基羰基，N-(3-二甲基氨基丙基)胺基羰基，N-(2-二乙基氨基乙基)胺基羰基，N-(2-乙基氨基乙基)胺基羰基，N-(3-乙基氨基丙基)胺基羰基或N-(3-二乙基氨基丙基)胺基羰基。

本发明具体优选的化合物为通式(I)化合物或其药理上可接受的盐，其特征在于它为(但不局限于)：

5-[(Z)-2-腈基-2-(2-氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(2-溴苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(2-甲基苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(2-三氟甲基苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(2-甲氧基苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(3-甲基苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(3-三氟甲基苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(3，4-二甲氧基苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(3，4-二氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(4-甲氧基苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(4-三氟甲基苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(3-氟苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(3-氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(3-溴苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(3，4-二甲基苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(3-甲基-4-甲氧基苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(3-甲氧基-4-甲基苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(3-甲氧基苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(4-甲基苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(2，4-二氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(2，3-二氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(3-氟-4-苯磺酸基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(3-氟苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺-(2S)-羟基丁二酸盐，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(3-氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺-(2S)-羟基丁二酸盐，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(3，4-二氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺-(2S)-羟基丁二酸盐，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(2，4-二氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺-(2S)-羟基丁二酸盐，

或5-[(Z)-2-腈基-2-(2，3-二氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺-(2S)-羟基丁二酸盐。

本发明中使用的术语“烷基”指的是包括直链和支链基团的饱和脂肪烃。所述烷基优选具有1-20个碳原子，更优选为中等大小的具有1-10个碳原子的烷基，最优选为1-4个碳原子的低链烷基。所述烷基可为取代的或未取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多个各自选自以下的基团：环烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、羟基、氨基，烷氧基、芳氧基、硫代羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、C-羧基、O-羧基、硝基、甲硅烷基。

“环烷基”指的是全部为碳的单环或稠和的环(即带有一个相邻对碳原子的环)基团，其中一个或多个环不具有完全连接的Pi-电子系统。环烷基的实例(不局限于)为环丙烷、环丁烷、环戊烷、环戊烯、环己烷、金刚烷、环己二烯、环庚烷和环庚三烯。环烷基可为取代的或未取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多个各自选自以下的基团：烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、烷硫基、芳硫基、氰基、卤代、羰基、硫代羰基、C-羧基、O-羧基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、硝基、氨基。

“芳香基”指的是所有为碳的单环或是稠和环的具有完全连接的Pi-电子系统的多元环(即其带有相邻对碳原子的环)基团。芳香基可为取代的或未取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多个选自以下的基团，包括：卤代、三卤代甲基、烷基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、烷硫基、芳硫基、氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、亚硫酰基、磺酰基、氨基。

“杂芳香基”指的是单环或稠和环(即带有相邻对原子的环)基团，其在环上具有一个或多个选自氮、氧和硫的原子并且另外具有完全连接的Pi-电子系统。杂芳香基的实例(不局限于)为吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、嘧啶、喹啉、异喹啉、嘌呤或咔唑。杂芳基可为取代的或未取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多个选自以下的基团，包括：烷基环烷基、卤代、三卤代甲基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、烷硫基、芳硫基、氰基、硝基、羰基、硫代羰基、亚磺酰氨基、C-羧基、O-羧基、亚硫酰基、磺酰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、氨基。

“杂脂环基”指的是在环上具有一个或多个选自氮、氧和硫的原子的单环或稠和环。所述环也可含有一个或多个双键。然而，所述环不具有完全连接的Pi-电子系统。杂脂环可为取代的或未取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多个选自以下的基团，包括烷基、环烷基、卤代、三卤代甲基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、烷硫基、芳硫基、氰基、硝基、羰基、硫代羰基、C-羧基、O-羧基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、亚硫酰基、磺酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、氨基。

“烷氧基”指的是其中R为直链或支链的如在此定义的烷基的-OR基团。其中优选1～6个碳原子的直链或支链烷氧基，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、戊氧基、新戊氧基、己氧基等。更优选具1～4个碳原子的直链或支链烷氧基，最优选甲氧基或乙氧基。

“羟基”指的是-OH基团。

“卤素”指的是氟、氯、溴或碘。

“三卤甲基”指的是其中X为如在此定义的卤代基团的-CX₃基团。

“氰基”指的是-C≡N基团。

如上所述，本发明的化合物也可以以药理上可接受的盐类的形式存在，即通式(I)的(Z)-2-苯基-3-(吡咯-2-基)-丙烯腈衍生物的药理上可接受的盐。药学上可接受的盐类形式包括药理上可接受的酸性/阴离子盐或碱性/阳离子盐。具有代表性的有机或无机酸包括(当然不仅限于此)盐酸，氢溴酸，氢氟酸，高氯酸，硫酸，硝酸，磷酸，乙酸，丙酸，羟基乙酸，乳酸，琥珀酸，马来酸，酒石酸，柠檬酸，安息香酸，扁桃酸，甲磺酸，羟乙基磺酸，苯磺酸，草酸，棕榈酸，2-萘磺酸，对甲苯磺酸，环乙胺基磺酸，水杨酸，己糖酸，三氟乙酸。药学上可接受的碱性/阳离子盐类包括(当然不仅限于此)铝，钙，氯普鲁卡因，胆碱，二乙醇胺，乙二胺，锂，镁，钾，鈉和锌。

本发明还包括发明的化合物所构成的前体药物。所谓前体药物是指一些其它已知的或者没有公开的化合物和本发明所描述的活性化合物结合后达到比较容易给药的目的，当它进入体内后可以转化为本发明所描述的有活性化合物的而起功能作用。

本发明另一个所要解决的技术问题是提供一种药物组合物，其至少具有上述化合物的功能和效果。为此本发明采用以下技术方案，它含有：

通式(I)化合物或者/和其药理上可接受盐，

任选的药理上可接受的辅剂，

或者，所述药物组合物还含有任选的含有一种或多种已知药物化合物。

本发明另一个所要解决的技术问题是提供制备具有如上述通式(I)的(Z)-2-苯基-3-(吡咯-2-基)-丙烯腈衍生物的方法。它由通式(II)化合物与通式(III)化合物在碱性条件下缩合得到通式(I)化合物，

此方法可以通过下列有代表性的实施例来说明。本发明所涉及制备方法可通过标准有机化学方法得到必需原料，或通过一般有机化学中所阐述的方法的类似方法获得必需原料。

所述的反应在碱性条件下进行优选为反应在以下适宜的碱的存在下进行：可为有机胺碱，如吡啶、三乙胺、N-甲基吗啉、4-二甲基氨基吡啶；或为碱金属或碱土金属的碳酸盐或氢氧化物，如碳酸钠、碳酸钾、碳酸钙、氢氧化钠、氢氧化钾；或者，为碱金属或碱土金属氨化物，如氨基化钠或双(三甲硅烷基)氨化钠。

制备具有如上述通式(I)的(Z)-2-苯基-3-(吡咯-2-基)-丙烯腈衍生物的反应可在以下适宜的溶剂或稀释剂存在下进行反应，溶剂或稀释剂包括链烷醇或酯或醇如甲醇、乙醇、异丙醇或乙酸乙酯；卤代溶剂如二氯甲烷、氯仿或四氯化碳；醚如四氢呋喃或1，4-二烷；芳族溶剂如甲苯；或偶极性非质子传递溶剂如N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷-2-酮、二甲基亚砜。

本发明所述的反应温度一般为10～150℃，优选为20～120℃范围内进行反应，最优选为30～90℃。

本发明所述的上述通式(I)的(Z)-2-苯基-3-(吡咯-2-基)-丙烯腈衍生物的药理上可接受的盐可采用下述方法制备：在制备通式(I)的(Z)-2-苯基-3-(吡咯-2-基)-丙烯腈衍生物后，然后再与适宜的酸制备加成盐。

本发明再一个所要解决的技术问题是提供上述任一化合物或其药理上可接受的盐和任选的药理上可接受的辅剂制备的药物制剂在治疗或者预防有机体中和蛋白激酶相关疾病中的应用。

本发明所描述的化合物的一个重要生物学作用是可以调控蛋白酪氨酸激酶的活性。这里的蛋白酪氨酸激酶是指受体蛋白路氨酸激酶(RTKs)、非受体或″细胞″酪氨酸激酶(CTKs)。调控是指本发明所描述的化合物可以使RTKs和CTKs的催化活性发生改变，尤其是抑制RTKs和CTKs的催化活性。

受本发明化合物调控的受体蛋白激酶包括(但不局限于)VEGFR、EGFR、HER2、HER3、HER4、IR、IGF-1R、IRR、PDGFR alpha、PDGFR beta、KIT(CD117)、CSF1R、C-kit、C-fms、Flk-lR、Flk4、KDR/Flk-L Flt-l、FGFR-1R、FGFR-2R、FGFR-3R和FGFR-4R，其中优选的是VEGFR、PDGFRs和c-KIT，其中优选调控的受体酪氨酸激酶是PDGFRs、VEGFRs和c-KIT。

受本发明化合物调控的非受体酪氨酸激酶选自(但不局限于)Src、Frk、Btk、Csk、Abl、ZAp70、Fes/Fps、Fak、Jak、Ack、Yes、Fyn、Lyn、Lck、Blk、Hck、Fgr和Yrk.

本发明所描述的化合物对酪氨酸激酶的调控可以用本领域中技术人员熟知的一些体外实验方法来证明，用这种方法还可以测定这些化合物的IC50而达到优选化合物的目的。用于这些实验方法中的酪氨酸激酶可以从细胞中提取，也可以用基因工程的方法通过体外表达来得到。

本发明所描述的化合物对酪氨酸激酶调控后产生的生物学效应可以用研究人员熟知的方法，例如体外细胞培养来观察。其中的方法之一是观察本发明所描述的化合物作用于肿瘤细胞后抑制肿瘤细胞的生长和/或引起的细胞的凋亡效应。

本发明所描述的化合物对酪氨酸激酶相关疾病的治疗作用可以在疾病的动物模型中得到验证。典型的例子之一是用肿瘤的异体移植模型将人的肿瘤移植到动物例如小鼠中，然后给动物服用有效治疗剂量的本发明的化合物达到一定时间，可以观察到服药后动物的肿瘤会停止增长、体积缩小或者消失(和对照组相比)。

根据对本发明所描述的化合物进行的生物学和药理学实验的优化后得到的最佳化合物是5-[(Z)-2-腈基-2-(3，4-二氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺和其药理上可以接受的盐，在以下将此优选化合物称为8号化合物。

由于酪氨酸激酶功能的失控，尤其是功能过强和许多疾病的发生发展密切相关，因此本发明所描述的化合物对酪氨酸激酶的调控可以用来治疗许多和酪氨酸激酶相关的疾病。这些疾病中最重要的是恶性肿瘤，包括源自各种上皮细胞的癌症、来源于中胚层细胞的恶性肉瘤、来源于血液系统的白血病和来源于淋巴系统的恶性淋巴瘤以及来源于生殖细胞的恶性肿瘤，具体包括(但不局限于)肺癌、肝癌、肾癌、胃癌、大肠癌、前列腺癌、乳腺癌、食道癌，胰腺癌，卵巢癌、宫颈癌、白血病、淋巴瘤、脑瘤、甲状腺癌、泌尿生殖道癌以及恶性肉瘤。

这些疾病还包括(但并不局限于)代谢性疾病(例如糖尿病)、自身免疫性疾病、炎症性疾病、过度增殖性疾病、心脑血管疾病、以及骨关节疾病。

本发明的另一个方面是，在此描述的化合物、或者它的盐或前药可与其它的化学治疗药物联合用于治疗以上讨论的疾病和失调以获得更好的效果。典型的例证是本发明描述的化合物和已知的抗肿瘤药物联合应用可以获得更好的治疗肿瘤的目的。这些已知的抗肿瘤药物包括(但不局限于)细胞毒类药物、激素类药物、生物类抗肿瘤药、单克隆抗体类药物和最新的分子靶向性药物。

为了达到治疗上述疾病的目的，本发明所描述的化合物或者其药理上可接受的盐需要和合适的载体、赋形剂和其它辅剂混合，根据所选择的给药方法，用常规的制剂方法例如混合、溶解、制粒、包衣、研磨、乳化、包裹、包埋或冷冻干燥的方法制备成合适的剂型。

对注射剂而言，可以将本发明化合物溶解在生理学上合适的缓冲液如Hank氏溶液、林格氏溶液或生理盐水缓冲液配制成水溶液制剂，也可以分散在合适的液体载体例如油性或水溶性的介质中形成混悬液、脂质体或乳剂。对透膜给药，可在制剂中使用适于穿过屏障的渗透剂。这样的渗透剂一般为本领域的技术人员所熟知的。

对口服制剂而言，通过使活性化合物与本领域已知的药学上可接受的载体、赋形剂和辅剂混合，用本领域技术人员熟知的制剂方法能够配制成片剂、丸剂、胶囊剂、溶液剂、凝胶剂、糖浆剂、浆剂、混悬剂等。其中的赋形剂和填充剂可以是糖类，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇、纤维素制剂如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉和马铃薯淀粉，也可以是其它的材料例如明胶、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，还可加入崩解剂如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸或藻酸鈉。

片剂可以用适宜的包衣材料通过包衣技术制成糖衣片。包衣材料可使用浓的糖溶液和任选自阿拉伯胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、carbopol胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆用溶液和适宜的有机溶剂或溶剂混合物以及无害的颜料或染料组成。常用的口服制剂还包括以凝胶组成的的硬胶囊剂以及用明胶和增塑剂如甘油或山梨糖醇组成的软胶囊剂。硬胶囊剂中活性成分需要和填充剂如乳糖、粘合剂如淀粉和/或润滑剂如滑石粉或硬脂酸锐以及任选的稳定剂混合。在软胶囊中活性化合物可溶解或悬浮于适宜的液体如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇中，也可将稳定剂加入到这些制剂中。

对吸入给药，使用加压填充或雾化器和适宜的抛射剂例如(不局限于)二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷或二氧化碳，以气溶胶喷雾剂的形式来传输本发明用途的化合物。

本发明的化合物还可以用缓释制剂技术制成缓释胶囊或者其它缓释制剂而用于长期给药。

为了达到治疗的目的，可以根据上述不同制剂的特征来采取不同的给药方法。这些给药方法包括(但不局限于)口服、直肠，、透过粘膜或肠道给药；或者肌肉内、皮下、髓内、鞘内、直接心室内、静脉、动脉、玻璃体内、腹膜内、鼻内或眼内注射。给药的优选途径为口服和非肠道。

给药的方法还可以采用局部而非全身的方式给予所述化合物，例如将液体制剂的化合物直接注射到实体瘤中。此外，还可以用靶向药物传递系统例如以肿瘤特异性抗体包被的脂质体给予药物。这些脂质体将选择性地将药物运送到肿瘤组织。

本发明活性成分的药物组合还包括有效的治疗剂量，也就是指需要达到有效预防、缓解或改善疾病症状或者延长受治疗者的存活率的一定化合物能的量。药物有效剂量的研究和计算是本领域技术人员所熟知的。常规的方法是根据体外实验和动物药效学的数据来推算。有效剂量的范围大约在每天每公斤体重0.001毫克至300毫克之间，比较常用的是每天每公斤体重0.01毫克至100毫克，更合适的是每天每公斤体重0.1毫克至30毫克。

具体实施方式

第一部分化合物部分

以下实施例为本发明选取的有代表性化合物的合成，并不构成对关于本发明合成方法或在本发明包括的化合物的限制。

实施例1

5-[(Z)-2-腈基-2-(3-氟苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺的制备

将5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(2-二乙基氨基-乙基)酰胺⁽¹⁾(1.33g，5.0mmol)，间氟苯乙腈(0.85g，6.7mmol)和异丙醇(30mL)加入三颈瓶中，搅拌溶解后，滴加入4N氢氧化钠溶液(10mL)，体系室温搅拌过夜，减压浓缩除去溶剂，浓缩物用乙酸乙酯(100mL)稀释，分别用水(2×50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥后，减压蒸干，浓缩物用乙酸乙酯-正己烷处理，过滤析出固体，80℃干燥4h，即得黄色固体目标化合物5-[(Z)-2-腈基-2-(3-氟苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺(1.2g，62.8％)

m.p.156.7～157.8℃

¹H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ10.93(s，1H)，7.73(s，1H)，7.69(d，1H)，7.50(m，2H)，7.40(m，1H)，7.18(t，1H)，3.27(m，2H)，2.52(m，6H)，2.41(s，3H)，2.28(s，3H)，0.97(t，6H)

(1)J.Med.Chem.1999，42，5120

实施例2

5-[(Z)-2-腈基-2-(3-氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺的制备

同实施例1操作，用相应的间氯苯乙腈制备得到黄色固体目标化合物5-[(Z)-2-腈基-2-(3-氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺(1.51g，75.7％)

m.p.143.2～145.3℃

¹H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ10.89(s，1H)，7.76(s，1H)，7.72(s，1H)，7.62(d，1H)，7.47(dd，1H)，7.439(d，1H)，7.37(t，1H)，3.26(m，2H)，2.50(m，6H)，2.41(s，3H)，2.28(s，3H)，0.97(t，6H).

实施例3

5-[(Z)-2-腈基-2-(3-溴苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺的制备

同实施例1操作，用相应的间溴苯乙腈制备得到黄色固体目标化合物5-[(Z)-2-腈基-2-(3-溴苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺(1.47g，66.3％)

m.p.143.4～144.8℃

¹H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ10.89(s，1H)，7.88(s，1H)，7.71(s，1H)，7.66(d，1H)，7.53(d，1H)，7.41(dd，1H)，7.36(t，1H)，3.26(m，2H)，2.50(m，6H)，2.40(s，3H)，2.27(s，3H)，0.97(t，6H).

实施例4

5-[(Z)-2-腈基-2-(3-氟苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺-(2S)-羟基丁二酸盐的制备

将5-[(Z)-2-腈基-2-(3-氟苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺(0.63g，1.63mmol)及甲醇(100mL)加入到三颈瓶中，再加入(2S)-羟基丁二酸(0.236g，1.76mmol)，室温搅拌0.5h，溶解后减压浓缩除去溶剂，浓缩物中加入乙腈(25.0mL)，加热回流0.5h后，搅拌冷却至室温，再放置冰箱(5℃)冷析，过滤析出物，60℃减压烘干(4h)，即得浅黄褐色固体物5-[(Z)-2-腈基-2-(3-氟苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺-(2S)-羟基丁二酸盐(0.66g，78.4％)。

m.p.95.4～99.8℃

¹H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.18(t，J＝7.10Hz，6H)，2.30(s，3H)，2.38(dd，J＝5.5Hz，1H)，2.44(s，3H)，2.57(dd，J＝8.0Hz，1H)，3.03(m，6H)，3.50(br，2H)，4.04(dd，J＝6.0Hz，1H)，7.18(br，1H)，7.50(s，1H)，7.58(d，J＝10.5Hz，1H)，7.71(m，2H)，10.98(s，1H)

实施例5

5-[(Z)-2-腈基-2-(2，3-二氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺的制备

同实施例1操作，用相应的2，3-二氯苯乙腈制备得到黄色固体目标化合物

5-[(Z)-2-腈基-2-(2，3-二氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺(1.36g，62.8％)。

实施例6

5-[(Z)-2-腈基-2-(2，4-二氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺的制备

同实施例1操作，用相应的2，4-二氯苯乙腈制备得到黄色固体目标化合物

5-[(Z)-2-腈基-2-(2，4-二氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺(1.21g，55.9％)。

实施例7

5-[(Z)-2-腈基-2-(3-氟-4-苯磺酸基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺的制备

将5-[(Z)-2-腈基-2-(3-氟苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺(0.63g，1.63mmol)及浓硫酸(5.0mL)加入到三颈瓶中，室温搅拌反应20h，反应体系倒入一定量的水中，过滤析出物，100℃烘干(4h)，即得黄色固体5-[(Z)-2-腈基-2-(3-氟-4-苯磺酸基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺(0.69g，91.2％)。

MS m/z 463[m+1]

实施例8

5-[(Z)-2-腈基-2-(3，4-二氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺的制备

同实施例1操作，用相应的3，4-二氯苯乙腈制备得到黄色固体目标化合物

5-[(Z)-2-腈基-2-(3，4-二氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺(1.36g，62.8％)。

m.p.157.0～159.3℃

¹H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ10.89(s，1H)，7.96(s，1H)，7.74(s，1H)，7.69(d，1H)，7.64(d，1H)，7.37(t，1H)，3.27(m，2H)，2.51(m，6H)，2.40(s，3H)，2.28(s，3H)，0.97(t，6H).

实施例9

5-[(Z)-2-腈基-2-(3-氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺-(2S)-羟基丁二酸盐的制备

将5-[(Z)-2-腈基-2--(3-氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺(0.72，1.8mmol)及甲醇(100mL)加入到三颈瓶中，再加入(2S)-羟基丁二酸(0.265g，1.98mmol)，室温搅拌0.5h，溶解后减压浓缩除去溶剂，浓缩物中加入乙腈(25.0mL)，加热回流0.5h后，搅拌冷却至室温，再放置冰箱(5℃)冷析，过滤析出物，60℃减压烘干(4h)，即得浅黄褐色固体物5-[(Z)-2-腈基-2-(3-氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺-(2S)-羟基丁二酸盐(0.63g，65.7％)。

¹H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.14(t，J＝7.00Hz，6H)，2.30(s，3H)，2.35(dd，J＝5.5Hz，1H)，2.43(s，3H)，2.54(dd，J＝8.0Hz，1H)，2.96(m，6H)，3.47(br，2H，2x OH)，4.00(m，1H)，7.38(d，J＝8.0，1H)，7.47(m，1H)，7.62(d，J＝8.0Hz，1H)，7.67(br，1H)，7.73(s，1H)，7.76(s，1H)，10.97(s，1H)

实施例10

5-[(Z)-2-腈基-2-(3，4-二氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺-(2S)-羟基丁二酸盐的制备

将5-[(Z)-2-腈基-2-(3，4-二氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺(0.35g，0.81mmol)及甲醇(30mL)加入到三颈瓶中，再加入(2S)-羟基丁二酸(0.12g，0.89mmol)，室温搅拌0.5h，溶解后减压浓缩除去溶剂，浓缩物中加入乙腈(5.0mL)，加热回流0.5h后，搅拌冷却至室温，再放置冰箱(5℃)冷析，过滤析出物，60℃减压烘干(4h)，即得黄色固体物5-[(Z)-2-腈基-2-(3，4-二氯苯基)-乙烯基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸-(2-二乙氨基-乙基)-酰胺-(2S)-羟基丁二酸盐(0.4g，87.0％)。

¹H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.13(t，J＝7.00Hz，6H)，2.29(s，3H)，2.36(dd，J＝5.5Hz，1H)，2.42(s，3H)，2.54(m，1H)，2.93(m，6H)，3.45(br，2H)，4.02(dd，J＝5.50Hz，1H)，7.63(m，2H)，7.70(d，J＝8.5Hz，1H)，7.77(s，1H)，7.97(m，2H)，10.99(s，1H)

第二部分生物学和药效学

实施例11

化合物在体外对酪氨酸激酶活性抑制实验

本发明所描述的化合物或者其药理上可接受的盐对酪氨酸激酶的作用可以用标准的试剂盒来检测，例如TaKaRa Bio Inc.的Universal Tyrosine Kinase Assay Kit。其原理是观察化合物对不同的酪氨酸激酶催化酪氨酸底物磷酸化的作用，以下是检测化合物对肿瘤细胞中蛋白酪氨酸激酶抑制作用的具体操作步骤，化合物对特定的酪氨酸激酶例如不同类别的受体酪氨酸激酶也可以用同样的方法来测定：

1.酪氨酸激酶样品的制备

1)在10cm平皿中培养Hep2喉癌细胞1-5X10⁶细胞，移去培养基，用PBS洗三次；

2)加入1ml提取缓冲液，用细胞刮刀小心收集细胞，4度下10000xg离心10分钟，留取上清作为样品。

2.检测：

1)样品用激酶反应缓冲液做合适的稀释，同时加入不同浓度的化合物；

2)每个反应孔加入40ul的标准品和稀释样品；

3)每孔加入10ul的40mM ATP一2Na溶液，充分混匀，37度反应30分钟；

4)弃反应液，用洗涤液充分洗4次；

5)每孔加入100ul的封闭溶液，37度反应30分钟；

6)弃封闭液，每孔加入50ul酶标抗体，37度反应30分钟；

7)弃抗体反应液，用洗涤液充分洗4次；

8)每孔加入100ul底物溶液，37度反应15分钟；

9)每孔加入100ul反应终止液；

10)检测450mM OD值，绘制标准曲线，计算化合物对酪氨酸激酶样品抑制的IC50。

用本法测得合成化合物对酪氨酸激酶抑制的IC50值在6-600nM之间，其中优选的8号化合物的IC50为6nM。

实施例12

化合物在体外对肿瘤细胞增殖的抑制作用

本发明优选化合物对肿瘤细胞增殖的抑制作用可以在体外用细胞培养的技术来测定具体操作步骤如下：

1.在96孔培养板上加入一定量肿瘤细胞(每孔加入细胞的数量根据细胞生长的速度而定，一般在2000到200000之间)；

2.细胞培养4小时后，把培养液换成含0.5％FBS的1640培养基，培养过夜；

3.弃上清液，每孔加入180ul无血清的1640培养液，然后再加入20ul预先配制好的不同浓度的化合物；1小时后，每孔再加入FBS使其终浓度为0.5％，继续培养24小时；

4.每孔加20ul MTT，孵育4小时；弃上清液，每孔加入200ul DMSO溶液，混匀，在570nm测吸光度。

5.根据不同浓度化合物的光吸收值可以计算出该化合物的IC50。

经测定，本发明所述化合物对肿瘤细胞增殖抑制的IC50值在1.92-25.6uM之间，其中优选的8号化合物对Hep2喉癌细胞增殖的IC50浓度是1.97uM，对SW620大肠癌细胞增殖的IC50是1.92uM。

实施例13

优选8号化合物在动物体内对肿瘤生长的抑制药效实验

本发明优选的8号化合物对肿瘤生长的药效学实验可以用人类肿瘤细胞在裸鼠的异种移植模型来进行，具体操作如下：

1.将人体Hep2喉癌肿瘤细胞植入裸鼠的后胁腹，每只动物植入5x10⁶细胞，每组8只动物；

2.在植入细胞的同一天起给动物每天口服8号化合物一次，剂量分别为每天每公斤体重25mg，50mg，100mg，连续服用21天；

3.每隔三天测定对照组和给药组肿瘤的大小，以长x宽x高来计算肿瘤的体积

4.根据给药组和对照组肿瘤体积的大小来计算8号化合物对肿瘤生长的抑制率实验结果发现8号化合物在21天后对Hep2肿瘤生长的抑制率为85.6％，经t检验和对照组有着显著差异。