含有蛋白激酶B抑制剂和表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂的药物组合物及其应用

摘要

本发明涉及一种含有蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂与表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂的药物组合物及其在制备治疗肠癌、肝癌、肺癌、胃癌、脑瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌的药物中的应用，本发明药物组合物具有显著的协同效应，提高了药物的疗效，降低了给药剂量，减少了副作用的发生。

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其在制备治疗癌症的药物中的应用，具体涉及含有蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂的药物组合物及其在制备治疗肠癌、肝癌、肺癌、胃癌、脑瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌的药物中的应用。

背景技术

世界卫生组织调查报告表明，全球癌症状况日益严重，今后20年新患者的人数将由目前的每年1000万增加到1500万，因癌症而死亡的人数也将由每年的600万增加至1000万。其中肺癌为常见的恶性肿瘤之一，源于各级支气管上皮，分为细胞肺癌和非小细胞肺癌。结肠癌的发病与环境、生活习惯，尤其是饮食方式有关。一般认为高脂肪饮食和纤维素不足是主要发病原因。随着生活水平的提高，饮食结构的改变，结肠癌的发病率呈逐年上升趋势；胰腺癌是恶性程度较高的消化系统肿瘤之一，发病率呈逐年上升趋势。由于起病隐匿，缺乏有效的早期诊断方法，确诊时往往已到晚期或发生转移，晚期患者中位生存期不超过六个月，因此研究胰腺癌的治疗新方法迫在眉睫。

目前已上市的抗肿瘤药物较多，如烷化剂药物、抗代谢药物、抗肿瘤抗生素、免疫调节剂等，但是大多药物由于毒性较大，病人不耐受。随着对肿瘤的发生发展的分子机制研究越来越清楚，分子靶向治疗多种恶性肿瘤受到了广泛的关注和高度重视。分子靶向药物选择性高、广谱有效，其安全性优于细胞毒性化疗药物，是目前肿瘤治疗领域发展的新方向。

Akt/PKB是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，属于cAMP依赖的蛋白激酶A、蛋白激酶G、蛋白激酶C超家族，它是PI3K/Akt通路中的关键分子，通过磷酸化mTOR、Bad、GSK3、mdm2、caspase家族等多种作用底物，在促进肿瘤细胞的生长、增殖、抑制细胞凋亡，促使细胞侵袭和转移，促进血管生成，抵抗化疗和放疗中细胞的凋亡等方面起重要作用。Akt受抑制后将会抑制大部分下游分子，控制肿瘤发展和转移，Akt/PKB信号通路异常与肿瘤发生发展关系密切，Akt已成为抗肿瘤治疗的一个重要新靶点。哌立福新(perifosine)为脂类Akt抑制剂，对前列腺癌、胰腺癌、肺癌等治疗效果的临床试验正在进行中；TCN-p(Triciribinephosphate)于2008年被FDA批准用于淋巴瘤的治疗。

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)在肿瘤的发生发展中起重要作用，它和配体结合后，促发级联反应导致细胞增殖、血管生成、转移和凋亡抑制。包括非小细胞肺癌在内的多重实体瘤中，EGFR基因常过表达，该基因的表达和某些肿瘤的不良预后相关。表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂与ATP可逆性竞争酪氨酸激酶的细胞内代谢区域，抑制酶的自动磷酸化和下游信号的传递。已上市的药物有如吉非替尼(Gefitinib，Iressa)、埃罗替尼(Erlotinib，Taceva)被批准用于晚期非小细胞肺癌的治疗，联合吉非替尼或埃罗替尼与卡铂+紫杉醇/顺铂+吉西他滨用于晚期非小细胞肺癌的治疗方案并没有出现协同作用，在总体生存时间上无明显差异。

随着肿瘤分子生物学的研究进展，肿瘤分子靶向治疗已成为肿瘤研究的热点，在多种肿瘤的治疗中发挥了重要的作用。然而，大部分肿瘤的生物学行为并非由单一信号传导通路所支配，而是多个信号传导通路共同起作用的，因此联合用药针对多靶点进行靶向治疗将不仅旨在减少或延缓耐药性的出现、降低毒性，而且通过多种药物对癌细胞杀伤的协同作用取得更好的疗效。

发明内容

针对以上技术缺陷，本发明提供一种药物组合物及其在制备治疗肠癌、肝癌、肺癌、胃癌、脑瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌的药物中的应用，具体为含有蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂与表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂的药物组合物在制备治疗肠癌、肝癌、肺癌、胃癌、脑瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌的药物中的应用。

本发明含有蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂与表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂的药物组合物中，所述蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂可以为任何结构类型的蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂的药物，如Wortmannin、哌立福新或TCN-p。

本发明药物组合物中的蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂优选为：TCN-p，其结构式为式I。

本发明药物组合物中，所述组分不限于TCN-p药物本身，还可以是其可药用的盐，TCN-p的水合物、衍生物或如US4123524专利申请中所披露的各种TCN-p的类似物。

本发明中，所述表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂可以为任何结构类型的表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂的药物，如吉非替尼、埃罗替尼、Canertinib或PKI-166，其中，Canertinib由Pfizer公司研发；PKI-166由Pfizer公司研发。

本发明药物组合物中表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂优选为吉非替尼或埃罗替尼或其组合，其中埃罗替尼为US5747498中所记载的式II的化合物；

本发明药物组合物中，所述组分不限于上述药物本身，还可以是它们的水合物、类似物、衍生物、游离碱及其它有机或无机的盐。

本发明含有蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂的药物组合物中，蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂的摩尔比为2.0-20∶1.0-20；优选摩尔比为5.0-10∶2.5-10。

本发明含有蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂的药物组合物可以用于制备治疗各种肿瘤的药物，所述肿瘤包括但不限于肠癌、肝癌、肺癌、胃癌、脑瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌。

本发明优选蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂的药物组合物用于制备治疗肺癌、结肠癌及胰腺癌的药物中的应用。

在本发明药物组合物用于制备治疗肺癌、结肠癌及胰腺癌的药物的应用中，所述TCN-p和埃罗替尼的摩尔比为5.0-10.0∶2.5-10.0；优选为TCN-p和埃罗替尼的摩尔比为7.5-10.0∶5.0-10.0；更进一步优选TCN-p和埃罗替尼的摩尔比为10.0∶10.0。

含有蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂与表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂组合物在制备治疗肠癌、肝癌、肺癌、胃癌、脑瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌的药物的应用中，在将本发明组合物制成同时给药的药剂的方案中，蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂可以含在同一种药物制剂如片剂或胶囊中，也可以将蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂分别做成制剂，如分别做成片剂或胶囊，并采用本领域常规的方式将它们包装或结合在一起，患者然后按照药品说明书的指示同时服用；在将本发明组合物制成先后给药的药剂的方案中，可以将蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂分别做成不同的制剂，并采用本领域常规的方式将它们包装或结合在一起，患者然后按照药品说明书指示的先后顺序进行服用，或将上述组合物中的两种成分制成一种控释的制剂，先释放组合物中的一种成分、然后再释放组合物中的另一种成分，患者只需要服用该控释组合物制剂；在将本发明组合物制备成交叉给药的药剂的方案中，可以将蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂分别做成不同的制剂，并采用本领域常规的方式将它们包装或结合在一起，患者然后按照药品说明书指示的交叉顺序服用，或者将该药物组合物制备成蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂交叉释放的控释制剂。

蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂与表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂组合物在制备治疗肠癌、肝癌、肺癌、胃癌、脑瘤、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌或前列腺癌的药物中的应用中，所述组合物中的蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂可以同时使用或以任何先后的顺序使用，如可以将蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂同时给患者服用；也可以先将蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂药物给患者服用、然后服用表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂，或先服用表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂、然后服用蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂药物，对于两者服用的时间间隔没有特别要求，但优选服用两种药物的时间间隔不超过一天；或者两种药物交替给药。

本发明中，可将本发明蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂采用本领域常规的方法制备成适于胃肠道给药或非胃肠道给药的药物制剂，本发明优选将蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂制成胃肠道给药的药物制剂，其制剂形式可以为常规片剂或胶囊、或控释、缓释制剂。在本发明蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂组合物的药物制剂中，根据不同的制剂形式和制剂规格，所述组合物在制剂中的含量可以为质量计为1-99％，优选为10％-90％；制剂使用的辅料可采用本领域常规的辅料，以不和本发明组合物发生反应或不影响本发明药物的疗效为前提；所述制剂的制备方法可采用本领域常规的制备方法进行制备。

本发明中，组合物的制备方法没有什么限制，蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂两者可以进行直接混合然后做成制剂，或分别和/或相应的辅料混合分别做成制剂，然后再按照本领域常规的方式包装在一起，或分别和相应的辅料混合然后再混合做成制剂。

本发明中的药物组合物的给药剂量根据给药对象、给药途径或药物的制剂形式不同可以进行适当的变化，但以保证该药物组合物在哺乳动物体内能够达到有效的血药浓度为前提。

本发明分别进行了蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂组合杀死NCI-H1650(肺癌细胞株)、HCT-116(结肠癌细胞株)、Panc-10.05(胰腺癌细胞株)的试验，结果提示，本发明蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂与表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂组合治疗肺癌、结肠癌及胰腺癌具有显著的协同效应，提高了药物的疗效，降低了用药剂量，减少了副作用的发生。

具体实施方式

结合以下实施例对本发明作进一步的阐述，但本发明并不受限于此。

实施例

试剂和方法：

细胞：NCI-H1650(肺癌细胞株)、HCT-116(结肠癌细胞株)、Panc-10.05(胰腺癌细胞株)，均购自American Type Culture Collection(ATCC)，Rockville，MD，USA。

药品：以下实施例中所用药物组合物均按下列方法1或方法2所述来制备；蛋白激酶B(Akt/PKB)抑制剂TCN-p参照专利US4123524合成而得；表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂埃罗替尼参照专利US5747498合成而得。

方法1：准确称量相应的药物组合物的各组分，以二甲基亚砜分别溶解，各自配成10mM的贮存液，在-20℃下保存，使用时用新鲜的培养基稀释到合适的浓度，然后各自取1微升的各组分的溶液，混合在一起备用。所有的试验中，二甲基亚砜的最终浓度应≤5g/L，以便不影响细胞的活性。

将所有的细胞于含10％小牛血清、100kU/L青霉素、100mg/L链霉素的RPMI 1640培养基中，37℃、5％CO₂的湿度条件下培养，在加药的前一天，在六孔板上进行细胞接种2×10⁵/孔，然后向细胞中加入按上述方法制备的药物组合物溶液，使各组分达到其工作浓度，具体见表中第1-6。

加药5天之后，通过台盼蓝(Trypan Blue)测定细胞死亡，细胞通过在37℃用胰蛋白酶钠/EDTA进行胰酶化作用10分钟。因为死亡的细胞从培养器上脱落进入培养基中，通过在1200转/分钟下离心收集所有的细胞，然后再用培养基重新悬浮沉淀物，与台盼蓝染料混合。染色之后，用光学显微镜和血细胞计数器进行计数。被染料染成蓝色的计为死亡细胞。随机选取500个细胞进行计数，死亡的细胞以占总计数细胞的百分比来表达。

方法2：准确称量相应的药物组合物的各组分，以二甲基亚砜分别溶解，各自配成10mM的贮存液，在-20℃下保存。使用时用新鲜的培养基稀释到合适的浓度，然后各自取1微升的各组分的溶液备用。所有的试验中，二甲基亚砜的最终浓度应≤5g/L，以便不影响细胞的活性。

将所有的细胞于含10％小牛血清、100kU/L青霉素、100mg/L链霉素的RPMI 1640培养基中，37℃、5％CO₂的湿度条件下培养，在加药的前一天，在六孔板上进行细胞接种2×10⁵/孔，然后以任意次序向细胞中加入按上述方法制备的药物组合物的各组分溶液，使各组分达到其工作浓度，具体见表中第7-9。

加药5天之后，通过台盼蓝(Trypan Blue)测定细胞死亡，细胞通过在37℃用胰蛋白酶钠/EDTA进行胰酶化作用10分钟。因为死亡的细胞从培养器上脱落进入培养基中，通过在1200转/分钟下离心收集所有的细胞，然后再用培养基重新悬浮沉淀物，与台盼蓝染料混合。染色之后，用光学显微镜和血细胞计数器进行计数。被染料染成蓝色的计为死亡细胞。随机选取500个细胞进行计数，死亡的细胞以占总计数细胞的百分比来表达。

下列表1所示的药物组合中，第1-6的组合按方法1，第7-9的组合按方法2制备。

表1

实施例1不同比例的TCN-p与埃罗替尼的组合协同增效促进NCI-H1650细胞死亡试验，见表2。

表2

  组别  使用量(μM)  细胞死亡率％  对照组  2.3±0.8

在考察相关化合物导致肺癌细胞株NCI-H1650细胞死亡的试验中，发现当单独使用7.5μMTCN-p或更低浓度、5.0μM埃罗替尼或更低浓度时只有很少量的细胞死亡；即使增加单药的浓度至10.0μMTCN-p或10.0μM埃罗替尼时，也只有约15％细胞死亡；而当两者在较低浓度下合用时(7.5μMTCN-p+5.0μM埃罗替尼)则产生明显的协同作用，导致40％的癌细胞死亡；当两者以10.0μMTCN-p+10.0μM埃罗替尼的比例合用时，则产生更加明显的协同作用，导致约85％的癌细胞死亡。

实施例2不同比例的TCN-p与埃罗替尼的组合协同增效促进HCT-116细胞死亡试验，见表3。

表3

在考察相关化合物导致结肠癌细胞株HCT-116细胞死亡的试验中，发现当单独使用7.5μMTCN-p或更低浓度、5.0μM埃罗替尼或更低浓度时只有很少量的细胞死亡；即使增加单药的浓度至10.0μMTCN-p或10.0μM埃罗替尼时，也只有约10-15％细胞死亡；而当两者在较低浓度下合用时(7.5μMTCN-p+5.0μM埃罗替尼)则产生明显的协同作用，导致约40％的癌细胞死亡；当两者以10.0μMTCN-p+10.0μM埃罗替尼的比例合用时，则产生更加明显的协同作用，导致约90％的癌细胞死亡。

实施例3不同比例的TCN-p与埃罗替尼的组合协同增效促进Panc-10.05细胞死亡试验，见表4。

表4

在考察相关化合物导致胰腺癌细胞株Panc-10.05细胞死亡的试验中，发现当单独使用7.5μM TCN-p或更低浓度、5.0μM埃罗替尼或更低浓度时只有很少量的细胞死亡；即使增加单药的浓度至10.0μMTCN-p或10.0μM埃罗替尼时，也只有约10-15％细胞死亡；而当两者在较低浓度下合用时(7.5μM TCN-p+5.0μM埃罗替尼)则产生明显的协同作用，导致约60％的癌细胞死亡；当两者以10.0μMTCN-p+10.0μM埃罗替尼的比例合用时，则产生更加明显的协同作用，导致约90％的癌细胞死亡。