纹缟虾虎鱼人工催产授精繁育方法

摘要

纹缟虾虎鱼人工催产授精繁育方法，涉及虾虎鱼的人工繁殖，需要提供一种纹缟虾虎鱼人工繁育方法，本发明由亲鱼筛选、催熟、授精、孵化、仔鱼培育组成，亲鱼催熟用促黄体素释放激素类似物、马来酸地欧酮和绒毛膜促性腺激素，其特征是3种激素分两次催熟使用；催熟时养殖水温18－21℃，盐度2－6，溶解氧3.5－6.5mg/L，pH 7.5～9.0；在第2次催熟后，经过8－10小时，选取成熟卵、成熟精子用于人工授精：将激活的精子浇于卵子上充分接触获得受精卵；将受精卵置于孵化池中孵化；将孵出的仔鱼置于培育池中孵化，在仔鱼出膜后第3天开始在水中放入小球藻和鸡蛋的蛋黄粉末供其开口摄食。本发明用于纹缟虾虎鱼人工繁育。

说明书

技术领域：

本发明涉及虾虎鱼科鱼类的人工繁殖方法。

背景技术

鱼类人工繁殖方法主要包括3种：①打针催产：人工注射催熟催产药剂，使精卵成熟后进行人工授精；②直接进行人工授精：将捕到的亲鱼进行筛选后，直接取出精子与卵子进行人工授精；③生态繁殖方法：将亲鱼放入人工调控生态因子的养殖箱中，使其自然成熟、发情、产卵、受精、孵化。人工繁育鱼类苗种时打针催产方法是通过定期注射特定的外源激素，促进鱼类成熟与产卵，到达效应期后采取特定的人工授精方法，混合精子与卵子获得受精卵，受精卵发育成胚胎，在特定的孵化环境中直至仔鱼出膜，仔鱼摄食特定开口饵料后逐渐发育生长为商品鱼。人工催产授精繁育鱼类苗种的办法看似简单，但自然界每种鱼类都经历了漫长的进化史，都形成了各自繁育特点，因此在人工繁殖时，创造发明的人工繁育方法必须适合各自鱼类的生理生态学特点，才能获得成功。目前许多鱼类苗种的人工繁育方法仍未成功，人工养殖时仍需依靠捕捞野生苗种。如鳗鲡苗种的人工繁育方法，虽然国内外众多单位投入大量的人力财力，包括中国也在过去的多个“国家五年重点科技攻关项目”中进行了研究，也取得了一些进展，但目前鳗鲡苗种的人工繁育方法仍未完全获得成功，鳗鲡养殖仍是靠每年捕捞鳗苗维持。当然也有许多鱼类苗种的繁育方法，经过大量研究，终于发明成功，并申请了发明专利，如暗纹东方豚、半滑舌鳎、大弹涂鱼、鱤鱼、裂腹鱼、翘嘴红鲌、沙塘鳢、香鱼等。

虾虎鱼类种类繁多，刘群等在1997年报道全世界虾虎鱼类有7个科，263个属，约1720种左右，其中仅虾虎鱼科就有200个属，至少1500种之多，成为鱼类中最大的一个科。虾虎鱼科鱼类属鲈形目、虾虎鱼亚目，各种类之间外部形态相似，无眼睑，背鳍两个，不相连，左右腹鳍愈合成吸盘状。虾虎鱼科鱼类分布广泛，淡水、海水品种皆有，且一些虾虎鱼生活在咸淡水水域，盐度适应范围较广。由于虾虎鱼科鱼类大多为野生品种，经济价值有一定的局限性，因此国内外对虾虎鱼科鱼类的研究深入很少。目前对虾虎鱼科的繁殖生物学研究，主要包括个体生殖力、繁殖习性与群体组成、早期生活史等报道。关于虾虎鱼科鱼类苗种繁育的报道，赵斌，范丽萍，王建等人于2005年在《渔业现代化》期刊上报道矛尾复虾虎鱼的繁殖情况，主要依靠天然成熟的矛尾复虾虎鱼亲鱼，在池塘中自然产卵并孵化出鱼苗后，人工投喂豆浆等饵料，然后捕捞池塘中的鱼苗。他们的繁殖技术是自然条件下的繁殖技术，其亲本是天然环境中自然成熟的亲鱼。

纹缟鰕虎鱼(Tridentiger trigonocephalus)属鲈形目(Perciformes)鰕虎鱼科(Gobiidae)缟鰕虎鱼属(Tridentiger)，该鱼喜穴居，以小虾、小鱼等为食，雌雄个体有明显差异。纹缟鰕虎鱼为沿岸广盐性底栖鱼类，主要分布于亚洲东北部的太平洋沿岸，在我国主要见于黄渤海、东海、南海和台湾海峡等水域，亦是长江口低盐度区域常见的小型鱼类。纹缟鰕虎鱼的繁殖期较长，性腺成熟度不统一，精子与卵子存在发育不同步的问题，而且捕到的亲鱼中雌鱼较多，而雄鱼较少。目前未见有关纹缟鰕虎鱼苗种人工繁育方法的报道。

纹缟虾虎鱼作为长江口水域生态系统的关键种之一，在生态系统的物质传递与能量流动中具有重要作用，亦是长江口中华鲟幼鱼最主要的饵料生物之一，因此发明纹缟虾虎鱼苗种人工繁育方法，对于长江口生态环境的可持续发展以及中华鲟物种的保护具有重要的意义。

发明内容

本发明目的在于针对纹缟虾虎鱼人工繁殖与育苗技术所存在的问题，提供一种纹缟虾虎鱼人工催产授精的苗种繁育方法。

本发明的技术方案由亲鱼筛选、催熟、人工授精、孵化、仔鱼培育依次结合组成，首先通过亲鱼头部形态与可量性状的比值进行雌雄鉴定(头部宽平且颊部肌肉突出为雄鱼特征，头部三角形为雌鱼特征；雄鱼体长/体高、头长/眼径和头长/吻长显著大于雌鱼，而体长/头长、头长/眼间距显著小于雌性亲鱼)并筛选(雄鱼的胸鳍呈亮黄色，并有明显黑色斑点在胸鳍上；雌鱼腹部膨大突出，生殖孔外突，呈红色)发育较好的亲鱼；亲鱼催熟注射用的激素为促黄体素释放激素类似物(LHRH-A₂)、马来酸地欧酮(DOM)和绒毛膜促性腺激素(HCG)，3种激素用生理盐水溶解混合，其特征是：每公斤鱼体重用的激素剂量为LHRH-A₂10微克、DOM 4.8毫克、HCG 1600IU(国际单位)这3种激素剂量分两次催熟使用(雌雄鱼剂量相同)，相隔时间为12小时，第1次催熟使用LHRH-A₂4微克、DOM 4.8毫克和1毫升生理盐水，第2次催熟使用LHRH-A₂6微克、HCG 1600IU和1毫升生理盐水；催熟时养殖环境条件控制在水温18-21℃，盐度2-6，溶解氧3.5-6.5mg/L，pH 7.5～9.0；在第2次催熟后，在水温20℃条件下，经过8-10小时即进行挤卵与挤精，先挤出雌鱼卵子检查其成熟度，选取卵子圆形呈黄色、油球较多且具有较好光泽度、卵膜外侧粘着丝发达的成熟卵用于人工授精：然后检查精子成熟度，选取精巢饱满呈乳白色、精巢表面充满精液的成熟精子用于人工授精：精子遇水后活力在80％以上，将激活的精子浇于卵子上，用镊子搅动让卵子与精子充分接触受精，即获得受精卵；将受精卵放在筛绢网上，置于孵化池中孵化，孵化池池底和池壁铺设黑色瓷砖；孵化条件控制在温度17-21℃，每昼夜光照12h以上，pH 7.5-9.5，盐度为4-6，溶氧6mg/L以上，保持水体的流速维持在1厘米/秒以下，经过150-200小时仔鱼即可破膜而出；将孵出的仔鱼置于培育池中孵化，培育条件在温度18-21℃，每昼夜光照12h，pH 7.5-9.5，盐度为2-4，在仔鱼出膜后第3天开始在水中放入小球藻和鸡蛋的蛋黄粉末供其开口摄食(纹缟鰕虎鱼仔鱼3-4日龄时能够摄食外部食物，发育进入外源营养和内源营养混合期)，5日龄时仔鱼卵黄囊完全消失，完成早期仔鱼发育阶段。

本发明的优点表现在选择亲鱼催产所需的激素适宜的剂量以及有效的催产方法，利用纹缟虾虎鱼生殖的生理和生态特性，选择能够获得高受精率的成熟卵，并采用内分泌调控和模拟生殖环境的方法，通过人工授精方法，极大提高了亲鱼的催熟率、受精率与出苗率，使得纹缟虾虎鱼人工繁殖首次获得成功，取得突破性的积极效果。

具体实施方式

本发明操作按如下次序进行：

1.亲鱼筛选：将自然水域捕捞的纹缟鰕虎鱼亲鱼，充氧运回繁殖地。首先进行雌雄鉴定，头部宽平且颊部肌肉突出为雄鱼特征，头部三角形为雌鱼特征，在外部形态上可通过肉眼观察亲鱼头部形状直接区分亲鱼性别，为雌雄鱼的挑选提供快速的鉴定方法。另外雌雄亲鱼体长/体高、体长/头长、头长/眼径和头长/眼间距之间存在极显著差异，头长/吻长存在显著差异，其中雄鱼体长/体高、头长/眼径和头长/吻长显著大于雌鱼，而体长/头长、头长/眼间距显著小于雌性亲鱼，通过形态可量性状的比值亦可以方便的进行雌雄鉴定(见表1)。雌雄鉴定后，筛选发育较好的亲鱼进行繁殖，筛选特征为雌鱼的腹部膨大突出，生殖孔外突，呈红色；雄鱼的胸鳍呈亮黄色，并有明显黑色斑点在胸鳍上。

表1纹缟虾虎鱼雌、雄亲鱼形态学可量性状比例值

2.亲鱼催熟：在5平方米水泥池中放入20对纹缟鰕虎鱼亲鱼，即放入20尾雌纹缟鰕虎鱼亲鱼和20尾雄纹缟鰕虎鱼亲鱼。水泥池中有25个瓦片等筑成的洞穴，可供纹缟鰕虎鱼亲鱼钻入其中，催熟时养殖环境条件控制如下：水温18-21℃，盐度2-6，溶解氧3.5-6.5mg/L，pH 7.5～9.0。暂养1周稳定后采用激素催熟，采用的激素为促黄体素释放激素类似物(LHRH-A₂)、马来酸地欧酮(DOM)和绒毛膜促性腺激素(HCG)，3种激素用生理盐水溶解混合，对于每公斤鱼体重采用的激素剂量为LHRH-A₂10微克、DOM 4.8毫克、HCG1600IU(国际单位)，雌雄鱼剂量相同，上述剂量分成两次催熟，相隔时间为12小时，第1次催熟剂量为LHRH-A₂4微克、DOM 4.8毫克和1毫升生理盐水，第2次催熟剂量为LHRH-A₂6微克、HCG 1600IU和1毫升生理盐水。

3.人工授精：亲鱼催熟后，在水温20℃条件下，经过8-10小时即可挤卵与挤精。采用半干法进行人工授精。先挤出雌鱼卵子检查其成熟度，选取具有以下特征的成熟卵用于人工授精：卵子圆形呈黄色；油球较多且具有光泽度；卵膜外侧粘着丝发达。然后检查精子成熟度，选取具有以下特征的成熟精子用于人工授精：精巢饱满呈乳白色；精巢表面充满精液；精子遇水后活力在80％以上。半干法人工授精的操作过程如下：取雌鱼卵巢，在培养皿中用镊子将卵子分开，同时取雄鱼精巢，剪成小块，置于研钵内研磨后，加少许4‰海水激活精子，立即将激活的精子浇于卵子上，用镊子搅动让卵子与精子充分接触受精，即可获得受精卵。采用这样的人工授精方法具有较高的受精率(见表2-5)

4.受精卵孵化：将受精卵放在筛绢网上，置于孵化池中孵化，孵化池池底和池壁铺设黑色瓷砖。孵化条件控制如下：温度17-21℃，每昼夜光照12h以上，pH 7.5-9.5，盐度为4-6，溶氧6mg/L以上，保持水体具有缓慢的流速，1厘米/秒以下。经过150-200小时仔鱼即可破膜而出。在这样合适的环境下具有较高的孵化率(见表2-5)。

表2不同温度中纹缟虾虎鱼的受精率、孵化率与发育时间

表3不同光照条件中纹缟虾虎鱼的受精率、孵化率与发育时间

表4不同pH中纹缟虾虎鱼的受精率、孵化率与发育时间

表5不同盐度中纹缟虾虎鱼的受精率、孵化率和孵化时间

5.仔鱼培育：将孵出的仔鱼置于培育池中孵化，培育条件控制如下：温度18-21℃，每昼夜光照12h，pH 7.5-9.5，盐度为2-4，在此条件睛仔鱼具有较高的生存活力指数(表6-9)。在仔鱼出膜后第3天开始在水中放入小球藻和鸡蛋的蛋黄粉末供其开口摄食。刚出膜的纹缟鰕虎鱼仔鱼身体透明，全长2.534±0.078mm，体高0.559±0.053mm，卵黄囊长径0.421±0.047mm，卵黄囊短径0.369±0.038mm，油球偏近于卵黄囊前端，仍处于内源营养时期，3-4日龄时能够摄食外部食物，发育进入外源营养和内源营养混合期，5日龄时仔鱼卵黄囊完全消失，完成早期仔鱼发育阶段。

表6饥饿时不同温度中纹缟虾虎鱼仔鱼的成活率和生存活力指数SAI

表7饥饿时不同光照条件下纹缟虾虎鱼仔鱼的成活率和生存活力指数SAI

表8饥饿时不同pH中纹缟虾虎鱼仔鱼的成活率和生存活力指数SAI

表9饥饿时不同盐度中纹缟鰕虎鱼仔鱼的成活率和生存活力指数SAI