包含吡嗪衍生物的药物组合物和使用吡嗪衍生物的联合用药的方法

摘要

披露了药物组合物，其包含下式表示的吡嗪衍生物[其中R

说明书

技术领域

[0001]

本发明涉及包含吡嗪衍生物或其盐和一种或多种神经氨酸酶抑制剂的药物组合物，该药物组合物用于治疗(例如治疗或预防)病毒疾病。此外，本发明涉及使用吡嗪衍生物或其盐和神经氨酸酶抑制剂的联合用药治疗(例如治疗或预防)流感的方法。

背景技术

[0002]

因流感病毒导致的流感病毒感染(下文称作流感)时常为致命之症。在近年来，已经出现了诸如禽流感这类病毒，它们表现出对人的强致病性。禽流感存在广泛流行的威胁。

然而，适用于流感的药物远少于抗微生物药等。例如，目前使用的金刚烷胺和奥司他韦存在问题，诸如对它们的抗药性。

已经讨论了使用抗流感病毒药的联合用药的方法，目的在于减少流感病毒的抗药性，促进治疗作用和/或减少副作用等。然而，联合用药中使用的药物在数量上有限并且始终无法产生令人满意的作用。

[0003]

例如，已知神经氨酸酶抑制剂为对流感病毒表现出作用的药物。作为在流感病毒表面上发现的突起糖蛋白的神经氨酸酶是感染咽喉或支气管细胞并且增殖以传播至其相邻细胞的流感病毒所需的。抑制神经氨酸酶可以阻止这类流感病毒传播至相邻细胞，例如，神经氨酸酶抑制剂奥司他韦在体内被转化成其活性形式GS-4071，其表现出抗病毒作用，使得它抑制流感病毒上的神经氨酸酶(非-专利对比文件1)。奥司他韦和扎那米韦(zanamivir)作为神经氨酸酶抑制剂商购。仍在研发和研究了这类药物。

另一方面，已知具有抗病毒活性的吡嗪衍生物(专利对比文件1)。已知该吡嗪衍生物在胞内核糖基磷酸化时表现出抗病毒作用，使得它抑制病毒RNA聚合酶(专利对比文件2)。

然而，迄今为止尚不了解包含神经氨酸酶抑制剂和吡嗪衍生物的药物组合物和使用神经氨酸酶抑制剂和吡嗪衍生物的联合用药的方法。

[0004]

专利对比文件1：WO00/10569出版物

专利对比文件2：WO03/015798出版物

非-专利对比文件1：Japanese Journal of Clinical Medicine，2003，vol.61，p.1975-1979

发明公开

本发明解决的技术问题

[0005]

对具有强抗流感病毒活性，几乎没有副作用并且用于治疗(例如治疗或预防)流感的药物组合物和治疗流感的方法存在需求。

解决问题的方式

[0006]

在这类情况中，本发明者已经进行了深入研究且因此通过找到包含由下列通式[1]表示的吡嗪衍生物或其盐和一种或多种神经氨酸酶抑制剂的药物组合物而完成了本发明：

[式1]

其中R¹和R²相同或不同并且各自表示氢原子或卤原子；且R³表示氢原子或氨基保护基，

该药物组合物具有强抗流感病毒活性并且用于治疗流感；并且使用这些化合物的联合用药的方法用作治疗流感的方法。

本发明的优点

[0007]

包含吡嗪衍生物或其盐和一种或多种神经氨酸酶抑制剂的药物组合物具有强的抗流感病毒协同作用活性并且用于治疗(例如治疗或预防)流感。使用这些化合物的联合用药的方法用作治疗(例如治疗或预防)流感的方法。

本发明的最佳实施方式

[0008]

在下文中详细描述本发明。

在本说明书中，除非另作陈述，否则卤原子意指氟、氯、溴和碘原子；酰基意指，例如甲酰基，直链或支链C_2-12烷酰基(例如乙酰基、丙酰基、异戊酰基和新戊酰基)，芳-C_1-6烷基羰基(例如苄基羰基)，环烃羰基(例如苯甲酰基和萘甲酰基)，杂环羰基(例如烟酰基，噻吩甲酰基，吡咯烷子基羰基和糠酰基)，琥珀酰基，戊二酰基，马来酰基，邻苯二甲酰基和衍生自氨基酸的直链或支链α-氨基烷酰基(可以为N-末端被保护的)(氨基酸的实例包括甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，半胱氨酸，甲硫氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，精氨酸，赖氨酸，组氨酸，羟赖氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸，色氨酸，脯氨酸和羟脯氨酸)；烷氧羰基意指，例如直链或支链C_1-12烷氧羰基，诸如甲氧羰基、乙氧羰基、1，1-二甲基丙氧羰基、异丙氧羰基、2-乙基己氧羰基、叔丁氧羰基和叔戊氧羰基；芳烷氧羰基意指，例如芳-C_1-6烷氧羰基，诸如苄氧羰基和苯乙氧羰基；芳氧羰基意指，例如苯氧羰基；芳烷基意指，例如芳-C_1-6烷基，诸如苄基、二苯基甲基、三苯甲基、苯乙基和萘基甲基；烷氧基烷基意指，例如C_1-6烷氧基-C_1-6烷基，诸如甲氧基甲基和1-乙氧基乙基；芳烷氧基烷基意指，例如芳-C_1-6烷氧基-C_1-6烷基，诸如苄氧基甲基和苯乙氧基甲基；

[0009]

芳硫基意指，例如苯硫基；烷基磺酰基意指，例如C_1-6烷基磺酰基，诸如甲基磺酰基，乙基磺酰基和丙基磺酰基；芳基磺酰基意指，例如苯磺酰基，甲苯磺酰基和萘磺酰基；二烷氨基亚烷基意指，例如N，N-二甲氨基亚甲基和N，N-二乙氨基亚甲基；芳亚烷基意指，例如亚苄基和萘基亚甲基；含氮杂环亚烷基意指，例如3-羟基-4-吡啶基亚甲基；环亚烷基意指，例如环亚戊基和环亚己基；二芳基磷酰基意指，例如二苯基磷酰基；二芳烷基磷酰基意指，例如二苄基磷酰基；含氧杂环烷基意指，例如5-甲基-2-氧代-2H-1，3-间二氧杂环戊烯-4-基甲基；且取代的甲硅烷基意指，例如三甲基甲硅烷基，三乙基甲硅烷基和三丁基甲硅烷基。

[0010]

氨基保护基包括作为通常的氨基保护基得到的所有基团。其实例包括描述在W.Greene等，Protective Groups in Organic Synthesis，3rd ed.，p.494-653，1999，John Wiley&Sons，INC.中的基团。其具体实例包括酰基，烷氧羰基，芳烷氧羰基，芳氧羰基，芳烷基，烷氧基烷基，芳烷氧基烷基，芳硫基，烷基磺酰基，芳基磺酰基，二烷氨基亚烷基，芳亚烷基，含氮杂环亚烷基，环亚烷基，二芳基磷酰基，二芳烷基磷酰基，含氧杂环烷基和取代的甲硅烷基。

[0011]

本发明中使用的式[1]的化合物的盐的实例可以包括通常已知的羟基盐。其实例可以包括：与碱金属，诸如钠和钾的盐；与碱土金属，诸如钙和镁的盐；铵盐；和与含氮有机碱的盐，所述的有机碱诸如三甲胺，三乙胺，三丁胺，N-甲基哌啶，N-甲基吗啉，二乙胺，二环己胺，普鲁卡因，二苄胺，N-苄基-β-苯乙胺，1-二苯羟甲胺和N，N′-二苄亚乙基二胺。

盐的理想实例包括药学上可接受的盐。优选与钠形成的盐。

[0012]

本发明中使用的式[1]的化合物的理想的实例包括下列化合物：

式[1]表示的化合物，其中R¹为氢原子，R²为氟原子且R³为氢原子。

[0013]

本发明中使用的式[1]的化合物通过合并本领域中本身公知的方法生产并且可以按照例如专利对比文件1中所述的生产方法生产。

[0014]

本发明中使用的神经氨酸酶抑制剂的实例包括对神经氨酸酶具有抑制作用的化合物自身或其体内代谢物，诸如奥司他韦，扎那米韦，帕拉米韦，CS-8958和FRUNET。优选奥司他韦和扎那米韦。而且奥司他韦是更理想的。

[0015]

对本发明药物组合物的给药途径没有具体限制并且可以通过静脉内，口服，肌内，皮下，通过吸入，通过喷雾或通过其它给药途径给予。此外，可以将式[1]表示的吡嗪衍生物或其盐与神经氨酸酶抑制剂同时或按照特定次序给药。

[0016]

本发明的药物组合物用于治疗(例如治疗或预防)流感。

本发明的药物组合物能够治疗(例如治疗或预防)更为严重性的流感。此外，所用的各药物甚至在以减量给药时也表现出强的抗流感病毒作用。因此，可以减少其相应的副作用。

[0017]

当使用本发明的药物组合物时，通常可以将其适当地与制剂中使用的药物助剂，诸如赋形剂、载体和稀释剂混合。可以通过口服或非肠道以下列剂型的形式按照常规方法给予制剂，诸如片剂，胶囊，粉剂，糖浆剂，颗粒剂，丸剂，混悬液，乳剂，溶液，粉状制剂，栓剂，滴眼液，滴鼻剂，滴耳剂，贴剂，软膏剂或注射剂。此外，可以根据患者的年龄，体重和症状适当选择给药方法，给药剂量和频率。通常可以通过口服或非肠道方式(例如注射，静脉内滴注和对直肠部位给药)对成年人给药，可以分一次到几次的分次剂量给予0.01-1000mg/kg/天。

实施例

[0018]

接下来参照试验例描述本发明。然而，本发明并不限于它们。

[0019]

将6-氟-3-羟基-2-吡嗪甲酰胺(下文称作T-705)选作测试化合物。将为奥司他韦的体内活性形式的GS-4071和扎那米韦选作神经氨酸酶抑制剂。本文的上下文中，用于本试验的GS-4071通过从达菲(商购药物)中提取，随后按照常规方法水解获得。

[0020]

试验例1

将T-705选作测试化合物。将GS-4071选作神经氨酸酶抑制剂。

(1)MDCK细胞的培养

通过乙二胺四乙酸-胰蛋白酶法分离在补充了在培养溶液中10％胎牛血清的Eagle′s MEM培养基中在37℃和5％二氧化碳条件下传代培养的Madin-Darby犬肾(下文称作MDCK)细胞并且悬浮于与上述相同的培养基中。依次将制备的包含100μL中2×10⁴个细胞的细胞混悬液接种在96-孔平板上。将细胞在37℃和5％二氧化碳条件下培养过夜以便获得单层MDCK细胞。

[0021]

(2)流感病毒感染和药物添加

所用的测试培养基为通过下列步骤制备的培养基：将3μg/mL浓度的L-1-甲苯磺酰基酰氨基-2-苯乙基氯甲基酮(TPCK)-处理的胰蛋白酶加入到包含补充了60μg/mL卡那霉素的1％牛血清白蛋白和通常浓度4倍的维生素的Eagle′s MEM培养基中。

在除去培养物上清液后用Eagle′s MEM培养基冲洗在段落(1)中获得的MDCK细胞。然后向各孔中加入下列试剂：包含牛血清白蛋白和测试培养基2倍浓度的维生素的100μL Eagle′s MEM培养基；使用包含4倍测试培养基浓度的TPCK-处理的胰蛋白酶的Eagle′s MEM培养基调整至4.0×10³PFU/mL的50μL流感病毒(PR/8(H1N1))溶液；和包含4倍目标浓度的T-705或GS-4071(T-705目标浓度(μg/mL)：0.0156，0.0313，0.0625，0.125，0.25，0.5，1，2和4；且GS-4071目标浓度(μg/mL)：0.00313，0.00625，0.0125，0.025，0.05，0.1，0.2，0.4和0.8)的或包含4倍目标浓度的T-705/GS-4071(重量浓度比5∶1)混合物的50μLEagle′s MEM培养基。

在添加药物后，将细胞在35℃和5％二氧化碳条件下培养2天。

[0022]

(3)中性红摄取试验

通过J.Virol.Methods，2002，vol.106，p.71-79和Proc.Natl.Acad.Sci.，1998，vol.95，p.8874-8849中所述的方法评价与流感病毒增殖一起观察到的致细胞病变效应(CPE)。

在完成培养后，将100μl体积的使用不含钙/镁的Dulbecco磷酸盐缓冲液稀释的0.033％中性红溶液加入到各孔中。使平板在35℃和5％二氧化碳条件下维持。2小时后，通过抽吸除去各孔中的溶液。在用100μL不含钙/镁的Dulbecco磷酸盐缓冲液冲洗2次后，向各孔中加入100μL按体积计1∶1比例的缓冲液(pH 4.2；由0.1mol/L柠檬酸钠和0.1mol/L盐酸组成)和乙醇的混合溶液。使平板在室温和避光下保持。30分钟后，使用微量平板读出器(BIO-RAD Model 550)测定吸收度(540nm)。通过添加包含TPCK-处理的4倍于测试培养基浓度的胰蛋白酶的50μLEagle′s MEM培养基而不是流感病毒溶液制备未感染的对照品并且按照与对测试组相同的操作进行，随后测定吸收度。就空白而言，不含接种MDCK细胞的各孔按照与对未感染的对照品相同的操作进行，随后测定吸收度。在每个浓度下使用8个孔。使用平均值并且通过从测定值中扣除空白吸收度获得的数值用于随后的作为吸收度的计算。将通过从未感染的对照品的吸收度中扣除感染的对照品的吸收度获得的值用作完全抑制病毒增殖的值。按照下列公式计算每次试验中病毒增殖的抑制率：

病毒增殖抑制率＝[(单一药物或联用药物的吸收度)-(感染的的对照品的吸收度)]/[(未感染的对照品的吸收度)-(感染的对照品的吸收度)]。

[0023]

(4)联合用药作用的分析

使用SAS release 8.2(SAS Institute Japan Ltd.)，按照Chou等的中间值效应法，由单一药物和联用的两种药物的浓度、联用药物的比例和病毒增殖抑制率分析联合作用。在Advanced EnzymeRegulation，1984，vol.22，p.27-55中所示的方法中，用于作用机理彼此完全独立(彼此非排他的药物)的药物等式用于计算CI值。基于50％病毒增殖抑制的CI值，按照Taira等的论文描述[Acta MedicaOkayama.，2006，vol.60，p.25-34]确定联合作用，其中CI≤0.8表示协同作用，0.8＜CI＜1.2表示相加作用且1.2≤CI表示拮抗作用。

[0024]

单独使用T-705，单独使用GS-4071和这些药物的联合用药对病毒增殖的抑制率如表1中所示。使用这些值的分析结果如表2中所示。

[0025]

[表1]

[0026]

[表2]

[0027]

T-705和GS-4071(奥司他韦的体内活性形式)的联合给药对病毒增殖表现出比单一药物给药表现出的更佳的协同抑制作用。

[0028]

试验例2

将T-705选作测试化合物。将扎那米韦选作神经氨酸酶抑制剂。试验按照与试验例1中所述方法相同的方式进行。

[0029]

单独使用T-705，单独使用扎那米韦和这些药物的联合用药对病毒增殖的抑制率如表3中所示。使用这些值的分析结果如表4中所示。

[0030]

[表3]

[0031]

[表4]

[0032]

T-705和扎那米韦的联合给药对病毒增殖表现出比单一药物给药表现出的更佳的协同抑制作用。

[0033]

试验例3

将T-705选作测试化合物。将GS-4071选作神经氨酸酶抑制剂。试验按照与试验例1中所述方法相同的方式进行，其中使用Victoria/3/75(H3N2)作为流感病毒。

[0034]

单独使用T-705，单独使用GS-4071和这些药物的联合用药对病毒增殖的抑制率如表5中所示。使用这些值的分析结果如表6中所示。

[0035]

[表5]

[0036]

[表6]

[0037]

T-705和GS-4071(奥司他韦的体内活性形式)的联合给药对病毒增殖表现出比单一药物给药表现出的更佳的协同抑制作用。

[0038]

试验例4

将T-705选作测试化合物。将扎那米韦选作神经氨酸酶抑制剂。试验按照与试验例3中所述方法相同的方式进行。

[0039]

单独使用T-705，单独使用扎那米韦和这些药物的联合用药对病毒增殖的抑制率如表7中所示。使用这些值的分析结果如表8中所示。

[0040]

[表7]

[0041]

[表8]

[0042]

T-705和扎那米韦的联合给药对病毒增殖表现出比单一药物给药表现出的更佳的协同抑制作用。

[0043]

正如从所述结果中观察到的，由通式[1]表示的吡嗪衍生物或其盐与不同神经氨酸酶抑制剂的联合给药表现出协同抗流感病毒活性并且有效治疗(例如治疗或预防)流感。

工业实用性

[0044]

包含吡嗪衍生物或其盐和一种或多种神经氨酸酶抑制剂的药物组合物具有强的抗流感病毒协同作用活性并且可用于治疗(例如治疗或预防)流感。使用这些化合物的联合用药的方法可用作治疗(例如治疗或预防)流感的方法。