5-氨基-3-(2’-0-乙酰基-3’-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑4

摘要

本发明涉及5－氨基－3－(2′－O－乙酰基－3′－脱氧－β－D－呋喃核糖基)－3H－噻唑并[4，5－d]嘧啶－2－酮对甲苯磺酸盐及其在治疗疾病如病毒感染、肿瘤和癌症中的应用。还涉及制备5－氨基－3－(2′－O－乙酰基－3′－脱氧－β－D－呋喃核糖基)－3H－噻唑并[4，5－d]嘧啶－2－酮的方法以及生产在诸如5－氨基－3－(2′－O－乙酰基－3′－脱氧－β－D－呋喃核糖基)－3H－噻唑并[4，5－d]嘧啶－2－酮对甲苯磺酸盐等药用化合物的制备过程中可用作中间体的呋喃糖化合物的方法。

说明书

发明领域

本发明涉及5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并 [4，5-d]嘧啶-2-酮的对甲苯磺酸盐及其在治疗疾病如病毒感染、肿瘤和癌症中的 应用。还涉及制备5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并 [4，5-d]嘧啶-2-酮的方法以及生产在诸如5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋 喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的对甲苯磺酸盐等药用化合物的制备过 程中可用作中间体的呋喃糖化合物的方法。

背景技术

核苷类似物是一类可以在疾病的治疗过程中使用的重要的化合物。例如， 已在癌症和病毒感染的治疗中使用核苷类似物。核苷类似物进入细胞后，常常 通过核苷补救途径磷酸化，类似物磷酸化形成相应的单、双和三磷酸酯。在其 他胞内结局中，三磷酸化的核苷类似物常常作为DNA或RNA聚合酶的底物而 掺入DNA和/或RNA中。如果三磷酸化核苷类似物是强的聚合酶抑制剂，它 们可诱导新生核酸分子过早终止。如果三磷酸化核苷类似物被结合到核酸复制 或转录物中，可导致基因表达或功能破坏。

一些核苷类似物因为能够抑制腺苷激酶所以有效。腺苷激酶催化腺苷磷酸 化形成腺苷5′-一磷酸(AMP)。腺苷激酶的抑制可有效提高人体中腺苷胞外水 平，因而可用于缺血性疾病如中风、炎症、关节炎、发作和癫痫症的治疗。

过去几十年来，在开放核苷类似物的治疗应用中进行了大量努力。例如， 在授予Robins等人的美国专利5,041,542中揭示了某些嘧啶并[4，5-d]嘧啶核 苷在BDF1小鼠中能有效治疗L1210。另外，授予Robins等的美国专利 5,041,426和4,880,784揭示了3-β-D-呋喃核糖基噻唑并[4，5-d]嘧啶显示出明 显的免疫活性，包括鼠科脾细胞增殖和对塞姆利基森林病毒(Semliki Forest virus)的体内活性。许多出版物也对噻唑并[4，5-d]嘧啶部分的非糖基化衍生 物进行了描述，参见例如，美国专利5,994,321和5,446,045；Revankar等 人，J.Het.Chem.，30，1341-49(1993)；Lewis等人，J.Het.Chem.，32， 547-56(1995)。

已证明3，5-二取代-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮化合物具有免疫调节活性。 此类化合物的制备和应用在美国申请公开US2006/0160830(美国申请第 11/304,691号)中揭示，该申请被全文参考纳入本文。该申请描述了游离碱化合 物5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮 的合成。该化合物的纯度取决于因游离碱无定形性质而采用的纯化方法。游离 碱的充分纯化受限于采用某些人体消耗不可接受的溶剂。此外，该化合物的非 晶形形式(游离碱)倾向于吸湿，导致化合物易于水解。因此，药学应用中非常 希望制备无毒溶剂用量低、具有高纯度和稳定性的结晶形化合物的方法。

发明概述

本发明涉及式(1)所示的5-氨基-3-(2′-0-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖 基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的对甲苯磺酸盐以及包含该盐的药物组合物。

式1的化合物可以在疾病的治疗或预防方法中使用。例如，式1的化合物 可用于治疗或预防肿瘤或癌症的发生和/或进程。还描述了治疗或预防病原体感 染的方法，例如病毒感染，包括乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒感染。式1的化 合物也可以在免疫细胞因子活性的调节方法中使用。

在另一实施方式中，本发明涉及制备5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D- 呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的对甲苯磺酸盐(1)的方法。

该方法包括以下步骤：

(i)使5-氨基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(2)与脱氧呋喃核糖(3)偶联形成式 (4)的化合物

(ii)选择性裂解式(4)化合物上的5′乙酸酯，形成5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′- 脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(5)，

(iii)使5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧 啶-2-酮(5)与对甲苯磺酸反应形成5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖 基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的对甲苯磺酸盐(1)

在另一实施方式中，步骤(i)包括使5-氨基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(2) 与式(3B)的脱氧呋喃核糖偶联形成式(4)的化合物

另一个实施方式涉及制备式(3)化合物的方法，式(3)的化合物可以在式(1) 化合物的制备过程中用作中间体。

该方法包括：

(i)在碱的存在下用磺化剂磺化式(6)的化合物，

形成式(7)的磺酰基取代的化合物，

其中R是任选取代的烷基或芳基；

(ii)用还原剂还原式(7)的磺酰基取代的化合物，形成式(8)的化合物

(iii)用酸水解式(8)的化合物，形成式(9)的化合物

(iv)用氧化剂氧化式(9)的化合物，然后用还原剂还原，形成式(10)的化合 物

和

(v)在酸催化剂的存在下用乙酰化试剂乙酰化式(10)的化合物，形成式(3) 的化合物

本发明的另一个实施方式涉及制备式(3B)的化合物的方法，式(3B)的化合 物可以在式(1)化合物的制备过程中用作中间体

该方法包括：

(i)在碱的存在下用磺化剂磺化式(6B)、式(6C)的化合物或其混合物，

形成式(7B)、式(7C)的磺酰基取代的化合物或它们的混合物

其中，R是任选取代的烷基或芳基；

(ii)用还原剂还原式(7B)、式(7C)的磺酰基取代的化合物或其混合物，形成 式8B的化合物

(iii)用酸水解式(8B)的化合物，形成式(9B)的化合物

(iv)用氧化剂氧化式(9B)的化合物，然后用还原剂还原，形成式(10B)的化 合物

和

(v)在酸催化剂的存在下用乙酰化试剂乙酰化式(10B)的化合物，形成式(3B) 的化合物

在另一实施方式中，本发明涉及用还原剂还原式(7)的磺酰基取代的化合 物，形成式(8)的化合物的方法，

其中，R是任选取代的烷基或芳基。在其它实施方式中，R是任选取代的 C₁-C₆烷基或苯基。在另一实施方式中，R是CF₃、CH₃、-C₆H₄CH₃。

在另一实施方式中，本发明涉及用还原剂还原式(7B)、式(7C)的磺酰基取 代的化合物或其混合物，形成式(8B)的化合物的方法，

其中R是任选取代的烷基或芳基。

在其它实施方式中，R是任选取代的C₁-C₆烷基或苯基。在另一实施方式 中，R是CF₃、CH₃或-C₆H₄CH₃。

本发明的方法适用于本文所述化合物的规模化商业生产。该方法操作简 便、稳健而有效。具体说，该方法尤其适用于规模化生产5-氨基-3-(2′-O-乙酰 基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的对甲苯磺酸盐(1)。

附图简要说明

图1是式(1)化合物的FT-拉曼光谱。

图2是式(1)化合物的PXRD(x-射线衍射)图谱。

发明详述

本文所用术语“包含”(及其语法变体)指“含有”或“包括”的包含涵 义而不是“仅由其构成”的排他性涵义。本文所用术语“一个”、“这个” 应理解为包括单数和复数形式。

本文所用术语“卤化物”代表氟化物、氯化物、溴化物或碘化物。术语“卤 素”代表氟、氯、溴或碘。

本文所用术语“烷基”除非另有说明，包括具有直链、支链或环状部 分(包括稠合和桥连的双环和螺环部分)或前述部分的组合的饱和单价烃基。 对于具有环部分的烷基，该基团必须至少含有三个碳原子。

本文所用术语“芳基”除非另有说明，包括通过除去芳烃中的一个氢得到 的有机基团，如苯基或萘基。

“烷基”和“芳基”可任选地被1-5个选自以下的取代基取代：-OH、卤 代、-CN、C₁-C₆烷基、芳基烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烯基、C₁-C₆羟基、C₁-C₆羟基烷基、氨基、C₁-C₆烷基胺、C₁-C₆二烷基胺，其中烷基还可被一个或多个 卤素进一步取代。

术语“Ac”表示乙酰基。

本发明化合物可能是单一的立体异构体、外消旋体和/或各种对映异构 体和/或非对映异构体的混合物。所有的这类单一立体异构体、外消旋体和/ 或各种对映异构体和/或非对映异构体的混合物都包括在本发明的范围内。

本文所用术语“氧化剂”指化学反应过程中得电子的物质，术语“还原剂” 指化学反应过程中失电子的物质。

术语“免疫调节剂”指能通过刺激或抑制来改变正常或异常的免疫系 统的天然或合成产品。

术语“预防”指本发明的化合物或组合物防止被诊断出患有疾病或具 有患病危险的患者的疾病的能力。该术语也涵盖了预防已患有或具有这类 疾病症状的患者疾病的进一步发展。

术语“患者”或“对象”表示动物(如牛、马、羊、猪、鸡、火鸡、鹌 鹑、猫、狗、小鼠、大鼠、兔、豚鼠等)或哺乳动物，包括嵌合和转基因动 物以及哺乳动物。

术语“治疗有效量”指足以治疗或预防疾病、延缓或最小化与疾病有 关的症状或者治愈或缓解疾病或感染或其病因的本发明化合物的用量。具 体而言，治疗有效量表示足以使体内产生治疗效果的用量。与一定量本发 明化合物的使用有关，该术语优选地涵盖改进总的疗效、减少或避免疾病 的症状或病因，或者增加另一种治疗剂的疗效或与另一种治疗剂产生协同 作用的无毒性的用量。

术语“预防有效量”指足以预防疾病、疾病的复发或传播的本发明的 化合物或其它活性组分的用量。预防有效量可指足以预防原发性病毒感染 或感染的复发或传播或与感染有关的疾病的用量。与一定量的本发明化合 物的使用有关，该术语优选地涵盖改进总的预防或者增加另一种预防剂或 治疗剂的预防效应或与另一种预防剂或治疗剂产生协同作用的无毒性的用 量。

术语“组合”指同时或相继使用一种以上的预防剂和/或治疗剂，并使 其各自产生的作用加合或协同。

术语“治疗”指：

(i)预防疾病、失调或病情在倾向于发生该疾病、失调或病情、但尚未 诊断已罹患的动物中发生；

(ii)抑制疾病、失调或病情，即阻止其发展；和

(iii)缓解疾病、失调或病情，或缓解疾病、失调或病情的症状和/或使 疾病、失调和/或病情消退。

术语“R”和“S”指所描绘的化学结构中不对称碳原子上取代基的特 定立体化学构型。

本发明化合物可显示出互变异构现象。虽然化学式不能显示出所有可 能的互变异构形式，但应当明白的是它们趋向于代表所显示化合物的所有 互变异构形式，不仅仅限于所描绘的具体化合物形式。

本技术领域的技术人员都知道，具有一个手性中心(即，一个不对称碳 原子)的光学纯化合物是基本上由两种可能的对映异构体中的一种构成的 (即为对映异构体纯)，具有一个以上手性中心的光学纯的化合物是同时为非 对映体纯的和对映体纯的化合物。优选的是，本发明化合物使用时的形式 为至少90％光学纯，即它含有至少90％的单一异构体(80％对映体过量(“e.e.”) 或非对映体过量(“d.e.”))，更优选至少95％单一异构体(90％e.e.或d.e.)， 甚至更优选至少97.5％单一异构体(95％e.e.或d.e.))，最优选至少99％的单 一异构体(98％e.e.或d.e.)。

5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2- 酮的对甲苯磺酸盐如下式(1)所示：

5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2- 酮(5)的游离碱为无定形物质。在本发明之前，从未获得结晶形式的5-氨基 -3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(5)。现在 根据本发明惊奇地发现，在某些条件下，可由5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧 -β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的对甲苯磺酸盐(1)获得残留溶剂 极低的结晶形。本发明的结晶形具有超过无定形5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧 -β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(5)的优点。例如，任何形式(例如， 溶解状态)的最终药物中溶剂残留较低。此外，提高结晶过程可实施额外的纯 化。这就使得药物具有更高的稳定性且制药厂处理更容易。

5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2- 酮(5)的游离碱是吸湿性物质。由化学结构预计，5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧 -β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(5)可能对水解非常敏感。现在根 据本发明惊奇地发现，对甲苯磺酸盐结晶形仅轻微吸湿，因而具有较好的储存 性质和更容易加工。

已发现5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d] 嘧啶-2-酮的游离碱(5)含有某些相关物质(合成期间的副产物)，并显示残留溶剂 和水。根据本发明术语“基本上纯的”表示以重量计，相关物质的总量不到1％， 优选不到0.75％，更优选不到0.5％，残留溶剂和水不到1％，优选不到0.75％， 更优选不到0.5％，甚至更优选地不到0.25％。

IR数据-图1显示了式(1)化合物的FT-拉曼光谱。式(1)化合物的特征是， 在1356、1130、804、498和435cm^-1主IR谱带，在1637、1602、1054、1037、 609和530cm^-1中等谱带。

X-射线数据-图2显示了式(1)化合物的X-射线衍射图谱。在x-射线图谱中， 以衍射角2θ为x轴，峰强度为y轴作图。在角度5.5°±0.3°观察到X-射线衍射 图谱中的最强的线，在11.8°、12.3°、17.9°、18.2°、19.7°、20.2°、21.3°、21.9°、 23.8°、24.1°和25.9°±0.3°观察到强度较低的线。

药物组合物

式(1)的结晶化合物可用于制备药物组合物，该组合物包含至少一种药学 上可接受的载体和式(1)的化合物。用载体制备药物组合物的详细内容在美国专 利申请公开2006/0160830(美国申请第11/304,691号)中描述，其内容被纳入本 文作为参考。

包含式1化合物、或其药用水合物或溶剂合物的药物组合物和单剂剂 型也落入本发明的范围内。本发明的各种剂型适合口服、粘膜给药(包括舌 下、口颊、直肠、鼻或阴道给药)、胃肠外(包括皮下、肌肉内、推注、动脉 内或静脉内)、透皮或局部给药。本发明的药物组合物和剂型通常还包含一 种或多种药学上可接受的赋形剂。无菌剂型也在本发明的范围内。在一个 可选的实施方式中，药物组合物包含本发明式I的化合物、或其药学上可 接受的水合物或溶剂合物，以及至少一种另外的治疗剂。

本发明剂型的组成、形状和类型通常随其应用而改变。例如，用于一 种疾病或相关疾病的急性治疗的剂型可含有比慢性治疗相同疾病用量更大 的一种或多种活性组分。类似地，胃肠外剂型可含有比用于治疗相同疾病 或失调的口服剂型更少量的一种或多种活性组分。所属技术领域的人员可 以很显而易见地了解这些和涵盖于本发明的特定剂型来实施的其它方式。 参见，例如，《雷明登药物科学》(Remington’s Pharmaceutical Science)，第 18版，Mack出版公司，美国宾夕法尼亚伊斯顿(Easton PA)(1990)。剂型的 例子包括但不限于：片剂；囊片；诸如软弹性明胶胶囊的胶囊；扁胶剂 (cachets)；含片；锭剂；分散剂；栓剂；软膏剂；泥敷剂(poutices)；糊剂； 粉剂；敷料；乳膏剂；膏药；溶液剂；贴剂；气雾剂(如鼻喷雾剂或吸入剂)； 凝胶；适合对患者口服或粘膜给药的液体剂型，包括悬浮剂(如，水性或非 水性液体悬浮剂、水包油乳剂或油包水液体乳剂)，溶液和酏剂；适合对患 者胃肠外给药的液体剂型；以及可用来重新构成适合对患者胃肠外给药液 体剂型的无菌固体(如，结晶或无定形固体)。

典型的药物组合物和剂型包括一种或多种载体、赋形剂或稀释剂。合 适的赋形剂是药学领域中公知的，本文提供了合适的赋形剂的非限定性例 子。一种特定的赋形剂是否合适掺入药物组合物或剂型取决于该技术领域 公知的各种因素，包括但不限于患者的给药途径。例如，诸如片剂的口服 剂型可含有不适合胃肠外剂型的赋形剂。特定赋形剂的适宜性也根据剂型 中的具体活性成分而定。

本发明进一步涵盖包含活性组分的无水药物组合物和剂型，因为水会 加速某些化合物的降解。例如，加入水(如5％的水)是药学领域中普遍接受 的，它可作为模拟长期存放的手段来测定诸如制剂在一段时间里的贮存寿 命或稳定性。例如参见Carstensen，《药物稳定性：原则与实践》(Drug Stability：Principles&Practice)，第2版，Marcel Dekker，美国纽约州纽约， 1995，第379-80页。实际上，水和热量会加速一些化合物的分解。因此， 由于在制造、处理、包装、贮存、运输和使用制剂时一般会遇到潮气和/或 湿气，水对制剂的作用是极为巨大的。

本发明的无水药物组合物和剂型可使用无水或低湿度的组分和低湿度 或低潮湿的条件进行制备。

可制备无水药物组合物并在贮存期间使其无水性质得以维持。因此， 无水组合物优选地使用已知的防水材料进行包装，使它们能包在合适规定 的试剂盒中。合适的包装的例子包括但不限于，密封箔、塑料、单位剂型 容器(如小药瓶)、泡罩包装和带包装。

本发明还包括包含一种或多种降低活性组分分解速率的化合物的药物 组合物和剂型。这类化合物(下面称为稳定剂)包括但不限于，抗氧化剂(如 抗坏血酸)、pH缓冲剂或盐缓冲剂。

与赋形剂的量和类型类似，剂型中活性组分的量和具体的类型可依据 各种因素而不同，例如但不限于，对患者给药途径。但是，本发明典型的 剂型包含0.1-1500毫克/单位的式1化合物或其水合物，以提供每天约0.01 到200毫克/千克的剂量。

口服剂型

适合口服给药的本发明的药物组合物可为不连续的剂型，例如但不限 于，片剂(如可咀嚼片剂)、囊片、胶囊和液体(如调味的糖浆剂)。这类剂型 含有预定量的活性组分，可用药学领域公知的方法制备。一般参见《雷明 登药物科学》，第18版，Mack出版公司，美国宾夕法尼亚州伊斯顿(Easton PA)(1990)。

通过以下步骤制备本发明典型的口服剂型：使活性组分与根据常规药 物复合技术中的至少一种赋形剂充分混合。根据给药的剂型来选取各种形 式的赋形剂。例如，适合用于口服液体或气雾剂的赋形剂包括但不限于， 水、多元醇、油、醇、调味剂、防腐剂和着色剂。适合用于固体口服剂型(如 粉末、片剂、胶囊和囊片)的赋形剂例子包括但不限于，淀粉、糖、微晶纤 维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。

由于片剂和胶囊剂易于给药，它们代表了口服剂型中最好的剂型，其 中使用了固体赋形剂。需要时，片剂可用标准的水性或非水性技术进行包 衣。该剂型可用药学中的任何方法进行制备。一般来说，制备药物组合物 和剂型，使活性组分与液体载体、细分散固体载体或这两种载体均匀密切 地混合，之后根据需要对产品进行成形，将其制成所需的形状。

例如，片剂可通过压制或模压来制备。压制的片剂可通过在合适的机 器中压制任选地与赋形剂混合的自由流动形式的活性组分，如粉末或颗粒 来制备。模压的片剂可通过在合适的机器中对惰性液体赋形剂湿润的粉末 化化合物的混合物进行模压而制得。

可用于本发明口服剂型的赋形剂的例子包括但不限于，粘合剂、填充 剂、崩解剂和润滑剂。适合用于药物组合物和剂型的粘合剂包括但不限于， 玉米淀粉、马铃薯淀粉或其它淀粉、明胶、天然和合成的胶(诸如阿拉伯胶、 藻酸钠、藻酸、其它藻酸盐、粉末化黄芪胶、瓜耳胶、纤维素和它的衍生 物(如乙基纤维素、乙酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠)、聚乙 烯基吡咯烷酮、甲基纤维素、预明胶化的淀粉、羟丙基甲基纤维素(如，第 2208、2906、2910号)、微晶纤维素和其混合物。

适合用于本文的药物组合物和剂型中的填充剂包括但不限于，滑石粉、 碳酸钙(如颗粒或粉末)、微晶纤维素、粉末化的纤维素、葡萄糖结合剂 (dextrates)、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉、预明胶化的淀粉以及 它们的混合物。本发明药物组合物中粘合剂或填充剂通常占药物组合物或 剂型的约50-99重量％。

微晶纤维素的合适形式包括但不限于，商品名AVICEL-PH-101、 AVICEL-PH-103、AVICEL RC-581、AVICEL-PH-105(购自FMC公司(FMC Corporation)，美国粘胶液部门(American Viscose Division)，Avicel销售部， 美国宾夕法尼亚马库斯胡克(Marcus Hook))，以及它们的混合物。特定的粘 合剂是微晶纤维素和羧甲基纤维素的混合物，商品名为AVICEL RC-581。 合适的无水或低水分的赋形剂或添加剂包括AVICEL-PH-103^TM和Starch 1500LM。

用于本发明组合物的崩解剂使片剂在暴露于水环境时崩解。含有过多 崩解剂的片剂会在贮存时崩解，而含有过少崩解剂的片剂不能以所需的速 率崩解或不能在所需的条件下崩解。因此，制备本发明的固体口服剂型所 用的崩解剂既不能太多也不能太少，其用量不应显著改变活性组分的释放。 崩解剂的用量可随制剂的类型而改变，这对于所述领域的普通技术人员来 说是显而易见的。通常药物组合物包含约0.5-15重量％崩解剂，优选约1-5 重量％的崩解剂。

可用于本发明药物组合物和剂型的崩解剂包括但不限于，琼脂-琼脂、 藻酸、碳酸钙、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮、聚克立林 钾(polacrillin potassium)、淀粉乙醇酸钠、马铃薯淀粉或木薯淀粉、预明胶 化的淀粉、其它淀粉、粘土、其它藻胶、其它纤维素、树胶以及它们的混 合物。

可用于本发明的药物组合物和剂型的润滑剂包括但不限于，硬脂酸钙、 硬脂酸镁、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、其 它多元醇、硬脂酸、月桂基硫酸钠、滑石粉、氢化植物油(如花生油、棉籽 油、葵花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油)、硬脂酸锌、油酸乙酯、月 桂酸乙酯、琼脂以及它们的混合物。另外的润滑剂包括例如，硅酸盐硅胶 (AEROSIL 200，由美国马里兰州巴尔的摩的W.R.格雷公司(W.R.Grace Co.) 制造)、合成二氧化硅的凝聚型气溶胶(由美国得克萨斯州布兰多(TX，Plano) 的德固赛公司(Degussa Co.)出售)、CAB-O-SIL(热解法二氧化硅产品，由美 国马萨诸塞州波士顿(MA，Boston)的卡伯公司(Cabot Co.)出售)以及它们的 混合物。若需要使用时，润滑剂的用量约低于药物组合物或剂型的1重量 ％。

延迟释放剂型

可通过控释方式或通过本释放领域普通技术人员公知的输递装置给予 本发明的活性组分。例子可参见但不限于，美国专利3,845,770；3,916,899； 3,536,809；3,598,123；和4,008,719、5,674,533、5,059,595、5,591,767、 5,120,548、5,073,543、5,639,476、5,354,556和5,733,566，这些专利都纳入 本文作为参考。这类剂型通过使用各种比例的下列物质而缓释或控释一种 或多种活性组分，所述的物质是例如羟丙基甲基纤维素、其它的聚合物基 质、凝胶、可渗透膜、渗透系统、多层包衣、微粒、脂质体、微球或其组 合，从而得到所需的释放曲线。为了使用本发明的活性组分，可以容易地 选择本文所述的本领域普通技术人员公知的合适的控释制剂。因此本发明 涵盖了适合口服给药的单位剂型，包括但不限于，适合控释的片剂、胶囊、 凝胶胶囊(gelcaps)和囊片(caplets)。

所有控释药品的一般目的是使其药物疗效相对于非控释的对应药物获 得提高。理想的是，在药物治疗中使用最佳设计的控释制剂的特征在于在 最短的时间里用来治愈或控制病情的药物用量最少。控释制剂的优点包括 药物的活性延长、给药频率减小、患者的顺应性增加。另外，控释制剂可 用来影响药物的开始作用时间或其它特性，如血药水平，并因此影响副作 用(例如不良反应)的发生。

大多数控释制剂被设计成开始释放一定量的药物(活性组分)以迅速产 生所需的治疗作用，然后逐渐和持续地释放其它量的药物以在一段延长的 时间里维持治疗或预防作用的水平。为了在体内维持该稳定的血药水平， 药物必须以代替被代谢和排泄的药物的速率从剂型中释放。通过各种条件， 包括但不限于pH、温度、酶、水或其它生理条件或化合物可刺激活性组分 的控释。

胃肠外剂型

胃肠外剂型可通过各种途径给药，包括但不限于皮下给药、静脉内(包 括推注)给药、肌内给药和动脉内给药。由于它们的给药通常绕过患者对污 染物的天然防御，所以胃肠外剂型优选是无菌的，或在给予患者前能进行 消毒。胃肠外剂型的例子包括但不限于，即用型注射液、准备溶于或悬浮 于药学上可接受的注射用运载体的干燥和/或冻干产品(可重建的粉末)、注 射用悬浮液和乳剂。

用于本发明胃肠外剂型的合适的赋形剂是该领域技术人员公知的。例 子包括但不限于，注射用水USP；水性赋形剂，例如但不限于，氯化钠注 射液、林格(Ringer)注射液、右旋糖注射液、右旋糖和氯化钠注射液、以及 乳酸化的林格注射液；可与水混溶的赋形剂，例如但不限于，乙醇、聚乙 二醇和聚丙二醇；非水性赋形剂，例如但不限于，玉米油、棉籽油、花生 油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯。

也可将能增加本文揭示的一种或多种活性组分的溶解度的化合物掺入 本发明的胃肠外剂型中。

透皮剂型

透皮剂型包括“贮库型”或“基质型”贴剂，它可用于皮肤并施用一段时 间，让所需量的活性组分渗透。

可用来提供本发明的透皮和局部剂型的合适赋形剂(如载体和稀释剂) 和其它材料是药学领域中的技术人员公知的，可根据给予药物组合物或剂 型的特定组织而定。典型的赋形剂包括但不限于，水、丙酮、乙醇、乙二 醇、丙二醇、1，3-丁二醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油以及它 们的混合物。

根据被治疗的特定组织，在用本发明的活性组分治疗前、同时或之后 可使用另外的组分。例如，可使用渗透促进剂帮助活性组分向组织渗透。 合适的渗透促进剂包括但不限于：丙酮；各种醇，如乙醇、油醇和四氢呋 喃；烷基亚砜，如二甲亚砜；二甲基乙酰胺；二甲基甲酰胺；聚乙二醇； 吡咯烷酮类，如聚乙烯吡咯烷酮；科利当(Kollidon)级(吡维酮、聚维酮)； 脲和各种水溶或水不溶的糖酯，如吐温80(聚山梨醇酯80)和司盘60(脱水山 梨糖醇单硬脂酸酯)。

可以调节药物组合物或剂型的pH值或给予药物组合物或剂型的组织 的pH值来改善一种或多种活性组分的输递。类似地，可以调节溶剂载体的 极性、它的离子强度或张力来改善输递。硬脂酸盐之类的化合物也可加到 药物组合物或剂型中，以有利地改变一种或多种活性组分的亲水性或亲脂 性来改进输递。就此而言，硬脂酸盐可作为制剂的脂质赋形剂，作为乳化 剂或表面活性剂，并可作为输递促进剂或渗透促进剂。可使用活性组分的 不同的盐、水合物或溶剂合物来进一步调节所得组合物的性质。

局部剂型

本发明的局部剂型包括但不限于，乳膏剂、洗液、软膏剂、凝胶、溶 液、乳剂、悬浮剂或该领域技术人员公知的其它剂型。例如参见《雷明登 药物科学》，第18版，麦克出版公司(Mack Publishing)，美国宾夕法尼亚 伊斯顿(1990)；和《药物剂型介绍》(Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms)，第4版，Lea和Febiger，美国费城(1985)。

本发明所涵盖的可用来提供透皮和局部剂型的合适赋形剂(例如载体 和稀释剂)和其它材料是药学领域技术人员众所周知的，根据药物组合物或 剂型给予的特定组织而定。典型的赋形剂包括但不限于，水、丙酮、乙醇、 乙二醇、丙二醇、1，3-丁二醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油以 及它们的混合物。

根据被治疗的特定组织，在用本发明活性组分治疗前、同时或之后可 使用另外的组分。例如，可使用渗透促进剂帮助活性组分向组织递送。合 适的渗透促进剂包括但不限于：丙酮；各种醇，如乙醇、油醇和四氢呋喃； 烷基亚砜，如二甲亚砜；二甲基乙酰胺；二甲基甲酰胺；聚乙二醇；吡咯 烷酮类，如聚乙烯吡咯烷酮；科利当(Kollidon)级(吡维酮、聚维酮)；脲和 各种水溶性或非水溶性的糖酯，如吐温80(聚山梨醇酯80)和司盘60(脱水山 梨糖醇单硬脂酸酯)。

粘膜剂型

本发明的粘膜剂型包括但不限于，眼用溶液、喷雾剂和气溶胶，或本 领域技术人员已知的其它形式。例如可参见《雷明登药物科学》，第18版， 麦克出版公司，美国宾夕法尼亚伊斯顿(1990)；和《药物剂型介绍》，第4 版，Lea和Febiger，美国费城(1985)。适合用来治疗口腔内粘膜组织的剂型 可配制成口腔洗液或口腔凝胶。在一个实施方式中，气溶胶包含载体。在 另一个实施方式中，气溶胶不含载体。

式(1)的化合物也可通过吸入直接对肺部给药。对于吸入给药，式(1)化 合物可通过许多不同的设备对肺部进行常规的输递。例如，计量吸入器 (“MDI”)使用含有合适的低沸点的推进剂的小罐直接将式(1)化合物输递到 肺部，所述的推进剂是例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、 二氧化碳或其它合适的其它气体。MDI设备可从许多供货商处购得，如3M 公司(3M Corporation)、阿凡替斯(Aventis)、BI公司(Boehringer Ingleheim)、 森林实验室公司(Forest Laboratories)、葛兰素史克(Glaxo-Wellcome)、先灵 葆雅(Schering Plough)和凡克拉公司(Vectura)。

或者，可使用干粉吸入器(DPI)对肺部给予式(1)的化合物(例如参见 Raleigh等，美国癌症研究协会年会会刊(Proc.Amer.Assoc.Cancer Research Annual Meeting)，1999，40，397，该文献纳入本文作为参考)。DPI设备通 常使用诸如气体爆发机制在容器中产生干粉的烟雾，该烟雾然后可为患者 吸入。DPI设备也是本领域中众所周知的，可从许多供货商处购得，包括例 如费氏(Fisons)、葛兰素史克(Glaxo-Wellcome)、吸入治疗系统公司(Inhale Therapeutic Systems)、ML实验室公司(ML Laboratories)、库都(Qdose)和凡 克拉公司(Vectura)。受欢迎的变化形式是多剂量DPI(″MDDPI″)系统，它准 许输递一种以上的治疗药剂。MDDPI设备可购自例如阿斯特拉公司 (AstraZeneca)、葛兰素史克(Glaxo-Wellcome)、IVAX、先灵葆雅(Schering Plough)、天空制药(SkyePharma)和凡克拉公司(Vectura)。例如，用于吸入器 或吹药器的明胶胶囊和装药筒可配制成含有化合物和适用于这些系统的粉 末基料(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。

用来将式(1)化合物输递到肺部的另一种设备是液体喷雾设备，例如阿 拉丁公司(Aradigm Corporation)出产的设备。液体喷雾设备使用极小的喷嘴 使液体药物制剂气溶胶化，然后可直接吸入肺部。

在一个实施方式中，使用喷雾装置将式(1)化合物输递到肺部。通过使 用，例如超声波能量形成能容易吸入的细小颗粒，喷雾器由液体药物制剂 制造气溶胶。(例如参见Verschoyle等，British J.Cancer，1999，80，增补2，96， 该文献纳入本文作为参考)。喷雾器的例子包括史菲/系统性肺部输递有限公 司(Sheffield/Systemic Pulmonary Delivery Ltd.)(参见Armer等，美国专利第 5,954,047号；van der Linden等，美国专利第5,950,619号；van der Linden等， 美国专利第5,970,974号，纳入本文作为参考)；阿凡提斯(Aventis)和巴代尔 肺部治疗公司(Batelle Pulmonary Therapeutics)提供的设备。

在一个实施方式中，使用电流体力学(“EHD”)气溶胶装置向肺部输递式 (1)的化合物。EHD气溶胶装置使用电能使液体药物溶液或悬浮液气溶胶化 (例如参见Noakes等，美国专利第4,765,539号；Coffee，美国专利第4,962,885 号；Coffee，PCT申请WO 94/12285；Coffee，PCT申请WO 94/14543；Coffee， PCT申请WO 95/26234，Coffee，PCT申请WO 95/26235，Coffee，PCT申 请WO 95/32807，这些文献纳入本文作为参考)。当使用EHD气溶胶设备向 肺部输递该药物时，式(1)化合物制剂的电化学性质可能是重要的优化参数， 这类优化可由本领域的技术人员依常规进行。EHD气溶胶装置可比现有的 肺部输递技术更有效地向肺部输递药物。式(1)化合物的其它肺内输递方法 是本领域技术人员公知的，也在本发明的范围内。

适合喷雾器和液体喷雾设备和EHD气溶胶设备使用的液体药物制剂通 常包含式(1)化合物和药学上可接受的载体。优选的是，药学上可接受的载 体是诸如醇、水、聚乙二醇或全氟化碳的液体。任选的是，可加入另一种 材料来改变式(1)化合物溶液或悬浮液的气溶胶性质。优选的是，该材料是 诸如醇、二醇、聚二醇或脂肪酸的液体。配制适合用于气溶胶设备的液体 药物溶液或悬浮液的其它方法是该技术领域人员公知的(例如参见Biesalski， 美国专利第5,112,598号；Biesalski，第5,556,611号，这些专利纳入本文作 为参考)。式(1)化合物也可配制成直肠组合物或阴道组合物，如栓剂或滞留 灌肠剂，例如可含有诸如可可油或其它甘油酯的常规栓剂基料。

除了前述的制剂外，式(1)化合物也可配制成长效制剂。这类长期作用 的制剂可通过(例如皮下或肌内)植入或通过肌内注射给予。这样，化合物可 用合适的聚合物材料或疏水材料(例如，可接受油中的乳剂)或离子交换树脂 配制，或者配制成微溶的衍生物，例如微溶的盐。

或者，可使用其它的药物输递系统。脂质体和乳剂是可用来输递式(1) 化合物的公知的输递赋形剂的例子。可使用诸如二甲亚砜的某些有机溶剂， 但是该溶剂通常会有较大的毒性。式(1)的化合物也可在控释系统中输递。 在一个实施方式中，可使用泵(Sefton，CRC Crit.Ref Biomed Eng，1987，14， 201；Buchwald等，Surgery，1980，88，507；Saudek等，N.Engl.J.Med.，1989， 321，574)。在另一个实施方式中，可使用聚合物材料(参见，控释的医学应 用(Medical Applications of Controlled Release)，Langer和Wise(编辑)，CRC Pres.，Boca Raton，Fla.(1974)；受控的药物生物利用度(Controlled Drug Bioavailability)，《药品设计与性能》(Drug Product Design and Performance)， Smolen和Ball(编辑)，Wiley，N.Y.(1984)；Ranger和Peppas，J.Macromol.Sci. Rev.Macromol.Chem.，1983，23，61；也可参见Levy等，Science，1985，228， 190；During等，Ann.Neurol.，1989，25，351；Howard等，1989，J.Neurosurg. 71，105)。在另一个实施方式中，控释系统可置于本发明化合物的靶标，如 肺部的附近，这样就只需要给予全身剂量的一部分(例如参见Goodson，控 释的医学应用(Medical Applications of Controlled Release)，同上，第2卷， 115页(1984))。可也使用其它的控释系统(例如参见Langer，Science，1990， 249，1527)。

合适的赋形剂(如载体和稀释剂)和可用来提供本发明的粘膜剂型的其 它材料是药学领域技术人员众所周知的，可以根据组合物或剂型给予的特 定位点或方法而定。典型的赋形剂包括但不限于，水、乙醇、乙二醇、丙 二醇、1，3-丁二醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油以及它们的混 合物，所述的赋形剂是无毒的且药学上可接受的。这类另外的组分例子是 本领域众所周知的。例如参见，《雷明登药物科学》，第18版，马克出版 公司，美国宾夕法尼亚伊斯顿(1990)。

也可调节药物组合物或剂型的pH值或给予药物组合物或剂型的组织的 pH值来改善一种或多种活性组分的输递。类似地，可以调节溶剂载体的极 性、溶剂载体的离子强度或张力以改善输递。也可将硬脂酸盐之类的化合 物加到药物组合物或剂型中以有利地改变一种或多种活性组分的亲水性或 亲脂性，从而改善输递。就此而言，硬脂酸盐可作为制剂的液体赋形剂、 作为乳化剂或表面活性剂，并作为输递促进剂或渗透促进剂。可使用活性 组分的不同的盐、水合物或溶剂合物来进一步调节所得组合物的性质。

药盒

本发明提供了包括一个或多个容器的药物包装或药盒，所述的容器包 含用于治疗或预防疾病的式(1)的化合物。在其它实施方式中，本发明提供 了包括一个或多个容器的药物包装或药盒，所述的容器包含用于治疗或预 防疾病的式(1)的化合物，所述药物包装或药盒还包括一个或多个容器，这 些容器包含额外的治疗剂。

本发明还提供了包括一个或多个容器的药物包装或药盒，所述的容器 包含一种或多种本发明药物组合物的成分。这些容器任选地装有由政府机 构规定的药品或生物制品生产、使用或销售规定形式的告知书，该告知书 反映了人用的所述药品或生物制品的制造、使用或销售已获得政府机构许 可。

治疗疾病

在一个实施方式中，在疾病的治疗或预防过程中使用式(1)的化合物。例 如，提高了预防或治疗温血动物，尤其是人致病生物感染的方法，该方法包括 给予有效量的式(1)的结晶形化合物。在一个优选的实施方式中，致病生物是在 WO2005/121162所述的细菌、真菌或病毒感染，在优选的实施方式中，是由腺 病毒、巨细胞病毒、甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、包括黄热 病病毒和丙型肝炎病毒(HCV)的黄病毒属、1型和2型单纯性疱疹病毒、带 状疱疹病毒、人疱疹病毒6、人免疫缺陷病毒(HIV)、人乳头状瘤病毒(HPV)、 甲型流感病毒、乙型流感病毒、麻疹病毒、副流感病毒、脊髓灰质炎病毒、 痘病毒(包括天花和猴痘病毒)、鼻病毒、呼吸道合胞体病毒(RSV)，引起出 血热的多种病毒科，包括沙粒病毒科(LCM、胡宁病毒、马秋博病毒、瓜纳 瑞托病毒和拉沙热)、本扬病毒科(汉坦病毒和里夫特裂谷热)和纤丝病毒科 (埃博拉和马堡病毒)；各种病毒性脑炎病毒，包括西尼罗病毒、拉克罗斯病 毒、加里福尼亚脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、东部马脑炎病毒、西部 马脑炎病毒、日本脑炎病毒、库阿撒鲁尔森林病毒；和蜱媒病毒如克里米 亚-刚果出血热病毒导致的病毒感染。尤其优选HBV和HCV。

另一个实施方式提供了调节温血动物、尤其是人的免疫细胞因子活性的方 法，该方法包括给予有效量的结晶形式的式(1)化合物。还提供了用作药物的式 (1)的结晶形化合物。还提供了式(1)的结晶形化合物在制造用于治疗病原体感 染，尤其是病毒(例如HCV或HBV)感染的药物中的应用。

另一个实施方式提供了治疗哺乳动物肿瘤或癌症的方法，该方法包括给予 哺乳动物(患者)治疗有效量的式(1)的化合物。预期可治疗的肿瘤或癌症包括 但不限于那些由病毒引起的肿瘤或癌症，这些化合物的作用涉及抑制感染 了病毒的细胞转化为肿瘤状态，抑制病毒从被转化的细胞扩散到其它正常 细胞和/或阻止病毒转化的细胞的生长。预期本发明的化合物可用于抵抗广 谱的肿瘤，包括但不限于：癌、肉瘤和白血病。这类肿瘤包括：乳腺癌、 结肠癌、膀胱癌、肺癌、前列腺癌、胃癌和胰腺癌以及成淋巴细胞白血病 和粒细胞性白血病。

式(1)化合物或其药学上可接受的溶剂合物或水合物在急性或慢性感染的 治疗或预防中的预防或治疗剂量的大小，将随感染的性质和严重性以及活性成 分的给药途径而变化。剂量，以及某些情况下给药频度，也会根据要治疗的 疾病、个体患者的年龄、体重和反应而不同。合适的剂量方案可由本领域 的技术人员根据这些因素很容易地确定。

本发明的方法特别适合于人类患者。具体而言，本发明的方法和剂量 可用于免疫削弱患者，包括但不限于：癌症患者、HIV感染患者和患有免 疫退行性疾病的患者。此外，这些方法可用于目前处于缓解状态的免疫削 弱患者。本发明的方法和剂量也可用于接受其它抗病毒治疗的患者。本发 明的预防方法特别可用于有被病毒感染危险的患者。这些患者包括但不限 于：健康护理工作人员，如，医生、护士、收容所护理人员；军事人员； 教师；育儿工作者；旅行或居住在国外，特别是居住在第三世界的患者， 包括社会救助工作者，传教士和外交使节。最后，这些方法和组合物包括 治疗难治性患者或对治疗产生耐受性(如对逆转转录酶抑制剂、蛋白酶抑制 剂等产生耐药性)的患者。

剂量

式(1)化合物的毒性和药效可通过在细胞培养或实验动物中进行的标准 药学方法来测定，如测定LD₅₀(致使50％群体死亡的剂量)和ED₅₀(对50％群 体治疗有效的剂量)。毒性和疗效的剂量比为治疗指数，其可表示为 LD₅₀/ED₅₀。

从细胞培养分析和动物研究中得到的数据可用来确定用于人体的化合 物的剂量范围。这类化合物的剂量优选在包括几乎没有或没有毒性的ED₅₀的循环浓度范围里。可在此范围内，根据所用剂型和给药途径改变剂量。 对于用于本发明方法中的任何化合物，治疗有效剂量可从细胞培养分析中 最初估算。可调整动物模型中的剂量以得到包括细胞培养中测定的IC₅₀(即， 达到症状最大抑制的一半的试验化合物的浓度)的循环血药浓度范围；或 者，在动物模型中调配式(1)化合物的剂量，以使化合物的循环血药浓度范 围与得到固定反应量级所需的浓度对应起来。这类信息可以用来更准确地 确定对人体有用的剂量。血药水平可通过，例如高效液相色谱进行测定。

本发明的方案和组合物在用于人体前，优选先对所需的治疗或预防活 性进行体外试验，然后再进行体内试验。例如，体外分析可用来确定是否 需要给予特定的治疗方案，体外分析包括体外细胞培养分析，使对式(1)化 合物有应答的细胞与配体接触，并通过合适的技术测量应答的强度。然后 就式(1)化合物的强度来评估该化合物。用于本发明方法的化合物可在给人 体试验前用合适的动物模型进行试验，所述的动物模型包括但不限于：大 鼠、小鼠、鸡、牛、猴子、兔子、仓鼠等。然后化合物可用于合适的临床 试验。

本发明式(1)的化合物或其药学上可接受的溶剂合物或水合物在急性或 慢性治疗或预防感染或疾病中的预防剂量或治疗剂量的量值会随感染的性 质和严重程度以及活性组分的给药途径而不同。剂量，以及可能的给药频 度也会随要治疗的疾病、患者的年龄、体重和反应而不同。本领域的人员 可根据对这些因素的考虑很容易地选择合适的剂量方案。在某一个实施方 式中，给药剂量根据使用的特定化合物和患者的体重和病情而定。剂量也 可根据不同的本发明的具体化合物而不同；合适的剂量可根据前述的体外 测试和动物研究来预测。一般来说，每天的剂量范围为约0.001-100毫克/ 千克，优选约1-25毫克/千克，更优选约5-15毫克/千克。对于治疗被丙型 肝炎病毒感染的人，在一日内分1-4次给予约0.1毫克到约15克/天的剂量， 优选的是100毫克/天到12克/天，更好是100-8000毫克/天。

另外，推荐的日剂量可在一段时间里作为单一制剂或与其它治疗剂联 合循环给药。在一个实施方式中，给予的每日剂量为单剂或等分剂量。在 一个相关的实施方式中，推荐的每日剂量可每周给予一次、每周给予两次、 每周给予三次、每周给予四次或每周给予五次。

在一个实施方式中，本发明的化合物经给药可在患者体内全身分布。 在相关的实施方式中，本发明的化合物经给药可在体内产生全身作用。

在另一个实施方式中，本发明的化合物通过口服、粘膜(包括舌下、颊 部、直肠、鼻或阴道)给药、胃肠外(包括皮下、肌内、推注、动脉内或静脉 内)给药、透皮给药或局部给药。在某一具体的实施方式中，本发明的化合 物通过粘膜(包括舌下、颊部、直肠、鼻或阴道)给药、胃肠外(包括皮下、 肌内、静脉推注、动脉内或静脉内)给药、透皮给药或局部给药。在另一具 体实施方式中，本发明的化合物通过口服给药。在另一具体实施方式中， 本发明的化合物不是通过口服给药的。

正如本领域的普通技术人员所了解的那样，对于不同的感染可用不同 的治疗有效量。相似的是，足以治疗或预防这类感染、但不足以引起或足 以减轻与常规治疗有关的副作用的量也涵盖在上述的剂量范围和给药频度 方案里。

组合疗法

本发明的具体方法还包括给予其它的治疗剂(即，非本发明化合物的治 疗剂)。在本发明具体的实施方式中，本发明化合物可与至少一种其它治疗 剂联合使用。所述治疗剂包括但不限于：抗生素、止吐药、抗抑郁剂和抗 真菌剂、抗炎药、抗病毒剂、抗癌药、免疫调节剂、α-干扰素、β-干扰素、 利巴韦林、烷化剂、激素、细胞因子或toll受体样调节剂。

式(1)的化合物可与抗生素联合给药或配制在一起。例如，它们可与以 下抗生素一起配制：大环内酯类(如，妥布霉素())、头孢菌素(如，头 孢氨苄()、头孢拉定()、头孢呋辛()、头孢丙烯 ()、头孢克洛()、头孢克肟()或头孢羟氨苄())、 克红霉素(如克拉霉素())、红霉素(如，红霉素())、青霉素(如， 青霉素V(V-或Pen))或是喹喏酮(如，氧氟沙星()、环 丙沙星()或诺氟沙星())、氨基糖苷类抗生素(如，安普霉素、 阿贝卡星、班贝霉素、布替罗星、地贝卡星、新霉素、十一烯酸酯(盐)、奈 替米星、巴龙霉素、核糖霉素、西索米星和大观霉素)、酰胺醇(amphenicol) 抗生素(如，叠氮氯霉素、氯霉素、氟苯尼考和甲砜霉素)、安莎霉素抗生素 (如，利福米特和利福平)、碳头孢烯(如，氯碳头孢)、碳青霉烯(如，比阿培 南和亚胺培南)、头孢菌素(如，头孢克洛、头孢羟氨苄、头孢孟多、头孢曲 秦、头孢西酮、头孢唑兰、头孢咪唑、头孢匹胺和头孢匹罗)、头霉素类(如， 头孢拉宗、头孢美唑和头孢米诺)、单菌霉素类(如，氨曲南、卡芦莫南和替 吉莫南)、氧头孢烯类(如，氟氧头孢和拉氧头孢)、青霉素类(如，氮脒青 霉素、氮脒青霉素匹酯(amdinocillinpivoxil)、阿莫西林、巴氨西林、苄基 青霉素酸、苄基青霉素钠、依匹西林、芬贝西林、氟氯西林、培那西林、 喷沙西林氢碘酸盐、苄胺青霉素(penicillino-benethamine)、青霉素O、青霉 素V、苄星青霉素V、哈胺青霉素V、青哌环素和苯氧乙基青霉素钾 (phencihicillin potassium))、林可酰胺(如，克林霉素和林可霉素)、安福霉素、 杆菌肽、卷曲霉素、多粘菌素E、持久霉素、恩维霉素、四环素类(如，阿 哌环素、金霉素、氯莫环素和地美环素)、2，4-二氨基嘧啶类(如，溴莫普林)、 硝基呋喃类(如，左呋喃他酮和呋唑氯铵)、喹诺酮类和其类似物(如，西诺 沙星、克林沙星、氟甲喹和格帕沙星)、磺胺类(如，乙酰磺胺甲氧吡嗪、苄 磺胺、诺丙磺胺、酞磺醋胺、磺胺柯定和磺胺西汀)、砜类(如，地百里砜、 葡砜钠和苯丙砜)、环丝氨酸、莫匹罗星和马铃薯球蛋白(tuberin)。

式(1)的化合物可与止吐剂联合给药或配制。合适的止吐剂包括但不限 于：甲氧氯普胺、多潘立酮、丙氯拉嗪、异丙嗪、盐酸氯丙嗪、曲美苄胺、 昂丹司琼、格拉司琼、羟嗪、乙酰亮氨酸单乙醇胺、阿立必利、阿扎司琼、 苯喹胺、氨醇醋茶碱、溴必利、布克力嗪、氯波必利、赛克力嗪、茶苯海 明、地芬尼多、多拉司琼、美克洛嗪、美沙拉妥、美托哌丙嗪、大麻隆、 氮羟哌丙嗪、匹哌马嗪、东莨菪碱、舒必利、四氢大麻酚、硫乙拉嗪、氨 砜拉嗪、托烷司琼以及它们的混合物。

式(1)的化合物可与抗抑郁药联合给药或配制在一起。合适的抗抑郁药 包括但不限于：苯奈达林、卡罗沙酮、西酞普兰、二甲沙生、芬咖明、吲 达品、盐酸茚洛秦、奈福泮、诺米芬辛、羟色氨酸、奥昔哌汀、帕罗西汀、 舍曲林、硫西新、三唑酮、苯酰甲苄肼、异丙氯肼、异丙烟肼、异卡波肼、 尼亚拉胺、奥他莫辛、苯乙肼、可替宁、罗利普令、咯利普兰、马普替林、 美曲吲哚、米安色林、米氮平(mirtazepine)、阿地唑仑、阿米替林、氧阿米 替林、阿莫沙平、布替林、氯米帕明、地美替林、地昔帕明、二苯西平、 二甲他林、度琉平、多塞平、三氟丙嗪、丙米嗪、丙米嗪N-氧化物、伊普 吲哚、洛非帕明、美利曲辛、美他帕明、去甲替林、诺昔替林、奥匹哌醇、 苯噻啶、丙吡西平、普罗替林、奎纽帕明、噻奈普汀、曲米帕明、阿屈非 尼、贝那替秦、安非他酮、布他西丁、地奥沙屈、度洛西汀、依托哌酮、 非巴氨酯、非莫西汀、芬戊二醇、氟西汀、氟伏沙明、血卟啉、金丝桃素、 左法哌酯、美地沙明、米那普仑、苯哒吗啉、吗氯贝胺、奈法唑酮、奥沙 氟生、吡贝拉林、普罗林坦、吡琥胺酯、利坦色林、罗克吲哚、氯化铷、 舒必利、坦度螺酮、托扎啉酮、托芬那辛、甲苯噁酮、反苯环丙胺、L-色 氨酸、文拉法辛、维洛沙秦和齐美定。

式(1)的化合物可与抗真菌剂联合给药或配制在一起。合适的抗真菌剂 包括但不限于：两性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟康唑、伊曲赛可 (intrathecal)、氟胞嘧啶、咪康唑、布康唑、克霉唑、制霉菌素、特康唑、 噻康唑、环吡酮、益康唑、碘氯苯炔醚、萘替芬、特比萘芬、十一烯酸酯(盐) 和灰黄霉素。

本发明式(1)的化合物可与抗炎药联合给药或配制在一起。有用的抗炎 药包括但不限于：非甾体类抗炎药，如水杨酸、乙酰水杨酸、水杨酸甲酯、 二氟尼柳、双水杨酯、奥沙拉秦、柳氮磺吡啶、对乙酰氨基酚、吲哚美辛、 舒林酸、依托度酸、甲芬那酸、甲氯灭酸钠、托美丁、酮咯酸、双氯非那 胺、布洛芬、萘普生、萘普生钠、非诺洛芬、酮洛芬、氟吡洛芬、奥沙普 秦、吡罗昔康、美洛昔康、安吡昔康、屈恶昔康、匹伏昔康(pivoxicam)、 替诺昔康、萘丁美酮、保泰松、羟布宗、安替比林、氨基比林、阿扎丙宗 和尼美舒利；白三烯拮抗剂，包括但不限于：齐留通、金硫葡糖、金硫丁 二钠和金诺芬；甾体类，包括但不限于：二丙酸阿氯米松、安西奈德、二 丙酸倍氯米松、倍他米松、苯甲酸倍他米松、二丙酸倍他米松、倍他米松 磷酸钠、戊酸倍他米松、丙酸氯倍他索、新戊酸氯可托龙、氢化可的松、 氢化可的松衍生物、地奈德、去羟米松、地塞米松、氟尼缩松、氟可辛松 (flucoxinolide)、氟氢缩松、氯氟松、甲羟松、甲泼尼龙、乙酸甲泼尼龙、 甲泼尼龙琥珀酸钠、糠酸莫米松、乙酸帕拉米松、泼尼松龙、乙酸泼尼松 龙、泼尼松龙磷酸钠、叔丁乙酸泼尼松龙、泼尼松、曲安西龙、曲安奈德、 二乙酸曲安西龙和己曲安奈德；以及其它的消炎药，包括但不限于：甲氨 蝶呤、秋水仙碱、别嘌醇、丙磺舒、磺吡酮和苯溴马隆。

式(1)的化合物可与另一种抗病毒剂联合给药或配制在一起。有用的抗 病毒剂包括但不限于，蛋白酶抑制剂、核苷逆转录酶抑制剂、非核苷逆转 录酶抑制剂和核苷类似物。抗病毒剂包括但不限于，齐多夫定、无环鸟苷、 更昔洛韦、阿糖腺苷、碘苷、曲氟尿苷、左韦林(levovirin)、三氮唑核苷 (viramidine)和利巴韦林、以及膦甲酸、金刚烷胺、金刚乙胺、沙奎那韦、 茚地那韦、安泼那韦、洛匹那韦、利托那韦、α-干扰素；β-干扰素；阿德福 韦、抗来呋定、思替卡韦、普来可那立。

本发明式(1)的化合物可与免疫调节剂联合给药或配制在一起。免疫调 节剂包括但不限于：甲氨蝶呤、来氟米特、环磷酰胺、环孢素A、麦考酚 酸吗乙酯、雷伯霉素(西罗莫司)、咪唑立宾、脱氧精胍菌素、布喹那、丙二 腈酰胺(malononitriloamindes)(如来氟米特(leflunamide))、T细胞受体调节剂 和细胞因子受体调节剂、肽模拟物和抗体(如人的、人源化的、嵌合、单克 隆、多克隆、Fv、ScFv、Fab或F(ab)2片段或表位结合片段)、核酸分子(如 反义核酸分子和三螺旋体)、小分子、有机化合物和无机化合物。T细胞受 体调节剂的例子包括但不限于：抗-T细胞受体抗体(如抗-CD4抗体(如 cM-T412(柏林格公司(Boeringer))、IDEC-CE9.1(IDEC和SKB)、 mAB4162W94、Orthoclone和OKTcdr4a(JC公司(Janssen-Cilag))、抗-CD3 抗体(如Nuvion(产品设计实验室(Product Design Labs))、OKT3(强生公司 (Johnson&Johnson))、或利妥昔(IDEC))、抗-CD5抗体(如抗-CD5蓖麻蛋白 连接的免疫结合物)、抗-CD7抗体(如CHH-380(诺华公司(Novartis))、抗-CD8 抗体、抗-CD40配合物单克隆抗体(如IDEC-131(IDEC))、抗-CD52抗体(如 CAMPATH 1H(Ilex))、抗-CD2抗体、抗-CD11a抗体(如，Xanelim(基因科 技公司(Genentech))、和抗-B7抗体(如，IDEC-114(IDEC))、CTLA4-免疫球 蛋白和Toll受体样(TLR)调节剂。细胞因子受体调节剂的例子包括但不限 于：可溶的细胞因子受体(如，TNFα受体的胞外结构域或其片段、IL-1β受 体的胞外结构域或其片段、和IL-6受体的胞外结构域或其片段)、细胞因子 或其片段(如，白介素(IL)-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、 IL-10、IL-11、IL-12、IL-15、TNF-α、干扰素(IFN)-α、IFN-β、IFN-γ、和 GM-CSF)、抗细胞因子受体抗体(如，抗-IFN受体抗体、抗-IL-2受体抗体(如， Zenapax(蛋白质设计实验室(Protein Design Labs))、抗-IL-4受体抗体、抗 -IL-6受体抗体、抗-IL-10受体抗体、和抗-IL-12受体抗体)、抗-细胞因子 抗体(如，抗-IFN抗体、抗-TNFα抗体、抗-IL-1β抗体、抗-IL-6抗体、抗-IL-8 抗体(如，ABX-IL-8(阿布基尼克斯公司(Abgenix))和抗-IL-12抗体)。

式(1)的化合物可与抑制病毒酶的药剂联合给药或配制在一起。所述的 药剂包括但不限于：HCV蛋白酶的抑制剂，如BILN 2061、SCH-503034、 ITMN-191或VX-950；NS5b聚合酶的抑制剂，如NM107(及其前药NM283)、 R1626、R7078、BILN1941、GSK625433、GILD9128或HCV-796。

式(1)的化合物可与如Wu，Curr Drug Targets Infect Disord.，3， 207-19(2003)所述的抑制HCV聚合酶的药剂联合给药或配制在一起，或与 Bretner M，等Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids.，22，1531(2003)所述 的抑制病毒螺旋化功能的药剂，或与Zhang X.IDrugs.，5(2)：154-8(2002)所 述的HCV特定靶向物的抑制剂联合给药或配制在一起。

式(1)的化合物可与抑制病毒复制的药剂联合给药或配制在一起。

式(1)的化合物可与细胞因子联合给药或配制在一起。细胞因子的例子 包括但不限于：白介素-2(IL-2)、白介素-3(IL-3)、白介素-4(IL-4)、白介素 -5(IL-5)、白介素-6(IL-6)、白介素-7(IL-7)、白介素-9(IL-9)、白介素-10(IL-10)、 白介素-12(IL-12)、白介素15(IL-15)、白介素18(IL-18)、来自血小板的生长 因子(PDGF)、促红细胞生成素(Epo)、表皮细胞生长因子(EGF)、成纤维细 胞生长因子(FGF)、粒细胞巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激 因子(G-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、泌乳刺激素和干扰素(IFN) 如IFN-α和IFN-γ。

式(1)的化合物可与激素联合给药或配制在一起。激素的例子包括但不 限于：黄体化激素释放激素(LHRH)、生长激素(GH)、生长激素释放激素、 ACTH、生长激素抑制素、生长激素、生长调节素、甲状旁腺素、下丘脑释 放因子、胰岛素、胰增血糖素、脑啡肽、抗利尿激素、降血钙素、肝素、 低分子量肝素、类肝素、合成和天然的阿片、胰岛素甲状腺刺激激素和内 啡肽。

式(1)的化合物可与包括但不限于干扰素β-1a、干扰素β-1b的β-干扰素 联合给药或配制在一起。

式(1)的化合物可与α-扰素联合给药或配制在一起，α-扰素包括但不限 于：干扰素α-1、干扰素α-2a(roferon)、干扰素α-2b、内含子、Peg-内含子、 Pegasys、同义干扰素(ingergen)和阿布芬龙(albuferon)的α-干扰素联合给药 或配制在一起。

式(1)的化合物可与吸收促进剂联合给药或配制在一起，所述的吸收促 进剂具体说是以淋巴系统为靶向的，包括但不限于，甘胆酸钠；癸酸钠； N-月桂酰基-β-D-麦芽吡喃糖苷；EDTA；混合的胶束；以及Muranishi Crit. Rev.Ther.Drug Carrier Syst.，7-1-33所报道的物质，该文献全文并入本文供 参考。也可使用其它已知的吸收促进剂。本发明式(1)的化合物可与烷化剂 联合给药或配制在一起。烷化剂的例子包括但不限于，氮芥、氮丙啶、甲 基蜜胺、磺酸烷基酯、亚硝基脲、三氮烯、双氯乙基甲胺、环磷酰胺、异 环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、六甲蜜胺、三胺硫磷、白消安、卡氯芥、 链脲菌素、氮烯唑胺和替莫唑胺。

式(1)化合物和其它治疗剂可有加合作用，更优选是协同作用。在一个 实施方式中，含有本发明化合物的组合物可与另一种治疗剂同时给药，所 述的另一种治疗剂可以是该组合物的一部分或来自与含有本发明化合物的 组合物不同的组合物。在另一个实施方式中，在给予另一种治疗剂之前或 之后给予本发明的化合物。在一个独立的实施方式中，对未曾接受或目前 未使用另一种治疗剂，具体说是抗病毒剂治疗的患者给予本发明的化合物。

制备方法

在另一实施方式中，本发明提供了制备下式(1)所示5-氨基-3-(2′-O-乙酰基 -3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮对甲苯磺酸盐的方法：

该方法操作简便、稳健且有效，可用于该盐的规模化商业生产。而且，该 方法成本有效，产量高效且总体产率高。

在一个实施方式中，合成5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖 基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮对甲苯磺酸盐(1)的方法包括以下步骤：

(i)使5-氨基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(2)与脱氧呋喃核糖(3)偶联形成式 (4)的化合物

(ii)选择性裂解式(4)化合物上的5′乙酸酯，形成5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′- 脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(5)，

和

(iii)使5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧 啶-2-酮(5)与对甲苯磺酸反应形成5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖 基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的对甲苯磺酸盐(1)

在另一实施方式中，步骤(i)包括使5-氨基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(2) 与式(3B)的脱氧呋喃核糖偶联形成式(4)的化合物

步骤(i)的偶联反应可以在无溶剂条件下在高温(大于130℃)“熔融”反应 中进行，通常采用1，3-二(4-硝基苯基)磷酸酯作为酸性催化剂并有时在真空下进 行。或者，该反应可以在溶剂如乙腈、甲苯、二氯乙烷、DMF、二氯甲烷或其 混合物中进行。偶联反应通常在酸如三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯 (“TMSOTf”)、AlCl₃、SnCl₄和TiCl₄以及硅烷化试剂(silating reagent)如N，O- 双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(“BSA”)或三甲基甲硅烷基氯的存在下进行。然后 加水终止偶联反应，水的作用是使过量的酸和硅烷化试剂猝灭。如果使用 TMSOTf和BSA，用水猝灭导致形成水性三氟甲磺酸(triflic acid)和六甲基二硅 醚(CAS#107-46-0)。水性酸溶液水解去除式(4)化合物杂环部分上残留的甲硅 烷基。

在另一实施方式中，步骤(i)的偶联步骤以反应化学计量为基准，相对于脱 氧呋喃核糖(3)采用过量的5-氨基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(2)。例如，5-氨基 -3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(2)可过量约5％-50％，约5％-25％，约5％-15％。此 外，以反应化学计量为基准，5-氨基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(2)比脱氧呋喃 核糖(3)过量约10％。在惰性固体的存在下，步骤(i)的偶联反应完成后，通过升 高pH来去除多余的5-氨基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(2)，惰性固体经涂覆并 过滤去除。(用碱如碳酸氢钠)进一步中和后，加入氯化钠，产生能够进行相分 离的三层液体体系。

过量5-氨基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(2)的分离较困难。然而已经发现， 在惰性固体的存在下升高完成的反应混合物的pH有利于分离方法。在惰性固 体如硅藻土(celite)过滤助剂的存在下，用碱(例如氢氧化钠和/或碳酸钠)升高 pH以沉淀过量的5-氨基-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(2)。惰性固体经涂覆后过 滤去除。用碱进一步中和后，在剩余滤液中加入额外的氯化钠，得到能够进行 相分离的三层液体体系。密度最小层(顶层)是澄清的六甲基二硅醚，可通过分 离各相去除，无需蒸馏(常规的去除方法)。中间相包含所需的核苷(4)和乙腈。 密度最大层(底层)为水相，可用乙腈萃取进一步回收反应混合物中的(4)。此时 式(4)的化合物为纯态，在溶剂混合物中时其纯度足以用于步骤(ii)而无需进一 步处理。

在步骤(ii)中，选择性裂解式(4)化合物上的5′乙酸酯。这可利用酶如南极 假丝酵母(Candida Antarctica)来实现。南极假丝酵母可购自生物催化有限公司 (Biocatalytics，Inc.)。通常，酶共价结合在固相载体上。共价结合在固相载体 上的酶再循环更有效且反应时间较短。将步骤(i)中形成的包含式(4)化合物的乙 腈溶液加入负载的酶和pH约为7的缓冲剂的搅拌悬浮液中。也可将其加入负 载的酶在含碱(例如碳酸氢钠或醋酸钠)的水的悬浮液中。或者，可将该溶液加 入无水乙醇和碳酸氢钠和/或醋酸钠中，以形成固相负载的酶的基本无水的浆 液。反应完成后，将负载的酶过滤，洗涤并储存备用。可将氯化钠加入滤液中 并用乙酸异丙酯萃取。

化合物如5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并 [4，5-d]嘧啶-2-酮(5)的处理较难，该化合物常常是难处理的物质。在该阶段进行 溶剂蒸发或沉淀是提供未达最佳标准产物状态的不确定方法。然而，本发明的 方法不再需要处理化合物(5)，不需要蒸发溶剂或使产物沉淀。5-氨基-3-(2′-O- 乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(5)已经是纯态，在 足以进行步骤(iii)的溶剂混合物中。

步骤(iii)包括使5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑 并[4，5-d]嘧啶-2-酮(5)与对甲苯磺酸在溶剂中反应形成5-氨基-3-(2′-O-乙酰基 -3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的对甲苯磺酸盐(1)。该反 应通常在约-20℃到约40℃，约0℃到约30℃，约15℃到约30℃的温度下进行。 适用于该反应的溶剂包括例如：乙醇、甲醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁 醇、乙酸乙酯、乙腈、乙酸异丙酯、THF以及它们的混合物。例如，溶剂可包 括乙酸异丙酯和乙腈的混合物。在一个实施方式中，乙酸异丙酯和乙腈的混合 物在步骤(ii)中产生，该方法还包括添加乙醇。通常，以化学反应计量为基准， 步骤(iii)中磺酸的用量约为等摩尔量到过量约10摩尔％。

步骤(iii)的反应可以反应物的任意浓度进行。例如，反应物浓度可约为 1-1000毫摩尔。此外，浓度约为50-500毫摩尔或约100-250毫摩尔。

5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2- 酮(5)的溶液与对甲苯磺酸溶液反应。将两种溶液混合约5分钟到约2小时，或 约5分钟到约1小时。此外，可将对甲苯磺酸溶液加入反应混合物中，由该反 应混合物合成式(1)化合物，如美国专利申请公开第2006/0160830号(序列号 11/304,691)所述，其内容被纳入本文作为参考。

步骤(iii)的反应在约-20℃到约40℃，约0℃到约30℃，约15℃到约30℃ 的温度下进行。适用于该反应的溶剂包括：乙醇、甲醇、正丙醇、异丙醇、正 丁醇、异丁醇、乙酸乙酯、乙腈、乙酸异丙酯、THF以及它们的混合物。在一 个实施方式中，混合物包括步骤(ii)中产生的乙酸异丙酯和乙腈，该方法还包括 将乙醇加入混合物中。通常，以化学反应计量为基准，步骤(iii)中磺酸的用量 约为等摩尔量到过量约25摩尔％，或约为等摩尔量到过量约10摩尔％。

将5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶 -2-酮(5)的溶液与对甲苯磺酸溶液混合后，5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D- 呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的对甲苯磺酸盐(1)沉淀或结晶。然后 将反应产物通过过滤分离，洗涤并干燥。反应产物也可通过从反应混合物蒸发 溶剂，从另外的溶剂系统沉淀或结晶来分离产物，或者通过冷却反应混合物来 沉淀或结晶产物进行分离。分离的产物5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃 核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮的对甲苯磺酸盐(1)通常洗涤，然后在约40 ℃到约70℃、或约50℃到约60℃的温度下干燥。干燥方法可以在大气压或在 减压(真空)下进行。减压范围可约为0.1到约10英寸汞柱。

本文所述方法还包括分离5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖 基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮对甲苯磺酸盐(1)的步骤，其中分离的盐的纯度 至少为95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％。

本发明还提供了制备式(3)和式(3B)化合物的方法。以下示意性地说明这些 方法。

在第一种反应过程(流程1)中，在碱的存在下，用磺化剂磺化式(6)的化合 物，形成式(7)的磺酰基取代的化合物。该反应过程(流程1)如下所示：

流程1

对磺化剂、碱和溶剂并无限制，只要它们能够实施流程1所述的化学反应。 流程1中的R基团可以是任选取代的烷基或芳基。

非限制性的磺化剂包括：烷基磺酸酐、烷基磺酰卤(sulfonic halide)、芳族 磺酸酐、芳族磺酰卤以及它们的混合物。磺化剂包括：三氟甲磺酸酐、甲苯磺 酰氯、甲烷磺酸酐、甲烷磺酰卤、苯磺酰卤、取代的苯磺酰卤、苯磺酸酐、取 代的苯磺酸酐以及它们的混合物。

对流程1中使用的碱并无限制，可以是有机或无机碱，如三乙胺、二异丙 基乙胺、咪唑或吡啶。

反应流程1中采用的溶剂并无限制。可使用含卤素的溶剂如二氯甲烷、二 氯乙烷及其混合物。通常，可使用非质子溶剂如四氢呋喃或乙腈。

流程1中的反应过程可以在约-40℃到约25℃的温度下进行。此外，反应 可以在约-20℃到约0℃的温度下进行。

在下一过程(流程2)中，用还原剂还原反应流程1中形成的式(7)的磺酰基 取代的化合物，形成式(8)的化合物。反应过程(流程2)如下所示：

反应流程2中采用的还原剂并无限制，只要还原剂能够实现所需的还原反 应。还原剂可以是氢硼化物。氢硼化物可以是氢硼化四烷基铵，氢硼化四丁基 铵、氢硼化钠、氰基氢硼化钠、氢硼化锂、氢硼化钾、氢硼化镁、氢硼化钙、 三乙酰氧基氢硼化钠以及它们的混合物。

反应流程2中采用的溶剂并无限制。可使用芳族溶剂或芳族溶剂的混合 物。可使用溶剂如甲苯、苯、二甲苯、其他取代的苯化合物以及它们的混合物。 此外，也可使用非质子溶剂如二噁烷，二氯乙烷、四氢呋喃以及它们的混合物。

流程2中的反应过程可以在约25℃到约100℃的温度下进行。此外，也可 以在约60℃到约80℃的温度下进行。

在下一反应过程(流程3)中，在酸的存在下，用水水解反应流程2中形成 的式(8)的化合物，形成式(9)的化合物。该反应过程(流程3)如下所示：

对反应流程3中使用的酸并无限制，可使用有机酸或无机酸。反应可以在 水性溶剂中进行。反应也可以用50％醋酸水溶液或盐酸水溶液进行。

流程3的反应过程在约0℃到约50℃的温度下进行。流程3的反应过程也 可以在约20℃到约30℃的温度下进行。

在下一反应过程(流程4)中，反应流程3中形成的式(9)的化合物用氧化剂 氧化、然后用还原剂还原，形成式(10)的化合物。该反应过程(流程4)如下所示：

对反应流程4中使用的氧化剂并无限制，只要氧化剂能够实现所需的氧化 反应。氧化剂包括高碘酸钠、醋酸铅以及它们的混合物。

对反应流程4中使用的还原剂并无限制，包括反应流程2中列出的还原剂。

对反应流程4中使用的溶剂并无限制。溶剂包括：甲醇、二氯甲烷、二氯 甲烷与甲醇的组合或甲醇与水的组合。

流程4的反应过程在约0℃到约50℃的温度下进行。此外，流程4的反应 过程也可以在约20℃到约30℃的温度下进行。

在最终反应过程(流程5)中，在酸催化剂的存在下，用乙酰化试剂如乙酸 酐或乙酰氯使反应流程4中形成的式(10)的化合物乙酰化，形成式(3)的化合物。 反应过程(流程5)如下所示：

流程5的反应过程中使用的酸催化剂并无限制，包括无机酸、有机酸或同 时有无机酸和有机酸。酸包括硝酸、盐酸、硫酸、磺酸、三氟乙酸、烷基磺酸、 芳基磺酸及其固定化形式以及它们的混合物。

流程5中的反应过程通常在含有上述酸催化剂的有机溶剂中进行。溶剂也 可以是乙酸。

流程5的反应过程在约0℃到约5℃的温度下进行。此外，流程5的反应 过程也可以在约20℃到约30℃的温度下进行。

在本发明的另一个实施方式中，上述一般反应流程(流程1-5)可以用式(6B) 的呋喃型葡萄糖化合物的起始反应物进行，形成式(3B)的乙酰基-脱氧-呋喃型 木糖化合物，如以下反应流程6所示：

流程6

上述流程1-5中的反应试剂和反应条件可用于反应流程6中。

在本发明的另一个实施方式中，上述一般反应流程(流程1-5)可以用式(6C) 的呋喃型阿洛糖(allofuranose)化合物的起始反应物进行，形成式(3C)的乙酰基- 脱氧-呋喃型木糖(xylofuranso)化合物，如以下反应流程7所示：

流程7

上述流程1-5中的反应试剂和反应条件可用于反应流程7中。

本发明还包括采用流程1-5中列出的一般反应流程，用式(6B)和(6C)化合 物的混合物作为原料来形成式(3B)的最终产物的实施方式。

根据以下反应流程8制备乙酰基-脱氧-呋喃型木糖化合物，1，2，5-三-O-乙 酰基-3-脱氧-D-呋喃型木糖(3B)：

流程8

上述流程1-5的反应试剂和反应条件也用于流程8中。

本发明的另一个实施方式包括用还原剂还原磺酰基取代的式(7)的化合 物，以形成式(8)的化合物的方法，

其中，R代表任选取代的烷基或芳基。

在本发明的一个具体的实施方式中，R是CF₃、CH₃或-C₆H₄CH₃。式(7) 的化合物可以是上述式(7B)的呋喃型葡萄糖异构体或式(7C)的呋喃型阿洛糖异 构体或式(7B)和(7C)化合物的混合物

或两者的混合物。

还原剂可以是硼氢化物。氢硼化物可以是氢硼化四烷基铵、氢硼化四丁基 铵、氢硼化钠、氰基氢氢化钠、氢硼化锂、氢硼化钾、氢硼化镁、氢硼化钙、 三乙酰氧基氢硼化钠以及它们的混合物。

实施例

下面的实施例仅仅是示例性的目的，并不限制权利要求书的范围。

在下述合成流程中，除非特别指出，所有的温度为摄氏度，所有的份 数和百分数是以重量为基准的。

反应试剂可购自如奥德里奇化学公司(Aldrich Chemical Company)或兰 卡斯特合成有限公司(Lancaster Synthesis Ltd.)等供应商，除非特别指出，所 述的试剂无需进一步纯化即可使用。所有溶剂购自如奥德里奇EMD化学品 公司(Aldrich，EMD Chemicals)或菲氏公司(Fisher)并可直接使用。

一般在氩气或氮气的正压力和环境温度下(除非特别指出)、在无水溶剂 中进行下列反应，反应烧瓶配有橡胶隔片，用于经注射器引入底物和反应 试剂。玻璃器皿烘箱干燥和/或加热干燥。

反应用TLC和/或LC-MS分析，通过原料的消耗来判断反应的终止。分 析用的薄层色谱(TLC)在预先涂覆有硅胶60 F₂₅₄ 0.25毫米板的玻璃平板 (EMD化学品公司)上进行，用UV光(254nm)和/或硅胶上的碘进行肉眼观察 和/或与TLC显色剂如乙醇制磷钼酸、茚三酮溶液、高锰酸钾溶液或硫酸高 铈溶液一起加热进行肉眼观察。制备型薄层色谱(制备型TLC)在预先涂敷硅 胶60 F₂₅₄ 0.5毫米片的玻璃板(20×20厘米，购自汤姆森器械公司(Thomson Instrument Company))上进行，用UV光(254nm)进行肉眼观察。

使用Varian Mercury-VX400仪、在400MHz下操作记录¹H-NMR谱和 ¹³C-NMR。NMR光谱从CDCl₃溶液(单位ppm)中得到，在适当的情况下， 用氯仿作为参比标准物(对质子为7.27ppm，碳为77.00ppm)，CD₃OD(质子 为3.4和4.8ppm，碳为49.3ppm)，DMSO-d₆(质子为2.49ppm)，或内标四 甲基硅烷(0.00ppm)。其它的NMR溶剂可按需使用。若有峰多重性时，使 用下列缩写：s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)、br(加 宽的峰)、bs(宽的单峰)、dd(双二重峰)、dt(双三重峰)。偶合常数记录的单 位为赫兹(Hz)。

在ATR FT-IR波谱仪上记录净相油或固体的红外(IR)光谱，以波数 (cm^-1)表示。质谱记录为(+)-ES或APCI(+)LC/MS，由安那迪斯药品股份有 限公司(Anadys Pharmaceuticals，Inc)的分析化学部(Analytical Chemistry Department)进行。元素分析由佐治亚州诺克罗斯的大西洋显微实验室有限 公司(Atlantic Microlab，Inc.，Norcross，GA)或加州圣地亚哥的NMR实验 室有限公司(NuMega Resonance Labs，Inc.)进行。熔点(mp)在开放毛细管设 备上测定，未校准。

所述的合成途径和实验过程使用许多常见的化学缩写：2，2-DMP(2，2- 二甲氧基丙烷)、Ac(乙酰基)、ACN(乙腈)、Bn(苄基)、BOC(叔丁氧基羰基)、 Bz(苯甲酰基)、DBU(1，8-二氮杂双环[5，4，0]十一碳-7-烯)、DCC(N，N’-二环己 基碳二亚胺)、DCE(1，2-二氯乙烷)、DCM(二氯甲烷)、DEAD(二乙基偶氮二 羧酸酯)、DIEA(二异丙基乙胺)、DMA(N，N-二甲基乙酰胺)、DMAP(4-(N，N- 二甲基氨基)吡啶)、DMF(N，N-二甲基甲酰胺)、DMSO(二甲亚砜)、EDC(1-(3- 二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)、Et(乙基)、EtOAc(乙酸乙酯)、 EtOH(乙醇)、HATU(六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲 鎓)、HBTU(六氟磷酸O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓)、HF(氟化氢)、 HOBT(1-羟基苯并三唑水合物)、HPLC(高效液相色谱)、IPA(异丙醇)、 KO^tBu(叔丁氧基钾)、LDA(二异丙基酰胺锂)、MCPBA(3-氯过苯甲酸)、Me(甲 基)、MeCN(乙腈)、MeOH(甲醇)、NaH(氢化钠)、NaOAc(乙酸钠)、NaOEt(乙 醇钠)、Phe(苯丙氨酸)、PPTS(对甲苯磺酸吡啶鎓)、PS(负载的聚合物)、Py(吡 啶)、pyBOP(六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻)、TEA(三乙胺)、 TFA(三氟乙酸)、TFAA(三氟乙酸酐)、THF(四氢呋喃)、TLC(薄层色谱)、 Tol(甲苯酰)、Val(缬氨酸)等。

实施例1

合成5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5]嘧啶 -2-酮)对甲苯磺酸盐

步骤(i)-偶联反应

在配备有温度探测器、冷凝器和氮气进口的三颈烧瓶中加入5-氨基-3H- 噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(2)[根据Wolfe等，J.Org.Chem.1997，62，1754-1759 所述方法制备](22克，130.9毫摩尔)和乙腈(198毫升)。缓慢氮气吹扫下，在搅 拌的同时由漏斗加入BSA(79.86毫升，327.8毫摩尔)，将在氮气氛下该混合物 升温至40℃保持90分钟。用冰浴使黑色、均质的溶液冷却至5℃，加入在66 毫升乙腈中的1，2，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖(3)(35.42克，111.32毫摩尔)。 在氮气下搅拌的同时由移液管加入TMSOTf(23.54毫升，130.9毫摩尔)，导致 放热反应至15℃。然后将该混合物升温至75℃，维持该温度10小时，然后用 冰水浴冷却，首先冷却至环境温度，再冷却至15℃。将水每份1毫升地加入反 应液中，使放热反应在每次加水之间达峰。六次加入后，再加入1毫升水不导 致放热，然后由漏斗加入38毫升水，将该混合物在环境温度下搅拌15分钟。 将硅藻土(Celite，44克)加入搅拌的反应液中，然后在约30秒内加入氢氧化钠 (15.7克50％NaOH，196.35毫摩尔)的22毫升水溶液。环境温度下搅拌90分 钟，反应液过滤。向搅拌的滤液中加入溶解在200毫升水中的碳酸氢钠(16.5 克，196.35毫摩尔)。不再有气泡产生时，加入50克氯化钠固体，搅拌混合物 直到所有固体溶解。将该混合物转移至分液漏斗，将得到的三相液体体系分离。 密度最大的相用50毫升乙腈萃取一次，将其与最初分离的中间相合并。搅拌 的同时向该合并的液体中加入11克硅藻土，5分钟后过滤混合物。滤液包含所 需的偶联产物(4)；其鉴定和纯度可利用已知物质由HPLC测定。

步骤(ii)-酶水解

向溶解在278毫升水中的碳酸氢钠(9.34克，111.32毫摩尔，相当于步骤 (i)中的糖(3))的溶液加入预先洗涤的潮湿的共价负载的脂肪酶[洗涤过程：将 23.21克干的共价结合的B型南极假丝酵母(生物催化剂目录号IMB-111)悬浮 在1∶1乙腈和水的溶液中，搅拌4小时，过滤，用60毫升乙腈-水(1∶1)洗涤]。 向该搅拌的溶液中加入步骤(i)产生的(4)的乙腈溶液。将该悬浮液搅拌36小时， 过滤催化剂，用乙腈-水(1∶1)洗涤，0℃储存备用。滤液用222毫升乙酸异丙酯 萃取，搅拌水相与30克氯化钠直到所有固体溶解，然后用111毫升乙酸异丙 酯再萃取两次。合并有机相，用MgSO₄干燥，与2.5克Norit 211一起搅拌90 分钟，通过硅藻土过滤助剂过滤。滤液包含所需的醇(5)；其鉴定和纯度可利用 已知物质作为标准物由HPLC测定。

步骤(iii)-与对甲苯磺酸成盐

用100毫升200标准烈度乙醇(proof ethanol)稀释步骤(ii)得到的包含溶解 在乙酸异丙酯和乙腈中的(5)的滤液。搅拌的同时，30分钟内逐滴加入在50毫 升200标准烈度的乙醇中的水合对甲苯磺酸(15.89克，83.49毫摩尔)。从反应 混合物结晶出灰白色固体。搅拌16小时后，过滤收集固体，用100毫升乙酸 异丙酯洗涤两次，用50毫升200标准烈度的乙醇洗涤一次。固体在真空烘箱 中干燥，得到30.55克5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑 并[4，5]嘧啶-2-酮对甲苯磺酸盐，HPLC测定其纯度＞98％。

实施例2

步骤(ii)的酶解过程中不加水进行5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋 喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5]嘧啶-2-酮)对甲苯磺酸盐的合成

步骤(i)-偶联反应

在配备有温度探测器、冷凝器和氮气进口的三颈烧瓶中加入5-氨基-3H- 噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-酮(2)(22克，130.9毫摩尔)和乙腈(198毫升)。缓慢氮气吹 扫下，在搅拌的同时从漏斗加入BSA(79.86毫升，327.8毫摩尔)，在氮气氛下 将该混合物升温至40℃保持90分钟。用冰浴使黑色、均质的溶液冷却至5℃， 加入在66毫升乙腈中的1，2，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖(3)(35.42克，111.32 毫摩尔)。在氮气下搅拌的同时由移液管加入TMSOTf(23.54毫升，130.9毫摩 尔)，导致放热反应至15℃。然后将该混合物升温至75℃，维持该温度10小 时，然后用冰水浴冷却，首先冷却至环境温度，再冷却至15℃。将水每份1 毫升地加入反应液中，使放热反应在每次加水之间达峰。六次加入后，再加入 1毫升水不导致放热，然后由漏斗加入38毫升水，将该混合物在环境温度下搅 拌15分钟。将硅藻土(Celite，44克)加入搅拌的反应液中，然后在约30秒内 加入氢氧化钠(15.7克50％NaOH，196.35毫摩尔)的22毫升水溶液。环境温 度下搅拌90分钟，反应液过滤。向搅拌的滤液中加入溶解在200毫升水中的 碳酸氢钠(16.5克，196.35毫摩尔)。不再有气泡产生时，加入50克氯化钠固 体，搅拌混合物直到所有固体溶解。将该混合物转移至分液漏斗，将得到三相 液体体系分离。密度最大的相用50毫升乙腈萃取一次，将其与最初分离的中 间相合并。搅拌的同时向该合并的液体中加入11克硅藻土，5分钟后过滤混合 物。滤液包含所需的偶联产物(4)；其鉴定和纯度可利用已知物质由HPLC测定。

步骤(ii)，不加任何水条件下酶解

在500毫升圆底烧瓶中加入15.0克固定的南极假丝酵母(Novozyme 435， 生物催化剂目录号1MB-102)，再加入无水乙醇(60毫升)。向该液体中加入步 骤(i)产生的(4)的乙腈溶液，将烧瓶与大气密封，环境温度下进行搅拌。72小 时后，加入17.5克硅藻土545，搅拌10分钟，然后过滤固体，用80毫升乙醇 洗涤。滤液包含所需的醇(5)；其鉴定和纯化可利用已知物质作为标准物由 HPLC测定。

步骤(iii)-与对甲苯磺酸成盐

用100毫升200标准强度的乙醇稀释在步骤(ii)得到的包含溶解在乙醇和 乙腈中的(5)的滤液。搅拌的同时，30分钟内逐滴加入在50毫升200标准烈度 的乙醇中的水合对甲苯磺酸(15.89克，83.49毫摩尔)。从反应混合物结晶出灰 白色固体。搅拌16小时后，过滤收集固体，用100毫升乙酸异丙酯洗涤两次， 用50毫升200标准烈度的乙醇洗涤一次。固体在真空烘箱中干燥，得到30.55 克5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5]嘧啶-2-酮对 甲苯磺酸盐，HPLC测定其纯度＞98％。

实施例3

规模化合成5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并 [4，5-d]嘧啶-2-酮对甲苯磺酸盐

步骤(i)-偶联反应

在配备有温度探测器、冷凝器和氮气进口的反应器中加入5-氨基-3H-噻唑 并[4，5-d]嘧啶-2-酮(2)(1.45千克，8.6摩尔)和乙腈(1.29升)。缓慢氮气吹扫下， 在搅拌的同时由漏斗加入BSA(5.23升，21.5摩尔)，在氮气氛下将该混合物升 温至40℃保持90分钟。用冰浴使黑色、均质的溶液冷却至5℃，加入在4.3 升乙腈中的1，2，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖(3)(2.33千克，7.32摩尔)。氮气下 搅拌的同时逐滴加入TMSOTf(1.54升，8.6摩尔)，导致放热反应至15℃。然 后将该混合物升温至75℃，维持该温度10小时，然后冷却，首先冷却至环境 温度，再冷却至15℃。

将水以每份100毫升地加入反应液中，使放热反应在每次加水之间达峰。 加入最后100毫升水不再导致放热时，由漏斗加入1.9升水，将该混合物在环 境温度下搅拌15分钟。将硅藻土(2.47千克)加入搅拌的反应液中，然后加入氢 氧化钠(516.8克，12.92摩尔)的14.5升水溶液。环境温度下搅拌90分钟，反 应液过滤。向搅拌的滤液中加入溶解在14.5升水中的碳酸氢钠(1.08千克，12.92 摩尔)。不再有气泡产生时，加入3.3千克氯化钠固体，搅拌混合物直到所有固 体溶解。将所得三相液体体系分离。密度最大的相用3.3升乙腈萃取一次，将 其与最初分离的中间相合并。合并的相包含所需的偶联产物(4)；其鉴定和纯度 可利用已知物质作为标准物由HPLC测定。

步骤(ii)-酶水解

向溶解在21.5升水中的碳酸氢钠(615克，7.32摩尔，相当于步骤(i)中的 糖(3))的溶液加入干的共价结合的B型南极假丝酵母(1.59千克，生物催化剂目 录号IMB-111)。向该搅拌的溶液中加入步骤(i)产生的(4)的乙腈溶液。将该悬 浮液搅拌36小时，过滤催化剂，用乙腈-水(1∶1)洗涤，0℃储存备用。滤液用 17.5升乙酸异丙酯萃取，水相与3.3千克氯化钠一起搅拌直到所有固体溶解， 然后用9升乙酸异丙酯再萃取两次。合并有机部分，用MgSO₄干燥，与117 克Norit 211一起搅拌90分钟，通过硅藻土过滤助剂过滤。滤液包含所需的醇 (5)；其鉴定和纯度可利用已知物质作为标准物由HPLC测定。

步骤(iii)-与对甲苯磺酸成盐

用5.5升200标准烈度的乙醇稀释步骤(ii)所得的包含溶解在乙酸异丙酯和 乙腈中的(5)的滤液。搅拌的同时，30分钟内逐滴加入在3.3升200标准烈度的 乙醇中的水合对甲苯磺酸(1.04千克，5.49摩尔)。从反应混合物结晶出灰白色 固体。搅拌16小时后，过滤收集固体，用7.5升乙酸异丙酯洗涤两次，用3.5 升200标准烈度的乙醇洗涤一次。固体在真空烘箱中干燥，得到2.38千克5- 氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5]嘧啶-2-酮对甲苯 磺酸盐，HPLC测定其纯度＞98％。

实施例4

结晶5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-dl嘧 啶-2-酮对甲苯磺酸盐

将5-氨基-3-(2′-O-乙酰基-3′-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-3H-噻唑并[4，5-d]嘧啶 -2-酮[50.0克，(以CoA为基准，43.85克，134毫摩尔有效)]加入2-升的三颈 烧瓶中。加入无水乙醇(840毫升)，将混合物在环境温度下搅拌约10分钟，得 到淡黄色溶液。将对甲苯磺酸(pTsOH)(26.2克，138毫摩尔)加入另一烧瓶中， 环境温度下溶解在无水乙醇(220毫升)中。将p-TsOH/乙醇溶液加入加液漏斗 中，然后在环境温度下，40分钟的时间内逐滴滴加到式(5)的搅拌溶液中。用 无水乙醇(3×20mL)淋洗用于制备p-TsOH/乙醇溶液的烧瓶和加液漏斗，每次 淋洗液加入反应悬浮液中。反应液在环境温度、氮气下搅拌过夜(18小时)，然 后用布氏漏斗和Whatman#1滤纸真空过滤。烧瓶中残余的固体用无水乙醇(2 ×50毫升)转移到滤器中，然后用无水乙醇(4×150毫升)洗涤滤饼。在滤器中 抽吸简单干燥滤饼后，将潮湿的白色固体在50-55℃、28-29英寸真空、氮气吹 扫的真空箱中干燥54小时。真空下冷却至环境温度后，得到62.9克(产率93.8％) 为白色结晶的式(1)化合物，HPLC测定纯度为99.1％。

第二批式(1)化合物的分离：将上述合并的上清液和洗涤液在旋转蒸发器 (45-50℃水浴，28-29英寸真空)上浓缩至体积为470毫升。搅拌下，将所得含 结晶颗粒的溶液冷却至环境温度。5分钟内，形成晶体悬浮液。将该悬浮液在 环境温度下搅拌约48小时，然后用布氏漏斗和Whatman#1滤纸真空过滤。滤 饼用无水乙醇(4×6毫升)洗涤，然后将固体在50-55℃、28-29英寸真空、氮气 吹扫的真空箱中干燥48小时。真空下冷却至环境温度后，获得2.8克(产率4.2％) 式(1)的化合物作为第二批式(1)的化合物，HPLC测定纯度为96％。

实施例5

1，2：5，6-二-O-异亚丙基-3-O-三氟甲磺酰基-α-D-呋喃型葡萄糖(7a)

将三氟甲磺酸酐(10.9毫升，64.9毫摩尔)逐滴加入1，2：5，6-二-O-异亚丙基 -α-D-呋喃型葡萄糖(13.0克，50.0毫摩尔)、吡啶(10.0毫升，124毫摩尔)和 CH₂Cl₂(300毫升)的-20℃到-10℃的搅拌溶液中，同时保持内部温度低于-10℃。 所得溶液在-10℃到0℃之间搅拌，同时由TLC监测原料的消耗(要求约1小时)。 反应液用H₂O(2×100毫升)洗涤，然后用饱和NaCl水溶液(50毫升)洗涤。有 机相用Na₂SO₄干燥，然后过滤。滤液在旋转蒸发器上浓缩至干(约30℃)，得 到20.4克(100％)白色蜡状固体1，2：5，6-二-O-异亚丙基-3-O-三氟甲磺酰基-α-D- 呋喃型葡萄糖(7a)。该物质可无需进一步纯化可直接用于下一步骤。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ5.99(d，1H)，5.26(d，1H)，4.76(d，1H)，4.14-4.25(m，3H)， 3.96-3.99(dd，1H)，1.53(s，3H)，1.44(s，3H)，1.35(s，3H)，1.34(s，3H)。

实施例6

3-脱氧-1，2：5，6-二-O-异亚丙基-α-D-呋喃型葡萄糖(8B)

将1，2：5，6-二-O-异亚丙基-3-O-三氟甲磺酰基-α-D-呋喃型葡萄糖(7a)(20.4 克，52.0毫摩尔)和n-Bu₄NBH₄(40.0克，155毫摩尔)在甲苯(500毫升)中的混合 物用氮气鼓泡脱气20分钟。将混合物在氮气下80℃加热，同时由TLC监测原 料的消耗(要求约6小时)。将反应液冷却至环境温度，然后小心加入水(200毫 升)。所得混合物在环境温度下搅拌直到不再有氢气逸出。分离两相，有机相 依次用水(2×200毫升)和饱和NaCl水溶液(100毫升)洗涤。有机相在旋转蒸发 器(40-50℃)上浓缩得到9.5克(78％)澄清油状物的3-脱氧-1，2：5，6-二-O-异亚丙基 -α-D-呋喃型葡萄糖(8a)。该物质无需进一步纯化即可用于下一步骤(注5)：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ5.8(d，1H)，4.75(t，1H)，4.08-4.19(m，3H)，3.79-3.85(m， 1H)，2.17-2.21(dd，1H)，1.73-1.80(m，1H)，1.51(s，3H)，1.43(s，3H)，1.36(s，3H)， 1.32(s，3H)。

实施例7

3-脱氧-1，2-O-异亚丙基-α-D-呋喃型葡萄糖(9a)

将3-脱氧-1，2：5，6-二-O-异亚丙基-α-D-呋喃型葡萄糖(8a)(9.50克，38.9毫 摩尔)溶解在乙酸(60毫升)中。加水(60毫升)，所得溶液在环境温度下搅拌过夜， 同时由TLC监测原料的消耗。溶液在旋转蒸发器上浓缩(约50℃)，得到7.9克 (100％)粘稠的澄清油状物的3-脱氧-1，2-O-异亚丙基-α-D-呋喃型葡萄糖(9a)。该 物质无需进一步纯化即可用于下一步骤：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ5.72(d， 1H)，4.67(t，1H)，4.11(m，1H)，3.78(m，1H+2OH)，3.75-3.79(m，1H)，3.44-3.49(m， 1H)，1.97-2.02(m，1H)，1.74-1.81(m，1H)，1.44(s，3H)，1.25(s，3H)。

实施例8

3-脱氧-1，2-O-异亚丙基-α-D-呋喃型木糖(10a)

将3-脱氧-1，2-O-异亚丙基-α-D-呋喃型葡萄糖(9a)溶解在CH₃OH(50.0毫升) 中，加入CH₂Cl₂(50.0毫升)中。环境温度下，将NaIO₄(10.0克，46.7毫摩尔) 一次性加入该溶液中。所得悬浮液在环境温度下搅拌过夜，同时由TLC监测 原料的消耗。过滤悬浮液，盐用CH₂Cl₂洗涤(20毫升)。将滤液转移到干燥的 烧瓶中。将NaBH₄(4.0克，106毫摩尔)分批缓慢加入合并的搅拌滤液中。悬浮 液在环境温度下搅拌2小时后，TLC显示中间体醛完全转化为3-脱氧-1，2-O- 异亚丙基-α-D-呋喃型木糖(10a)。旋转蒸发器上(约40℃)除去溶剂，残留物在 10％NaCl水溶液(50毫升)和EtOAc(50毫升)之间分配。将两相剧烈混合，然后 分离。水相用EtOAc(3×50毫升)萃取。合并的有机萃取物用饱和NaCl水溶液 (30毫升)洗涤，用Na₂SO₄干燥，然后过滤。滤出液在旋转蒸发器(约40℃)上 浓缩，得到4.7克(70％)为白色固体的3-脱氧-1，2-O-异亚丙基-α-D-呋喃型木糖 (10a)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ5.82(d，1H)，4.76(t，1H)，4.34-4.37(m，1H)， 3.90(dd，1H)，3.56(q，1H)，1.99-2.04(m，1H)，1.82-1.89(m，1H)，1.76(br s，1H)， 1.53(s，3H)，1.34(s，3H)。

实施例9

3-脱氧-1，2，5-三-O-乙酰基-α-D-呋喃型木糖(3B)

将H₂SO₄水溶液(0.1毫升1M的溶液，0.1毫摩尔)缓慢加入到3-脱氧 -1，2-O-异亚丙基-α-D-呋喃型木糖(10a)(0.26克，1.5毫摩尔)、冰醋酸(3毫升) 和乙酸酐(0.6毫升)的溶液中。所得溶液在环境温度下搅拌过夜，然后蒸发至干。 残留物在水和EtOAc之间分配。将相混合物充分震摇，然后分离。水相用EtOAc 萃取。合并的有机部分用Na₂SO₄干燥，过滤，蒸发至干，得到α和β端基异 构体混合物形式的粗制3-脱氧-1，2，5-三-O-乙酰基-α-D-呋喃型木糖(3B)。β端基 异构体的¹HNMR：(400MHz，CDCl₃)δ6.17(s，1H)，5.19(d，1H)，4.55-4.61(m，1H)， 4.22(d，0.5H)，4.20(d，0.5H)，4.07-4.12(m，1H)，2.04-2.18(m，11H)。

实施例10

3-脱氧-1，2，5-三-O-乙酰基-α-D-呋喃型木糖(3B)

将3-脱氧-1，2-O-异亚丙基-α-D-呋喃型木糖(10a)(1.0克，5.7毫摩尔)， CH₂Cl₂(5毫升)、乙酸酐(2毫升)和吡啶(0.3毫升)的溶液在环境温度下搅拌过夜。 真空蒸发溶液以去除CH₂Cl₂。0℃向剩余溶液中加入乙酸(18毫升)、乙酸酐(1 毫升)和浓硫酸(1.2毫升)。所得溶液从0℃升温至环境温度并搅拌24小时。溶 液冷却至0℃，加入10％乙酸钠水溶液(150毫升)。所得溶液用甲基叔丁基醚 (MTBE)萃取(2×100毫升)。合并的MTBE萃取物依次用5％NaHCO₃(2×40 毫升)、水和饱和NaCl水溶液(50毫升)洗涤。MTBE相蒸发至干，得到0.9克 α和β端基异构体混合物形式的3-脱氧-1，2，5-三-O-乙酰基-α-D-呋喃型木糖 (3B)。¹H NMR分析与实施例9所得结果相同。

重要的是，示例性实施方式中示出的方法和步骤的结构和排列仅仅是阐述 性的。虽然本文仅详细描述了一些本发明的实施方式，本领域技术人员将容易 明白，许多改进形式也是可能的而不实质背离权利要求书中所述主旨的新颖性 内容和优点。因此，所有这些改进形式旨在包括在所附权利要求书所限定的本 发明的范围内。根据可选的实施方式，任意方法或方法步骤的顺序或序列可变 化或重排。实施方式的设计、操作条件和排列可进行其他替代、改进、改变或 省略而不背离所附权利要求书所表达的本发明的精神。

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