阿加曲班在血细胞和生化常规分析中的应用

摘要

本发明公开了一种阿加曲班在血细胞和生化常规分析中的应用。本发明选用的阿加曲班是一种活性强、高度选择性的凝血酶抑制剂，能直接与凝血酶(因子IIa)结合，不但灭活血液中游离状态的凝血酶，还能够灭活与纤维蛋白结合的凝血酶，极低浓度时即可抑制由凝血酶所致的纤维蛋白形成和血小板聚集，达到抗凝目的。目前大多数临床实验室在一个工作日(8h)内出具血细胞和生化常规分析报告。本发明通过实验选定重复性、稳定性和干扰性实验的阿加曲班浓度约为0.7mg/ml，因为其可保证血液在10h内不凝固。

说明书

技术领域：

本发明涉及一种试剂的新用途。

背景技术：

血液标本是临床实验室使用最多的标本类型。常用的血标本抗 凝剂如EDTA-K₂、肝素锂等可干扰某些项目检测，故仅局限于某类 标本的抗凝^[1-3]。当患者检查不同项目时，需使用多种抗凝管，而每 类标本又未尽其用，造成标本的极大浪费，并增加患者痛苦和医疗 成本。因此，寻求一种通用抗凝剂是亟待解决的问题，但目前国内 外对临床实验室使用新抗凝剂的研究报道很少。阿加曲班 (Argatroban)能强烈地直接抑制凝血酶(II a)活性，阻止血液凝 固，且不会引起出血等副作用，因而在临床抗血栓治疗领域应用较 为广泛。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种阿加曲班的新用途，是阿加曲班在 血细胞和生化常规分析中的应用。

本发明的技术解决方案是：

一种阿加曲班在血细胞和生化常规分析中的应用。

所述的阿加曲班在血细胞和生化常规分析中的应用，在进行血 细胞和生化常规分析时，阿加曲班浓度约为0.70～0.75mg/ml。

本发明选用的阿加曲班是一种活性强、高度选择性的凝血酶抑 制剂，能直接与凝血酶(因子IIa)结合，不但灭活血液中游离状态 的凝血酶，还能够灭活与纤维蛋白结合的凝血酶，极低浓度时即可 抑制由凝血酶所致的纤维蛋白形成和血小板聚集，达到抗凝目的。

目前大多数临床实验室在一个工作日(8h)内出具血细胞和生 化常规分析报告。本发明通过实验选定重复性、稳定性和干扰性实 验的阿加曲班浓度约为0.7mg/ml，因为其可保证血液在10h内不凝 固。

下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明：

图1是不同浓度阿加曲班的抗凝效果图。

图2是10例WBC和PLT在一定时间段内的变化情况图。

具体实施方式：

一种阿加曲班在血细胞和生化常规分析中的应用。

所述的阿加曲班在血细胞和生化常规分析中的应用，在进行血 细胞和生化常规分析时，阿加曲班浓度约为0.70～0.75mg/ml。

本发明的实验材料如下：

1.材料

阿加曲班(Argatroban)购自天津药物研究院药业有限责任公司。 外观呈白色晶状粉末，纯度99.2％，批号：070814，CAS登记号： 74863-84-6，有效期3年。无任何添加剂的空白试管(硅化玻璃)购 自江苏康健医疗用品有限公司，批号：080718，有效期2年，规格3 ml，13×75mm。按照实验设计方案称取一定量阿加曲班加入空白试 管内制成实验用试管。

2.标本收集

共93例标本，来自志愿者和本院门诊就医者(排除影响血液凝 固的血液病、肝脏疾病等患者)，其中男41例，女52例，年龄(31±3) 岁(20～41岁)。由2名熟练的专业技术人员从肘静脉、严格按实 验要求定量采集血液。

3.仪器、试剂和检测方法

检测仪器为全自动血细胞分析仪(Sysmex XE-2100)和全自动 生化分析仪(Hitachi 7600-020)，血细胞分析采用仪器配套试剂，生 化分析采用实验室日常检测用试剂。室内质控品为Sysmex e-CHECK level 2，批号：82030802(血细胞分析)和BeckmanCoulter NYSSPATH level 2，批号：M705512(生化分析)。检测时仪 器均在控。

表1分析项目、检测方法和试剂来源。

续表1

4.凝固时间与剂量的关系

共5位受试者参与本实验，每人采集定量全血分别加入1支空 白管和4支自制阿加曲班抗凝管，各管阿加曲班最终浓度依次约为 0、0.13、0.33、0.52、0.74mg/ml，再分别于0.5、2、5、10、14、 24h观察标本凝固情况。倾斜试管，如血液保持正常流动状态为未 凝固，记为0分，轻度粘稠记为1分，重度粘稠记为2分，完全凝 固记为3分。

5.重复性实验

共10位受试者，第1组(5人)进行血细胞常规分析的重复性 实验，第2组(另5人)进行生化常规分析的重复性实验。阿加曲 班最终浓度约为0.70mg/ml。所有标本连续重复检测5次，1h内完 成。

6.稳定性实验

共20位受试者，第1组(10人)进行血细胞常规分析的稳定性 实验，第2组(另10人)进行生化常规分析的稳定性实验。阿加曲 班最终浓度约为0.75mg/ml。标本分别于采血后1、3、5、7、9、11 h(血细胞分析)和1、2、4、6、8h(生化分析)检测，以1h检测 结果为参照值。实验过程中，血细胞分析标本始终置于室温，而生 化分析标本在全血离心后将血清或血浆移入另一试管置于2℃～8℃ 冰箱保存，分别于相应检测时间点取出检测。

7.干扰性实验

共58位受试者，分为2组(每组29人)。第1组每人抽取定量 全血注入1支EDTA-K₂抗凝管和2支自制阿加曲班抗凝管，第2组 每人抽取定量全血注入1支空白管和2支自制阿加曲班抗凝管，各 管抗凝剂最终浓度约为1.8mg/ml(EDTA-K₂)和0.7、1.5mg/ml(阿 加曲班)。血细胞分析以EDTA-K₂抗凝血检测值为参照，生化分析 以空白管血清值为参照。

8.统计学处理

实验数据采用统计软件SigmaStat 3.5和SigmaPlot 10.0处理。 根据数据分布特点，稳定性实验数据采用单因素重复测量方差分析 或基于秩的Friedman重复测量方差分析，干扰性实验数据采用单因 素方差分析或基于秩的Kruskal-Wallis方差分析。临床可接受范围 (clinically acceptable limits，CAL)＝参考值±参考值×[1.65×CV_A+ 0.25×(CV_W-S²+CV_B-S²)^1/2]，其中CV_A我们取日常室内质控结果的变 异系数，CV_W-S和CV_B-S分别为个体内和个体间生理变异系数^[7]。

结果

1.凝固时间与剂量的关系

阿加曲班浓度越高，抗凝时间越长。当阿加曲班浓度为0.74 mg/ml时，抗凝时间可达10h，见图1。

2.重复性实验

阿加曲班抗凝标本中，各检测项目的变异系数(CV％)均小于 或接近TEa的1/4^[8]或本实验室批内精密度，见表2。

表2重复性实验结果

续表2

注：实验CV％以5人的CV％均值±SD表示；空格处为无CLIA’88 的TEa值或本科室CV％。

3.稳定性实验

部分生化项目(ALP、LDH、TB、TP、Alb、Urea、UA、Chol、TG、 HDL-c、LDL-c、apo A1、apo B、K、Na、Cl、Ca、P)和血细胞项 目(WBC、NE#、PLT)各测试点的检测值间有统计学差异，其中 仅WBC检测值超出该项目临床可接受范围(表3)，差异具有临床 意义，但从图2看出，WBC在采血5h后趋于稳定。虽然PLT检测 值在临床可接受范围内，但9h后有下降趋势(图2)。中性粒细胞 数(NE#)变化情况与WBC相似。

4.干扰性实验

0.7、1.5mg/ml阿加曲班抗凝标本的TP和Na检测值与血清标 本检测值间有统计学差异，但均在临床可接受范围内，差异不具有 临床意义(表4)。抗凝血K检测值低于临床可接受范围，MCHC值 略高于临床可接受范围。其它血细胞和生化分析项目均无统计学差 异且都在临床可接受范围内。