一种红叶樱花组培快繁培养基及组培快繁方法

摘要

本发明属于植物的组培快繁方法领域，特别涉及一种红叶樱花的培养基及组培快繁方法。所述培养基由大量元素、微量元素、铁盐、有机成分、蔗糖、琼脂和植物生长调节剂组成，其大量元素的组成如下：硝酸铵、硫酸钾、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、四水硝酸钙、二水氯化钙；其铁盐组成如下：七水硫酸亚铁、二水乙二胺四乙酸钠；所述植物生长调节剂为6－苄基腺嘌呤，浓度为0.5～1.0毫克/升；其他成分同MS培养基。所述培养基的pH值为5.6～5.8。本发明提供的红叶樱花组培快繁培养基及组培快繁方法，针对红色樱花的特点，简便易行。组培苗无畸形，节间伸长，繁殖系数提高。繁殖周期短，约50天。培养效果好，成活率高。

说明书

(一)技术领域

本发明属于植物的组培快繁方法领域，特别涉及一种红叶樱花的培养基及组培快繁方法。

(二)背景技术

樱花，蔷薇科、李属，在我国为著名观赏花木，在华北、华东、华南、中原地区及东北、西北的大部分地区有广泛的传统栽植习惯，不少城市将其定为“市树市花”。红叶樱花，是瑰丽樱花的一个变种，在国外经多年选育，其性状已稳定，其花甚大、淡红色、重瓣、有长梗，在河南3月中下旬至4月上、中旬开花，花先叶开放或花叶同放，花大而艳丽。初春展叶为深红色，5至7月份叶为亮红色，高温多雨季节老叶渐变深紫色，叶大而厚，晚秋遇霜叶变桔红色。

目前红叶樱花用嫁接和扦插繁殖，但繁殖系数小，生根率低。在现有组培快繁技术文献中，尚未发现红叶樱花组培快繁方法的系统报道。若参照其他木本植物的组培快繁培养基和组培快繁方法对红叶樱花进行组培快繁，会出现组培苗抽生叶片不伸展、畸形、呈现莲座化、节间短小，从而导致增殖速度缓慢，增殖系数小，成苗周期长，成苗质量差。

(三)发明内容

本发明的目的在于提供一种红叶樱花组培快繁培养基及组培快繁方法，针对红色樱花的特点而设计，简便易行，增殖速度快，成苗周期短，组培快繁效果好，成活率高。

本发明采用的技术方案如下：

一种红叶樱花组培快繁培养基，由大量元素、微量元素、铁盐、有机成分、蔗糖、琼脂和植物生长调节剂组成，其微量元素、有机成分以及蔗糖、琼脂的组成和浓度同MS培养基，其大量元素的组成及每升的含量如下：硝酸铵500～550毫克，硫酸钾520～570毫克，磷酸二氢钾150～170毫克，七水硫酸镁350～400毫克，四水硝酸钙750～800毫克，二水氯化钙90～100毫克；其铁盐组成及每升的含量如下：七水硫酸亚铁28～56毫克，二水乙二胺四乙酸钠38～76毫克；所述植物生长调节剂为6-苄基腺嘌呤，浓度为0.5～1.0毫克/升；所述培养基的pH值为5.6～5.8。

本发明还提供了利用所述红叶樱花组培快繁培养基进行组培快繁的方法，包括所述培养基的灭菌、红叶樱花腋芽茎段的灭菌、腋芽茎段外植体的接种、增殖培养、生根培养、炼苗、移栽，其中增殖培养期间进行暗处理。

所述暗处理于接种后第4～6天进行，暗处理时间为7～10天。

所述培养基的灭菌、红叶樱花腋芽茎段的灭菌、腋芽茎段外植体的接种、增殖培养、生根培养、炼苗、移栽可参照其他木本植物的组培快繁方法进行，也可按照下面方法进行：

培养基的灭菌在120～125℃，1.06～1.08kg/cm²的压力下进行15min。

红叶樱花腋芽茎段的灭菌为：先用自来水冲洗，再用洗洁精刷洗每个茎段，最后用流水冲洗30分钟；拿到超净工作台上进行灭菌，体积浓度为75％的酒精灭菌30秒，质量浓度为1％的NaClO灭菌10分钟，无菌水冲洗1遍，再用质量浓度为0.5％的NaClO灭菌10～13分钟，无菌水冲洗3～4遍。所述红叶樱花腋芽茎段由红叶樱花当年4～5月萌发的侧芽获得。

所述增殖培养、生根培养的条件为温度25±2℃，光照强度2000Lx，光照时间为12小时/天；约7～10天左右，接种的外植体腋芽萌发。

具体的，增殖培养为每隔25～30天，从培养产生的无菌丛生芽上剪取腋芽茎段，重复接种步骤进行增殖培养，在玻璃瓶上覆盖黑布进行暗处理。

生根培养为将培养基上高度在1.5cm以上、生长健壮的组培苗接种于生根培养基中进行生根培养。一般接入生根培养基后7～10天有白色根尖长出，20天后可以形成完整的根系。

所述炼苗、移栽为将生根的组培苗在温室中经过1～2天的半开玻璃瓶盖炼苗和3～5天的全开玻璃瓶盖炼苗；取出其中的组培苗，用清水洗净根系粘附的培养基，栽入穴盘，移栽基质为草炭和珍珠岩质量比为3～4∶1的混合物；移栽初期的10～15天，保持温度25～28℃，相对湿度保持在90％以上。

生根培养所用培养基其大量元素的组成及每升的含量如下：硝酸铵810～830毫克，硝酸钾930～960毫克，二水氯化钙210～230毫克，七水硫酸镁175～195毫克；所述植物生长调节剂是IBA和NAA的等量混合物，浓度分别为0.05～0.1毫克/升；其他成分及浓度组成同所述快繁培养基。

本发明对普适性的MS培养基进行有利于红叶樱花组培快繁的调整。调整主要体现在三个方面：一个方面是离子总量的调整，离子总量降低到普适培养基的1/2以下。另一方面是N∶P₂O₅∶K₂O的调整，将N∶P₂O₅∶K₂O由1∶6∶1调整为2∶1∶4.第三方面是NH₄⁺-N/NO₃^--N的调整，将NH₄⁺-N/NO₃^--N由1∶3.5调整为1∶2。此调整使红叶樱花组培苗叶片畸形消失，叶片伸展。

增殖培养期间覆盖黑布进行暗处理是利用植物在弱光条件下的适应性反应来提高节间长度，改善普适性培养基上红叶樱花节间短小，新生叶片莲座化的问题。

本发明方法经生根培养，生根率达到90％以上，炼苗后移栽，成活率90％左右。

本发明相对于现有技术，有以下优点：

本发明提供的红叶樱花组培快繁培养基及组培快繁方法，针对红色樱花的特点，简便易行。组培苗无畸形，节间伸长，繁殖系数提高。繁殖周期短，约50天。培养效果好，成活率高。

(四)附图说明

图1为利用MS培养基以及实施例1快繁培育方法培育生长的红叶樱花；

图2为利用实施例1培养基和培养方法培育但增殖培养不做暗处理生长的红叶樱花；

图3为本发明实施例1中暗处理后的红叶樱花；

图4为本发明实施例1中红叶樱花组培生根苗；

图5为本发明实施例1中移栽成活的红叶樱花；

图6为本发明实施例1中红叶樱花的成苗。

(五)具体实施方式：

以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此：

实施例1

红叶樱花组培快繁培养基的配制按每升中含有以下物质种类和质量溶入蒸馏水中配制而成。

硝酸铵500毫克，硫酸钾520毫克，磷酸二氢钾150毫克，七水硫酸镁350毫克，四水硝酸钙750毫克，二水氯化钙90毫克，四水硫酸锰22.3毫克，硫酸锌8.6毫克，硼酸6.2毫克，二水钼酸钠0.25毫克，碘化钾0.83毫克，六水氯化钴0.025毫克，五水硫酸铜0.025毫克，七水硫酸亚铁28毫克，二水乙二胺四乙酸钠38毫克，肌醇100毫克，烟酸0.5毫克，盐酸吡哆醇0.5毫克，盐酸硫胺素0.1毫克，甘氨酸2毫克，6-苄基腺嘌呤0.5毫克，蔗糖30克，琼脂6克。用1M的氢氧化钠将培养基pH调节为5.6。

红叶樱花的组培快繁：

将配制好的培养基放入高为8.5厘米，口径为5.5厘米的玻璃瓶，每瓶50毫升，盖紧瓶盖，于121℃，1.06kg/cm²灭菌15分钟后待用。

取红叶樱花当年4-5月萌发枝条，剪成带一个腋芽茎段，先用自来水冲洗，再用洗洁精刷洗每个茎段，最后用流水冲洗30分钟。拿到超净工作台上进行灭菌，体积浓度为75％的酒精灭菌30秒，质量浓度为1％的NaClO灭菌10分钟，无菌水冲洗1遍，再用质量浓度为0.5％的NaClO灭菌10分钟，无菌水冲洗3～4遍。

于超净工作台上将消毒后的外植体接种于培养基中，将其放入培养室进行增殖以及生根培养，培养条件为温度25±2℃，培养光源为28W直管型节能荧光灯，光照强度2000Lx，光照时间为12小时/天。

25天后，从培养基上萌发的无菌丛生芽上剪取腋芽茎段，接种于新配制的培养基中，不断继代增殖。剪取高度在1.5cm以上的茎段、接种于生根培养基中进行生根培养，每升生根培养基中用硝酸铵810毫克，硝酸钾930毫克，二水氯化钙210毫克，七水硫酸镁175毫克替代快繁组培培养基中的硝酸铵、硫酸钾、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、四水硝酸钙、二水氯化钙；用浓度皆为0.05毫克/升的IBA和NAA的混合物替代上述培养基中的6-苄基腺嘌呤。接入生根培养基后7～10天有白色根尖长出，20天后可以形成完整的根系。

为了打破组培苗新生叶片的莲座化，简便而快速地增加组培苗节间长度，缩短成苗周期，于增殖培养期间，在玻璃瓶上覆盖黑布进行暗处理。暗处理于接种后第6天进行，暗处理时间为10天。

生根的组培苗在温室中经过2天的半开玻璃瓶盖炼苗和3天的全开玻璃瓶盖炼苗，取出其中的组培苗，用清水洗净根系粘附的培养基，栽入72孔的穴盘，移栽基质为草炭：珍珠岩质量比为3∶1的混合物。移栽初期的10～15天，保持温度25～28℃，相对湿度保持在90％以上。移栽成活率为92％。

从图1-6中可知，采用本发明提供培养基以及组培快繁方法，培养出的红叶樱花组培苗新生叶片叶形正常，叶色浓绿，姿态伸展，无莲座化现象。组培苗经炼苗移栽后，生长健壮，茎杆充实，新生叶片红叶樱花特征明显。当增殖培养不进行暗处理时，可发现存在节间短小的问题。

实施例2

红叶樱花组培快繁培养基的配制：每升中含有硝酸铵550毫克，硫酸钾570毫克，磷酸二氢钾170毫克，七水硫酸镁400毫克，四水硝酸钙800毫克，二水氯化钙100毫克，七水硫酸亚铁56毫克，二水乙二胺四乙酸钠76毫克，6-苄基腺嘌呤1.0毫克；其他成分和浓度同实施例1；培养基pH调节为5.8。培育方法中除暗处理时间为7天外，其他同实施例1，成活率为90％。

实施例3

红叶樱花组培快繁培养基的配制：每升中含有硝酸铵525毫克，硫酸钾545毫克，磷酸二氢钾160毫克，七水硫酸镁375毫克，四水硝酸钙775毫克，二水氯化钙95毫克，七水硫酸亚铁42毫克，二水乙二胺四乙酸钠57毫克，6-苄基腺嘌呤0.8毫克；其他成分和浓度同实施例1；培养基pH调节为5.7。

培育方法中除了草炭：珍珠岩质量比为4∶1之外，其他同实施例1，成活率为87％。

实施例4

培育方法中除了半开玻璃瓶盖炼苗为1天，全开玻璃瓶盖炼苗为5天外，培养基的组成以及培养方法的其他部分同实施例1，成活率为90％。