阿达帕林盐酸克林霉素复方凝胶制剂及其制备方法

摘要

本发明公开了阿达帕林盐酸克林霉素复方凝胶制剂及其制备方法。该制剂按重量百分比含有0.08％－0.12％的阿达帕林和0.8％－1.2％的盐酸克林霉素。阿达帕林盐酸克林霉素复方凝胶的制备方法包括：配制凝胶基质，溶胀，灭菌，将阿达帕林和盐酸克林霉素分别溶解凝胶基质中，用三乙醇胺调节pH，使之形成稳定的凝胶。本品可以有效地治疗痤疮。

说明书

技术领域

本发明涉及含有阿达帕林(Adapalene)和盐酸克林霉素(hydrochloric clindamycin)的复方凝胶制剂及其制备方法，该凝胶制剂可用于治疗痤疮。

背景技术

痤疮是一种常见的毛囊皮脂腺炎症性疾病。致病因素较多，在人的青春期阶段，发病广，表现出来的症状的程度不同。

阿达帕林是一种视黄醇类化合物，具有抑制人类多形核白细胞的化学趋化反应，并可通过抑制花生四烯酸化脂氧化反应转化为炎症媒介物来抑制多形白细胞的代谢。能够溶解粉刺，缓解痤疮的炎性反应。

盐酸克林霉素能够抑制蛋白质合成过程中肽链的延长，从而影响了细菌细胞蛋白质的合成。盐酸克林霉素对厌氧菌感染有较好的疗效，能抑制痤疮丙酸杆菌的活性，有效治疗痤疮病症。

由于阿达帕林为脂溶性药物，在水中溶解性很差，因此不易获得稳定的水凝胶制剂，而脂溶性的阿达帕林制剂不仅会产生油腻感，而且药物吸收相对较慢。目前治疗痤疮的制剂配方比较单一，制剂的稳定性不高，治疗效果也不理想。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种阿达帕林盐酸克林霉素复方凝胶制剂，该制剂对痤疮丙酸杆菌的抑制作用显著，治疗效果突出。

本发明的另一目的是提供一种阿达帕林盐酸克林霉素复方凝胶制剂的制备方法，利用该方法可以得到水溶性稳定的阿达帕林盐酸克林霉素复方凝胶制剂，该方法所得制剂对痤疮丙酸杆菌的抑制作用显著。

为实现上述发明目的，本发明提供的技术方案如下：

一种阿达帕林盐酸克林霉素复方凝胶制剂，按重量百分比其中含有0.08％-0.12％的阿达帕林和0.8％-1.2％的盐酸克林霉素。

上述阿达帕林盐酸克林霉素复方凝胶制剂，其中还含有

卡波姆                   0.4％-1.6％

1，2-丙二醇              17.6％-26.4％

尼泊金甲酯               0.16％-0.24％

乙二醇苯醚               0.32％-0.48％

乙二胺四乙酸二钠         0.08％-0.12％

三乙醇胺                 0.60％-1.20％

泊洛沙姆188              0.16％-0.64％

上述药物的原料药及辅料均可通过市场途径获得，本领域技术人员熟悉上述原辅料的名称、用途及使用方法。对于上述辅料，本领域技术人员可以选择具有相同或类似作用的辅料进行替换。

本发明提供了制备上述阿达帕林盐酸克林霉素复方凝胶制剂的方法，包括下述步骤：

(1)按上述重量百分比称取原料药和辅料；

(2)配制凝胶基质，溶胀，灭菌；

(3)分别溶解阿达帕林和盐酸克林霉素；

(4)将溶解好的主药加入至灭菌后的基质中，搅拌均匀；

(5)三乙醇胺水溶液调节pH为6.0-7.5之间，以形成稳定的凝胶制剂。

(6)制剂分装后即得。

上述制备方法中，卡波姆优选卡波姆940，步骤5)PH值最佳值是7.0。

本发明的阿达帕林盐酸克林霉素复方凝胶制剂主要用于由痤疮丙酸杆菌引起的皮肤痤疮，对有其他病菌引起的皮肤感染也有一定的疗效。本凝胶制剂为外用制剂，医师可以根据个体感染状况施用适宜的剂量。

本发明提供的复方凝胶制剂的优点是：

(1)采用本发明重量配比的阿达帕林与盐酸克林霉素可以起到协同作用，从而更有效地治疗痤疮。通过药效学实验显示，采用本发明重量配比的联合用药较单一使用阿达帕林或克林霉素的制剂治疗效果显著，体外抑菌实验显示本发明中阿达帕林和盐酸克林霉素可产生协同抗菌作用。

(2)阿达帕林为脂溶性药物，在水中溶解性很差，通过本工艺，解决了阿达帕林的水溶性问题，制备了稳定均一的水凝胶。

(3)本发明的制备工艺简便，制剂质量稳定，给药方便，释药快，无油腻性，易涂展，对皮肤及粘膜无刺激性，能与水溶液混合，治疗后药物易洗除。

(4)阿达帕林盐酸克林霉素复方凝胶剂比阿达帕林凝胶剂和盐酸克林霉素凝胶剂稳定性好，阿达帕林凝胶剂(达芙文)和盐酸克林霉素凝胶剂有效期均为两年，本品进行了36个月稳定性考察，结果表明本品长期考察36个月样品稳定性良好。

(5)阿达帕林盐酸克林霉素复方凝胶的毒性实验证明，本品安全无毒，对皮肤无明显刺激性作用，不会导致皮肤过敏反应。

阿达帕林盐酸克林霉素复方凝胶可以更有效地缓解由细胞反应介导的炎性反应和抑制痤疮丙酸杆菌的活性，能有效治疗痤疮病症，且对皮肤的刺激性很小，因此将阿达帕林和盐酸克林霉素制成阿达帕林盐酸克林霉素复方凝胶剂，更好地发挥治疗痤疮，具有广阔的应用和市场前景。

具体实施方式

下面的实施例将对本发明作进一步的解释，但是本发明并不仅仅局限于这些实施例，这些实施例不以任何方式限制本发明的保护范围。

实施例1 本发明复方凝胶剂的制备

表1为本发明复方凝胶制剂的制备实施例I-III所用的原辅料的用量。

表1 制备实施例I-III所用原料及辅料配方

 

成分制备例I(g)    制备例II(g)     制备例III(g)      阿达帕林546盐酸克林霉素504060卡波姆9405020801，2-丙二醇11008801320三乙醇胺453060乙二醇苯醚201624乙二胺四乙酸二钠546泊洛沙姆18816832尼泊金甲酯10812去离子水加至5000加至5000加至5000

以制备实施例I为例说明本发明复方凝胶制剂制备，具体步骤如下：

(1)按表1中的制备实施例I准备原料药及辅料；

(2)配制凝胶基质：

取10L的容器，将50g卡波姆940，5g乙二胺四乙酸二钠，10g尼泊金甲酯，400g1，2-丙二醇，16g泊洛沙姆188加入容器中，加入2075.5g的去离子水，搅拌放至呈均匀胶冻状基质。配制0.2g/ml三乙醇胺溶液，剩余量的1，2-丙二醇和20g乙二醇苯醚混合。将胶冻状基质、0.2g/ml三乙醇胺溶液、泊洛沙姆188水溶液、1，2-丙二醇和乙二醇苯醚混合液、去离子水121℃，20分钟加热灭菌。取出，冷却，备用。

(3)加入原料药：无菌条件下用375.1g去离子水溶解50g盐酸克林霉素，用上述灭菌好的1，2-丙二醇和乙二醇苯醚混合液溶解5g阿达帕林，将溶解好的盐酸克林霉素和阿达帕林溶解加入至基质中，滴加三乙醇胺水溶液，边加边搅拌至pH为7.0，再加去离子水至总重为5000g，用灭菌的玻璃棒搅拌均匀，分装至铝管中，5g/支，共得942支阿达帕林盐酸克林霉素复方凝胶制剂。

制备实施例II和III按照表1中准备原料药及辅料，其步骤同制备实施例I。

实施例2 本发明复方凝胶制剂的稳定性研究

本品的稳定性考察数据(批号：20040204)见表2。

表2 阿达帕林盐酸克林霉素复方凝胶稳定性实验结果

从本发明复方制剂36个月稳定性试验结果可以看出，各项质量指标符合标准要求，且无明显变化。稳定性研究资料表明，在有效期内制剂的质量稳定。

实施例3 本发明复方凝胶制剂的药效学试验

本实施例中本发明复方凝胶高、中、低三个剂量组均为外涂复方凝胶，其中高剂量组阿达帕林和盐酸克林霉素的浓度分别为4g/kg和40g/kg，中剂量组阿达帕林和盐酸克林霉素的浓度分别为2g/kg和20g/kg，低剂量组阿达帕林和盐酸克林霉素的浓度分别为1g/kg和10g/kg。

(1)对家兔耳实验性痤疮模型的治疗作用

实验选用健康白色家兔45只，体重2.1-2.6kg，雌雄兼用，雌性未孕。按文献^(1，2)方法，取39只家兔，于每只家兔右耳内侧面耳管开口处2×2cm范围，每日涂煤焦油1次，每次0.5ml，连续两周，另6只作为空白对照组。第14天，取3只家兔于涂煤焦油处取皮肤活检，以确定模型是否形成。然后，随机分成空白对照组、模型对照组、本发明复方凝胶高、中、低三个剂量组、达芙文(阿达帕林凝胶)组及克林霉素凝胶组，其中空白对照组不给任何药物，模型对照组给予本发明中不含药物的凝胶基质，各组单位面积施用药量相同，施药方法是每日一次，持续3周。同条件饲养。每日除给药外，应肉眼观察局部给药处皮肤的变化，耳厚薄、硬度、粗糙程度、毛囊口有无黑角栓等。末次给药后24小时，取下涂药处皮肤(全层)，10％福尔马林溶液固定后，并按下述标准进行组织学观察、显微照相。

结果：在兔耳涂煤焦油一周后，兔耳皮肤干燥，粗厚，有痂皮脱落，毛囊孔扩张，毛囊口部位角化过度；2周后，涂煤焦油兔耳厚度增加、变硬，毛囊口有黑色角栓，呈黑头粉刺状，毛囊口隆起呈丘疹状，表面粗糙，触之较硬，似痤疮状。病理学也证实模型形成。

随机分组给药三周，结果显示：除模型对照组外，给药一周后，各组兔耳皮肤症状开始减轻，耳毛囊角化性丘疹顶端渐平复，触之较软，脱屑痂皮减少；给药2周后，局部毛囊角栓减少，角栓脱落者后遗有点状凹陷的毛囊，尤以本发明复方阿达帕林凝胶高、中剂量组和阳性对照组为明显，而复方阿达帕林凝胶低剂量组皮损改善较差；模型对照组无明显改善(丘疹减少、变平)；给药三周后，给药组兔耳变软、变薄，毛囊性丘疹基本消失，无脱屑痂皮，表面皮肤较平滑，而模型对照组兔耳皮损有减轻，但肉眼观察仍有损害。

病理学检查：空白对照组兔耳：表皮较薄，约一层颗粒层，2-4层棘细胞层，可见毛囊，真皮、表皮交界清楚；模型对照组：可见表皮角化过度，表皮和毛囊上皮的颗粒层增厚，棘层肥厚，相邻扩张的毛囊互相融合，毛囊口及漏斗部充满角化物质，并向皮脂腺延伸，毛囊口被角质栓堵塞，毛囊漏斗部充满角化物质并扩大呈壶状，真皮上皮毛细血管扩张，毛囊周围散在以慢性炎细胞浸润为主，还有少量中性白细胞的炎细胞浸润；停用煤焦油三周后，表皮增厚稍减轻，毛囊口及漏斗部角化物略为减少。而停用煤焦油后改用外涂本发明复方凝胶制剂、达夫文(阿达帕林)及克林霉素对照药(给药三周)，表皮增厚减轻明显，毛囊口扩张程度减轻，其内角化物质疏松、减少，部分已接近正常组织。参照文献^[1、2]按其表皮增厚及毛囊口扩张程度、角化物质多少将其病理变化分为四级：“0”为无粉刺；“±”为介于“0”和“+”之间；“+”为毛囊漏斗部可见少量致密角化物；“++”为毛囊漏斗部可见中等量角化物质，并向皮脂腺延伸；“+++”为扩张的毛囊内有广泛的角化物质。结果见表3。

表3 本发明复方凝胶制剂对兔耳痤疮模型治疗后的病理学改变

从上表可以看出：本发明复方凝胶剂给药三周后对煤焦油引起的兔耳实验性痤疮模型有一定的治疗作用，以高剂量组最为明显，单独用阿达帕林和克林霉素对兔耳实验性痤疮模型的治疗作用不如本发明复方凝胶制剂组。

(2)对大鼠角叉菜胶性足跖肿胀的影响

实验选用雄性Wistar大鼠，体重160～180g，随机分为空白对照组、达芙文(阿达帕林)组、克林霉素凝胶组和本发明复方凝胶高、中、低三个剂量组。于实验前于右后足外涂给药，各组给相应含量的受试药1次/日，单位面积施药量相同，连续3天。实验当日再给药一次后30分钟。先用容积法测量右后足跖体积，并作标记。再于右后足跖皮下注射1％角叉菜胶0.1ml，并于注射后1、2、3、4、5和6小时在已标记处用同样方法测足跖体积，减去给药前体积即为足爪肿胀度，结果经统计学处理后，列于表4。

表4 本发明复方凝胶制剂对大鼠角叉菜胶性足爪肿胀的影响(x±s)

注：表中()内为足爪肿胀抑制率

与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

表4结果显示：本发明复方凝胶高、中、低剂量组对大鼠角叉菜胶性足爪肿胀均有抑制作用，与空白对照组比较P<0.05～0.01。

(3)对小白鼠二甲苯性耳廓肿胀的影响

实验选用健康昆明种小白鼠90只，体重25-30g，雄性。随机分为空白对照组、达芙文(阿达帕林)组、克林霉素组和本发明复方凝胶高、中、低三个剂量组。每组15只。实验前按上述给药方法和次数，分别于右耳给药三天，实验当日再给药一次后60分钟，于每鼠右耳廓双面涂二甲苯0.1ml/只，4小时后处死动物，用直径8mm的打孔器，取下双耳同部位的耳片，立即置分析天平上称重，右耳片重量减去左耳片重量为耳廓肿胀度。结果进行统计学处理后，列于表5。

表5 本发明复方凝胶制剂对小白鼠耳廓肿胀的影响(x±s)

表5结果表明：本发明复方凝胶高、中剂量组对小鼠二甲苯性耳廓肿胀有较强的抑制作用，与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01，有显著性差异。

(4)对大白鼠棉球肉芽肿的抑制作用

实验选用健康Wistar大白鼠，体重150-180g，雌雄兼用，雌性未孕。随机分为空白对照组、达芙文(阿达帕林)组、克林霉素对照组和本发明复方凝胶高、中、低三个剂量组。每组10只动物。各大白鼠腹腔注射戊巴比妥钠30mg/kg麻醉，仰位固定，在大白鼠两侧腹股沟处去毛后用碘酒消毒，75％酒精脱碘后，各切0.5cm皮肤至皮下，并用血管钳扩张皮下组织，用眼科小镊子将20mg的高压灭菌棉球(内置0.2ml青、链霉素混合液)，从切口处植入腹股沟皮下，然后缝合切口。待动物清醒后于切口皮肤处开始外涂给药。各组均给药1次/日，单位面积施药量相同，连续7天。第8天处死动物，取出棉球，剔尽棉球周围脂肪组织，称湿重后，置在70℃恒温烘箱中12小时，取出再称干重，以(肉芽肿)mg/100g体重表示。结果进行统计学处理后列于表6。

表6 本发明复方凝胶制剂对大白鼠棉球肉芽肿的抑制作用(x±s)

表6结果显示：本发明复方凝胶高、中剂量组有较强的抑制大白鼠肉芽肿肿胀作用，与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01，有显著性差异。

(5)体外抑菌作用

将药液按倍比稀释法稀释成不同的浓度(本发明复方凝胶制剂中，10g中含阿达帕林10mg、克林霉素100mg；克林霉素凝胶组中，每10g中含克林霉素100mg)，按50μl/孔加入96孔培养板中，再将培养48h的痤疮丙酸杆菌菌液按1:1000稀释后，等量加入培养板，将培养板置于密闭容器中，蜡烛驱氧37℃培养48h，培养液混浊度，判定药物的最低抑菌浓度。实验时各药物浓度设3个复孔，同时设药物空白对照，细菌对照、培养液对照及溶酶对照。实验重复2次。结果见表7。

表7 本发明复方凝胶制剂体外抑菌实验结果

注：—表示药物在实验浓度范围内无抑菌作用。

从表7可以看出：本发明复方凝胶制剂与克林霉素制剂组达到最低抑菌浓度时，克林霉素组中含有的盐酸克林霉素量是本发明复方凝胶组中含有的盐酸克林霉素量的两倍，说明本发明复方凝胶制剂中的克林霉素与阿达帕林在本发明的配比范围内可产生协同抑菌作用。

以上结果表明：本发明复方凝胶制剂对实验性兔耳痤疮模型有较好的治疗作用，有明显减少毛囊角栓，减轻表皮增厚，减少真皮炎细胞浸润；有抑制大白鼠棉球肉芽肿的形成作用；对大白鼠角叉菜胶性足爪肿胀有一定的抑制作用；对二甲苯致小白鼠耳廓肿胀有较好的抑制作用；体外对痤疮丙酸杆菌有较强的抑制作用，其中克林霉素与阿达帕林在本发明的配比范围内可产生协同抗菌作用。

实施例4 本发明复方凝胶制剂的安全性试验

(1)豚鼠皮肤急性毒性试验

给豚鼠完整皮肤和破损皮肤局部外涂本发明复方凝胶制剂，最高浓度24小时内给三次，连续观察14天，未发现明显的毒性反应。

(2)家兔皮肤刺激试验

给家兔背部皮肤(完整皮肤和破损皮肤)多次(连续7天)外涂本发明复方凝胶制剂，对家兔皮肤无明显的刺激反应。

(3)豚鼠皮肤过敏试验

给豚鼠背部脱毛区外涂本发明复方凝胶制剂三次致敏(0天、7天和14天)，并于末次致敏后第14天攻击，豚鼠未出现明显的皮肤和全身过敏反应。

(4)家兔皮肤长期毒性研究：

连续给家兔皮肤外用3个月，其中：空白对照组每天局部外涂赋形剂2g/只；给药低剂量组局部外涂本发明复方凝胶制剂(10g中含阿达帕林10mg、克林霉素100mg)、给药中剂量组(10g中含阿达帕林20mg、克林霉素200mg)，给药高剂量组(10g中含阿达帕林40mg、克林霉素400mg)，给药量约2g/只(均匀涂布为准)。结果发现：1、在给药期间各组家兔活动自如，毛色有光泽，饮食和大小便均正常，未发现其他明显的异常反应，亦未发现动物死亡。2、各试验组家兔每周体重自然增加，连续给药3个月，血液学指标(Hb、RBC、PLT、WBC及分类)、血液生化学指标(AST、ALT、ALB、ALP、T-BIL、T-CHO、TP、GLU、Crea、BUN)、脏器系数(脑、心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、卵巢/睾丸)均在正常范围，与空白对照组比较，差异无显著性。3、病理组织学检查发现：给药3个月破损皮肤和完整皮肤各组脑、心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、卵巢/睾丸和给药局部皮肤均未发现明显异常。

参考文献

1、薛春宵李士佐.痤疮清对实验性兔耳痤疮模型的治疗作用，中华劳动卫生职业病杂志，1995；13(6)：355-356。

2、柴宝黄畋.中药痤疮冲剂对兔耳实验模型抗角化作用的研究，中华皮肤科杂志，1999；32(5)：326-327。