薤白在制备治疗血管内皮功能障碍药物中的应用

摘要

本发明公开了薤白在制备治疗血管内皮功能障碍药物中的应用。研究证实薤白能有效升高血清NO水平，降低血浆ET水平，显示了薤白具有改善内皮功能障碍的作用。

说明书

技术领域

本发明涉及中药薤白的一种新的用途，具体地，涉及一种中药组合物在制治疗血管功能障碍的药物中的应用。

背景技术

内皮功能障碍是动脉粥样硬化的始动因素并贯穿病变全过程，高同型半胱氨酸血症是内皮功能障碍的独立危险因素[梁俊清，吴以岭，赵韶华，等.通心络超微粉对同型半胱氨酸致血管损伤的干预作用.络病学基础与临床研究(2)，中国科学技术出版社，202～205]。

内皮依赖性舒张反应的降低或消失是国际公认的评价血管内皮功能障碍的金标准[Verdejo Paris J.Endothelial function[J].Arch Cardiol Mex，2006，76(Suppl 2)：S164-9]，NO是血管内皮所合成分泌的最重要的血管活性物质。NO具有扩张血管，抗血小板粘附聚集，抗血管平滑肌细胞增生等作用[Moncade S.Nitric Oxide：physiology，pathophysiology and pharmacology[J].Pharmacol Rev，1997，43：109-114]，血浆NO水平可作为血管内皮损伤程度的评价标准。一氧化氮和内皮素—1(ET-1)是血管内皮合成、分泌的2种重要物质。NO是一种小分子血管活性物质，是重要的内源性血管舒张因子，在血管内皮中由NO合成酶催化L-精氨酸而生成，并向血管中膜的平滑肌细胞迅速弥散，激活鸟苷酸环化酶，生成cGMP，并激活cGMP依赖性蛋白，影响Na+-Ca2+交换，使平滑肌松弛，血管舒张。近年研究表明，当患者存在高血压及高血脂等代谢指标异常时，内皮功能受损，NO的生成与分泌下降[吴以岭.络病学.北京：中国中医药出版社，2006.]。内皮素(ET—1)被认为是目前所知的最强烈的缩血管物质，在与血管平滑肌有关的血管张力和结构的长期调节中起作用。ET—1不仅本身具有强有力的缩血管作用，而且还增强5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素的缩血管作用，刺激血管内皮的血管紧张素转化酶活性及肾上腺素和醛固酮的释放，刺激单核细胞产生细胞因子，刺激血管平滑肌细胞的移行和增生，从而促进AS的进程[张清德，魏宗德.通心络胶囊对冠心病患者血脂及内皮素的影响[J].中国心血管杂志，2006，11(1)：20-23]。ET是心脏的高度“毒性肽”，其浓度升高是病情恶化标志之一，临床上可用ET升高的幅度判断病情，估计预后[黄宗明，陈清枝，李东野.冠心病患者内皮细胞的损伤及其机制[J].徐州医学院学报，1999，19(1)：19-21]。其引起的血管收缩、心肌缺血、代谢紊乱和细胞增殖是与血管损伤有关疾病的共同致病因素。

发明内容

本发明目的是提供薤白在制备治疗血管内皮功能障碍药物中的应用。在本发明所述的应用中，用于改善血管内皮功能障碍的药物是由薤白或薤白提纯中间体制成。该药物可以制成胶囊剂、片剂、散剂、口服液、软胶囊、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂。

在本发明应用中的药物，制备该药物所用述薤白提纯中间体由如下步骤制成：

薤白提取物与药用大孔树脂HPD-400按照1:5—1:15重量比例装柱，使用水与乙醇的比例按照5:95—95:5梯度变化进行梯度洗脱，每个浓度洗脱4—6倍柱体积，收集60-80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味后，减压浓缩为相对密度1.1—1.5的稠膏，冷冻干燥即得中间体。

本发明药物是由如下步骤制成的：

1)薤白提取物与药用大孔树脂HPD-400按照1:5—1:15重量比例装柱，使用水与乙醇的比例按照5:95—95:5梯度变化进行梯度洗脱，每个浓度洗脱4—6倍柱体积，收集60-80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味后，减压浓缩为相对密度1.1—1.5的稠膏，备用。

2)将步骤1制得的稠膏，按照常规制剂方法制成胶囊剂、片剂、散剂、口服液、软胶囊、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂。

在本发明应用中的药物，该药物可升高血清NO水平，降低血浆ET水平。

本发明中薤白提取物还可以由常规的提取工艺[如范碧亭《中药药剂学》(上海科学出版社1997年12月第1版)]制得。

本发明中的药物，作为原料药的中药薤白的拉丁名及其加工方法来自《中药大辞典》(1977年7月，第一版，上海科学技术出版社)和《中国药典》(2005年版，化学工业出版社)。

本发明药物还可以按常规的制剂工艺，例如，范碧亭《中药药剂学》(上海科学出版社1997年12月第1版)记载的制备工艺，制成药剂学可接受的任意常规剂型。

本发明的应用中，所述药物的制剂剂型为胶囊剂、片剂、散剂、口服液、软胶囊、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂等，为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：PEG6000，PEG4000，虫蜡等。为使上述剂型能够实现中药药剂学，需在制备这些剂型时加入药学可接受的其它辅料(范碧亭《中药药剂学》，上海科学出版社1997年12月第1版中各剂型记载的辅料)。

为阐明本发明药物治疗血管内皮功能障碍的活性，用按实施例1方法制得的提纯中间体(以下称本发明药物)进行了下列临床试验。

1.材料与方法

1.1实验动物及分组

健康Wistar雄性大鼠40只，体重220～240g，购于北京维通利华实验动物中心，大鼠5只/笼，饲养在河北以岭医药研究院药理实验室，将大鼠按体重随机分为下列4组，(1)空白对照组：正常饲料饮食。(2)模型组。(3)复方黄芪薤白瓜蒌治疗组：模型+黄芪薤白瓜蒌煎剂灌胃。(4)本发明药物组：模型+本发明药物灌胃。

1.2药物

黄芪瓜蒌薤白复方(组成：黄芪15g 瓜蒌12g 薤白10g)，由河北以岭医药研究院提供，水煎制成3.0g生药/ml，给药浓度为：30g生药/Kg。按1ml/100g灌胃。每周6天。

本发明药物：由河北以岭医药研究院提供，配制成0.2g生药/ml，给药浓度为：2g生药/Kg。按1ml/100g灌胃。每周6天。

以上药物均在使用前用0.5％CMC—Na制成混悬液，4℃保存备用。用药组在灌胃药物的同时，正常组和模型组按体重，用0.5％CMC—Na液以1ml/100g灌胃。

1.3造模方法：

参照文献[梁俊清，吴以岭，赵韶华，等.通心络超微粉对同型半胱氨酸致血管损伤的干预作用.络病学基础与临床研究(2)，中国科学技术出版社，202～205]采用3％蛋氨酸饮食(不限食)，4周，建立内皮功能障碍大鼠动物模型。

蛋氨酸：25kg/袋，纯度99.9％，河北省农科院提供。3％高蛋氨酸(Met)饲料：由河北省实验动物中心制作。

1.4检测指标：

1.4.1NO含量采用硝酸还原酶法检测于实验结束后，10％水合氯醛麻醉(0.35ml/100g)，颈动脉插管取血，4℃，3500转/分离心10分钟，常规分离留取血清，-70℃保存，严格按照试剂盒说明书要求进行检测。

1.4.2血浆ET含量的测定：采用放免法。实验结束后，颈动脉取血2ml注入含有10％的EDTA-Na230μl和抑肽酶40μl的无菌抗凝试管中，混匀，4℃，3000r/min，离心10min，分离血浆，-70℃保存，严格按照试剂盒说明书要求进行检测。

1.5主动脉组织光镜及电镜观察

1.5.1光镜观察  各组于实验结束后，10％水合氯醛腹腔注射麻醉，仔细分离并截取胸主动脉，用4％多聚甲醛溶液固定，脱水，石蜡包埋，切片，行HE染色，于光学显微镜下观察各组实验动物胸主动脉的大体形态学改变。

1.5.2透射电镜观察  各组于实验结束后，10％水合氯醛腹腔注射麻醉，仔细分离并截取一小段动脉，迅速浸入电镜液中，修成1mm×1mm×1mm大小组织块，置电镜液中4℃保存(由河北医科大学基础医学院电镜室协助完成)。

1.6统计学方法：

所有数据用均数±标准差(x±s)表示。采用SPSS-11.5统计软件包，多个样本均数比较用单因素方差分析(One-Way ANOVA)，多个样本均数间的两两比较用最小显著差法(least significant difference，LSD)，若方差不齐则采用Satterthwaite-t’检验行两两比较，以P<0.05作为判断差异显著性的标准。

2 结果

2.1各组大鼠内皮功能的变化

模型组大鼠ET较正常组明显增高(P<0.01)，NO较正常组降低(P<0.01)；黄芪瓜蒌薤白组较模型组ET下降(P<0.05)，NO增高(P<0.05)；本发明药物组较模型组ET明显下降(P<0.01)，NO明显增高(P<0.01)；本发明药物组较黄芪薤白瓜蒌组效果更明显(P<0.05)。

表1各组之间内皮素(ET)、NO比较(x±s，n＝10)

与正常组比较^**P<0.01；与模型组比较#P<0.05##P<0.01；与黄芪瓜蒌薤白组比较@@P<0.01

2.2 各组大鼠主动脉组织HE染色比较

正常组主动脉血管形态正常，内皮细胞结构完整，中膜弹力纤维正常。外膜形态基本正常。模型组内皮细胞肿胀、分布不均匀、密度增加，内膜有多量淋巴细胞附壁、内膜内有炎细胞浸润、内弹力板有断裂；平滑肌细胞水肿。黄芪薤白瓜蒌组、本发明药物治疗组可改善模型大鼠的主动脉大体结构，本发明药物治疗组作用较黄芪薤白瓜蒌组更加明显。见图1.

2.3 各组大鼠主动脉组织内皮细胞超微结构的变化

模型组：内皮细胞线粒体大部分嵴和少部分膜融合或消失，几乎见不到粗面内质网和吞饮小泡。黄芪薤白瓜蒌组、本发明药物组内皮细胞超微结构变化较模型组减轻，本发明药物组作用较黄芪薤白瓜蒌组更加明显。见图2.

3 结论：

本实验结果显示，内皮功能障碍时，NO合成减少，ET明显增加，病理学检查可见血管内皮细胞严重受损，黄芪薤白瓜蒌组和本发明药物组可升高血清NO水平，降低血浆ET水平，显示了本发明药物具有改善内皮功能障碍的作用，而本发明药物提取物优于复方黄芪薤白瓜蒌水煎剂组，主动脉组织光镜及电镜检查也证实了这一点。

附图说明：

图1：各组大鼠主动脉组织HE染色(400×)

图2：各组大鼠主动脉组织内皮细胞超微结构变化(20000×)

具体实施方式

本发明以下实施列中所用水蛭素购自广西科康水蛭素股份有限公司；薤白提取物购自西安奥晶科技公司，生药量每g提取物相当于生药10g。其他中药材购自安国药材市场。但其不对本发明的范围构成任何限制。

实施例1：本发明药物提纯中间体的制备

薤白提取物与药用大孔树脂HPD-400按照1:10重量比例装柱，使用水与乙醇的比例按照5:95-15:85-30:70-50:50-70:30-85:15-95:5梯度变化进行梯度洗脱，每个浓度洗脱5倍柱体积，收集65-75％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味后，减压浓缩为相对密度1.25的稠膏，冷冻干燥即得中间体。

实施例2：本发明药物胶囊的制备

1)薤白提取物与药用大孔树脂HPD-400按照1:10重量比例装柱，使用水与乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度变化进行梯度洗脱，每个浓度洗脱5倍柱体积，收集70-80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味后，减压浓缩为相对密度1.22的稠膏，备用；

2)将步骤1制得的稠膏，按照常规制剂方法制成胶囊剂。

实施例3：本发明药物片剂的制备

1)薤白提取物与药用大孔树脂HPD-400按照1:10重量比例装柱，使用水与乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度变化进行梯度洗脱，每个浓度洗脱5倍柱体积，收集70-80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味后，减压浓缩为相对密度1.22的稠膏，备用；

2)将步骤1制得的稠膏，按照常规制剂方法制成片剂。

实施例4：本发明药物口服液的制备

1)薤白提取物与药用大孔树脂HPD-400按照1:10重量比例装柱，使用水与乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度变化进行梯度洗脱，每个浓度洗脱5倍柱体积，收集70-80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味后，减压浓缩为相对密度1.22的稠膏，备用；

2)将步骤1制得的稠膏，按照常规制剂方法制成口服液。

实施例5：本发明药物凝胶剂的制备

1)薤白提取物与药用大孔树脂HPD-400按照1:10重量比例装柱，使用水与乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度变化进行梯度洗脱，每个浓度洗脱5倍柱体积，收集70-80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味后，减压浓缩为相对密度1.22的稠膏，备用；

2)将步骤1制得的稠膏，按照常规制剂方法制成凝胶剂。

实施例6：本发明药物注射剂的制备

1)薤白提取物与药用大孔树脂HPD-400按照1:10重量比例装柱，使用水与乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度变化进行梯度洗脱，每个浓度洗脱5倍柱体积，收集70-80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味后，减压浓缩为相对密度1.22的稠膏，备用；

2)将步骤1制得的稠膏，按照常规制剂方法制成注射剂。

实施例7：本发明药物酊剂的制备

1)薤白提取物与药用大孔树脂HPD-400按照1:10重量比例装柱，使用水与乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度变化进行梯度洗脱，每个浓度洗脱5倍柱体积，收集70-80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味后，减压浓缩为相对密度1.22的稠膏，备用；

2)将步骤1制得的稠膏，按照常规制剂方法制成酊剂。

实施例8：本发明药物丸剂的制备

1)薤白提取物与药用大孔树脂HPD-400按照1:10重量比例装柱，使用水与乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度变化进行梯度洗脱，每个浓度洗脱5倍柱体积，收集70-80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味后，减压浓缩为相对密度1.22的稠膏，备用；

2)将步骤1制得的稠膏，按照常规制剂方法制成丸剂。

实施例9：本发明药物糖浆剂的制备

1)薤白提取物与药用大孔树脂HPD-400按照1:10重量比例装柱，使用水与乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度变化进行梯度洗脱，每个浓度洗脱5倍柱体积，收集70-80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味后，减压浓缩为相对密度1.22的稠膏，备用；

2)将步骤1制得的稠膏，按照常规制剂方法制成糖浆剂。

实施例10：本发明药物散剂的制备

1)薤白提取物与药用大孔树脂HPD-400按照1:10重量比例装柱，使用水与乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度变化进行梯度洗脱，每个浓度洗脱5倍柱体积，收集70-80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味后，减压浓缩为相对密度1.22的稠膏，备用；

2)将步骤1制得的稠膏，按照常规制剂方法制成散剂。

实施例11：本发明药物栓剂的制备

1)薤白提取物与药用大孔树脂HPD-400按照1:10重量比例装柱，使用水与乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度变化进行梯度洗脱，每个浓度洗脱5倍柱体积，收集70-80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味后，减压浓缩为相对密度1.22的稠膏，备用；

2)将步骤1制得的稠膏，按照常规制剂方法制成栓剂。

实施例12：本发明药物喷雾剂的制备

1)薤白提取物与药用大孔树脂HPD-400按照1:10重量比例装柱，使用水与乙醇的比例按照10:90-20:80-35:65-50:50-65:35-80:20-90:10梯度变化进行梯度洗脱，每个浓度洗脱5倍柱体积，收集70-80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味后，减压浓缩为相对密度1.22的稠膏，备用；

2)将步骤1制得的稠膏，按照常规制剂方法制成喷雾剂。