15－亚甲基取代穿心莲内酯衍生物在制备抗炎解热镇痛药物中的用途

摘要

本发明公开了通式1所示15－亚甲基取代穿心莲内酯衍生物在制备抗炎、解热、镇痛药物中的应用，属药物化学领域。利用二甲苯致小鼠耳肿胀、小鼠棉球肉芽肿、酵母致大鼠发热、小鼠热板法、小鼠扭体法等模型证实15－亚甲基取代穿心莲内酯衍生物的抗炎、解热、镇痛作用。与穿心莲内酯相比，15－亚甲基取代穿心莲内酯衍生物具有更好的抗炎、解热、镇痛效果，并且小鼠急性毒性实验研究结果表明15－亚甲基取代穿心莲内酯衍生物毒性甚微。将其应用于抗炎、解热、镇痛药物的开发，具有较好的应用前景。

说明书

技术领域

本发明涉及穿心莲内酯的药物用途，具体涉及15-亚甲基取代穿心莲内酯衍生物的抗炎、解热、镇痛作用，属药物化学领域。

背景技术

穿心莲是爵床科植物Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees的干燥地上部分，其主要作用是清热解毒、凉血消肿。临床上常用于治疗各种感染性疾病，包括外伤感染、疖、痈、丹毒、上呼吸道感染、急慢性扁桃体炎、急慢性咽喉炎、急慢性支气管炎、急性菌痢、急性胃肠炎、尿路感染、子宫内膜炎、盆腔炎、中耳炎、牙周炎等。穿心莲的主要成分含有二萜内酯、甾醇、黄酮类化合物、生物碱等。内酯类是主要有效成分，包括穿心莲内酯(AD)、去氧穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、新穿心莲内酯、高穿心莲内酯。现代药理学研究表明穿心莲提取物及有效成分均有不同程度的抗炎作用，能抑制急性炎症早期的毛细血管通透性亢进而抗渗出；对2，4-二硝基酚或内毒素诱导的发热和蛋清诱导的水肿或巴豆油诱导的炎症模型均有退热、抗炎活性。穿心莲内酯资源广，在动物体内吸收快，药效长，生物利用度高，且无明显的毒副作用，因此，是开发高效低毒抗炎、解热、镇痛药物的优良先导物。近30年来，穿心莲内酯及其3种衍生物穿琥宁、炎琥宁、莲必治已在中国广泛应用于临床。“穿心莲内酯片”、“穿心莲内酯滴丸”是口服型制剂，具有清热解毒，抗菌消炎作用，可用于上呼吸道感染，细菌性痢疾的治疗。

以穿心莲内酯(AD)为先导化合物合成的新型α-葡萄糖苷酶抑制剂15-亚甲基取代穿心莲内酯衍生物，在专利CN：200510107247.4已有所报导，为本申请人前期研究成果，后期又对其进行了更为深入的研究，研究表明：此类化合物具有显著的抗炎、解热、镇痛作用，目前将其作为制备治疗抗炎、解热、镇痛药物的应用还未见相关报道。

发明内容

本发明目的在于提供15-亚甲基取代穿心莲内酯衍生物在制备抗炎、解热、镇痛药物中的应用。

为实现本发明目的，采用二甲苯致小鼠耳肿胀、小鼠棉球肉芽肿、酵母致大鼠发热、小鼠热板法、小鼠扭体法等实验模型，证实15-亚甲基取代穿心莲内酯衍生物具有明确的抗炎、解热、镇痛作用，且效果优于穿心莲内酯，并且通过小鼠急性毒性实验证实15-亚甲基取代穿心莲内酯衍生物的毒性甚微。以该类化合物为有效药用成分，按目前各种常规的制药方法和工艺要求，与制药中可以接受的辅助和/或添加成分混合后，制成用于抗炎、解热和镇痛的口服型制剂、口含制剂、注射型制剂或外用型制剂等药物。口服型制剂为片剂、丸剂、胶囊、冲剂或糖浆等；注射型制剂为注射液或冻干粉针剂等；外用型制剂为皮肤粘膜用药和滴眼剂等。

本发明所述15-亚甲基取代穿心莲内酯衍生物具有如下结构式：

R₁、R₂为氢、C1-16烃基、芳香基、卤代芳基、芳香烷基、芳酰基、烷酰基、链烯基、链烯酰基、杂芳基、杂芳酰基、芳烯酰基、芳烷酰基、杂芳烷基或杂芳酰基；R₃、R₄为氢、COR₅；R₅为C1-16烃基、芳香基、芳香烷基、链烯基、杂芳基或杂芳烷基基团。

优选15-对甲氧基亚甲基-14-脱氧-11，12-脱氢穿心莲内酯、15-对氯苯基亚甲基-14-脱氧-11，12-脱氢穿心莲内酯或15-对氯苯基亚甲基-3，19-烟酸酯-14-脱氧-11，12-脱氢穿心莲内酯。其制备方法已在本研究前期申请的的发明专利CN：200510107247.4中公开，还可以参考文献BMC，2007(Xu HW，et al.)。

本发明创新点及优点在于：通过药理实验及活性筛选，证实15-亚甲基取代穿心莲内酯衍生物具有抗炎、解热、镇痛作用，活性显著优于穿心莲内酯，且毒性甚微。采用15-亚甲基取代穿心莲内酯衍生物作为制备抗炎、解热、镇痛药物，可显著提高该类药物的口服疗效，避免现有的盐类衍生物静脉给药带来的副作用，而且扩大了临床用药的可选择范围，对充分利用穿心莲植物资源具有重要意义。

具体实施方式

通过药理实验，以15-对甲氧基亚甲基-14-脱氧-11，12-脱氢穿心莲内酯(ADD-1)、15-对氯苯基亚甲基-14-脱氧-11，12-脱氢穿心莲内酯(ADD-2)和15-对氯苯基亚甲基-3，19-烟酸酯-14-脱氧-11，12-脱氢穿心莲内酯(ADD-3)为例对本发明进行更好的说明。

实施例1 15-亚甲基取代穿心莲内酯衍生物的药理活性

一、抗炎实验

1.对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响实验

实验药物为本发明药物样品、北京医工生物技术研究所提供的穿心莲内酯及作为阳性对照的山西云鹏制药有限公司生产的消炎痛(吲哚美辛肠溶片；批号：20060502)。药物配制采用0.1％吐温-80(天津市科密欧化学试剂开发中心，批号：20030720)助溶，0.5％羧甲基纤维素钠(上海化学试剂公司，批号：F20020928)混悬。试验动物为河南省实验动物中心提供的体重为20±2g的清洁级雄性昆明种小鼠(合格证号：0009255)。致炎剂二甲苯为天津市东丽区天大化学试剂厂生产的分析纯试剂(批号：20040308)。

将小鼠按体重随机分为8组，每组10只。分别为对照组(给等量溶媒)、阳性对照组(消炎痛)、穿心莲内酯(AD)低剂量组(0.90mmol/kg)、AD高剂量组(1.35mmol/kg)、ADD-2(1.35mmol/kg)、ADD-3低剂量组(0.45mmol/kg)、ADD-3中剂量组(0.90mmol/kg)、ADD-3高剂量组(1.35mmol/kg)。各组分别灌服相应的药物，体积0.2mL/10g；一天一次，连续3d。第三天给药后1小时将20微升二甲苯均匀涂于每只小鼠右耳两侧，左耳不涂，留作对照。记录涂二甲苯的时间，40min后将小鼠处死，沿耳廓基部剪下两耳，用直径9mm的打孔器分别在左右耳的同一部位打下圆形耳片，称重。计算同一小鼠左右耳的重量差，作为肿胀度，比较各组耳肿胀的程度，进行统计学显著性检验，并计算肿胀抑制率。结果(见表1)表明，与对照组比，AD高剂量组(P<0.05)、ADD-2组(P<0.01)和ADD-3的中(P<0.05)、高剂量组(P<0.01)对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀都有显著的抑制作用。与穿心莲内酯组相比，ADD-2组和ADD-3高剂量组对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的抑制作用显著提高(P<0.01)。

表1 本发明衍生物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的抑制作用(x±s)

注：与对照组比较：^*P<0.05，^**P<0.01；与穿心莲内酯组比较^ΔP<0.05，^ΔΔP<0.01

2.对小鼠棉球肉芽肿的影响实验

实验药物为本发明药物样品、北京医工生物技术研究所提供的穿心莲内酯和作为阳性对照的巨化集团公司制药厂生产的布洛芬原料药(批号：0402007)。药物配制同上。试验动物为河南省实验动物中心提供的体重为20±2g的清洁级雄性昆明种小鼠(合格证号：0009276)。氨苄青霉素(160万单位/支)为华北制药股份有限公司生产，批号：X0705330。

将小鼠按体重随机分为5组，每组10只。分别为对照组(给等量溶媒)、阳性对照组(布洛芬)、AD组(0.9mmol/kg)、ADD-3低剂量组(0.45mmol/kg)、高剂量组(0.9mmol/kg)。实验前小鼠禁食(不禁水)5h。无菌条件下，在小鼠胸部开一小口，将两个灭菌棉球(每个棉球重10mg，高压灭菌，加入少量氨卞青霉素)分别植入小鼠两侧腋下皮下，缝合。手术当天开始灌胃给药，体积0.2mL/10g，连续7天，第8天颈椎脱臼处死，取出棉球，在60℃烤箱放置12h后称重，减去原棉球重量并根据体重换算成体重每100g的肉芽重量即为肉芽肿净重。结果(见表2)表明，ADD-3组对小鼠棉球肉芽肿形成有显著抑制作用，0.9mmol/kg剂量组与对照组比具有差异显著性意义(P<0.05)。ADD-3组的效果比相同摩尔给药量的AD组好，但未达到差异显著水平。

表2 ADD-3对小鼠棉球肉芽肿形成的影响(x±s)

注：与对照组比较：^*P<0.05，^**P＜0.01

二、解热作用

采用酵母致大鼠发热模型。实验药物为本发明药物样品、北京医工生物技术研究所提供的穿心莲内酯及作为阳性对照的西安利君制药有限责任公司生产的APC(复方乙酰水杨酸片；批号：0805218-2)。药物配制采用0.1％吐温-80(天津市科密欧化学试剂开发中心，批号：20030720)助溶，0.5％羧甲基纤维素钠(上海化学试剂公司，批号：F20020928)混悬。试验动物为河南省实验动物中心提供的体重为200±20g的清洁级雌性SD大鼠(合格证号：0009564)。致热剂的配制：临用前向干酵母(湖北安琪酵母股份有限公司，生产日期：20080319)中加生理盐水(郑州永和制药有限公司，批号：070920032)研磨，配成20％的悬液供实验用。

健康SD大鼠，预测体温3日，实验当日每小时测定大鼠体温1次，连续两次，取其均值作为基础体温，筛选体温波动小者为合格大鼠50只，按基础体温随机分为5组，即对照组(给等量溶媒)、阳性对照组(APC)、AD组、ADD-3低剂量组(0.9mmol/kg)和ADD-3高剂量组(1.35mmol/kg)，每组10只。以上各组均于背部sc20％酵母悬液，5h后按分组灌胃给药，测定给药后1h、2h、3.5h大鼠体温，计算各时段体温与基础体温的差值，结果见表3。结果表明，与对照组相比，ADD-3具有显著的解热作用，尽管效果不如APC(300mg/kg)组，但是显著优于同等摩尔剂量的穿心莲内酯(P<0.01)。

表3 ADD-3对发热大鼠体温的影响(x±s，n＝10)

注：与对照组比较：^*P<0.05，^**P<0.01；与穿心莲内酯组比较：^ΔΔP<0.01

三、镇痛作用

1.醋酸致小鼠扭体的试验结果

实验药物为本发明药物样品、北京医工生物技术研究所提供的穿心莲内酯和作为阳性对照的巨化集团公司制药厂生产的布洛芬原料药(批号：0402007)。药物配制采用0.1％吐温-80(天津市科密欧化学试剂开发中心，批号：20030720)助溶，0.5％羧甲基纤维素钠(上海化学试剂公司，批号：F20020928)混悬。试验动物为河南省实验动物中心提供的体重为20±2g的清洁级雄性昆明种小鼠(合格证号：0009256)。冰乙酸(醋酸)为天津市凯通化学试剂有限公司生产，批号：20050410。

将小鼠按体重随机分为7组，每组11只。分别为对照组(给等量溶媒)、阳性对照组(布洛芬130mg/kg)、AD组(1.35mmol/kg)、ADD-2组(1.35mmol/kg)、ADD-3低剂量组(0.45mmol/kg)、中剂量组(0.9mmol/kg)、高剂量组(1.35mmol/kg)。给药体积为0.2mL/10g，给药后2.5h，腹腔注射0.6％的醋酸溶液，每只0.2mL，观察注射后15min内出现扭体反应次数。结果见表4。结果表明，与对照组相比，ADD-2、ADD-3的高剂量组(1.35mmol/kg)对醋酸所致小鼠扭体均有显著镇痛作用，具有差异极显著意义(P<0.01)。与穿心莲内酯组相比均具有差异极显著意义(P<0.01)。

表4 本发明衍生物对醋酸致痛小鼠的镇痛作用(x±s)

注：与对照组比较：^*P<0.05，^**P<0.01；与穿心莲内酯组比较：^ΔP<0.05，^ΔΔP<0.01

2.热板刺激所致小鼠疼痛反应的试验结果

实验药物为本发明药物样品、北京医工生物技术研究所提供的穿心莲内酯和作为阳性对照的巨化集团公司制药厂生产的布洛芬原料药(批号：0402007)。药物配制同前述方法。试验动物为河南省实验动物中心提供的体重为20±2g的清洁级雌性昆明种小鼠(合格证号：0009898)。

设定热板测痛仪(山东省医学科学院，型号：YLS-7B)温度为(55±0.5)℃。每次取1只小鼠放人测痛仪内，记录自放人到出现舔后足所需时间(s)，作为该鼠的痛阈值，凡30s内不出现舔后足者弃之不用。取筛选合格的小鼠，随机分为7组，每组11只。即对照组(给等量溶媒)、阳性对照组(布洛芬)、AD组(0.90mmol/kg)、ADD-2组(0.90mmol/kg)、ADD-1组(0.90mmol/kg)、ADD-3低剂量组(0.45mmol/kg)、ADD-3高剂量组(0.90mmol/kg)。将各组小鼠分别灌服相应的药物(0.2ml/10g)。给药后30min、90min、150min、210min分别测定各组小鼠的痛阈值，若小鼠在测痛仪内60s仍无痛觉反应，应取出，按60s计，结果见表5。结果表明，当给药时间大于等于150min时，ADD-1、ADD-2和ADD-3对热板法致小鼠足痛有显著抑制作用(P<0.05)。ADD-3两个剂量组与穿心莲内酯组相比差异均具有显著或极显著意义。且比布洛芬组镇痛作用效果好，持续时间长(P<0.05)。

表5 本发明衍生物对热板法致小鼠足痛的影响(x±s)

注：与对照组比较：^*P<0.05；与穿心莲内酯组比较：^ΔP<0.05

综上所述，15-亚甲基取代穿心莲内酯衍生物具有显著的抗炎、解热、镇痛作用，且效果优于等摩尔剂量的穿心莲内酯，用于抗炎、解热、镇痛药物的制备具有较好的开发前景。

实施例2 ADD-3的急性毒性

动物：清洁级昆明种小鼠，体重20±2g，雌雄各半，合格证号：0009898，河南省实验动物中心提供。

药物：本发明15-亚甲基取代穿心莲内酯衍生物。

实验方法：取体重20±2g小鼠20只，雌雄各半，随机分成ADD-3低剂量组和ADD-3高剂量组，每组10只。动物禁食12h后(不限饮水)，分别一次性灌胃给予剂量为2.00g/kg和5.00g/kg的ADD-3，灌胃量为0.2mL/10g。观察、记录动物的中毒表现。每周称重一次。连续观察14天。结果见表6。

实验结果：小鼠没有出现明显中毒表现，且未有死亡，说明ADD-3的急性毒性甚微。作为制备抗炎镇痛药物，具有较高的实用、开发价值。

表6 ADD-3急性毒性实验