孔雀石绿等三苯基甲烷类染料降解酶TpmD的制备方法

摘要

本发明涉及一种三苯基甲烷类染料降解酶TpmD的制备方法，其特征是将嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila) DN322 CCTCC No.AB205001T菌株接种到LB培养基中，收集培养好的菌悬液离心过滤，洗涤，粉碎细胞，过滤除去细胞碎片，得到的细胞抽提液上强阴离子交换柱，用0～500mmol/L的NaCl水溶液进行梯度洗脱，收集有脱色活性的洗脱液，合并后用截留分子量10～20kDa的超滤器超滤，去除滤过液，将截留浓缩液上NADH特异型的亲和层析柱，用NADH进行洗脱，收集并合并有脱色活性的洗脱液，得到产物。本发明提供了一种高效率、低成本设备简单、不产生二次污染的制备方法，酶收率达48％以上，纯化倍数10倍以上，收获的总酶活单位数目40000U以上。