公开/公告号CN101368176A
专利类型发明专利
公开/公告日2009-02-18
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申请/专利权人 北京赛生药业有限公司;
申请/专利号CN200710120377.0
申请日2007-08-16
分类号C12N9/16;A61K38/46;A61K9/48;A61P1/16;
代理机构北京律诚同业知识产权代理有限公司;
代理人徐金国
地址 100176 北京市经济技术开发区兴盛街8号
入库时间 2023-12-17 21:32:13
法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2014-08-06
专利实施许可合同备案的生效 IPC(主分类):C12N9/16 合同备案号:2014110000023 让与人:北京赛而生物药业有限公司 受让人:北京诺泓医药科技有限公司 发明名称:复合磷酸酯酶及其提取方法,和该复合磷酸酯酶胶囊 申请公布日:20090218 授权公告日:20120314 许可种类:独占许可 备案日期:20140604 申请日:20070816
专利实施许可合同备案的生效、变更及注销
2012-03-14
授权
授权
2012-01-18
专利申请权的转移 IPC(主分类):C12N9/16 变更前: 变更后: 登记生效日:20111209 申请日:20070816
专利申请权、专利权的转移
2011-12-14
著录事项变更 IPC(主分类):C12N9/16 变更前: 变更后: 申请日:20070816
著录事项变更
2009-05-20
实质审查的生效
实质审查的生效
2009-02-18
公开
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技术领域
本发明涉及复合磷酸酯酶,具体地说是涉及一种从大麦芽根须中提取的复合磷酸酯酶,以及这种提取的方法,和使用该纯化的复合磷酸酯酶制得的胶囊。
背景技术
复合磷酸酯酶是从制麦的副产物——大麦根须中提取制得的多种酶的混合物,主要由磷酸单酯酶、磷酸二酯酶、核苷酸酶、淀粉酶等组成。这些生物活性物质能催化多种磷酸酯水解,调节人体新陈代谢,服用后可改善机体代谢,增进食欲,增强体质,使某些疾病得以改善或痊愈。因此,在临床上可用于迁延性肝炎、慢性肝炎、早期肝硬化、冠心病、胶原性硬皮病、小儿顽固性牛皮癣、再生障碍性贫血、白血球减少症及矽肺的辅助治疗。
传统的方法是将大麦根粉碎,水提取复合磷酸酯酶,将水提液离心弃去杂质沉淀,上清液加入3—4倍乙醇使复合磷酸酯酶沉淀,离心得到复合磷酸酯酶。此方法用到大量乙醇,极大地增加了生产成本。而且,得到的复合磷酸酯酶的活力不是很高。
由于复合磷酸酯酶易于在胃中被胃酸破坏,所以为了减少胃内首过效应,现有的复合磷酸酯酶的制剂仅有肠溶片剂,剂型单一。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有较高活力的复合磷酸酯酶。
本发明的另一目的在于克服现有技术的提取方法会用到大量的乙醇,极大地增加了生产成本的缺点,从而提供一种避免了使用大量乙醇,从麦芽根水提液中可低成本地提取复合磷酸酯酶的方法,本发明的方法成本低廉、适于大规模工业生产。
本发明的再一目的在于提供一种上述复合磷酸酯酶的新剂型制剂。
为了实现上述发明目的,本发明提供了一种从大麦芽根中提取纯化复合磷酸酯酶的方法,包括如下步骤:
1)硫酸铵分级沉淀:于25℃,边搅拌,边向大麦芽根水提取液中,加入硫酸铵,使得溶液中的硫酸铵浓度为40—80%饱和度(如表1所示),即按照每1升溶液加固体硫酸铵243—561g的量加入硫酸铵;继续搅拌,充分沉淀后,离心弃去上清;
所述的大麦芽根水提取液是将麦芽根粉碎为80目,按1kg:8L的质量体积比加入水,在不高于20℃的温度下提取20小时,然后以转速4000转/分钟离心25分钟,滤出水相,即为大麦芽根水提取液;
2)丙酮-水溶液洗盐:在-20℃下,用丙酮-水溶液清洗步骤1)得到的沉淀;离心弃去上清;所述的丙酮-水溶液中,丙酮和水的体积比为2:3—7:3,其加入量与步骤1)中得到的沉淀的质量体积比为1:10—15(g/ml);
3)丙酮溶液干燥:在-20℃下,用纯丙酮清洗步骤2)得到的沉淀;离心弃去上清,在室温晾干,粉碎,得到所需的复合磷酸酯酶。
在本发明的技术方案中,所述步骤1)中,加入硫酸铵后,继续搅拌的时间为30—50分钟。
在本发明的技术方案中,所述步骤1)中,离心转速为4000转/分钟,时间为25分钟。
在本发明的技术方案中,所述步骤2)中,离心时,转速为4000转/分钟,时间为15分钟,温度为4℃。
在本发明的技术方案中,所述步骤2)中的丙酮-水溶液的清洗和离心过程为重复3—4次。
表1、在25℃下,硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时,每升溶液所加固体硫酸铵的克数
本发明采用硫酸铵分级沉淀、丙酮-水溶液洗盐、丙酮溶液干燥相结合的方法,从大麦芽根水提取液中提取纯化复合磷酸酯酶,并将所有丙酮-水、纯丙酮洗涤复合磷酸酯酶沉淀的操作控制在-20℃下低温操作,以避免复合磷酸酯酶活性降低。最终获得了符合国家药品标准的要求的复合磷酸酯酶,该复合磷酸酯酶的活力单位可达到39000u/mg。与现有技术相比,本发明解决了原老技术本身技术中所存在的弊病,避免了使用大量的有机溶剂,节约了大量成本,操作简单,适合于工业化大规模生产;而且,可以得到高纯度高生物活性的复合磷酸酯酶。
本发明还提供了一种复合磷酸酯酶胶囊,其中含有作为有效成分的上述复合磷酸酯酶,和药用辅料。
所述的药用辅料包括固体制剂中常用的填充剂和润滑剂;
所述的润滑剂,可以是硬脂酸镁、滑石粉和微粉硅胶中的一种或多种;
所述的填充剂可以是淀粉、乳糖、糖粉、可压性淀粉中的一种或多种;
其中,润滑剂占总药量的重量比为0-5%;填充剂占总药量的重量比为40-85%;余量为上述复合磷酸酯酶。
本发明提供的复合磷酸酯酶胶囊,是先将上述提取得到的复合磷酸酯酶提取物粉碎,过100目筛,然后将此粉末和所需比例的填充剂和润滑剂混匀,加入润湿剂和粘合剂制软材,制颗粒,整粒,干燥,装胶囊。
所述的湿润剂和粘合剂为选自蒸馏水、淀粉浆、3%-5%聚乙烯吡咯烷酮水或醇溶液。所用胶囊为肠溶胶囊,为4号或5号胶囊。
与现有的肠溶片剂相比,该复合磷酸酯酶胶囊的优点在于:
1.服用量小,每粒胶囊装量0.2至0.4g,每次服用1-2粒,每日3次。
3.制剂辅料少,仅加入适量的润滑剂和填充剂。
4.制剂成本低,节约资源和能源。
5.胶囊剂方便储存,运输,掩盖了药物异味,更加方便患者服用。
该复合磷酸酯酶胶囊可用于肝炎辅助治疗的药物。
具体实施方式
实施例1:从大麦芽根须水提液中提取复合磷酸酯酶
将3kg麦芽根粉碎为80目,按1:8的质量体积比加入24L水,在不高于20℃的温度下提取20小时,然后以转速4000转/分钟离心25分钟,滤出水相,得到大麦芽根水提取液。
取上述大麦芽根水提取液20L,于25℃,边搅拌,边将11.22公斤硫酸铵缓慢加入到该大麦芽根水提液中,继续搅拌30分钟,充分沉淀后,于室温在离心机中离心25分钟,转速4000转/分钟,弃去上清。
于-20℃,采用800ml丙酮-水溶液(其中,丙酮:水的体积比为3:2)充分洗涤磷酸二酯酶沉淀,然后于4℃,在离心机中离心15分钟,转速4000转/分钟,弃去上清。重复此洗涤—离心过程3次。
于-20℃,用800ml纯丙酮清洗沉淀,然后于4℃在离心机中离心25分钟,转速4000转/分钟,弃去上清。重复此洗涤—离心过程2次。然后将得到的沉淀物在室温晾干,粉碎,即得到所需的复合磷酸酯酶65g,产品酶活效价为38000u/mg。
实施例2:从大麦芽根须水提液中提取复合磷酸酯酶
取实施例1中的大麦芽根水提取液20L,于25℃,边搅拌,边将9.44公斤硫酸铵缓慢加入到该大麦芽根水提液中,继续搅拌45分钟,充分沉淀后,于室温在离心机中离心25分钟,转速4000转/分钟,弃去上清。
于-20℃,采用1000ml丙酮-水溶液(其中,丙酮:水的体积比为3:2)充分洗涤磷酸二酯酶沉淀,然后于4℃,在离心机中离心15分钟,转速4000转/分钟,弃去上清。重复此洗涤—离心过程4次。
于-20℃,用800ml纯丙酮清洗沉淀,然后于4℃在离心机中离心25分钟,转速4000转/分钟,弃去上清。重复此洗涤—离心过程2次。然后将得到的沉淀物在室温晾干,粉碎,即得到所需的复合磷酸酯酶70g,产品酶活效价为39000u/mg。
实施例3:从大麦芽根须水提液中提取复合磷酸酯酶
取实施例1中的大麦芽根水提取液20L,于25℃,边搅拌,边将4.86公斤硫酸铵缓慢加入到该大麦芽根水提液中,继续搅拌50分钟,充分沉淀后,于室温在离心机中离心25分钟,转速4000转/分钟,弃去上清,得到沉淀物100g。
于-20℃,采用1000ml丙酮-水溶液(其中,丙酮:水的体积比为7:3)充分洗涤磷酸二酯酶沉淀,然后于4℃,在离心机中离心15分钟,转速4000转/分钟,弃去上清。重复此洗涤—离心过程4次。
于-20℃,用800ml纯丙酮清洗沉淀,然后于4℃在离心机中离心25分钟,转速4000转/分钟,弃去上清。重复此洗涤—离心过程3次。然后将得到的沉淀物在室温晾干,粉碎,即得到所需的复合磷酸酯酶80g,产品酶活效价为38500u/mg。
实施例4、复合磷酸酯酶胶囊的制备:
将实施例1中制得的复合磷酸酯酶,粉碎成100目,取70g备用;取乳糖(填充剂)300g,粉碎过100目筛;将复合磷酸酯酶与乳糖混匀,将4g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)加入到60%乙醇中,制得4%聚乙烯吡咯烷酮的乙醇溶液,作粘合剂,制软材,过18目筛,整粒烘干,加入1.85g硬脂酸镁,作润滑剂,装入4号胶囊,套合胶囊帽。
实施例5、复合磷酸酯酶胶囊的制备:
将实施例2中制得的的复合磷酸酯酶,粉碎成100目,取70g备用;取淀粉(填充剂)300g,过100目筛;取适当干淀粉制淀粉浆作粘合剂,将复合磷酸酯酶与剩余淀粉混匀,加粘合剂,制软材,过18目筛,整粒烘干,加入7.5g滑石粉,作润滑剂,装入5号胶囊,套合胶囊帽。
机译: 人磷酸酯酶4D的复合物的3D晶体结构及其具有改善的结晶度的抑制剂,以及使用相同方法鉴定材料调节人磷酸酯酶4D活性的方法
机译: 人磷酸酯酶4D的复合物的3D晶体结构及其具有改善的结晶度的抑制剂,以及使用相同方法鉴定材料调节人磷酸酯酶4D活性的方法
机译: 复合对5型磷酸酯酶的抑制作用及其制备方法