一种用于养殖水质调控的乳酸菌微生态制剂的生产方法

摘要

本发明公开了一种用于养殖水质调控的乳酸菌微生态制剂的生产方法，包括以下步骤：(1)试管培养；(2)摇瓶培养；(3)种子罐培养；(4)发酵罐培养：将种子罐中的培养液接种入装有培养基的发酵罐中，温度25～35℃静置培养24～36小时；当发酵液最终pH为3.0～4.0，菌密度为50亿/ml时停止发酵；所述步骤(3)和步骤(4)中的培养基的pH为5.5～6.5；所述的培养基为每升水中包含以下重量份的组分：糖蜜3～5、酵母膏3～5、玉米浆0.8～1、KH2PO4 0.1～0.3、MgSO4 0.3～0.5、NaCl 3～5、葡萄糖8～10、蛋白胨0.8～1。该方法采用全开放的培养方式进行用于养殖水质调控的乳酸菌微生态菌剂的生产，具有设备投资少，能耗小、工艺简单、生产成本低的特点。

说明书

技术领域

本发明涉及一种乳酸菌的生产方法，尤其涉及一种用于养殖水质调控的乳酸菌微生态制剂的生产方法。

背景技术

乳酸菌与人类的关系密切，其应用范围广泛，于临床医学方面，乳酸菌作为微生态制剂可以治疗肠道功能紊乱，维持肠道菌体平衡等。应用于饲料中，可促进生长发育，防治疾病和改善禽产品的品质；可作为食品添加剂，提高酸度改善风味，增加养分提高营养价值，延长食品保质期，防止腐败的作用。于集约化对虾养殖过程中大量使用，其调控藻相、净化水质的作用明显，提高了对虾养殖的成功率。

现有的培养乳酸菌制剂的工艺一般是将培养基配料后混合搅拌，然后放置在发酵装置中并加入菌种进行培养，现在常用的是微生物发酵行业内的标准发酵罐进行发酵。标准发酵罐内部有夹层，主要利用水蒸汽或冷水进行加热或降温，这种培养罐对环境条件要求高，消毒灭菌必须彻底，培养成本高，而且设备投资大。

另一方面，对虾养殖池塘泼洒使用的乳酸杆菌微生态制剂使用量大，若能降低产品的生产成本就能大大降低水产养殖投入成本。

发明内容

本发明目的是提供一种用于养殖水质调控的乳酸菌微生态制剂的生产方法，该方法采用全开放的培养方式进行乳酸菌微生态菌剂的生产，具有设备投资少，能耗小、工艺简单、生产成本低的特点。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种用于养殖水质调控的乳酸菌微生态制剂的生产方法，包括以下步骤：

(1)试管培养：将乳酸菌菌种接种于装有培养基的试管中，在28～30℃温度活化培养；

(2)摇瓶培养：将菌种的活化培养液接种于装有培养基的三角瓶中，28～30℃温度静置培养；

(3)种子罐培养：将三角瓶中的培养液接种于装有培养基的种子罐中，温度25～35℃静置培养；

(4)发酵罐培养：将种子罐中的培养液接种入装有培养基的发酵罐中，温度25～35℃静置培养24～36小时；当发酵液最终pH为3.0～4.0，菌密度为50亿/ml时停止发酵；

所述步骤(3)和步骤(4)中的培养基的pH为5.5～6.5；所述的培养基为1000重量份水中包含以下重量份的组分：糖蜜3～5、酵母膏3～5、玉米浆0.8～1、KH₂PO₄ 0.1～0.3、MgSO₄ 0.3～0.5、NaCl 3～5、葡萄糖8～10、蛋白胨0.8～1。

所述步骤(2)的活化培养液、步骤(3)和步骤(4)中的培养液的接种量为培养基总重量的3～5％。

所述的步骤(1)和步骤(2)中的培养基为改进的MRS培养基，其pH为5.5～6.5；所述的MRS培养基为1000重量份水中包含以下重量份的组分：蛋白胨8～10、酵母膏3～5、葡萄糖13～15、KH₂PO₄ 1.5～2、MgSO₄ 0.3～0.5、MnSO₄ 0.20～0.25、CH₃COONa 3～5。

所述的MRS培养基在121℃下高压灭菌20分钟。

步骤(3)所述的种子培养是先进行一级种子培养，然后再进行二级种子培养。所述的一级种子培养为乳酸菌菌种在较小体积的种子罐进行培养；所述的二级种子乳酸菌菌种在较大体积的种子罐进行培养。

所述步骤(4)种子罐中的培养液以3～5％的接种量接入装有培养基的发酵罐中后，搅拌均匀，分装在小口瓶的塑料罐中进行静置培养。

本发明与现有技术相比具有以下优点：试管培养、摇瓶培养两阶段的培养基灭菌，种子罐、发酵罐生产阶段培养基不灭菌，采用静置培养方式，从而大大降低能耗；可采用塑料罐代替微生物培养正式的发酵罐，从而大幅度降低生产成本的投入。以糖蜜、玉米浆作为生产发酵培养基的主要原料，以降低生产成本，变废为宝实现资源再次利用。

具体实施方式

以下结合实施例和对比对本发明进行阐述，然而本发明的保护范围并非仅仅局限于以下实施例。所属技术领域的普通技术人员依据本发明公开的内容，均可实现本发明的目的。

实施例一

一种用于养殖水质调控的乳酸菌微生态制剂的生产方法，包括以下步骤：

(1)试管培养：将两株乳酸菌菌种分别接种于两个装有MRS培养基的试管中，在28℃温度活化培养；然后合并所得培养液；

(2)摇瓶培养：将菌种的活化培养液以培养基总重量的5％的接种量接种于装有MRS培养基的三角锥瓶中，28℃温度静置培养；

(3)种子罐培养：将三角瓶中的培养液以培养基总重量的5％的接种量接种于装有4500ml的培养基的聚乙烯瓶中，在温度35℃静置24小时进行一级种子培养，装满瓶；然后再将一级种子培养液按培养基总重量的5％的接种量接种于500L的塑料罐中，按一级种子培养的条件进行二级种子培养；

(4)发酵罐培养：将种子罐中的培养液以培养基总重量的5％的接种量接入装有培养基的1000L发酵罐中，温度35℃静置培养24小时；当发酵液最终pH为4.0，菌密度为50亿/ml时停止发酵。

所述步骤(3)和步骤(4)中的培养基的pH为6.5；所述的培养基为每升水中包含以下重量份的组分：糖蜜5g、酵母膏5g、玉米浆1g、KH₂PO₄ 0.3g、MgSO₄ 0.5g、NaCl 5g、葡萄糖10g、蛋白胨1g。

所述的步骤(1)和步骤(2)中的培养基为改进的MRS培养基，其pH为6.5；所述的MRS培养基为每升水中包含以下重量份的组分：蛋白胨10g、酵母膏5g、葡萄糖15g、KH₂PO₄2g、MgSO₄ 0.5g、MnSO₄ 0.25g、CH₃COONa 5g。所述的MRS培养基在121℃下高压灭菌20分钟。

实施例二

一种用于养殖水质调控的乳酸菌微生态制剂的生产方法，包括以下步骤：

(1)试管培养：将两株乳酸菌菌种分别接种于两个装有MRS培养基的试管中，在29℃温度活化培养；然后合并所得培养液；

(2)摇瓶培养：将菌种的活化培养液以培养基总重量的4％的接种量接种于装有MRS培养基的三角瓶中，29℃温度静置培养；

(3)种子罐培养：将三角瓶中的培养液以培养基总重量的4％的接种量接种于装有4500ml的培养基的聚乙烯瓶中，在温度30℃静置30小时进行一级种子培养，装满瓶；然后再将一级种子培养液按培养基总重量的4％的接种量接种于500L的塑料罐中，按一级种子培养的条件进行二级种子培养；

(4)发酵罐培养：将种子罐中的培养液以培养基总重量的4％的接种量接入装有培养基的1000L发酵罐后，搅拌均匀，分装在5个小口瓶的塑料罐中，在温度30℃静置培养30小时；当发酵液最终pH为3.5，菌密度为50亿/ml时停止发酵。

所述步骤(3)和步骤(4)中的培养基的pH为5.5；所述的培养基为每升水中包含以下重量份的组分：糖蜜3g、酵母膏3g、玉米浆0.8g、KH₂PO₄ 0.1g、MgSO₄ 0.3g、NaCl3g、葡萄糖8g、蛋白胨0.8g。

所述的步骤(1)和步骤(2)中的培养基为改进的MRS培养基，其pH为5.5；所述的MRS培养基为每升水中包含以下重量份的组分：蛋白胨8g、酵母膏3g、葡萄糖13g、KH₂PO₄1.5g、MgSO₄ 0.3g、MnSO₄ 0.20g、CH₃COONa 3g。所述的MRS培养基在121℃下高压灭菌20分钟。

实施例三

一种用于养殖水质调控的乳酸菌微生态制剂的生产方法，包括以下步骤：

(1)试管培养：将两株乳酸菌菌种分别接种于两个装有MRS培养基的试管中，在30℃温度活化培养；然后合并所得培养液；

(2)摇瓶培养：将菌种的活化培养液以培养基总重量的3％的接种量接种于装有MRS培养基的三角瓶中，30℃温度静置培养；

(3)种子罐培养：将三角瓶中的培养液以培养基总重量的3％的接种量接种于装有4500ml的培养基的聚乙烯瓶中，在温度25℃静置36小时进行一级种子培养，装满瓶；然后再将一级种子培养液按培养基总重量的3％的接种量接种于500L的塑料罐中，按一级种子培养的条件进行二级种子培养；

(4)发酵罐培养：将种子罐中的培养液以培养基总重量的3％的接种量接入装有培养基的1000L发酵罐中，温度25℃静置培养36小时；当发酵液最终pH为3.0，菌密度为50亿/ml时停止发酵。

所述步骤(3)和步骤(4)中的培养基的pH为6；所述的培养基为每升水中包含以下重量份的组分：糖蜜4g、酵母膏4g、玉米浆0.9g、KH₂PO₄ 0.2g、MgSO₄ 0.4g、NaCl 4g、葡萄糖9g、蛋白胨0.9g。

所述的步骤(1)和步骤(2)中的培养基为改进的MRS培养基，其pH为6；所述的MRS培养基为每升水中包含以下重量份的组分：蛋白胨9g、酵母膏4g、葡萄糖14g、KH₂PO₄1.8g、MgSO₄ 0.4g、MnSO₄ 0.2g、CH₃COONa 4g。所述的MRS培养基在121℃下高压灭菌20分钟。

本发明提供的产品乳酸菌微生态制剂施用于养殖水体，使用时每1000ml菌剂兑塘水10公斤，搅拌均匀，全塘泼洒，依水质情况，每10～15天投加菌剂一次。施用乳酸菌微生态制剂能显著性改善养殖水体水质，促进有益藻类的生长，调控藻相，水色鲜活，不暗淡，提高养殖水体溶解氧，降解有机污染物，降低有害物质NO₂-N、NH₄-N的量，提高养殖成功率。