用于肠道疾病的药物组合物、饮食品或饲料

摘要

本发明提供了具有预防和/或治疗溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠易激综合症等肠道疾病的效果的药物组合物、饮食品或饲料。一个优选实施方案是含有乳过氧化物酶作为有效成分、具有预防和/或治疗肠道疾病的效果的药物组合物、饮食品或饲料，其中所述肠道疾病是选自溃疡性大肠炎、克罗恩病和肠易激综合症中的至少一种以上疾病。

说明书

技术领域

本发明涉及含有乳过氧化物酶作为有效成分的、用于预防或治疗溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠易激综合症等肠道疾病的药物组合物、饮食品或饲料。

背景技术

溃疡性大肠炎和克罗恩病是病因尚不明朗的炎症性肠道疾病，是反复缓解和复发的慢性难治性疾病。虽然已经有人指出，这些疾病的病因除了遗传原因和免疫异常以外还牵涉到饮食等环境因素(例如非专利文件1)，但原因仍然是不明的。溃疡性大肠炎是在大肠粘膜上连续形成糜烂和溃疡的炎症性疾病，除了血便、粘液血便、腹泻、腹痛以外，在重症的情况下，还出现发热、体重减轻、贫血等全身性症状(例如非专利文件2)。另外，克罗恩病特征在于在从口到肛门的消化道的任何部位非连续地出现炎症和溃疡等病变，除了腹痛、腹泻、血便以外，在重症的场合下出现发热、便血、体重减轻、全身倦怠感、贫血等症状(例如非专利文件3)。

过去，已知这些炎症性肠道疾病在欧美的患病率很高，但近年来，在日本随着饮食习惯等生活习惯的改变，患者数也急剧增加。然而，由于炎症性肠道疾病的病因不明，还没有确立根本性治疗方法。为此，治疗方针不是以治愈(完全治好的状态)为目标，而目的是早期诱导缓解(减轻)(暂时性症状变好的状态)，并尽可能长期维持该缓解状态。作为用于这种对症疗法的药物，主要使用氨基水杨酸制剂、肾上腺皮质类固醇药、免疫抑制剂等，但它们的副作用成为临床上很大的问题。例如，据报告，通常作为氨基水杨酸制剂经常使用的柳氮磺吡啶的副作用有恶心、呕吐、食欲不振、皮疹、头痛、肝损害、白细胞减少、异常红细胞、蛋白尿、腹泻等。另外，肾上腺皮质类固醇激素，通常使用泼尼松龙的口服给药、灌肠、栓剂、静注等，但具有很强的副作用如胃溃疡和长期使用引发的股骨头坏死等。然而，由于中断给药引起了症状的复发(再发)，所以这些药物不得不持续给药。

另一方面，肠易激综合症不被认为是小肠和大肠的明显器质性病变，而是由于功能异常而出现腹痛、腹泻、粘液便、便秘、腹部胀满等症状的疾病(例如非专利文件4)。根据在日本的研究，据报告该患病率与欧美相同，高达15.5％(例如非专利文件4)。肠易激综合症的病因尚不明朗，但已有人指出，除了精神紧张和肠道运动功能障碍以外，没有完全治愈的轻度肠炎也可能引起上述症状(例如非专利文件5)。另外，对于肠易激综合症，由于病因不明，也实行以诱导缓解并维持为目的的对症疗法。作为用于该目的的药物，主要给药整肠剂、泻药、抗胆碱能药物、抗抑郁药和抗焦虑药等。此外，也有人提出，通过在肠易激综合症中使用用于炎症性肠道疾病的对症疗法的药物，肠易激综合症的症状能够得到缓解(例如非专利文件6)。但是，为了诱导缓解并维持，必需持续使用药物，这样，副作用成为大的问题。

乳过氧化物酶是主要在牛乳等哺乳类乳汁中含有还在唾液、泪液、气道粘液等分泌液中含有的、分子量约8万的氧化还原酶(例如非专利文件7)，并且在分子内还含有一个亚铁血红素作为辅酶(非专利文件8)。另外已知的是，乳过氧化物酶通过在过氧化氢的存在下将动物组织和体液中广泛含有的硫氰酸(SCN-)氧化，生成抗菌物质即次硫氰酸(hypothiocyanic acid)(OSCN-)(例如非专利文件9)。基于这种体系，已经开发了由乳过氧化物酶、硫氰酸和过氧化氢(或能够供给过氧化氢的化合物)构成的发挥各种效果的药物。例如，已经公开下列技术：使用乳过氧化物酶、过氧化物给体和硫氰酸盐制备治疗幽门螺旋杆菌用的医疗药物(专利文件1)，过氧化物酶在预防和治疗上的应用(专利文件2)，含有过氧化物酶-硫氰酸离子和/或卤素离子-过氧化氢系的乳酸菌发酵食品的制备方法(专利文件3)，双酶系洁齿剂(专利文件4)，杀菌剂组合物(专利文件5)，含有过氧化物酶的乳酸菌发酵剂(starter)，发酵乳制品及其制备方法(专利文件6)和尿素酶失活的组合物和饮食品(专利文件7)等。

另外，关于单独的乳过氧化物酶的效果，已经有人报告，通过口服给药于感染流感病毒的小鼠，能抑制其肺炎的严重度、支气管肺泡灌洗液中炎症细胞的数目和血清中白介素-6的浓度上升(例如非专利文件10)。此外，已经公开了与肠内菌丛改进剂和饮食品(专利文件8)，蛋白酶抑制剂(专利文件9)、抗病毒剂(专利文件10)和白介素-6产生抑制剂(专利文件11)有关的技术。但是，迄今为止，关于乳过氧化物酶对肠道疾病的效果的现有技术，还没有任何报道。

专利文件1：日本特表2000-509367号公报

专利文件2：日本特许第3478821号公报

专利文件3：日本特开昭62-228224号公报

专利文件4：日本特公平4-25924号公报

专利文件5：日本特开平1-61427号公报

专利文件6：日本特许第3007686号公报

专利文件7：日本特开2002-238554号公报

专利文件8：日本特开2003-246753号公报

专利文件9：日本特开2005-104900号公报

专利文件10：日本特开2005-232133号公报

专利文件11：国际公开2004/073733号小册子

非专利文件1：日本临床，第63卷，2005年，第757-762页

非专利文件2：日本临床，第63卷，2005年，第744-749页

非专利文件3：Diseases of the Colon and Rectum，第43卷，第S85-S93页，2000年，美国

非专利文件4：Internal Medicine，第43卷，第353-359页，2004年，日本

非专利文件5：Gut，第51卷，第i41-i44页，2002年，英国

非专利文件6：Current Opinion in Gastroenterology，第19卷，第336-342页，2003年，美国

非专利文件7：American Journal of Respiratory and CriticalCare Medicine，第166卷，第S57-S61页，2002年，美国

非专利文件8：British Journal of Nutrition，第84卷，第S19-S25页，2000年，英国

非专利文件9：American Journal of Res piratory Cell andMolecular Biology，第20卷，第642-644页，2000年，美国

非专利文件10：Journal of Me dical Microbiology，第54卷，第717-723页，2005年，英国

发明内容

发明所要解决的问题

在这种状况下，希望开发出一种用于诱导和维持缓解的预防或治疗溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠易激综合症等肠道疾病的药物，该药物可以安全且不产生副作用地长期给药或摄取。

另外，期望提供一种可作为健康食品、功能性食品、特殊用途食品、营养功能食品、特殊保健用食品等形式用于在生活习惯中预防肠道疾病和/或改善肠道疾病的症状(诱导和维持缓解)的饮食品，其可以持续日常摄取，不用担心副作用。

用于解决问题的方法

本发明人基于上述课题反复深入研究，结果第一次发现，乳蛋白质即乳过氧化物酶对于溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠易激综合症等肠道疾病具有预防效果和症状缓解(改善)效果，从而完成了本发明。

也就是说，本发明通过提供含有乳过氧化物酶作为有效成分的预防和/或治疗溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠易激综合症等肠道疾病的药物组合物、饮食品或饲料来实现。解决上述课题的手段如以下所述。

解决上述课题的本申请第一发明，一个优选的形态为：含有乳过氧化物酶作为有效成分的预防和/或治疗肠道疾病的药物组合物，所述肠道疾病是选自溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠易激综合症中的至少一种或多种疾病。

解决上述课题的本申请第二发明，一个优选的形态为：含有乳过氧化物酶作为有效成分的用于预防和/或治疗肠道疾病的饮食品，所述肠道疾病是选自溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠易激综合症中的至少一种或多种疾病，所述饮食品是健康食品、功能食品、特殊用途食品、营养功能食品、特殊保健用食品。

解决上述课题的本申请第三发明是乳过氧化物酶用于制备第二发明中所述的饮食品的用途。

解决上述课题的本申请第四发明，一个优选的形态为：用于预防和/或治疗肠道疾病的含有乳过氧化物酶作为有效成分的食品添加剂，所述肠道疾病是选自溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠易激综合症中的至少一种或多种疾病。

解决上述课题的本申请第五发明，一个优选的形态为：用于预防和/或治疗肠道疾病的含有乳过氧化物酶作为有效成分的饲料，所述肠道疾病是选自溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠易激综合症中的至少一种或多种疾病。

解决上述课题的本申请第六发明，一个优选的形态为：通过投与含有乳过氧化物酶作为有效成分的药物组合物和/或饲料而预防和/或治疗哺乳类的肠道疾病的方法，所述肠道疾病是选自溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠易激综合症中的至少一种或多种疾病。

同时，本发明提供了以下(1)～(11)。

(1)一种用于预防和/或治疗肠道疾病的药物组合物，其含有作为有效成分的乳过氧化物酶和药学上允许的载体。

(2)根据项(1)所述的药物组合物，其中所述肠道疾病是选自溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠易激综合症中的至少一种或多种疾病。

(3)乳过氧化物酶用于制备前述项(1)～(2)任一项所述的药物组合物的用途。

(4)一种用于预防和/或治疗肠道疾病的饮食品，其含有乳过氧化物酶作为有效成分。

(5)根据前述项(4)所述的饮食品，其中所述肠道疾病是选自溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠易激综合症中的至少一种或多种疾病。

(6)乳过氧化物酶用于制备前述项(4)～(5)任一项所述的饮食品的用途。

(7)根据前述项(4)～(6)的任一项所述的饮食品，其中所述饮食品为健康食品、功能性食品、特殊用途食品、营养功能食品或特殊保健用食品的形式。

(8)一种用于预防和/或治疗肠道疾病的食品添加剂，其含有乳过氧化物酶作为有效成分。

(9)前述项(8)所述的食品添加剂，其中所述肠道疾病是选自溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠易激综合症中的至少一种或多种疾病。

(10)一种用于预防和/或治疗肠道疾病的饲料，其含有乳过氧化物酶作为有效成分。

(11)根据项(10)所述的饲料，其中所述肠道疾病是选自溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠易激综合症中的至少一种或多种疾病。

(12)一种用于预防和/或治疗哺乳类的肠道疾病的方法，其通过投与含有作为活性成分的乳过氧化物酶和药学上允许的载体的药物组合物来进行。

(13)根据前述项(12)所述的方法，其中所述肠道疾病是选自溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠易激综合症中的至少一种或多种疾病。

上述乳过氧化物酶可以采用从天然物质中分离的乳过氧化物酶。或者，还可以采用人工合成的过氧化物酶。优选使用从天然物质中分离的乳过氧化物酶。

发明效果

本发明所取得的效果如以下所述：

(1)本发明的药物组合物、饮食品和食品添加剂具有预防和/或治疗溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠易激综合症等肠道疾病的效果。

(2)本发明的药物组合物、饮食品和食品添加剂对人和动物的安全性很高，可以持续日常摄取达长时间，不用担心副作用，从而可以预防和/或治疗肠道疾病。

(3)由于本发明的有效成分即乳过氧化物酶可以由作为生物材料的比较廉价的乳和乳清等原料稳定而大量地制备，因此可以低成本提供用于预防和/或治疗肠道疾病的药物组合物、饮食品和食品添加剂。因此，从费用负担方面考虑，容易长时间持续日常摄取。

具体实施方式

接下来详细说明本发明的优选实施方案。但本发明不限于以下优选实施方案，在本发明的范围内可以做出各种改变。另外，除非另有规定，本说明书中的百分率按质量表示。

在本发明中，肠道疾病的预防效果和治疗效果主要是针对炎症性肠道疾病的效果，尤其是针对溃疡性大肠炎、克罗恩病等炎症性肠道疾病和由没有完全治愈的轻度炎症所引起的肠易激综合症等的症状的效果。此外，治疗效果包含缓解(改善)症状的效果和治疗疾病的效果，尤其是指诱导缓解的效果和维持该缓解状态的效果。也就是说，本发明中，通过日常给药或摄取有效成分即乳过氧化物酶，可以获得预防和/或治疗上述疾病的效果，几乎不会产生副作用等。

本发明中所使用的乳过氧化物酶在工业上可以适合如以下制备方法例如“含活菌的液体组合物”(日本特开平5-41981号公报)中公开的方法那样按照常规方法(例如离子色谱法)由未加热的乳清或脱脂乳工业制备。或者，根据需要，也可以使用市购的天然物来源的乳过氧化物酶(例如Biopole公司所生产)或者重组型乳过氧化物酶(例如，通过Shin等人的方法[Biochemical and Biophysical Research Communications，第271卷，第831-836页，2000年]开发和提纯的重组型乳过氧化物酶，或市售的重组型乳过氧化物酶)。

本发明中所使用的乳过氧化物酶优选来源于哺乳类的乳汁。在制备供人用的药物组合物或饮食品的情况下，优选使用来源于其乳汁在传统饮食中使用的牛、绵羊、山羊等的乳汁的乳过氧化物酶，尤其优选使用来源于牛乳的乳过氧化物酶。这是因为这些乳汁已经一直用在人的饮食中，因此以极高水平确保了对人的安全性。

另外，由于来源于牛乳的未加热的乳清作为乳制品生产中的副产物能够稳定且大量地获得，所以特别优选作为本发明中所使用的乳过氧化物酶的原料。

本发明的药物组合物、饮食品或饲料中的有效成即分乳过氧化物酶是来源于乳的天然物质，摄取时具有高安全性，在牛乳等食品中含有，因此可以日常摄取，不具有毒性，即使长时间连续摄取也几乎没有发现副作用。因此，可适合通过口服等给药方法使用，还可通过公知的方法加工成片剂、胶囊剂、锭剂、糖浆剂、颗粒剂、散剂等。另外，乳过氧化物酶还能够作为有效成分在食品中含有，作为预防和/或治疗肠道疾病的一个方面，还可以加工成具有预防和/或治疗肠道疾病的效果的功能性食品。

本发明的药物组合物、饮食品或饲料的有效成分即乳过氧化物酶的给药量根据剂型、症状、年龄、体重等因素而不同，为了发挥预防和/或治疗肠道疾病的效果，优选经口给药至少1mg/kg体重/日的比例，尤其优选3～300mg/kg体重/日的比例。

根据本发明的药物组合物例如可以通过使用乳过氧化物酶和可药学上允许的赋型剂等任意添加剂配制来成为制剂。在配制时，制剂中的乳过氧化物酶的含量通常是0.001～10质量％，优选0.01～10质量％。在配制制剂时，可以使用赋型剂、粘结剂、崩解剂、滑爽剂、稳定剂、矫味矫臭剂、稀释剂和注射用溶剂等添加剂。

赋型剂的实例包括：乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和山梨糖醇等糖衍生物；玉米淀粉、马铃薯淀粉、α-淀粉、环糊精、羧甲基淀粉等淀粉衍生物；结晶纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素和羧甲基纤维素钙等纤维素衍生物；阿拉伯树胶；右旋糖苷；普鲁兰多糖(PULLULAN)；轻质无水硅酸、合成硅酸铝和偏硅酸铝酸镁等硅酸盐衍生物；磷酸钙等磷酸盐衍生物；碳酸钙等碳酸盐衍生物；以及硫酸钙等硫酸盐衍生物等。粘结剂的实例包括除了上述赋型剂以外的明胶、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等。崩解剂的实例包括除了上述赋型剂以外的交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠和交联聚乙烯吡咯烷酮等化学改性淀粉或纤维素衍生物。滑爽剂的实例包括滑石、硬脂酸、硬脂酸钙和硬脂酸镁等硬脂酸金属盐；胶体二氧化硅；蜂蜡和鲸蜡等蜡类；硼酸、二醇、富马酸和己二酸等羧酸类；苯甲酸钠等羧酸钠盐、硫酸钠等硫酸类盐、亮氨酸、月桂基硫酸钠和月桂基硫酸镁等月桂基硫酸盐；无水硅酸、硅酸水合物等硅酸类；淀粉衍生物等，稳定剂的实例包括对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯等对氧基苯甲酸酯(p-oxybenzoate)类；氯丁醇、苄醇和苯乙醇等醇类；苯扎氯铵、乙酸酐、山梨酸等。矫味剂的实例包括甜味料、酸味料、香料等。注射剂用溶剂的实例包括水、乙醇、甘油等。

本发明的药物组合物的给药途径的实例包括口服给药和非口服给药如肠内给药等。本发明的药物组合物的给药剂型包括例如喷雾剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、糖浆剂、乳剂、栓剂、注射剂、软膏、胶带剂等。另外，本发明的药物组合物还可以与饮食品和饲料等混合来给药。

本发明的含有药物组合物的饮食品是指含有乳过氧化物酶作为有效成分、用于预防和/或治疗肠道疾病的饮食品，实例是可日常摄取的饮食品。

例如，这可以通过将乳过氧化物酶与糊精、淀粉等糖类，明胶、大豆蛋白、玉米蛋白等蛋白质，丙氨酸、谷氨酰胺、异亮氨酸等氨基酸类，纤维素、阿拉伯树胶等多糖类，大豆油、中链脂肪酸甘油三酯等油脂类配合来制备。饮食品组合物的形式包括清凉饮料、碳酸饮料、营养饮料、水果饮料、乳酸饮料等饮料(包括这些饮料的浓缩原液和调节用粉末)；冰激凌、冰果汁饮料、刨冰等冷冻甜食；荞麦面条、小麦面、粉丝、饺子皮、烧麦皮、中国面条、方便面等面条；糖、口香糖、糖果、泡泡糖、巧克力、片状点心、休闲食品、饼干、果冻、果酱、奶油、烘烤食品等点心；鱼酱、火腿、香肠等水产品和家畜加工食品；加工乳和发酵乳等乳制品；色拉油、油炸油、人造黄油、蛋黄酱、起酥油(shortning)、搅打奶油、调料等油脂和油脂加工食品；沙司和佐料等调味品；汤；炖菜；沙拉；家常菜；腌菜；面包；肠内营养食品；功能性食品等。

本发明的含有药物组合物的饲料是指含有乳过氧化物酶作为有效成分、用于预防和/或治疗肠道疾病的饲料，实例是可以日常喂饲的饲料。

例如，这可以通过将乳过氧化物酶与玉米、小麦、大麦、黑麦、买罗高梁等谷类；大豆油渣饼、菜籽油渣饼、棕榈油渣饼、亚麻油渣饼等植物性油渣饼类；小麦麸、大麦麸、米糠、脱脂米糠等糠类；玉米面筋粉、玉米胚饼粉等副产品粉；鱼粉、脱脂粉乳、乳清、黄色油脂、牛油等动物性饲料类；圆酵母、啤酒酵母等酵母；三碱式磷酸钙、碳酸钙等矿物饲料；油脂类；单体氨基酸；糖类等配合来制备。这种饲料的形式可举例宠物食品、家畜饲料、养鱼饲料等。

本发明的药物组合物、饮食品或饲料可以仅单独使用，但可以与其它对肠道疾病具有效果的药物组合物、饮食品或饲料联合使用。通过联用，可以提高预防和/或治疗肠道疾病的效果。联用的药物组合物、饮食品或饲料可以在本发明的药物组合物、饮食品或饲料中作为有效成分含有，也可以不在本发明的药物组合物、饮食品或饲料中含有，而作为另一药物、饮食品等组合后成为商品。

本发明的饮食品的用途可以用于利用其预防和/或治疗肠道疾病的效果的各种用途。

本发明的饮食品优选作为说明了改善肠道疾病的用途的饮食品，例如“说明用于改善肠道疾病的、具有肠道疾病改善效果的饮食品”，“说明用于改善肠道疾病的、含有乳过氧化物酶的饮食品”或者“说明用于预防肠道疾病的、含有乳过氧化物酶的饮食品”等出售。

另外，以上为了说明而使用的词语不限于“用于改善肠道疾病”或“用于预防肠道疾病”词语，除此以外的短语只要为表达了预防或治疗肠道疾病的效果的词语，就当然涵盖在本发明的范围内。作为这种短语，例如，让需要者认识到肠道疾病预防的效果和/或改善效果的各种用途为基础的表达也是可以的。

上述“说明”的行为包括让需要者知道上述用途的全部行为，只要是让需要者想起和类推出上述用途的说明，不论其说明的目的、说明的内容、说明的对象物、介质等，全部被当作本发明的“说明”行为。但是，该说明优选可使得需要者直接认识到上述用途的方式来表达。具体地说，可举例将涉及本发明的饮食品的商品或商品包装上记载上述用途的行为作为该说明行为，另外还可以例举转让、交货、为了转让或交货而显示、或进口在商品或商品包装上记载上述用途的行为，在与商品有关的广告、价格表或交易订单类上记载上述用途并且显示或颁布的行为，或者在以这些作为内容的信息上记载上述用途并通过电磁方法(例如互联网)提供信息的行为，等。

另一方面，说明的内容(说明内容)优选被政府等的表达(例如，以得到基于政府规定的各种制度接受许可并基于这样的许可的形式)，该说明内容优选在包装物、容器、目录、小册子、POP等在销售现场中的宣传材料，其它文件等之上显示。

另外，可以列举如作为健康食品、功能性食品、肠内营养食品、特殊用途食品、保健功能食品、特定保健用食品、营养功能食品、准药物等的说明。尤其，可以例举由厚生劳动省批准的说明，如由特定保健用食品制度或与之类似的制度许可的说明。后者的实例包括作为特定保健用食品的说明，作为附带条件的特定保健用食品的说明，带有影响身体结构和功能之意的说明，降低疾病风险的说明等，更具体地说，可以列举健康增进法施行规则(平成15年4月30日，日本国厚生劳动省令第86号)规定的特定保健用食品的说明(尤其是保健用途的说明)以及与此类似的说明作为典型的实例。

在本发明中，为了评价由乳过氧化物酶带来的预防和/或治疗肠道疾病的效果，通过给药Gastroenterology，第109卷，第1344～1367页，1995年，美国或Laboratory Investigation，第69卷，第238～249页，1993年，美国中记载的葡聚糖硫酸钠诱发大肠炎来获得大肠炎动物模型，用该大肠炎动物模型进行试验。也就是说，通过常规方法用添加了葡聚糖硫酸钠的饮用水喂饲小鼠来诱发大肠炎，然后研究乳过氧化物酶对大肠炎症状的效果(体重减轻抑制作用、大肠缩短抑制作用和大肠炎抑制作用)。

以下参照实施例详细说明本发明，但本发明不限于下列实施例。

实施例1

[乳过氧化物酶的制备]

让10000kg的未加热的乳清通过填充了100L的CM-Sephadex C-50(Amersham Biosciences制造)的柱子。然后，用1000kg水清洗sephadex凝胶，让200L的含有0.3M氯化钠的20mM磷酸钠缓冲液(pH7.0)通过柱子，以洗脱吸附到sephadex树脂上的乳过氧化物酶。用具有10000的截留分子量的超滤膜模块(旭化成公司制造)将该洗脱液浓缩并脱盐。在所得约10升的浓缩液中添加30L的去离子水，然后让该液体通过填充了20L的SP-Sepharose FF(Amersham Biosciences制造)的柱子。然后，用含有0.15M氯化钠的20mM磷酸钠缓冲液(pH6.4)清洗该琼脂糖凝胶，再用含有0.3M氯化钠的20mM磷酸钠缓冲液(pH6.4)洗脱乳过氧化物酶。用具有10000的截留分子量的超滤膜模块(旭化成公司制造)将该洗脱液浓缩并脱盐。然后，该浓缩液用具有0.2μm平均孔径的微滤膜模块(Asahi Kasei Corporation制造)进行无菌过滤，冷冻干燥，获得约150g的无菌乳过氧化物酶粉末。

该乳过氧化物酶样品使用丙烯酰胺浓度为10-20％的SDS-聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，用考马斯亮蓝R250(Sigma公司生产)染色，再用图像处理器(ATTO公司制造)分析。结果发现，乳过氧化物酶的纯度为大约97％。

实施例2

[乳过氧化物酶·片剂的制备]

添加150g的实施例1的方法中获得的乳过氧化物酶、100g的乳果糖粉(森永乳业公司生产)、635g麦芽糊精(松谷化学工业公司生产)、85g脱脂奶粉(森永乳业公司生产)、1g甜菊甜味料(San-Ei Gen F.F.I.公司生产)、5g酸乳增香剂(San-Ei Gen F.F.I.公司生产)和24g甘油脂肪酸酯制剂(Riken Vitamin Co.，Ltd.生产)的各个粉末并均匀混合，使用压片机(Hata Iron Works Co.，Ltd.制造)，以12片/分钟的压片速度、9.8KPa的压力将上述混合粉末连续压片，每片片剂为0.5g。制造1800片(约900g)的含有乳过氧化物酶的片剂，作为炎症性肠道疾病和肠易激综合症的症状缓解剂和/或治疗剂。

实施例3

将10.8kg的乳清蛋白水解产物(森永乳业公司生产)、36kg的糊精(昭和产业公司生产)和少量的水溶性维生素和矿物质在200kg的水中溶解，在罐内制备水相。另一方面，将3kg的大豆色拉油(太阳油脂公司生产)、8.5kg的棕榈油(太阳油脂公司生产)、2.5kg的向日葵油(太阳油脂公司生产)、0.2kg的卵磷脂(味之素公司生产)、0.2kg的脂肪酸甘油一酯(花王公司生产)和少量的脂溶性维生素混合和溶解，配制油相。在罐内的水相中添加油相，搅拌并混合之后，加热到70℃，另外，通过均化器在14.7MPa的压力下均质化。接着，在90℃下10分钟杀菌之后，浓缩，喷雾干燥，制备约59kg的中间产品粉末。向该50kg的中间产品粉末中添加6.8kg的蔗糖(Hokuren公司生产)、167g的氨基酸混合粉末(味之素公司生产)和60g的实施例1的方法中获得的乳过氧化物酶，均匀混合，制备约56kg的具有肠道疾病预防和/或症状缓解效果的含有乳过氧化物酶的肠内营养粉末。

以下给出以下试验例来详细说明本发明。

[试验例1]

本试验以肠道疾病中的溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠易激综合症等的动物模型作为研究对象，以调查乳过氧化物酶对大肠炎症状的效果。

(1)试样的制备

将实施例1中的方法获得的乳过氧化物酶按12.5质量％的浓度溶解在提纯水中，以制备试验试样。另外，将牛血清白蛋白(Sigma公司生产)以12.5质量％的浓度溶解在提纯水中，制备对照试样。

使用7周龄CBA/J雌性小鼠(从日本Charles RiverLaboratories公司购买)作为试验动物，给小鼠喂饲葡聚糖硫酸钠(分子量36000～50000，MP Biomedicals公司生产)，将作为诱发大肠炎的状态的小鼠作为动物模型使用。

(2)试验方法

a)试样的喂饲与体重的测定

将总共32只7周龄CBA/J雌性小鼠放入设有防止食入粪便的网的笼子内，用Labo MR原料(日本农产工业公司生产)和饮用水驯化饲养一周。然后，如表1所示，分成上述小鼠各6只的2组和上述小鼠各10只的两组(合计4组)。

在不喂饲葡聚糖硫酸钠的动物组(第1组和第2组)中，第1组用探针经口投喂0.5ml对照试样，每日一次，连续10日。同时，第2组用探针经口投喂0.5ml试验试样，每日一次，连续10日。

另外，在投喂葡聚糖硫酸钠、以诱发大肠炎的模型动物组(第3组、第4组)中，第3组用探针经口投喂0.5ml对照试样，每日一次，连续10日。同时，从投喂对照试样的第2日到第10日的9天中，在饮用水中溶解葡聚糖硫酸钠，使之浓度为3.0质量％，也投喂葡聚糖硫酸。

还有，第4组用探针经口投喂0.5ml试验试样，每天一次，连续10日，这里，从投喂对照试样的第2日到第10日的9天中，在饮用水中溶解葡聚糖硫酸钠，使之浓度为3.0质量％，也投喂葡聚糖硫酸钠。

表1

从投喂试样开始后的第2日测定第1～4组小鼠的体重，投喂试样的最后一天(第10日)也测定体重。投喂结束后的各组小鼠在麻醉下解剖，切取大肠。

b)大肠长度的测定

在试样喂饲结束之后的各试验组小鼠在麻醉下解剖，切取大肠。作为肠壁肥厚的指标，用标尺测定所切取的大肠的长度，求得平均值±标准偏差。

c)大肠炎的评分

用圆棒卷曲用上述方法切取的大肠的剩余部分，用大头针固紧，用磷酸缓冲的10％福尔马林(Nacalai Tesque生产)固定。然后，根据常规方法将大肠在石蜡中包埋，切片，然后用苏木精-伊红染色。使用该标本，用Cooper等人的方法[例如参照Laboratory Investigation，美国，第69卷，1993年，第238～249页]，根据表2所述的基准从组织病理学上对肠炎的严重度评分，另外，根据表3所示的标准对大肠炎的病变部分与大肠全长所占的比率进行评分。将这些评分相乘，获得大肠炎评分，然后确定每一试验组的大肠炎评分的平均值±标准偏差。

d)统计学分析

关于各试验组的体重变化、大肠长度和肠炎评分，通过一元配置的方差分析和Tukey-Kramer方法进行统计学分析，危险率低于5％(p＜0.05)判定为存在显著性差异。

表2

                                                     

评分     标准(肠炎的严重度)

                                                     

0        正常隐窝结构

1        隐窝基底侧的1/3消失

2        隐窝基底侧的2/3消失

3        粘膜表层的上皮细胞残留，但全部隐窝消失

4        粘膜表层的上皮细胞以及全部隐窝消失(糜烂)

                                                     

表3

                                                     

评分     基准(大肠炎病变部分占全部大肠的比率：％)

                                                     

0        0

1        1～25

2        26～50

3        51～75

4        76～100

                                                     

(3)试验结果

本试验的结果在表4～6中示出。表4示出了各试验组的体重变化(从投喂试样开始之后的第2～10日)，表5示出了大肠长度的测定结果，表6用各自平均值±标准偏差示出了肠炎评分。其结果，从体重变化来看(参照表4)，第1组的投喂对照试样的正常动物的平均体重增加0.85g，而第3组的投喂对照试样的肠炎动物模型的体重减轻为-1.73g，可见第1组与第3组之间存在显著性差异。另一方面，第4组的投喂乳过氧化物酶的肠炎动物模型的体重下降为-0.30g，相比于第3组的投喂对照试样的肠炎动物模型，体重减去得到抑制，可见第3组与第4组之间存在显著性差异。另外，第2组的投喂乳过氧化物酶的正常动物与第1组的投喂对照试样的正常动物具有大致同样的体重增加，可见第1组和第2组之间无显著性差异。

另外，第1组的投喂对照试样的正常动物的平均大肠长度(参照表5)为9.1cm，而第3组的投喂对照试样的大肠炎动物模型短至5.8cm，可见第1组和第3组存在显著性差异。另一方面，第4组的投喂乳过氧化物酶的大肠炎动物模型为6.7cm，与第3组的投喂对照试样的大肠炎动物模型相比大肠缩短得到抑制，可见第3组和第4组之间存在显著性差异。另外，第2组的投喂乳过氧化物酶的正常动物与第1组的投喂对照试样的正常动物具有大致同样的大肠长度，可见第1组和第2组之间无显著性差异。

还有，第1组的投喂对照试样的正常动物的平均肠炎(参照表6)评分为0，相对于此，第3组的投喂对照试样的大肠炎动物模型高达8.0，可见在第1组和第3组之间存在显著性差异。另一方面，第4组的投喂乳过氧化物酶的大肠炎动物模型为5.1，与第3组的投喂对照试样的大肠炎动物模型相比大肠炎评分得到改善，因此认为第3组和第4组之间存在显著性差异。

从以上结果可以明显看出，乳过氧化物酶显示了具有统计学显著性差异的改善体重减少和大肠缩短等大肠炎的症状以及改善大肠炎评分的效果。

表4

                                            

试验组   体重变化(g)

                                            

第1组    0.85±0.72^a-b

第2组    1.43±0.64^a

第3组    -1.73±1.31^c

第4组    -0.30±1.01^b

                                          

^*)通过Tukey-Kramer法分析，各试验组中，不含同样字母的试验组之间判定为具有危险率低于5％(p＜0.05)的显著性差异。

表5

                            

试验组   大肠长度(cm)

                            

第1组    9.1±0.9^a

第2组    9.0±0.5^a-b

第3组    5.8±0.3^c

第4组    6.7±0.5^d

                            

^*)通过Tukey-Kramer法分析，各试验组中，不含相同字母的试验组之间判定为具有危险率低于5％(p＜0.05)的显著性差异。

表6

                            

试验组   大肠炎评分

                            

第1组    0.0±0.0^a

第2组    0.0±0.0^a-b

第3组    8.0±1.8^c

第4组    5.1±1.4^d

                            

^*)通过Tukey-Kramer法分析，各试验组中，不含相同字母的试验组之间判定为具有危险率低于5％(p＜0.05)的显著性差异。

工业实用性

本发明的用于肠道疾病的药物组合物、饮食品或饲料对人和动物具有高安全性，通过日常给药或摄取，可以缓解由溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠易激综合症等肠道疾病引起的症状(诱导缓解并维持)。另外，属于本发明的有效成分的乳过氧化物酶可以由乳等原料大量生产，所以可以低成本提供用于肠道疾病的药物组合物和饮食品。