一种紫茎泽兰中绿原酸的提取工艺

摘要

本发明涉及一种紫茎泽兰中绿原酸的提取工艺，该方法以紫茎泽兰为起始原料，先用20－60％的乙醇溶液进行提取，再通过大孔树脂进一步纯化产品，可以得到含量高达52.56％的绿原酸提取物。本发明的方法弥补以金银花为原料提取绿原酸时资源有限的不足，还可以在将紫茎泽兰变害为宝的同时，高产率地获得绿原酸，且方法简单，成本低廉，适于工业化生产。

说明书

技术领域

本发明涉及一种紫茎泽兰中绿原酸的提取工艺。

背景技术

紫茎泽兰(Eupatorium adenophorum Spreng)为菊科泽兰属多年生草本植物，原产墨西哥，20世纪50年代前后自缅甸和越南传入我国云南南部，因其生长及繁殖能力极强，已在云南省及其周边许多地区蔓延。由于它对生态环境的破坏，给农林牧副业带来了严重危害。

鉴于紫茎泽兰已成为我国危害最为严重的外来入侵物种之一，各地在加强控制紫茎泽兰蔓延措施的同时，纷纷展开对其综合利用的研究，力图变害为宝。在文献1：闰乾胜，陈庆华，杨婕，李华民，曹坳程，文永奇，何兰.入侵物种紫茎泽兰化学成分及生物活性研究进展.北京师范大学学报(自然科学版)，2006，42(1)：70中，报道了紫茎泽兰中含有化学成分绿原酸(Chlorogenic acid，CHA)。绿原酸又称咖啡单宁酸，具有显著的抗菌、抗病毒、抗氧化、抗诱变、抗肿瘤及利胆、降压、增高白血球、兴奋中枢神经系统等多种生理活性，在国内外已被作为添加剂广泛用于食品、功能(保健)食品、饮料中。

现在，国内主要以金银花为原料提取绿原酸，如文献2：王天制，李永梅.金银花的研究进展.华西药学杂志，2000，15(4)：292中公开的方法，但是该方法提取物中仅含1％的绿原酸，产率低；金银花资源大量采集，造成资源的浪费。

发明内容

本发明的目的在于提供一种紫茎泽兰中绿原酸的提取工艺，该方法以紫茎泽兰为起始原料，不仅可以弥补以金银花为原料提取绿原酸时资源有限的不足，还可以在将紫茎泽兰毒草为我所用，变害为宝，获得高产率地绿原酸。

本发明的目的是通过如下的技术方案实现的：

本发明提供的紫茎泽兰中绿原酸的提取工艺，包括如下步骤：

1)将紫茎泽兰的嫩茎叶粉碎成粉末；

2)将步骤1)中得到的紫茎泽兰嫩茎叶粉末，加入体积比为20-60％的乙醇水溶液，并用盐酸调pH值至2-6；在50-80℃，将混和液煎煮2-5小时；

所加入的紫茎泽兰嫩茎叶粉末和乙醇水溶液的重量比为1∶8-13；

3)减压抽滤，滤出滤液1；将滤渣再次加入体积比为20-60％的乙醇水溶液，并用盐酸调pH值至2-6；在50-80℃，将混和液回流2-5小时；

4)减压抽滤，滤出滤液2；将滤渣再次加入体积比为20-60％的乙醇水溶液，并用盐酸调pH值至2-6；在50-80℃，将混和液回流2-5小时；

5)减压抽滤，滤出滤液3；合并三次的滤液，蒸发除去溶剂，将所得浸膏用空气泵吹干，得到绿原酸的粗产品；

6)用大孔树脂法纯化绿原酸的粗产品，将绿原酸的粗产品溶于乙醇中，上样到大孔树脂中，用去离子水作为洗脱液，过柱两次；将水洗脱物除去溶剂，干燥，得到绿原酸提取物。

在本技术方案中，所述步骤6)的大孔树脂为NKA-9型、NKA-II型或D101型大孔树脂。

在本技术方案中，所述步骤6)中绿原酸的粗产品、溶样的乙醇和洗脱的去离子水的比例为10g∶100mL∶400mL。

在本技术方案中，所述步骤6)中过柱时控制流速1-3mL/min。

在本技术方案中，所述步骤6)中，还可使用乙醇进一步洗脱，得到少量的绿原酸提取物。

本发明先用20-60％的乙醇溶液进行提取，再通过大孔树脂进一步纯化产品，开发出一套适合从紫茎泽兰中提取绿原酸的最优路线。该方法使用紫茎泽兰为起始原料，其在我国分布广阔，所以原料丰富。本发明的方法可以得到含量高达52.56％的绿原酸提取物，高产率地获得绿原酸。本发明提供的方法简单，成本低廉，适于工业化生产。

具体实施方式

实施例1、

先将紫茎泽兰的嫩茎叶粉碎成粉末，然后称取100克紫茎泽兰嫩茎叶粉末，装于圆底烧瓶中，加入800g 20％(体积比)的乙醇水溶液，并用盐酸调pH值至6；在80℃，将混和液回流2小时。

用布氏漏斗减压抽滤，滤出滤液1移至茄型瓶中；将滤渣重新装回圆底烧瓶中，再次加入800g 20％(体积比)的乙醇水溶液，并用盐酸调pH值至6；在80℃，将混和液煎煮2小时。

再次用布氏漏斗减压抽滤，滤出滤液2移至茄型瓶中；将滤渣重新装回圆底烧瓶中，再次加入800g 20％(体积比)的乙醇水溶液，并用盐酸调pH值至6；在80℃，将混和液回流2小时。

减压抽滤，滤出滤液3，弃去滤渣；合并三次的滤液，蒸发除去溶剂，将所得浸膏转移至已称重的小锥形瓶中，用空气泵吹干，得到绿原酸的粗产品370.01g，计算出绿原酸得率为14.91％，使用HPLC分析，在浸膏中绿原酸的含量为32.24％。

用大孔树脂法纯化绿原酸的粗产品。首先，对树脂进行预处理：将NKA-9型大孔树脂用去离子水溶胀后浮选，然后用1mol/L的氢氧化钠溶液浸泡4h，去离子水洗至中性，再用0.5mol/L的盐酸溶液浸泡12h，去离子水洗至中性；最后用70％乙醇浸泡24h，不断搅拌，再用去离子水洗至无白色混浊现象、无醇味止；去离子水浸泡，待用。然后，将已经预处理好的大孔树脂装柱。最后，称取10g绿原酸的粗产品溶于100mL乙醇中，上样；使用400mL去离子水洗脱，控制流速1-3mL/min，过柱两次，将水洗脱物除去溶剂，干燥，得到绿原酸提取物，使用HPLC分析，该提取物中绿原酸的含量为52.56％。

实施例2、

先将紫茎泽兰的嫩茎叶粉碎成粉末，然后称取100克紫茎泽兰叶粉末，装于圆底烧瓶中，加入1300g 40％(体积比)的乙醇水溶液，并用盐酸调pH值至4；在50℃，将混和液煎煮5小时。

用布氏漏斗减压抽滤，滤出滤液1移至茄型瓶中；将滤渣重新装回圆底烧瓶中，再次加入1300g 40％(体积比)的乙醇水溶液，并用盐酸调pH值至4；在50℃，将混和液煎煮5小时。

再次用布氏漏斗减压抽滤，滤出滤液2移至茄型瓶中；将滤渣重新装回圆底烧瓶中，再次加入1300g 40％(体积比)的乙醇水溶液，并用盐酸调pH值至4；在50℃，将混和液煎煮5小时。

减压抽滤，滤出滤液3，弃去滤渣；合并三次的滤液，蒸发除去溶剂，将所得浸膏转移至已称重的小锥形瓶中，用空气泵吹干，得到绿原酸的粗产品568.7g，计算出绿原酸得率为13.89％，使用HPLC分析，在浸膏中绿原酸的含量为31.75％。

用大孔树脂法纯化绿原酸的粗产品。首先，对树脂进行预处理：将D101型大孔树脂用去离子水溶胀后浮选，然后用1mol/L的氢氧化钠溶液浸泡4h，去离子水洗至中性，再用0.5mol/L的盐酸溶液浸泡12h，去离子水洗至中性；最后用70％乙醇浸泡24h，不断搅拌，再用去离子水洗至无白色混浊现象、无醇味止；去离子水浸泡，待用。然后，将已经预处理好的大孔树脂装柱。最后，称取10g绿原酸的粗产品溶于100mL乙醇中，上样；使用400mL去离子水洗脱，控制流速1-3mL/min，过柱两次，将水洗脱物除去溶剂，干燥，得到绿原酸提取物，使用HPLC分析，该提取物中绿原酸的含量为50.08％。

实施例3、

先将紫茎泽兰的叶子粉碎成粉末，然后称取100克紫茎泽兰叶粉末，装于圆底烧瓶中，加入1000g 60％(体积比)的乙醇水溶液，并用盐酸调pH值至2；在60℃，将混和液煎煮4小时。

用布氏漏斗减压抽滤，滤出滤液1移至茄型瓶中；将滤渣重新装回圆底烧瓶中，再次加入1000g 60％(体积比)的乙醇水溶液，并用盐酸调pH值至2；在60℃，将混和液煎煮4小时。

再次用布氏漏斗减压抽滤，滤出滤液2移至茄型瓶中；将滤渣重新装回圆底烧瓶中，再次加入1000g 60％(体积比)的乙醇水溶液，并用盐酸调pH值至2；在60℃，将混和液煎煮4小时。

减压抽滤，滤出滤液3，弃去滤渣；合并三次的滤液，蒸发除去溶剂，将所得浸膏转移至已称重的小锥形瓶中，用空气泵吹干，得到绿原酸的粗产品444.1g，计算出绿原酸得率为14.23％，使用HPLC分析，在浸膏中绿原酸的含量为32.04％。

用大孔树脂法纯化绿原酸的粗产品。首先，对树脂进行预处理：将NKA-II型大孔树脂用去离子水溶胀后浮选，然后用1mol/L的氢氧化钠溶液浸泡4h，去离子水洗至中性，再用0.5mol/L的盐酸溶液浸泡12h，去离子水洗至中性；最后用70％乙醇浸泡24h，不断搅拌，再用去离子水洗至无白色混浊现象、无醇味止；去离子水浸泡，待用。然后，将已经预处理好的大孔树脂装柱。最后，称取10g绿原酸的粗产品溶于100mL乙醇中，上样；使用400mL去离子水洗脱，控制流速1-3mL/min，过柱两次，将水洗脱物除去溶剂，干燥，得到绿原酸提取物，使用HPLC分析，该提取物中绿原酸的含量为51.07％。还可使用乙醇进一步洗脱，得到少量的绿原酸提取物。