小儿风热清合剂的质量控制方法

摘要

本发明公开了小儿风热清合剂的质量控制方法，该方法采用高效液相色谱法对小儿风热清合剂中的桅子苷进行含量测定，并对多种有效物质进行鉴别，该方法是依据国家药典会国家标准提高要求，体现了操作简单、节约检测成本、降低试剂毒性等优点。

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物组合物的质量控制方法，特别涉及小儿风热清合剂的质量控制方法。

背景技术

感冒发烧、急性单纯性扁桃体炎或化脓性扁桃体炎合并发烧(外感、乳娥化脓兼发烧)是儿科临床上的常见病、多发病。目前国内外公认的治疗药物为抗生素，国内多以青霉素肌注，而青霉素耐药性日益增长，部分患儿又因过敏不能接受该药物的治疗，很多患儿接受该药物也很痛苦。小儿风热清合剂由金银花、连翘、板蓝根、薄荷、柴胡、牛蒡子、荆芥穗、石膏、黄芩、栀子、桔梗等药味经加工制成的口服液体制剂，具有辛凉解表，清热解毒，止咳利咽之功效，用于小儿风热感冒，发热，咳嗽，咳痰，鼻塞流涕，咽喉红肿疼痛；为了严格控制小儿风热清合剂的质量，有必要研究一套小儿风热清合剂的质量控制方法。

发明内容

本发明的一个目的在于公开小儿风热清合剂的质量控制方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

小儿风热清合剂的质量控制方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种：

鉴别：

(1)取小儿风热清合剂10-50ml，加稀盐酸调pH值至1～2，置分液漏斗中，用溶剂乙醚、60～90℃石油醚或三氯甲烷提取1-3次，每次10-30ml，弃去溶剂乙醚、60～90℃石油醚或三氯甲烷液，再用乙酸乙酯提取2-4次，每次10-30ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇1-5ml溶解，作为供试品溶液；另取牛蒡苷对照品，加甲醇制成每1ml含1-5mg的溶剂，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取对照品溶液5μl、供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为10-50∶1-10∶1-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(2)取小儿风热清合剂10-50ml，加稀盐酸调pH值至1～2，置分液漏斗中，用溶剂乙醚、60～90℃石油醚或三氯甲烷提取1-3次，每次10-30ml，弃去溶剂乙醚、60～90℃石油醚或三氯甲烷液，再用乙酸乙酯提取2-4次，每次10-30ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇1-5ml溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每ml含0.5-5mg的溶液作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取对照品溶液5μl、供试品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为3-10∶1-5∶0.1-5∶0.1-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(3)取小儿风热清合剂10-50ml，注入已处理好的内径1.5cm、柱高25cm的D101型大孔吸附树脂柱内，先用100-500ml的蒸馏水以1-5ml/min的速度洗脱，弃去洗脱液，再用50-95％的乙醇洗脱，收集洗脱液于100ml量瓶至刻度，摇匀，滤过，取续滤液20-80ml置蒸发皿，蒸干，残渣加甲醇1-5ml溶解，作为供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5-5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-乙腈-氨水为1-10∶1-5∶0.1-1∶0.1-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取小儿风热清合剂10-50ml，用氨试液调pH值至10，用溶剂乙醚、60～90℃石油醚或三氯甲烷萃取1-3次，每次10-20ml，分取溶剂乙醚、60～90℃石油醚或三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇1-5ml使溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材1-5g加水50-100ml，煎煮10-60分钟，滤过，滤液浓缩至10-50ml，同法制备作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验；吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇为2-10∶2-10∶1-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点；

(5)取小儿风热清合剂10-50ml，加水5-20ml，摇匀，加稀盐酸调节pH值至1～2，离心10分钟，分取上清液加溶剂乙醚、60～90℃石油醚或三氯甲烷、乙酸乙酯10-30ml振摇提取2-3次，蒸干，残渣加溶剂乙醚、60～90℃石油醚或三氯甲烷、乙酸乙酯1-5ml使溶解，作为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.1-1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸为5-10∶0.1-5∶0.1-5为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(6)取小儿风热清合剂10-50ml，用溶剂乙醚、365nm石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇振摇提取1-3次，每次10-50ml，合并溶剂乙醚、60～90℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇液，用2％氢氧化钠溶液10-30ml洗涤，再用溶剂乙醚、60～90℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇洗涤2次，每次30ml，弃去洗液，溶剂乙醚、60～90℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇溶液蒸干，残渣加甲醇1-5ml使溶解，作为供试品溶液；另取柴胡对照药材1-5g，加水50-100ml，加热微沸1-5小时，滤液同法制成对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为10-50∶5-30∶0.5-10为展开剂，展开，取出晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液，60-100℃加热至斑点显色清晰；置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；

(7)取小儿风热清合剂10-50ml，置分液漏斗中，加溶剂乙醚、60～90℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇10-30ml振摇提取1-3次，分取溶剂乙醚、60～90℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1-1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为2-10∶1-5∶0.1-3∶0.1-5为展开剂，展开，取出晾干，喷以2％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

含量测定：

精密量取小儿风热清合剂10-50ml，注入已处理好的内径1.5cm、柱高25cm的D101型大孔吸附树脂柱内，先用100-500ml的蒸馏水以1-5ml/min的速度洗脱，弃去洗脱液，再用50-95％的乙醇洗脱，收集洗脱液于100ml量瓶至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的栀子苷对照品10mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，每1ml中含栀子苷40μg，即得对照品溶液；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为5-30∶95-70为流动相，检测波长238nm，理论板数按栀子苷峰计算应不低于2000；照高效液相色谱法测定，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得，每1ml小儿风热清合剂含栀子以栀子苷C₁₇H₂₄O₁₀计，不得少于0.16mg。

小儿风热清合剂的质量控制方法优选如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种：

鉴别：

(1)取小儿风热清合剂10ml，加稀盐酸调pH值至2，置分液漏斗中，用溶剂乙醚、60℃石油醚或三氯甲烷提取2次，每次10ml，弃去溶剂乙醚、60℃石油醚或三氯甲烷液，再用乙酸乙酯提取三次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取牛蒡苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶剂，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取对照品溶液5μl、供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为10∶10∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(2)取小儿风热清合剂50ml，加稀盐酸调pH值至1，置分液漏斗中，用溶剂乙醚、90℃石油醚或三氯甲烷提取2次，每次30ml，弃去溶剂乙醚、90℃石油醚或三氯甲烷液，再用乙酸乙酯提取三次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每ml含5mg的溶液作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取对照品溶液5μl、供试品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为10∶1∶5∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(3)取小儿风热清合剂10ml，注入已处理好的内径1.5cm、柱高25cm的D101型大孔吸附树脂柱内，先用100ml的蒸馏水以1ml/min的速度洗脱，弃去洗脱液，再用50％的乙醇洗脱，收集洗脱液于100ml量瓶至刻度，摇匀，滤过，取续滤液40ml置蒸发皿，蒸干，残渣加甲醇3ml溶解，作为供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含2.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-乙腈-氨水为5∶2∶0.5∶0.6为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取小儿风热清合剂20ml，用氨试液调pH值至10，用溶剂乙醚、70℃石油醚或三氯甲烷萃取2次，每次20ml，分取溶剂乙醚、70℃石油醚或三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材2g加水90ml，煎煮20分钟，滤过，滤液浓缩至20ml，同法制备作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验；吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇为3∶9∶3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点；

(5)取小儿风热清合剂40ml，加水20ml，摇匀，加稀盐酸调节pH值至1，离心10分钟，分取上清液加溶剂乙醚、80℃石油醚或三氯甲烷、乙酸乙酯30ml振摇提取3次，分取溶剂乙醚、80℃石油醚或三氯甲烷、乙酸乙酯液，蒸干，残渣加溶剂乙醚、80℃石油醚或三氯甲烷、乙酸乙酯4ml使溶解，作为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸为10∶0.5∶4为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(6)取小儿风热清合剂25ml，用溶剂乙醚、65℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇振摇提取2次，每次25ml，合并溶剂乙醚、65℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇液，用2％氢氧化钠溶液20ml洗涤，再用溶剂乙醚、65℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇洗涤2次，每次30ml，弃去洗液，溶剂乙醚、65℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇溶液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取柴胡对照药材5g，加水70ml，加热微沸2小时，滤液同法制成对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为50∶15∶5为展开剂，展开，取出晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液，60℃加热至斑点显色清晰；置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；

(7)取小儿风热清合剂50ml，置分液漏斗中，加溶剂乙醚、90℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇30ml振摇提取3次，分取溶剂乙醚、90℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为10∶1∶3∶0.1为展开剂，展开，取出晾干，喷以2％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

含量测定：

精密量取小儿风热清合剂10ml，注入已处理好的内径1.5cm、柱高25cm的D101型大孔吸附树脂柱内，先用100ml的蒸馏水以1ml/min的速度洗脱，弃去洗脱液，再用50％的乙醇洗脱，收集洗脱液于100ml量瓶至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的栀子苷对照品10mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，每1ml中含栀子苷40μg，即得对照品溶液；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为5∶95为流动相，检测波长238nm，理论板数按栀子苷峰计算应不低于2000；照高效液相色谱法测定，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得，每1ml小儿风热清合剂含栀子以栀子苷C₁₇H₂₄O₁₀计，不得少于0.16mg。

小儿风热清合剂的质量控制方法优选如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种：

鉴别：

(1)取小儿风热清合剂50ml，加稀盐酸调pH值至1，置分液漏斗中，用溶剂乙醚、90℃石油醚或三氯甲烷提取2次，每次30ml，弃去溶剂乙醚、90℃石油醚或三氯甲烷液，再用乙酸乙酯提取三次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，作为供试品溶液；另取牛蒡苷对照品，加甲醇制成每1ml含5mg的溶剂，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取对照品溶液5μl、供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为50∶1∶5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(2)取小儿风热清合剂10ml，加稀盐酸调pH值至2，置分液漏斗中，用溶剂乙醚、60℃石油醚或三氯甲烷提取2次，每次10ml，弃去溶剂乙醚、60℃石油醚或三氯甲烷液，再用乙酸乙酯提取三次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每ml含0.5mg的溶液作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取对照品溶液5μl、供试品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为3∶5∶0.1∶5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(3)取小儿风热清合剂50ml，注入已处理好的内径1.5cm、柱高25cm的D101型大孔吸附树脂柱内，先用500ml的蒸馏水以5ml/min的速度洗脱，弃去洗脱液，再用95％的乙醇洗脱，收集洗脱液于100ml量瓶至刻度，摇匀，滤过，取续滤液60ml置蒸发皿，蒸干，残渣加甲醇4ml溶解，作为供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含4mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-乙腈-氨水为10∶1∶1∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取小儿风热清合剂50ml，用氨试液调pH值至10，用溶剂乙醚、90℃石油醚或三氯甲烷萃取2次，每次20ml，分取溶剂乙醚、90℃石油醚或三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材5g加水60ml，煎煮60分钟，滤过，滤液浓缩至50ml，同法制备作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验；吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇为10∶2∶5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点；

(5)取小儿风热清合剂10ml，加水5ml，摇匀，加稀盐酸调节pH值至2，离心10分钟，分取上清液加溶剂乙醚、60℃石油醚或三氯甲烷、乙酸乙酯10ml振摇提取2次，分取溶剂乙醚、60℃石油醚或三氯甲烷、乙酸乙酯液，蒸干，残渣加溶剂乙醚、60℃石油醚或三氯甲烷、乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸为5∶5∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(6)取小儿风热清合剂50ml，用溶剂乙醚、90℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇振摇提取3次，每次50ml，合并溶剂乙醚、90℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇液，用2％氢氧化钠溶液30ml洗涤，再用溶剂乙醚、90℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇洗涤2次，每次30ml，弃去洗液，溶剂乙醚、90℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇溶液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取柴胡对照药材5g，加水100ml，加热微沸5小时，滤液同法制成对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为50∶5∶10为展开剂，展开，取出晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液，100℃加热至斑点显色清晰；置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；

(7)取小儿风热清合剂10ml，置分液漏斗中，加溶剂乙醚、60℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇10ml振摇提取1次，分取溶剂乙醚、60℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为2∶5∶0.1∶5为展开剂，展开，取出晾干，喷以2％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

含量测定：

精密量取小儿风热清合剂50ml，注入已处理好的内径1.5cm、柱高25cm的D101型大孔吸附树脂柱内，先用500ml的蒸馏水以5ml/min的速度洗脱，弃去洗脱液，再用95％的乙醇洗脱，收集洗脱液于100ml量瓶至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的栀子苷对照品10mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，每1ml中含栀子苷40μg，即得对照品溶液；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为30∶70为流动相，检测波长238nm，理论板数按栀子苷峰计算应不低于2000；照高效液相色谱法测定，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得，每1ml小儿风热清合剂含栀子以栀子苷C₁₇H₂₄O₁₀计，不得少于0.16mg。

小儿风热清合剂的质量控制方法优选如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种：

鉴别：

(1)取小儿风热清合剂25ml，加稀盐酸调pH值至1，置分液漏斗中，用溶剂乙醚、70℃石油醚或三氯甲烷提取2次，每次20ml，弃去溶剂乙醚、70℃石油醚或三氯甲烷液，再用乙酸乙酯提取三次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇3ml溶解，作为供试品溶液；另取牛蒡苷对照品，加甲醇制成每1ml含3mg的溶剂，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取对照品溶液5μl、供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为30∶5∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(2)取小儿风热清合剂20ml，加稀盐酸调pH值至2，置分液漏斗中，用溶剂乙醚、80℃石油醚或三氯甲烷提取2次，每次20ml，弃去溶剂乙醚、80℃石油醚或三氯甲烷液，再用乙酸乙酯提取三次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇3ml溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每ml含3mg的溶液作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取对照品溶液5μl、供试品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为4∶3∶4∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(3)取小儿风热清合剂30ml，注入已处理好的内径1.5cm、柱高25cm的D101型大孔吸附树脂柱内，先用300ml的蒸馏水以3ml/min的速度洗脱，弃去洗脱液，再用75％的乙醇洗脱，收集洗脱液于100ml量瓶至刻度，摇匀，滤过，取续滤液20ml置蒸发皿，蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-乙腈-氨水为1∶5∶0.1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取小儿风热清合剂30ml，用氨试液调pH值至10，用溶剂乙醚、80℃石油醚或三氯甲烷萃取2次，每次20ml，分取溶剂乙醚、80℃石油醚或三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材3g加水70ml，煎煮40分钟，滤过，滤液浓缩至30ml，同法制备作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验；吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇为50∶8∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点；

(5)取小儿风热清合剂20ml，加水10ml，摇匀，加稀盐酸调节pH值至1，离心10分钟，分取上清液加溶剂乙醚、70℃石油醚或三氯甲烷、乙酸乙酯20ml振摇提取3次，分取溶剂乙醚、70℃石油醚或三氯甲烷、乙酸乙酯液，蒸干，残渣加溶剂乙醚、70℃石油醚或三氯甲烷、乙酸乙酯3ml使溶解，作为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸为6∶4∶3为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(6)取小儿风热清合剂10ml，用溶剂乙醚、60℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇振摇提取1次，每次10ml，合并溶剂乙醚、60℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇液，用2％氢氧化钠溶液10ml洗涤，再用溶剂乙醚、60℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇洗涤2次，每次30ml，弃去洗液，溶剂乙醚、60℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇溶液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柴胡对照药材1g，加水50ml，加热微沸1小时，滤液同法制成对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为10∶30∶10为展开剂，展开，取出晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液，60℃加热至斑点显色清晰；置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；

(7)取小儿风热清合剂30ml，置分液漏斗中，加溶剂乙醚、75℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇20ml振摇提取2次，分取溶剂乙醚、75℃石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯或水饱和正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为6∶2∶2∶4为展开剂，展开，取出晾干，喷以2％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

含量测定：

精密量取小儿风热清合剂30ml，注入已处理好的内径1.5cm、柱高25cm的D101型大孔吸附树脂柱内，先用300ml的蒸馏水以3ml/min的速度洗脱，弃去洗脱液，再用75％的乙醇洗脱，收集洗脱液于100ml量瓶至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的栀子苷对照品10mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，每1ml中含栀子苷40μg，即得对照品溶液；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为20∶85为流动相，检测波长238nm，理论板数按栀子苷峰计算应不低于2000；照高效液相色谱法测定，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得，每1ml小儿风热清合剂含栀子以栀子苷C₁₇H₂₄O₁₀计，不得少于0.16mg。

现行检测方法是依据国家药典会国家标准提高要求，主要从操作简单、节约检测成本、降低试剂毒性着手进行修订、补充、完善质量标准检测方法，小儿风热清合剂的质量控制方法有如下优点：

(1)原检测方法用苯作为提取溶剂，毒性大，检测牛蒡子的斑点较多，不易判定。现方法改进了提取溶剂改用“乙醚、70℃石油醚或三氯甲烷”，检测牛蒡苷斑点，操作、判定简单，Rf值适中。

(2)原检验方法用乙醚洗涤，再用乙酸乙酯提取。现在改用鉴别一项供试品溶液点样。原检验方法在聚酰胺薄膜上点样，现改为硅胶G板点样。检测黄芩苷斑点清晰，操作简单，节约成本。

(3)检验方法都是含量项下溶液制备点样。原含量供试品溶液提取用正丁醇萃取6次，不但方法复杂而且试剂用量大，现改得含量方法既节省时间，又节省试剂和成本。

(4)原检验方法是直接取样品浓缩后点样，展开显色后，斑点多背景深。现在改为药液调pH值后用溶剂乙醚、80℃石油醚或三氯甲烷萃取，检测连翘斑点清晰，Rf值适中。

下面实验和实施例用于进一步说明但不限于本发明

实验例1含量测定

栀子苷为栀子的特征性有效成分，原标准为薄层扫描法，现修订为高效液相色谱法。

1、仪器与试药

仪器：日本岛津HPLC色谱仪LC-10ATvp泵，SPD-10ATvp紫外检测器，N2010浙江大学色谱数据工作站。色谱柱：大连依特利，规格250nm×4.6nm×10μm。

对照品：栀子苷为中国药品生物制品检定所提供的110749-200512供含量测定用药品，使用前置五氧化二磷减压干燥器中干燥12小时以上使用。

试剂：乙腈为色谱试剂，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。

2、色谱条件

(1)实验条件选择

色谱柱：HypersilC18，规格250nm×4.6nm×10μm；流动相：12∶88的乙腈-水；流速1.0ml/min；柱温为室温；检测波长238nm；灵敏度0.01AUFS。在选定条件下，栀子苷与样品中其他组分色谱峰可基线分离。栀子苷与其相邻色谱峰的分离度大于1.5，栀子苷峰理论塔板数为2000以上，托尾因子T为0.99。

最大吸收波长的选择：对照品溶液进行紫外光谱扫描最大吸收波长位于237.6nm处，因此液相检测波长定为238nm。(见图1)

(2)前处理条件的选择

①柱长的确定：在其他条件相同的条件下，分别用15cm、20cm、25cm、30cm的树脂柱试验，结果25cm的柱吸附杂质最为彻底，用时也较少，图谱峰最佳。

②不同浓度的洗脱比较：在其他条件相同的条件下，分别用60％、70％、80％乙醇洗脱，分别测其含量。结果见表1：

表1：不同浓度洗脱后测得含量数据表

  洗脱  60％  70％  80％  含量  0.28mg/ml  0.32mg/ml  0.31mg/ml

试验表明，故采用70％乙醇为样品洗脱溶剂。

③70％乙醇洗脱体积的确定：在其他条件相同的情况下，分别用100ml、150ml洗脱，分别测其含量，结果见表2：

表2：不同洗脱体积测得含量数据表

结果说明150ml洗脱含量比100ml洗脱含量已无增加，故用100ml 70％乙醇洗脱即可。

为弄清洗脱的精确体积，我们在同一树脂柱的前提下，将100ml洗脱体积分成前30ml，中30ml，后40ml三段分别收集洗脱液，注入色谱仪，测定面积，结果见表3：

表3：不同洗脱体积测得峰面积数据表

  体积  前30ml  中30ml  后40ml  峰面积  130935  312512.9  3027.6

结果表明中间30ml洗脱的栀子苷最多。

3、方法学验证

(1)准确度

精密量取已知栀子苷含量的同一批号1020样品5ml，分别精密加入0.1072mg/ml栀子苷对照品溶液1.0ml、1.5ml、1.7ml，按上述测定条件测定，并以下列计算公式，计算回收率，试验结果见表4

表4：样品回收率试验结果(n＝9)

试验表明：本法具有良好的回收率。

(2)精密度

取同一批号样品6分，精密量取，按上述条件制备供试品溶液，测的峰面积值并计算含量。RSD＜2％(n＝6)结果见表5

表5：样品重现性试验

仪器精密度

精密吸取对照品溶液，重复进样5次，栀子苷峰面积值的RSD＜2％(n＝5)结果见表6

表6：仪器精密度实验

试验表明，仪器精密度良好。

(3)线性

精密量取0.04288mg/ml栀子苷对照品溶液；分别精密吸取对照品溶液3μl，6μl，9μl，12μl，15μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以栀子苷微克数为横坐标，峰面积为纵坐标，得一直线，计算回归方程，Y＝-2.58536×10^-5x+1.36031×10^-9，r＝0.99928，n＝5。结果表明栀子苷在0.12864μg～0.6432μg范围内线性关系良好。(见图2)

(4)专属性

按处方中药味的比例，称取不含栀子的群药，按制剂工艺制成阴性对照，再按供试品溶液制备方法制备缺栀子的阴性对照溶液，吸取对照品溶液，供试品溶液，阴性对照溶液各20μl，分别注入色谱仪，依法测定，结果阴性对照溶液与栀子苷对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰。(见图3、4、5)

(5)耐用性

取样品按上述条件制备批号1020供试品溶液，注入液相色谱仪，测定峰面积，然后于0、4、8、16小时测定一次，X＝445496RSD＝1.45％结果见表7

表7：耐用性实验

结果表明供试品溶液在16小时基本稳定。

4、样品及原料栀子含量测定

取样品依法制备供试品溶液，吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪测定峰面积，计算样品栀子苷含量。见表8

表8：样品含量测定结果

  批号  栀子苷含量(mg/ml)  050605  0.35  050606  0.28  050607  0.30  050608  0.29  050609  0.28  050816  0.18  050817  0.17  050819  0.18  050926  0.30  050927  0.35

原料栀子含量测定结果见表9

表9：原料栀子含量测定结果

  原料编号  1^#  2^#  3^#  4^#  栀子苷含量(％)  3.1  1.82  2.5  3.6

根椐4个编号的栀子原料含量得知，因原料来源不同，原料栀子含量差异较大，从而导致成品含量波动较大，根椐10个批次成品含量数据，将含量限度确定为：每1毫升小儿风热清合剂含栀子以栀子苷C₁₇H₂₄O₁₀计，不得少于0.16mg。

附图说明：

图1：紫外光谱扫描图；

图2：栀子苷线性关系图；

图3：对照品溶液紫外光谱扫描图

图4：供试品溶液紫外光谱扫描图；

图5：阴性对照溶液紫外光谱扫描图

下述实施例均能实现上述实验例的效果。

具体实施方式

实施例1：小儿风热清合剂的质量控制方法

鉴别：

(1)取小儿风热清合剂10ml，加稀盐酸调pH值至2，置分液漏斗中，用溶剂乙醚提取2次，每次10ml，弃去溶剂乙醚液，再用乙酸乙酯提取三次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取牛蒡苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶剂，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取对照品溶液5μl、供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为10∶10∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(2)取小儿风热清合剂50ml，加稀盐酸调pH值至1，置分液漏斗中，用溶剂90℃石油醚提取2次，每次30ml，弃去溶剂90℃石油醚液，再用乙酸乙酯提取三次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每ml含5mg的溶液作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取对照品溶液5μl、供试品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为10∶1∶5∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(3)取小儿风热清合剂10ml，注入已处理好的内径1.5cm、柱高25cm的D101型大孔吸附树脂柱内，先用100ml的蒸馏水以1ml/min的速度洗脱，弃去洗脱液，再用50％的乙醇洗脱，收集洗脱液于100ml量瓶至刻度，摇匀，滤过，取续滤液40ml置蒸发皿，蒸干，残渣加甲醇3ml溶解，作为供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含2.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-乙腈-氨水为5∶2∶0.5∶0.6为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取小儿风热清合剂20ml，用氨试液调pH值至10，用溶剂三氯甲烷萃取2次，每次20ml，分取溶剂三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材2g加水90ml，煎煮20分钟，滤过，滤液浓缩至20ml，同法制备作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验；吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇为3∶9∶3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点；

(5)取小儿风热清合剂40ml，加水20ml，摇匀，加稀盐酸调节pH值至1，离心10分钟，分取上清液加溶剂乙醚30ml振摇提取3次，分取溶剂乙醚液，蒸干，残渣加溶剂乙醚4ml使溶解，作为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸为10∶0.5∶4为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(6)取小儿风热清合剂25ml，用溶剂水饱和正丁醇振摇提取2次，每次25ml，合并溶剂水饱和正丁醇液，用2％氢氧化钠溶液20ml洗涤，再用溶剂水饱和正丁醇洗涤2次，每次30ml，弃去洗液，溶剂水饱和正丁醇溶液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取柴胡对照药材5g，加水70ml，加热微沸2小时，滤液同法制成对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为50∶15∶5为展开剂，展开，取出晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液，60℃加热至斑点显色清晰；置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；

(7)取小儿风热清合剂50ml，置分液漏斗中，加溶剂乙酸乙酯30ml振摇提取3次，分取溶剂乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为10∶1∶3∶0.1为展开剂，展开，取出晾干，喷以2％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

含量测定：

精密量取小儿风热清合剂10ml，注入已处理好的内径1.5cm、柱高25cm的D101型大孔吸附树脂柱内，先用100ml的蒸馏水以1ml/min的速度洗脱，弃去洗脱液，再用50％的乙醇洗脱，收集洗脱液于100ml量瓶至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的栀子苷对照品10mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，每1ml中含栀子苷40μg，即得对照品溶液；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为5∶95为流动相，检测波长238nm，理论板数按栀子苷峰计算应不低于2000；照高效液相色谱法测定，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得，每1ml小儿风热清合剂含栀子以栀子苷C₁₇H₂₄O₁₀计，不得少于0.16mg。

实施例2：小儿风热清合剂的质量控制方法

含量测定：

精密量取小儿风热清合剂50ml，注入已处理好的内径1.5cm、柱高25cm的D101型大孔吸附树脂柱内，先用500ml的蒸馏水以5ml/min的速度洗脱，弃去洗脱液，再用95％的乙醇洗脱，收集洗脱液于100ml量瓶至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的栀子苷对照品10mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，每1ml中含栀子苷40μg，即得对照品溶液；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为30∶70为流动相，检测波长238nm，理论板数按栀子苷峰计算应不低于2000；照高效液相色谱法测定，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得，每1ml小儿风热清合剂含栀子以栀子苷C₁₇H₂₄O₁₀计，不得少于0.16mg。

实施例3：小儿风热清合剂的质量控制方法

鉴别：

(1)取小儿风热清合剂50ml，加稀盐酸调pH值至1，置分液漏斗中，用溶剂90℃石油醚提取2次，每次30ml，弃去溶剂90℃石油醚液，再用乙酸乙酯提取三次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，作为供试品溶液；另取牛蒡苷对照品，加甲醇制成每1ml含5mg的溶剂，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取对照品溶液5μl、供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为50∶1∶5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(2)取小儿风热清合剂10ml，加稀盐酸调pH值至2，置分液漏斗中，用溶剂三氯甲烷提取2次，每次10ml，弃去溶剂三氯甲烷液，再用乙酸乙酯提取三次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每ml含0.5mg的溶液作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取对照品溶液5μl、供试品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为3∶5∶0.1∶5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(3)取小儿风热清合剂50ml，注入已处理好的内径1.5cm、柱高25cm的D101型大孔吸附树脂柱内，先用500ml的蒸馏水以5ml/min的速度洗脱，弃去洗脱液，再用95％的乙醇洗脱，收集洗脱液于100ml量瓶至刻度，摇匀，滤过，取续滤液60ml置蒸发皿，蒸干，残渣加甲醇4ml溶解，作为供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含4mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-乙腈-氨水为10∶1∶1∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取小儿风热清合剂50ml，用氨试液调pH值至10，用溶剂90℃石油醚萃取2次，每次20ml，分取溶剂90℃石油醚液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材5g加水60ml，煎煮60分钟，滤过，滤液浓缩至50ml，同法制备作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验；吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇为10∶2∶5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点；

(5)取小儿风热清合剂10ml，加水5ml，摇匀，加稀盐酸调节pH值至2，离心10分钟，分取上清液加溶剂乙酸乙酯10ml振摇提取2次，分取溶剂乙酸乙酯液，蒸干，残渣加溶剂乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸为5∶5∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(6)取小儿风热清合剂50ml，用溶剂水饱和正丁醇振摇提取3次，每次50ml，合并溶剂水饱和正丁醇液，用2％氢氧化钠溶液30ml洗涤，再用溶剂水饱和正丁醇洗涤2次，每次30ml，弃去洗液，溶剂水饱和正丁醇溶液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取柴胡对照药材5g，加水100ml，加热微沸5小时，滤液同法制成对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为50∶5∶10为展开剂，展开，取出晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液，100℃加热至斑点显色清晰；置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；

(7)取小儿风热清合剂10ml，置分液漏斗中，加溶剂三氯甲烷10ml振摇提取1次，分取溶剂三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为2∶5∶0.1∶5为展开剂，展开，取出晾干，喷以2％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例4：小儿风热清合剂的质量控制方法

鉴别：

(1)取小儿风热清合剂20ml，加水10ml，摇匀，加稀盐酸调节pH值至1，离心10分钟，分取上清液加溶剂乙酸乙酯20ml振摇提取3次，分取溶剂乙酸乙酯液，蒸干，残渣加溶剂乙酸乙酯3ml使溶解，作为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸为6∶4∶3为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(2)取小儿风热清合剂10ml，用溶剂乙醚振摇提取1次，每次10ml，合并溶剂乙醚液，用2％氢氧化钠溶液10ml洗涤，再用溶剂乙醚洗涤2次，每次30ml，弃去洗液，溶剂乙醚溶液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柴胡对照药材1g，加水50ml，加热微沸1小时，滤液同法制成对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为10∶30∶10为展开剂，展开，取出晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液，60℃加热至斑点显色清晰；置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；

(3)取小儿风热清合剂30ml，置分液漏斗中，加溶剂75℃石油醚20ml振摇提取2次，分取溶剂75℃石油醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为6∶2∶2∶4为展开剂，展开，取出晾干，喷以2％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

含量测定：

精密量取小儿风热清合剂30ml，注入已处理好的内径1.5cm、柱高25cm的D101型大孔吸附树脂柱内，先用300ml的蒸馏水以3ml/min的速度洗脱，弃去洗脱液，再用75％的乙醇洗脱，收集洗脱液于100ml量瓶至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的栀子苷对照品10mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，每1ml中含栀子苷40μg，即得对照品溶液；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为20∶85为流动相，检测波长238nm，理论板数按栀子苷峰计算应不低于2000；照高效液相色谱法测定，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得，每1ml小儿风热清合剂含栀子以栀子苷C₁₇H₂₄O₁₀计，不得少于0.16mg。

实施例5：小儿风热清合剂的质量控制方法

鉴别：

取小儿风热清合剂50ml，置分液漏斗中，加溶剂三氯甲烷30ml振摇提取3次，分取溶剂三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为10∶1∶3∶0.1为展开剂，展开，取出晾干，喷以2％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

含量测定：

精密量取小儿风热清合剂10ml，注入已处理好的内径1.5cm、柱高25cm的D101型大孔吸附树脂柱内，先用100ml的蒸馏水以1ml/min的速度洗脱，弃去洗脱液，再用50％的乙醇洗脱，收集洗脱液于100ml量瓶至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的栀子苷对照品10mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，每1ml中含栀子苷40μg，即得对照品溶液；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为5∶95为流动相，检测波长238nm，理论板数按栀子苷峰计算应不低于2000；照高效液相色谱法测定，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得，每1ml小儿风热清合剂含栀子以栀子苷C₁₇H₂₄O₁₀计，不得少于0.16mg。