一种培养白腐真菌分泌漆酶的培养基

摘要

一种培养白腐真菌分泌漆酶的培养基，它涉及一种培养真菌分泌功能酶的培养基。本发明解决了现有培养基培养出的白腐真菌的漆酶产量低，不能满足对漆酶大量生产的要求的问题。本发明的培养白腐真菌分泌漆酶的培养基为每1000mL的液体培养基含有35～45mL的玉米粉浸出液、0.43～0.45g的酒石酸铵、0.19～0.21g的KH

说明书

技术领域

本发明涉及一种培养真菌分泌功能酶的培养基。

背景技术

随着工业的发展，产生了大量的难降解有机污染物，而利用现代生物技术可以降解这些污染物。白腐真菌拥有强大的酶系，在胞外分泌产生，降解污染物主要靠酶系统来完成，其中漆酶是白腐真菌众多酶中的一种。漆酶(Laccases)是一种结合多个铜离子的蛋白质，属于铜蓝氧化酶，存在菇、菌及植物中。漆酶可存活于空气中，发生反应后唯一的产物就是水，因此漆酶是一种环保型酵素。

漆酶在木质素及其前体类似物降解中的重要作用，可降解250多种污染物，被广泛应用在纸浆生物漂白、废水处理、环境污染物质去毒与降解等方面。在最适宜的条件下用现有的培养基培养白腐真菌，培养的白腐真菌漆酶的产量低(酶活仅为0.5411U/mL)，不能满足对漆酶大量生产的要求。

发明内容

本发明为了解决现有的培养基培养出的白腐真菌的漆酶产量低，不能满足对漆酶大量生产的要求的问题，而提供一种培养白腐真菌分泌漆酶的培养基。

本发明的培养白腐真菌分泌漆酶的培养基为每1000mL的液体培养基含有35～45mL的玉米粉浸出液、0.43～0.45g的酒石酸铵、0.19～0.21g的KH₂PO₄、0.05～0.056g的MgSO₄·7H₂O、10.0～10.2mg的CaCl₂、0.8～1.2mL的无机溶液、0.4～0.6mL的维生素溶液和0.2mol pH为7的HAc-NaAc的缓冲溶液。

本发明的使培养白腐真菌分泌漆酶的培养基中的无机溶液中MnSO₄的浓度为0.5g/L，NaCl的浓度为1g/L，FeSO₄·7H₂O的浓度为100mg/L，CoSO₄的浓度为100mg/L，ZnSO₄的浓度为100mg/L，CuSO₄·5H₂O的浓度为10mg/L，AlK(SO₄)₂的浓度为10mg/L，H₃BO₃的浓度为10mg/L，NaMoO₄的浓度为10mg/L。

本发明的培养白腐真菌分泌漆酶的培养基中的维生素溶液中生物素的浓度为2mg/L，叶酸的浓度为2mg/L，维生素B₁的浓度为5mg/L，维生素B₂的浓度为5mg/L，维生素B₆的浓度为10mg/L，烟酸的浓度为5mg/L。

在最适宜白腐真菌分泌漆酶的条件下，本发明的培养基培养的白腐真菌漆酶酶活为2.7979U/mL，是现有培养基的5倍。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式的培养白腐真菌分泌漆酶的培养基为每1000mL的液体培养基含有35～45mL的玉米粉浸出液、0.43～0.45g的酒石酸铵、0.19～0.21g的KH₂PO₄、0.05～0.056g的MgSO₄·7H₂O、10.0～10.2mg的CaCl₂、0.8～1.2mL的无机溶液、0.4～0.6mL的维生素溶液和0.2mol pH为7的HAc-NaAc的缓冲溶液。

本实施方式的玉米粉浸出液的制备方法为：将10g的玉米粉用60～100mL的水煮沸30分钟后，再滤出浸出液，控制其体积为35～45mL(浸出液体积大于45mL进行蒸发浓缩，浸出液体积小于35mL加入蒸馏水补足)。

具体实施方式二：本实施方式的培养白腐真菌分泌漆酶的培养基为每1000mL的液体培养基由40mL的玉米粉浸出液、0.44g的酒石酸铵、0.2g的KH₂PO₄、0.053g的MgSO₄·7H₂O、10.082mg的CaCl₂、1mL的无机溶液、0.5mL的维生素溶液、0.2mol pH为7的HAc-NaAc的缓冲溶液和余量的水组成。

本实施方式的玉米粉浸出液的制备方法为：将10g的玉米粉用80～90mL的水煮沸30分钟后，再滤出浸出液，控制其体积为40mL。

将本实施方式的培养基与现有液体培养基(每1000mL的现有液体培养基含有20g的葡萄糖、3g的KH₂PO₄、1.5g的MgSO₄·7H₂O和200mL的土豆浸出液)都用于培养偏肿拟栓菌(Pseudotrametes gibbosa，白腐真菌的一种)，并进行对比实验，实验按如下步骤进行：在无菌操作台上用无菌打孔器将长满偏肿拟栓菌的固体琼脂培养基打成10mm的菌片，分别接种到含50mL本实施方式的培养基与现有液体培养基的150mL三角瓶中，接种量为三片，在培养箱25℃、130r/min的条件下培养，先每两天测定一次漆酶酶活，培养到第6天后，每天测定漆酶酶活，直到测定到第12天，然后测出两种液体培养基的最高漆酶活性，结果表明：本实施方式的培养基培养的偏肿拟栓菌分泌的漆酶酶活为2.7979U/mL，现有液体培养基培养的偏肿拟栓菌分泌的漆酶酶活为0.5411U/mL，本实施方式的培养基培养的偏肿拟栓菌分泌的漆酶酶活是现有液体培养基培养的偏肿拟栓菌分泌的漆酶酶活的5倍多。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二的不同点为：无机溶液中MnSO₄的浓度为0.5g/L，NaCl的浓度为1g/L，FeSO₄·7H₂O的浓度为100mg/L，CoSO₄的浓度为100mg/L，ZnSO₄的浓度为100mg/L，CuSO₄·5H₂O的浓度为10mg/L，AlK(SO₄)₂的浓度为10mg/L，H₃BO₃的浓度为10mg/L，NaMoO₄的浓度为10mg/L。其它与具体实施方式一或二相同。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一或二的不同点为：维生素溶液中生物素的浓度为2mg/L，叶酸的浓度为2mg/L，维生素B₁的浓度为5mg/L，维生素B₂的浓度为5mg/L，维生素B₆的浓度为10mg/L，烟酸的浓度为5mg/L。其它与具体实施方式一或二相同。