抗HIV病毒、提高人体免疫力的保健普洱茶

摘要

本发明提供一种抗艾滋病病毒HIV、提高人体免疫功能的保健普洱茶，由下列质量比的原料组成：普洱茶30～50％，石斛10～20％，人参10～20％，茯苓5～10％，天麻10～20％，灵芝8～18％。它是一种后发酵茶，在发酵过程中除添加生物酶营养液外，还添加灵芝、天麻类真菌物质，以及能提神补气的药物成分，除具有减缓免疫细胞的损伤，促进受损免疫细胞的恢复，调整肠道吸收环境，改善人体免疫系统，胃肠道吸收等功效外，更重要的是它对艾滋病病毒HIV具有很强的抑制作用，根据临床观察，本发明能减少患者服用抗艾滋病病毒药物的毒副反应发生率，特别是消化道症状和肝毒性，提高患者服药的依从性，并能明显增加人体CD4免疫细胞数量，且无毒副作用，从而提高抗病毒治疗的疗效。

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗艾滋病病毒(HIV)的保健普洱茶，及其在制备防治艾滋病药物中的应用。

背景技术

艾滋病因其传播速度快、范围广，以及到目前为止，尚无有效的药物对其进行控制与预防，因而成为当今社会影响最大的病毒性传染病，是危及人类身体健康的重大疾病之一。近年来世界各国都注重对艾滋病防治药物的研究，并加大了研究投入，但仍然未取得突破性进展。虽然有的采用高效抗逆转录病毒疗法，以改善患者的病症，增加CD₄细胞数量，减少病毒，但因其存在治疗费用昂贵，毒副作用大，不能阻断HIV的早期感染过程，HIV变异快等诸多问题，难于让患者承受，同时也难于获得有效的预防疫苗和治疗药物。另外现有的防治艾滋病的中草药，也存在人体差异大，疗效不显著，防治效果不一等诸多问题。因此，防止HIV变异，治疗AIDS(获得性免疫缺陷综合症)病变的高效低毒药物，仍然是世界性研究抗HIV药物的重大课题。

普洱茶是我国茶饮料家族中的重要一员，其独特的发酵加工工艺，赋予普洱茶醇厚、香浓、汤色艳丽的特色，让普洱茶在富含茶叶固有的丰富营养成分如儿茶素、单宁、芳香油、维生素C、B、D以及微量元素外，还含有多种防治疾病，有利于增强人体免疫力，提高人体健康水平的有益物质。但迄今为此，尚未见普洱茶在制备防治艾滋病药物及保健品中应用的报导，也未见具有防治艾滋病病毒HIV的保健普洱茶产品的报导。

发明内容

本发明的目的就是提供一种抗艾滋病病毒HIV、提高人体免疫功能的保健普洱茶。

本发明的目的是这样实现的：一种抗艾滋病病毒HIV、提高人体免疫功能的保健普洱茶，其特征在于由下列质量比的原料组成：

普洱茶  30～50％

石斛    10～20％

人参    10～20％

茯苓    5～10％

天麻    10～20％

灵芝    8～18％。

所述保健普洱茶经过下列方法制得：

A、先将石斛、人参、茯苓、天麻、灵芝原料分别经过下列方法提取：将原料粉碎成粉末状，用水浸泡3～5小时，于80℃温度下加热2～4小时，过滤，浓缩滤液，得浓度为30～50％的提取液；

B、将普洱茶与生物酶营养液按1∶0.1～0.3的质量比进行混合后，再与A步骤所得各提取物的全量进行混合，其中，生物酶营养液由下列质量百分比的组分组成：

水解蛋白酶    0.1～0.3％

葡萄糖        10～35％

鲜果汁        15～30％

水            余量；

C、将B步骤所得混合物装入箱内，在混合物堆内温度为40-65℃条件下，发酵20-25天，即得保健普洱茶；

D、将步骤C所得发酵保健普洱茶制成保健品类的散茶、碎茶、饼茶、沱茶、糖块茶、袋泡茶，即得抗艾滋病病毒HIV、提高人体免疫功能的保健普洱茶产品。

所述C步骤的装箱发酵采用高度为0.8-1米的矩形或圆形或多边形箱体，并在箱口封盖的情况下进行，以提高发酵效果，满足发酵卫生要求。

所述B步骤的水解蛋白酶为菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种；鲜果汁为梨汁、苹果汁、桃子汁、西瓜汁、菠萝汁、芒果汁、葡萄汁、西蕃莲汁、哈密瓜汁、木瓜汁、橙汁、石榴汁中的一种或几种。

所述B步骤的生物酶营养液的pH值为4.5～6.5。

所述发酵过程中的湿度控制以物料含水量为10～30％为限，含水量的多与少，又决定于晒青毛茶及其它原料自身的含水量以及发酵过程中物料的水分含量。

所述普洱茶为云南大叶种茶的晒青毛茶(又名：普洱生茶)。

所述保健普洱茶还可采用本申请人于2006年1月11日申请的专利号为200610010625.1，名称为“一种用生物酶发酵普洱茶的方法”的中国专利之方法及分层台架进行发酵而得，即：

A、将石斛、人参、茯苓、天麻、灵芝原料粉碎成粉末状，与普洱茶充分混合后，得混合物；

B、将A步骤的混合物、水和生物酶营养液按下列质量比进行混合；

1∶0.4～0.6∶0.1～0.3

其中，生物酶营养液由下列质量百分比的组分组成：

水解蛋白酶    0.1～0.3％

葡萄糖        10～35％

鲜果汁        15～30％

水            余量；

C、将混合后的上述茶叶混合物堆放到分层的台架上，控制每层茶叶高度为40-70cm；

D、在茶堆温度为40-65℃条件下，发酵20-25天，即得保健普洱茶；

E、用现有的常规加工方法制成保健品类的散茶、碎茶、饼茶、沱茶、糖块茶、袋泡茶，即得抗艾滋病病毒HIV、提高人体免疫功能的保健普洱茶产品。

其中的分层台架由立体框架和间隔设置于立体框架上的水平台板构成，水平台板设为固定台板，或者抽拉式活动台板；立体框架设置为矩形框架或者三角形框架或者圆柱形框架或者多边形框架，框架上间隔设置水平支撑件，支撑件上放置固定或者活动台板；框架上的两两水平支撑件或者水平台板的间距为70-85cm。

上述所得保健普洱茶可与其他防治艾滋病的药物组合制成复方保健品类的散茶、碎茶、饼茶、沱茶、糖块茶、袋泡茶。

所述保健普洱茶可通过现有技术的常规方法提取后，再采用现有技术的常规方法将所得提取物制备成药剂学上允许的口服制剂如胶囊剂、片剂、冲剂、口服液等。

所述保健普洱茶提取物可通过现有技术的常规方法制备成药剂学上允许的注射制剂如注射液、注射用粉针剂、注射用乳液等。

所述保健普洱茶提取物可与其他防治艾滋病的药物组合制成药剂学上允许的复方口服制剂或者复方注射制剂。

所述药物为中草药或者西药。

采用的使用量成人可以是：

直接用保健普洱茶制成的保健类产品为5～10克/次，每日1～3次。

用保健普洱茶提取物制成的保健类产品为0.15～0.2克/次，每日1～3次。

本发明提供的保健普洱茶中的中药成分中，天麻其性甘平润，具有息风止痉，通络止痛的作用；灵芝其性温，味苦涩，能滋补强体，扶正固本、促进新陈代谢及延缓衰老，强化人体免疫系统，提高人体对疾病的抵抗能力；石斛其味甘、淡，性微寒，能提高人体内的SOP(超氯歧化酶)，降低CPO(过氯化脂质)；人参其性味甘微苦、温，具有固脱生津、安神养血的作用；茯苓其性味甘淡、平，具有渗湿利水，益脾和胃宁心安神的功效。

本发明提供的保健普洱茶是一种后发酵茶，在发酵过程中除添加生物酶营养液外，还添加灵芝、天麻类真菌物质，以及能提神补气的药物成分，使之起到意想不到的效果，该保健普洱茶除具有普洱茶自身的功效外，更重要的是它对艾滋病病毒HIV具有很强的抑制作用，并能明显增加人体CD4免疫细胞数量，且无毒副作用。

具体实施方式

实施例1

按下列质量比取料：

普洱生茶    300公斤

石斛        200公斤

人参        100公斤

茯苓        100公斤

天麻        120公斤

灵芝        180公斤

经过本申请人的在先发明专利方法，即：

A、将石斛、人参、茯苓、天麻、灵芝原料粉碎成粉末状，与普洱茶充分混合后，得混合物；

B、将A步骤的1吨混合物与0.4吨水和0.1吨pH值为4.5的生物酶营养液进行混合，其中生物酶营养液由下列组分在常温下均匀混合而成的：

菠萝蛋白酶    0.1公斤

葡萄糖        10公斤

苹果汁        15公斤

水            74.9公斤

C、将B步骤所得混合物以每层40cm的高度堆放到台架上的台板上；

D、将台架置于发酵室内，控制台架台板上茶堆温度40℃，发酵25天，即得保健普洱茶；

E、用现有的常规加工方法将D步骤所得保健普洱茶制成保健品类的饼茶，即得抗艾滋病病毒HIV、提高人体免疫功能的保健普洱茶产品。

实施例2

按下列质量比取料：

普洱生茶    500公斤

石斛        100公斤

人参        170公斤

茯苓        50公斤

天麻        100公斤

灵芝        80公斤

经过本申请人的在先发明专利方法，即：

A、将石斛、人参、茯苓、天麻、灵芝原料粉碎成粉末状，与普洱茶充分混合后，得混合物；

B、将A步骤的1吨混合物与0.6吨水和0.3吨pH值为6.5的生物酶营养液进行混合，其中生物酶营养液由下列组分在常温下均匀混合而成的：

木瓜蛋白酶    0.3公斤

葡萄糖        30公斤

苹果汁        30公斤

水            39.7公斤

C、将B步骤所得混合物以每层70cm的高度堆放到台架上的台板上；

D、将台架置于发酵室内，控制台架台板上茶堆温度60℃，发酵22天，即得保健普洱茶；

E、用现有的常规加工方法将D步骤所得保健普洱茶制成保健品类的袋装茶，即得抗艾滋病病毒HIV、提高人体免疫功能的保健普洱茶产品。

实施例3

按下列质量比取料：

普洱茶    400公斤

石斛      140公斤

人参      150公斤

茯苓      70公斤

天麻      150公斤

灵芝      90公斤

经过下列方法：

A、先将石斛、人参、茯苓、天麻、灵芝原料分别经过下列方法提取：将原料粉碎成粉末状，用水浸泡3小时，于80℃温度下加热4小时，过滤，浓缩滤液，得浓度为30％的提取液；

B、将400公斤普洱茶与80公斤pH值为5.5的生物酶营养液进行混合后，再与A步骤所得各提取物的全量进行混合，其中，生物酶营养液由下列质量百分比的组分组成：

木瓜蛋白酶    0.2公斤

葡萄糖        20公斤

鲜果汁        25公斤

水            54.8公斤

C、将B步骤所得混合物装入高度为0.8米的矩形箱体内，并在箱口封盖的情况下，控制混合物堆内温度为40℃条件下，发酵25天，即得保健普洱茶；

D、将C步骤所得保健普洱茶用现有技术的方法压制成沱茶，或者用下列现有技术的方法提取：将保健普洱茶粉碎成粉末状，用水浸泡3小时，于80℃温度下加热4小时，过滤，浓缩滤液，得浓度为80％的提取液，配入适量糖液后，制成口服液。

实施例4

按下列质量比取料：

普洱茶      320公斤

石斛        110公斤

人参        200公斤

茯苓        60公斤

天麻        200公斤

灵芝        110公斤

经过下列方法：

A、先将石斛、人参、茯苓、天麻、灵芝原料分别经过下列方法提取：将原料粉碎成粉末状，用水浸泡5小时，于80℃温度下加热2小时，过滤，浓缩滤液，得浓度为50％的提取液；

B、将320公斤普洱茶与96公斤pH值为6的生物酶营养液进行混合后，再与A步骤所得各提取物的全量进行混合，其中，生物酶营养液由下列质量百分比的组分组成：

菠萝蛋白酶        0.3公斤

葡萄糖    15公斤

鲜果汁    30公斤

水        54.7公斤

C、将B步骤所得混合物装入高度为1米的圆形箱体内，并在箱口封盖的情况下，控制混合物堆内温度为65℃条件下，发酵20天，即得保健普洱茶；

D、将C步骤所得保健普洱茶用下列现有技术的方法提取：将保健普洱茶粉碎成粉末状，用水浸泡4小时，于80℃温度下加热3小时，过滤，浓缩滤液，将所得滤饼进行干燥后，装入囊材中，得胶囊。

为表明本发明的保健普洱茶具有抗艾滋病病毒HIV的功效，下面将通过检测的试验数据加以验证：

I、材料和方法

一、测定药物

检测试验用的样品采用实施例3所得浓度为80％的提取液。取该提取液作为待测样品，并将其溶解于RPMI-1640完全培养基中，0.22μm滤膜过滤除菌，4℃保存，贮存浓度为5.0mg/ml。

二、试剂和溶液

(1)试剂

HEPES(N-2(2-Hydroxyothyl)piperazine-N’-(2-ethanesufonic acid)、MTT(3，(4，5-dimethylthiazol-2-y1)-2，5-diphenyl tetrazolium bromide)、DMF(N，N’-Dimethyl formamine)、青霉素(Penicillin)、硫酸链霉素(Streptomycin sulfate)、谷氨酰胺(Glutamine)均购自Sigma公司；2-巯基乙醇(2-ME，2-Mercaptoethan01)为Bio-Rad公司产品。RPMI-1640和新生小牛血清为Gibeo公司产品。

(2)培养基

RPMI-1640完全培养基，含有10％新生小牛血清，2mM L-谷氨酰胺，10mM HEPES，50μM2-巯基乙醇，100,000IU青霉素，100μg/ml链霉素。

三、细胞和病毒

人T淋巴细胞系C8166、MT-4以及HIV-1实验株HIV-1_IIIB均由英国MedicalResearchCouncil.AIDS Reagent Project惠赠。所有细胞和病毒均以含10％小牛血清的RPMI-1640完全培养基进行培养。按常规方法制备HIV-1_IIIB，滴定并计算出病毒的TCID₅₀。病毒贮存液分装后，置-70℃保存。细胞和病毒按常规方法冻存和复苏。

四、HIV-1感染性滴定

HIV-1_IIIB按Johnson&Byington(1990)所述方法改良进行滴定，简述如下：将HIV-1贮存液在96孔板上作4倍稀释，10个梯度，每梯度6个重复孔，同时设置对照孔6孔。每孔：加入C8166细胞50μl，每孔终体积为200μl。37℃，5％CO₂培养。第3天补加新鲜RPMI-1640完全培养基1001μl，第7天在倒置显微镜下观察每孔中HIV-1诱导的细胞病变效应(Cytopathic Effect，CPE)，以每孔是否有合胞体(Syncytium)的形成确定：按Reed&Muench方法计算病毒的TCID₅₀(50％Tissue Culture Infection Dose)。

五、对C8166细胞的毒性实验

4×10⁵/ml C8166细胞悬液100μl与不同的待测药物溶液混合，设3个重复孔。同时设置不含药物的对照孔，37℃，5％CO₂培养3天，采用MTT比色法检测细胞毒性。ELx800酶标仪测定OD值，测定波长为595nm，参考波长为630 nm。计算得到CC₅₀值(50％Cytotoxic Concentration)，即对50％的正常T淋巴细胞系C8166产生毒性时的药物浓度。

六、对HIV-1_IIIB致细胞病变(CPE)的抑制实验

将8×10⁵/ml C8166细胞50μl/孔接种到含有100μl/孔梯度倍比稀释药物的96孔细胞培养板上，然后加入50μl的HIV-1_IIIB稀释上清，1300 TCID₅₀/孔。设3个重复孔。同时设置不含药物的正常细胞对照孔。AZT为阳性药物对照。37℃，5％CO₂培养3天，倒置显微镜下(100×)计数合胞体的形成。EC₅₀(50％EffectiveConcentration)为抑制合胞体形成50％时的药物浓度。

七、对HIV-1_IIIB感染MT-4细胞死亡的保护实验

在96孔细胞培养板上，对每种药物进行5倍倍比稀释，每个稀释度设4孔，共6个稀释度。每孔100μl。同时设置不含药物的未感染或感染HIV-1_IIIB的细胞对照组。AZT作为阳性对照药物。每个稀释度中的2孔分别滴加MT-4细胞悬液和HIV-1_IIIB上清各50μl。另2孔滴加MT-4细胞悬液100μl。每孔终体积为200μl。置37℃，5％CO₂培养箱中培养。感染后第3天补加100μl新鲜培养基。第5天用MTT方法用ELx800酶标仪测定OD_595/630nm值。计算药物对细胞生长的抑制率和对HIV-1_IIIB感染细胞的保护率。CC₅₀为对50％的宿主细胞产生毒性的药物浓度；EC₅₀为保护50％的HIV-1_IIIB感染细胞存活时的药物浓度。

八、计算公式

根据实验结果绘制剂量反应曲线，按Reed&Muench法计算出化合物抑制病毒的50％有效浓度(EC₅₀)，50％抑制细胞生长浓度(CC₅₀)及抗HIV-1活性的治疗指数TI值(Therapeutic index)为：TI＝CC₅₀/EC₅₀。

1、细胞生长存活率(％)＝实验孔OD值/对照孔OD值×100

2、HIV-1致细胞病变的抑制率(％)＝(1-实验孔合胞体数/对照孔合胞体数)×100

3、化合物对HIV-1感染细胞的保护率(％)＝(实验孔OD值-HIV感染细胞对照孔OD值)/(正常细胞对照孔OD值HIV感染细胞对照孔0D值)×100

II、结果

一、保健普洱茶提取物的细胞毒性作用

保健普洱茶提取物对C8166细胞的毒性作用的实验数据见表1、图1。

CC₅₀(保健普洱茶提取物第一次实验)：378.26μg/ml；CC₅₀(保健普洱茶提取物第二次实验)：377.83μg/ml；CC₅₀(AZT)为：1389.95μg/ml。

二、保健普洱茶提取物对HIV-1_IIIB诱导C8166细胞病变的抑制作用

保健普洱茶提取物对HIV-1_IIIB诱导C8166细胞病变的抑制作用实验数据见表2、图2。

EC₅₀(保健普洱茶提取物第一次实验)：11.62μg/ml；EC₅₀(保健普洱茶提取物第二次实验)：11.53μg/ml；EC₅₀(AZT)为：4.01μg/ml

三、保健普洱茶提取物对HIV-1_IIIB感染MT-4细胞死亡的保护实验

保健普洱茶提取物对HIV-1_IIIB感染MT-4细胞死亡的保护实验数据见表3、图3。

CC₅₀(保健普洱茶提取物第一次实验)：93μg/ml；CC₅₀(保健普洱茶提取物第二次实验)：93.15μg/ml，EC₅₀(保健普洱茶提取物第一次实验)：19.88μg/ml；EC₅₀(保健普洱茶提取物第二次实验)：13.62μg/ml。CC₅₀(AZT)＞1μg/ml；EC₅₀(AZT)为0.0036μg/ml。

III、实验结果

保健普洱茶提取物细胞毒性和抗HIV-1活性结汇总表见表4。

IV、结论

保健普洱茶提取物对C8166细胞有一定的毒性，CC₅₀为377.83～378.26μg/ml，对HIV-1诱导C8166细胞形成合胞体抑制活性较好；EC₅₀为11.53～11.62μg/ml，治疗指数(TI)为32.55～32.76。保健普洱茶提取物对HIV-1感染MT-4细胞具有一定保护作用，其EC₅₀为13.62～19.88μg/ml，治疗指数(TI)值为4.68～6.84。说明该保健普洱茶具有体外抗HIV-1活性，其治疗指数为32.55～32.76。对HIV-1感染MT-4细胞有一定的保护作用。

为表明本发明的保健普洱茶具有治疗艾滋病病毒HIV的疗效，下面将通过临床观察其效果：

一、一般资料

选择符合国家免费抗艾滋病病毒治疗医学入选标准的患者80例，其中，男性60例，女性20例，年龄在19-65岁之间，平均24.5岁，随机将80例患者分为二组，对照组40例单服抗艾滋病病毒的药物，试验组40例在服与对照组相同的抗艾滋病病毒药物的同时，加服本发明实施例1提供的饼茶。两者在临床表现、性别、年龄等方面经统计学分析，无显著性差异(P＞0.05)。

二、治疗方法

所有患者抗病毒治疗方案均采用标准一线方案，即国家免费艾滋病抗病毒治疗手册(D4T+3TC+NVP或EFV)，试验组加服本发明实施例1提供的饼茶，一次5克，开水冲泡，每日3次，总疗程4个月。

三、观察指标

观察指标包括临床症状、体征和化验指标。了解患者药物毒副反应情况和评估疗效。每月监测体重、全血细胞计数、血糖、肌酐、ALT等，每2月监测CD4⁺细胞数。

四、结果

试验组毒副反应发生率明显低于对照组，特别是消化道症状和肝毒性发生率，两组对照有明显差异(P＞0.05)，详见表1。试验组CD4⁺细胞计数上升率高于对照组，详见表2。

表1    毒副反应发生情况

组别消化道症状肝毒性皮疹周围神经炎骨髓抑制试验组(40例)10例(25％)2例(5％)4例(20％)2例(5％)0例对照组(40例)24例(60％)10例(25％)6例(15％)2例(5％)0例

(P＞0.05)

表2    疗效评估

组别CD4⁺细胞计数上升率机会性感染再发试验组(40例)36例(90％)[最高上升426/mm³]0例对照组(40例)24例(70％)8例(20％)

(P＞0.05)

五、讨论

保健普洱茶中的成分能减缓免疫细胞的损伤，促进受损免疫细胞的恢复，调整肠道吸收环境等作用，并能改善人体免疫系统，胃肠道吸收。从本次病例研究结果看，保健普洱茶能减少患者服用抗艾滋病病毒药物的毒副反应发生率，特别是消化道症状和肝毒性，提高患者服药的依从性，从而提高抗病毒治疗的疗效。本试验组CD4⁺细胞计数上升率高于对照组。